同源异型盒基因MSX-2在SD大鼠颅缝闭合过程中的表达

目的研究同源异型盒基因Msx-2在SD大鼠颅缝闭合过程中的表达变化及意义。方法选择出生后1、2、5、8、12、15、18、22、30和45 d的SD大鼠,采用免疫组化和Real-timePCR法分别检测颅缝不同位点的MSX-2表达。结果MSX-2表达于SD大鼠发育的颅骨成骨缘、颅缝间质及其下的硬脑膜组织。在后额缝和矢状缝均未闭合期(出生后1～8 d),后额缝和矢状缝复合组织中均出现MSX-2少量表达;在活跃的后额缝闭合期(出生后12～22 d),后额缝复合组织出现较多MSX-2表达,而矢状缝复合组织无明显的表达增加;在后额缝完全闭合期(出生后30～45 d),MSX-2表达在后额缝减弱明显,并持续较低水平,此时矢状缝的表达略高于后额缝。结论同源异型盒基因MSX-2转录主要发生于颅缝闭合活跃阶段,在后额缝和矢状缝复合组织的表达有不同的时间趋势,提示可能参与颅骨发育和颅缝闭合的调控。

SD大鼠MSX-2基因真核表达载体的构建与功能鉴定

目的构建SD大鼠颅颌面发育相关基因MSX-2与PcDNA3．1融合的高效真核表达载体，为研究MSX-2基因的功能奠定基础。方法根据SD大鼠MSX-2基因的核苷酸序列，设计并合成引物，采用PCR技术，扩增编码MSX-2基因，TA克隆到PMD18-T载体上，再亚克隆到真核表达载体PcDNA3．1的BamHI和Xhol位点。对该重组体进行酶切鉴定，以及测序验证。重组体转染HEK293细胞，RT-PCR和Western blot检测重组MSX-2基因的RNA和蛋白表达情况。结果重组真核表达载体PcDNA3．1-MSX-2经PCR扩增、酶切鉴定均显示有476bp左右的特异性基因片断，证明MSX-2基因正向插入真核表达载体中；碱基序列的测定证明重组质粒中含有SD大鼠的MSX-2基因序列。重组体转染HEK293细胞，RT-PCR和Western blot可检测到重组MSX-2基因的mRNA和蛋白的特异表达。结论成功构建SD大鼠MSX-2基因的高效真核表达载体，为进一步研究MSX-2基因的功能及基因治疗奠定了基础。

同源盒基因Msx-1、Msx-2和Dlx-2在小鼠下颌第一磨牙发育阶段的表达

目的 观察同源盒基因Msx 1、Msx 2和Dlx 2mRNA在小鼠下颌第一磨牙发育阶段的表达。方法 取胎龄E11～E18和新生P1～P3小鼠的头或下颌 ,制备 5 μm连续冠状切片。体外转录合成地高辛标记的Msx 1、Msx 2和Dlx 2RNA探针。原位杂交后观察Msx 1、Msx 2和Dlx 2在小鼠下颌第一磨牙中的表达。结果 在牙胚发育过程中 ,Msx 1转录信号始终只在间质细胞中观察到 ,在上皮细胞中呈阴性。Msx 2和Dlx 2在牙源性上皮和间质中均表达 ,在磨牙发育起始期二者表达相似 ,但在随后的牙胚发育过程中 ,它们出现不同的表达特征。结论 牙胚发育过程中 ,Msx 1、Msx 2和Dlx 2有不同的表达特征 ,可能共同参与调控上皮和间质间的相互作用。

11名少牙畸形病人Pax 9、Msx 1、Axin 2基因突变的检测

目的:对少牙畸形病人血样标本中提取的DNA进行Pax 9、Msx 1和Axin 2核苷酸单链构象多态性和突变的检测,探讨少牙畸形的发病机制。方法:收集11名少牙畸形病人外周血标本,提取DNA,采用聚合酶链反应(PCR)、聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)技术结合DNA直接双向测序对病人DNA进行检测。结果:在11名病人中发现1个Msx 1单核苷酸多态位点,但没有发现有关Pax 9、Msx 1、Axin 2突变。结论:结合少牙畸形的高发病率及Pax 9、Msx 1、Axin 2基因突变的较低报告数值间的偏差,遗传因素在少牙畸形形成中的作用比原先预想的更加具有异质性。

壮骨伸筋胶囊对泼尼松致骨质疏松模型大鼠的改善作用及其机制研究

目的:研究壮骨伸筋胶囊对骨质疏松模型大鼠的改善作用及其机制。方法:将72只SD大鼠随机分为6组,即空白对照组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、骨疏康颗粒组[阳性药物,3 g(生药)/kg]和壮骨伸筋胶囊低、中、高剂量组[1.4、2.7、5.4 g(生药)/kg]。除空白对照组ig生理盐水外,其余各组大鼠于每周一、四ig醋酸泼尼松片(4.5 mg/kg)复制骨质疏松模型,并同时于每周一至六ig相应药物,连续13周。测定大鼠股骨骨密度、骨形态计量指标[骨小梁体积百分比、骨小梁矿化率(MAR)和骨皮质矿化率(mAR)]、肾组织中肌节同源盒基因Msx-2 mRNA及其蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠骨密度、骨小梁体积百分比降低,mAR升高,肾组织中Msx-2 mRNA及其蛋白表达减弱(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,骨疏康颗粒组和壮骨伸筋胶囊高剂量组大鼠骨小梁体积百分比升高、m AR降低,肾组织中Msx-2 mRNA表达增强;各给药组大鼠骨密度增加、Msx-2蛋白表达增强;中剂量组骨小梁体积百分比升高,以上差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);MAR差异无统计学意义(P>0.05)。结论:壮骨伸筋胶囊对泼尼松致大鼠骨质疏松有一定的改善作用,其机制可能与上调肾组织中Msx-2基因的表达有关。

信号网络在牙齿发育中的作用

转录因子Msx2、Runx2可通过Smad信号通路和p38 MAPK信号通路对成釉细胞合成外基质起重要作用;FGFs能直接调控Msxs的表达并参与Smad信号通路,也能通过参与活化MEK-ERK信号通路间接下调Smads转录活性,从而达到调控Smad信号通路的目的;Pitx2可通过Nodal/Sonic hedghog信号通路影响牙胚分化及外基质的合成;转录因子Msx2能通过Smad信号通路和Wnt信号通路影响釉基质的分泌,说明Msx2作为两种信号通路的交叉点在牙齿发育过程中是不可缺少的。本文就Msx2、Runx2、FGF2、Bmp、Pitx2等转录因子通过多种信号通路的相互调控对牙齿发育的影响作一综述。