Mst1基因对人喉癌Hep2细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨Mst1基因对人喉癌Hep2细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法以Hep2细胞为对照组,转染pcDNA3.1-Mst1的Hep2细胞为转染组,SB203580处理的Mst1转染细胞为处理组。采用MTT法测定三组细胞的增殖抑制率,双标流式细胞法检测其凋亡率,用Western blot法检测三组细胞中Mst1蛋白、磷酸化p38(p-p38)和总p38蛋白(t-p38)的表达情况。结果与对照组相比,转染组Mst1和p-p38蛋白表达增强明显t,-p38的表达无明显变化,凋亡率由2.46%升高至7.37%,细胞增殖抑制率为41.8%。与转染组相比,处理组p-p38蛋白表达增强降低t,-p38表达无明显变化,细胞凋亡率由7.37%降低至2.65%,细胞抑制率为-10.1%,细胞增殖活力显著降低。结论 Mst1基因能够通过p38 MAPK通路参与喉癌细胞凋亡和增殖的调控。

MST1基因在肾癌中的表达及对细胞凋亡影响的研究

目的探讨Mst1基因与肾癌的相关性及其表达增高对肾癌细胞凋亡、增殖能力的影响。方法荧光定量PCR检测47例肾癌及相应的癌旁正常组织中Mst1基因的表达;真核表达载体pcDNA3.1-Mst1转染769-P细胞;western检测转染后Mst1基因的表达;MTT法测定细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 Mst1基因在肾癌组织中表达明显下调;成功构建重组载体;转染后Mst1基因表达增强明显,凋亡明显升高,增殖能力明显下降(P<0.05)。结论 Mst1基因的表达异常与肾癌的发生相关,是肾癌潜在的肿瘤抑制基因,其表达增高能够抑制肿瘤细胞的增殖并促进细胞凋亡。

构建可诱导表达MST1基因的慢病毒载体及其在肝癌细胞系Huh-7中的表达

目的构建可诱导表达MST1基因的慢病毒载体,为进一步研究MST1与肝癌之间的关系提供理想的模型。方法克隆MST1基因到慢病毒载体pLVPT-tTRKRAB中,2种慢病毒载体(pLVPT-tTRKRAB-MST1和pLV-tTRKRAB-Red)与包装质粒通过293FT细胞系介导,分别包装成病毒颗粒,先后2次去感染肝癌细胞系Huh-7。培养7 d后,使用强力霉素(doxcycline)进行诱导,用Western blot检测MST1表达情况。结果构建了可诱导MST1真核表达病毒载体并获得相应的病毒,病毒可以高效感染目的肝癌细胞系Huh-7。在强力霉素诱导条件下,肝癌细胞系Huh-7可以表达MST1。结论成功构建出可诱导表达MST1基因的慢病毒载体,并获得在强力霉素诱导条件下可以表达MST1的肝癌细胞亚系。

MST1基因在宫颈癌中的表达及其与人乳头瘤病毒感染的关系

目的:探讨MST1基因在宫颈癌中的表达情况及其与人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系。方法:收集临床宫颈癌标本32例及培养宫颈癌Hela细胞系,采用蛋白质印迹法和实时定量荧光PCR方法检测宫颈癌组织中MST1的蛋白与mRNA水平。用HPV病毒转染细胞,测定MST1启动子区甲基化情况;然后向HPV病毒感染的细胞中加入甲基化抑制剂,检测MST1的变化情况。结果:MST1在宫颈癌中低表达、癌旁高表达,且宫颈癌中HPV感染时MST1表达明显低于未感染HPV的宫颈癌对照组。HPV可以增加宫颈癌细胞的甲基化水平。加入甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-CdR)后,MST1的启动子、mRNA和蛋白质水平增加,且随5-aza-CdR浓度的增加而升高。结论:HPV可能通过增加宫颈癌细胞的甲基化水平而抑制MST1基因的表达,从而进一步促进宫颈癌的发生发展。

Hippo信号通路核心元件MST1在急性白血病患者中的表达及意义

本研究旨在探讨Hippo信号通路核心元件MST1基因在急性白血病患者中的表达情况及其与白血病发生、发展的关系。采用实时定量PCR检测50例初治急性白血病患者、33例正常人、23例完全缓解缓解患者及12例难治/复发患者的MST1基因的表达情况,采用Western blot进一步验证其蛋白的表达水平,结合临床资料对患者的预后因素进行分析。结果表明,与正常人相比,急性白血病初治患者MST1基因的表达水平明显减低(P<0.05),完全缓解前后差异有统计学意义(P<0.05),难治/复发患者与初治患者MST1基因表达水平无明显差异(P>0.05),完全缓解患者与正常人MST1表达水平无明显差异(P>0.05)。结论:MST1基因的低表达与急性白血病的发病及预后相关。

中期阿尔茨海默病小鼠模型海马组织Mst1r基因甲基化初探

目的探讨Mst1r基因在中期病程阿尔茨海默病模型(presenilins条件性双基因敲除小鼠,d KO mice)中海马组织的甲基化状态。方法选取12月龄雌性d KO mice及同系野生型小鼠各3只,采用二代测序技术(简化表观亚硫氢酸盐测序技术,RRBS)检测其海马组织基因组DNA以获得甲基化异常基因。结果RRBS测序成果显示中期AD d KO mice海马组织中Mst1r基因呈超甲基化状态(P<0.05)。结论超甲基化的Mst1r基因可能在中期AD d KO mice的病理过程中发挥着一定作用。