口腔鳞癌对顺铂耐药分子机制探讨

目的 Muc16是细胞表面黏蛋白,在多种肿瘤中过表达,Muc16C端可结合β-链蛋白(β-catenin)入核调节原癌基因c-Myc转录,进而调节卵巢癌细胞生长。本研究建立耐顺铂口腔鳞癌模型细胞,探讨Muc16-c-Myc信号通路对其调节作用,为临床治疗口腔鳞癌提供新思路。方法采用逐步增加顺铂(cis-Dichlorodiamineplatinum,DDP)药物浓度、间歇诱导人口腔鳞癌Tca8113细胞的方法建立口腔鳞癌体外耐药细胞模型(Tca8113/CDDP);MTT法检测药物对细胞的抑制率并计算半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50);siRNA转染沉默c-Myc蛋白表达,设立沉默组(c-Myc si)和空载对照组(c-Myc NC);Sh-RNA-Muc16转染细胞以沉默Muc16蛋白表达,设立沉默组(Muc16sh)和空载对照组(Muc16NC),并以嘌呤霉素筛选稳定表达细胞株;应用蛋白质印迹法检测各蛋白表达水平;结晶紫染色观察DDP处理后各组细胞存活率。结果与Tca8113细胞相比,Tca8113/CDDP中多药耐药相关蛋白1(multidrug resistanec-associated protein 1,MRP1)上调(44.5±7.3)%,z=-2.087,P<0.001;P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达上调(30.1±7.7)%,z=-2.016,P<0.001。Muc16沉默后,与Muc16NC组相比,Muc16sh组Tca8113/CDDP中Muc16表达下调(91.8±3.8)%,z=-5.087,P<0.001;与Muc16 NC组相比,Muc16sh组细胞c-Myc表达下调(42.3±5.2)%,z=-4.165,P<0.001。Muc16沉默后Tca8113/CDDP中MRP1表达下调(67.7±6.2)%,z=-3.656,P<0.001;P-gp表达下调(59.6±8.1)%,z=-3.884,P<0.001。Tca8113/CDDP中c-Myc沉默后,其蛋白表达量下降(78.8±4.8)%,z=-5.112,P<0.001;c-Myc沉默后,Tca8113/CDDP细胞MRP1表达下调(53.2±3.2)%,z=-5.745,P<0.001;P-gp表达下调(74.6±7.7)%,z=-3.948,P<0.001。Muc16 NC组DDP的IC50为(165.4±8.5)μg/mL,Muc16sh组为(72.9±4.1)μg/mL,与Muc16NC组相比,Muc16sh组IC50明显降低,z=-3.312,P<0.001;c-Myc NC组DDP的IC50为(157.2±6.3)μg/mL,c-Myc si组IC50为(58.3±3.8)μg/mL,与c-Myc NC组相比,c-Myc si组细胞IC50明显降低,z=-4.606,P<0.001。DDP(165.4μg/mL)处理细胞24h发现,与Muc16NC组相比,Muc16sh组Tca8113/CDDP存活率下降(70.1±8.1)%,z=-2.787,P<0.001;DDP(157.2μg/mL)处理细胞24h发现,与c-Myc NC组相比,c-Myc si组Tca8113/CDDP存活率下降(67.6±7.7)%,z=-3.568,P<0.001。结论Tca8113/CDDP通过活化Muc16-c-Myc信号通路维持细胞耐药蛋白MRP1和P-gp的表达,从而对DDP耐药。