重视Mtiller细胞在糖尿病视网膜病变中作用的基础研究

视网膜是经典的“神经．血管耦合”组织，将神经生物活性与血流调节融为一体。Maller细胞作为贯穿整个视网膜中的重要神经胶质细胞，连接着视网膜神经元和血视网膜屏障，在糖尿病视网膜病变的发病过程中扮演重要角色。但近年来关于Mtiller细胞在糖尿病视网膜病变神经损伤与微循环调节障碍中的关键作用的临床及基础研究较少。故本文将这一重要科学问题再次重申以期引起科研人员的重视。

色素上皮衍生因子对高糖环境下大鼠视网膜Mtiller细胞的影响

目的 探讨高糖环境下色素上皮衍生因子（PEDF）对大鼠视网膜Müller细胞的影响.方法将体外25 mmoL/L葡萄糖培养的大鼠Müller细胞以100 ng/ml PEDF或10 ng/ml白细胞介素-1β（IL-1β）孵育24 h,采用间接免疫荧光、Western印迹和实时定量PCR检测相关蛋白和mRNA表达,采用MTT检测Müller细胞活性.结果细胞免疫荧光组化、Western印迹和实时定量PCR检测显示在高糖环境下PEDF可以下调Müller细胞IL-1β蛋白和mRNA的表达,同样IL-1β也可以下调Müller细胞PEDF蛋白和mRNA的表达（P＜0.05）;PEDF明显提高视网膜Müller细胞活性（0.48±0.09对0.64±0.17,P＜0.05）.结论模拟糖尿病状态下,PEDF可以下调Müller细胞中IL-1β的表达,提高Müller细胞活性,可能对糖尿病炎症引起的病理改变起到一定抑制作用.

单色光照射对体外培养的Müller细胞生长及细胞因子表达的影响

背景 530 nm单色光照射可诱导动物产生近视.Müller细胞作为视网膜上主要的胶质细胞,参与近视的形成,但Müller细胞在单色光诱导的近视形成过程中的具体作用尚不清楚. 目的 研究530 nm单色光照射对体外培养的大鼠视网膜Müller细胞的生物学特征及近视相关细胞因子表达的影响,探讨Müller细胞在单色光诱导的近视形成中的作用.方法 在自制光照度分别为125、250、500 lx波长530 nm单色光设备的细胞培养箱中用常规细胞培养基培养永生化大鼠Müller细胞,另用无光照的常规培养法培养细胞作为对照组.细胞培养6、12、24 h后,用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法检测细胞在波长570 nm处的吸光度（A570）值；培养48 h后用流式细胞仪检测各组大鼠Müller细胞的细胞周期,比较各组G2期与G1期细胞数的比值；采用逆转录PCR（RT-PCR）法检测各组大鼠Müller细胞中转化生长因子-β1（TGF-β1）、酪氨酸羟化酶（TH）、诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF） mRNA表达量的改变.采用两因素方差分析比较各组间大鼠Müller细胞随不同培养时间的变化增生值的差异,采用单因素方差分析比较各组间不同细胞周期细胞数的变化以及大鼠Müller细胞中各近视相关因子mRNA表达量的差异. 结果 530 nm单色光照射后,Müller细胞均呈典型的多角形,细胞大小均匀,边界清晰.与对照组比较,125 lx组、250 lx组大鼠Müller细胞在培养0、6、12、24 h时A570值的差异均无统计学意义（P＞0.05）,但500 lx组光照12h、24 h后细胞A570值明显低于对照组,差异均有统计学意义（P=0.013、0.001）.与对照组比较,125 lx组、250 lx组大鼠Müller细胞G2/G1细胞数比值的差异均无统计学意义（P=0.073、0.330）,500 lx组G2/G1细胞数比值明显降低,与对照组、250 lx组比较差异均有统计学意义（P=0.028、0.038）.RT-PCR检测结果显示,250 lx组TGF-β1 mRNA的表达明显高于500 lx组（P=0.006）；125 lx组、250 lx组iNOS mRNA表达依次上调,250 lx组与对照组比较差异有统计学意义（P=0.001）,而500 lx组表达下调,与对照组比较差异有统计学意义（P=0.000）.与对照组比较,125 lx组、250 lx组bFGF mRNA的表达量均上调,但500 lx组细胞中bFGF mRNA表达量下调,差异均有统计学意义（P=0.002、0.000、0.005）.与对照组比较,250 lx组细胞中TH mRNA的表达量明显增加,500 lx组细胞中TH mRNA表达量明显下调,差异均有统计学意义（P=0.000、0.001）. 结论 光照度＞250 lx的530 nm单色光照射可以通过抑制大鼠Müller细胞的生长,并下调细胞中近视相关细胞因子的表达而在近视的形成中发挥作用.

星形胶质细胞与血-视网膜屏障

星形胶质细胞是脊椎动物视网膜中主要的神经胶质细胞。随着细胞生物学和分子生物学研究的深入,逐渐发现视网膜内的星形胶质细胞与血-视网膜内屏障(innerblood-retinalbarrier,iBRB)密切相关。星形胶质细胞是诱导血管内皮间紧密连接和维持iBRB的结构基础。因此,对视网膜星形胶质细胞的屏障特性进行深入的研究,将有助于全面地认识视网膜血液屏障系统的结构及功能,为诸多BRB功能受损的眼科疾病的预防及治疗提供新的动态。

青光眼疾病中视网膜胶质细胞的作用

青光眼是一种视网膜视神经的退行性病变，以视网膜神经节细胞（RGCs）的凋亡为基本病理基础，但其凋亡的具体机制尚未完全阐明。目前，大量在体及体外研究发现，视网膜胶质细胞，如Mtiller胶质细胞、星形胶质细胞和小胶质细胞与青光眼的发生和发展，特别是RGCs的损伤密切相关。胶质细胞上存在众多神经递质受体、离子通道、表面标志物及效应分子，同时也可释放活性因子，因此胶质细胞除了传统认为的具有对神经元的支持营养作用外，还积极参与神经元之间的信息传递过程。在青光眼条件下，胶质细胞可被激活并产生许多生理、生化及形态学改变，一方面可释放神经保护因子，启动神经保护程序；另一方面在胶质细胞过度激活时也会影响其正常生理功能或释放有害因子，加重视网膜神经元的损伤。这2种作用在青光眼中常常并存，但目前这些作用的潜在机制和相关信号通路尚不十分清楚，因而青光眼神经元损伤后胶质细胞是如何重建或进一步破坏神经元功能需要进行更多的研究。本文对视网膜Miiller细胞、星形胶质细胞及小胶质细胞的基本生理特征，以及在青光眼病理过程中各自的功能变化进行综述。

体外诱导猪Maller细胞定向分化为光感受器细胞的研究

背景大鼠、小鼠Müller细胞在体外能诱导分化为表达视网膜光感受器细胞特异标记的细胞，但目前有关成年猪Müller细胞分化为视网膜光感受器细胞的研究鲜有报道。 目的研究成年猪Müller细胞于体外定向诱导后分化成视网膜第一级传导神经元光感受器细胞。 方法消化成年猪眼视网膜组织，分离Müller细胞行体外继代单层贴壁培养。使用定向分化培养基对P2、P3和P4代Müller单层贴壁细胞及先形成细胞球悬浮培养2～3 d，然后再对贴壁细胞进行诱导分化，最后结合细胞形态和免疫荧光染色结果鉴定Müller细胞以及诱导分化效果。 结果免疫荧光染色结果显示，P2，P3和P4 Müller细胞均能表达Müller细胞特异蛋白分子标记，即谷氨酸合成酶（GS），P3 Müller细胞还同时表达另一种Müller细胞特异蛋白分子标记，神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）。免疫荧光染色分析并计算视网膜光感受器细胞特异标记视紫质Rhodopsin阳性率，P2 Müller单层贴壁分化细胞为（27.99±6.53）%，P2悬浮细胞球分化为（16.54±3.40）%。P2悬浮细胞球诱导分化后形态更趋向神经元，而P2代Müller单层贴壁细胞分化后形态仍趋向于成纤维细胞。随着培养代数的增加，细胞球定向分化Rhodopsin阳性表达程度逐渐减弱，P2、P3和P4 Rhodopsin阳性率分别为（56.23±7.32）%、（35.26±8.55）%和（12.68±3.18）%，差异无统计学意义（F＝2.618，P＝0.099）。同代细胞随着诱导时间的延长，Rhodopsin阳性表达有所减弱，差异无统计学意义（P＝0.099），但分化细胞形态更为细长。 结论成年猪Müller细胞离体培养后可定向分化为表达视网膜光感受器样细胞特异标记的细胞。细胞球悬浮培养2～3 d，以及延长诱导分化时间都能使得分化细胞形态更为细长。

高浓度胰岛素对兔视网膜Mller细胞表达血管内皮生长因子的影响

目的 探讨高浓度胰岛素对体外培养的视网膜M櫣ｌｌｅｒ细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法 采用免疫细胞化学法、原位杂交法及ELISA法 ,定性、定量测定在不同浓度胰岛素条件下 ,体外培养的兔视网膜M櫣ｌｌｅｒ细胞表达ＶＥＧＦ的变化?峁∫鹊核啬苊飨栽銮浚郑牛牵频谋泶?,并通过转录水平调节。结论 高浓度胰岛素可能通过刺激M櫣ｌｌｅｒ细胞编码ＶＥＧＦ基因的转录 ,增强VEGF蛋白的表达 ,从而加速糖尿病视网膜病变的新生血管形成。 (中华眼科杂志 ,2 0 0 4,40 :40 44)

视网膜色素变性疾病中细胞替代治疗

视网膜变性是一类难治性疾病，其中最常见的包括视网膜色素变性（retinitispigmento—sa，RP）、年龄相关性黄斑变性（agerelateddegeneration，AMD）等。因视网膜属于终末神经组织，神经细胞再生困难，此类疾病的治疗非常棘手。近年来，由于干细胞工程技术的飞速发展，各类干细胞在视网膜变性疾病中也有了一定的应用，取得了可喜的进展。文中就骨髓间充质干细胞和Mtiller细胞在视网膜色素变性疾病中的应用及相关研究作一综述。

抗血管内皮生长因子单克隆抗体bevacizumab对缺氧Müller细胞水通道蛋白4表达的影响

目的观察抗血管内皮生长因子（VEGF）单克隆抗体bevacizumab（商品名Avastin）对氯化钴（CoC12）诱导的缺氧Mtiller细胞水通道蛋白4（AQP4）表达的影响，探讨bevacizumab在治疗视网膜水肿中的作用机制。方法采用酶消化法培养人视网膜Mtiller细胞，通过电子显微镜、细胞免疫荧光染色进行MUller细胞的鉴定。采用半定量逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）检测不同浓度的CoC12和VEGF作用不同时间后Mtüller细胞AQP4和VEGFmRNA的表达。观察200p．g／mlbevacizumab预处理对CoC12诱导的缺氧人视网膜Mtüller细胞AQP4mRNA表达的影响。结果细胞免疫荧光染色显示，所培养的细胞95％表达波形蛋白、谷氨酰胺合成酶、a平滑肌肌动蛋白和胶质纤维酸性蛋白；电子显微镜下可见特征性的8～10nm的微丝。证实培养的细胞为Müller细胞。RT-PCR结果显示，CoC12上调Müaller细胞AQP4和VEGFmRNA表达水平，AQP4和VEGFmRNA表达随CoC12作用时间延长和CoC12浓度增加的变化趋势均呈成正相关（r=0．952、0．954，P〈0．05）。VEGF可上调Müller细胞上AQP4mRNA的表达（F=12．43，P〈0．05）。bevacizumab可抑制CoC12诱导的Mtüller细胞AQP4mRNA表达的上调（F=2370．37，P〈O．05）。结论bevacizumab可以下调CoC12诱导的Müller细胞AQP4的表达。这一效应可能是通过抑制VEGF对AQP4的诱导作用所发挥的，推测这是bevacizumab治疗视网膜水肿的机制之一。

缺氧对视网膜Müller细胞水通道蛋白4表达的影响

目的观察体外培养兔视网膜Müller细胞在缺氧条件下水通道蛋白4(AQP4)表达的变化。方法本实验以体外培养的兔视网膜Müller细胞为研究对象,选定不同缺氧时间体外培养Müller,并采用AO/EB染色检测Müller细胞的凋亡情况,根据细胞凋亡情况选定最适缺氧时间进行检测,利用免疫细胞化学染色、流式细胞术及RT-PCR的方法对实验组细胞AQP4的表达进行定性及定量测定。结果 Müller细胞缺氧24h为缺氧最大耐受时间。缺氧组Müller细胞AQP4表达明显低于正常对照组;流式细胞仪检测中波峰位置明显提前,AQP4表达减少;RT-PCR半定量分析显示:AQP4mRNA的表达比对照组明显降低(P<0.01)。结论缺氧使体外培养兔视网膜Müller细胞AQP4表达下调,缺氧可能影响细胞代谢变化,引起K+外流。