血清sTim-3、Gal-9及IL-17水平与冠心病患者冠脉狭窄程度的关系及对预后的预测价值

目的探讨血清可溶性T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(sTim-3)、半乳糖凝集素-9(Gal-9)、白介素-17(IL-17)水平与冠心病患者冠脉狭窄程度及预后的关系,以期为冠心病患者的治疗及预后预测提供参考。方法选取2020年4月—2022年4月于延安市人民医院就诊的182例冠心病患者,根据Gensini评分将患者分为轻度狭窄组(49例)、中度狭窄组(76例)和重度狭窄组(57例);根据纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级将患者分为心功能Ⅰ级组(32例)、心功能Ⅱ级组(85例)和心功能Ⅲ级组(65例);根据预后情况分为预后不良组(43例)和预后良好组(139例)。比较不同冠脉狭窄程度、不同心功能分级及不同预后冠心病患者血清sTim-3、Gal-9、IL-17水平,分析这几个指标与冠脉狭窄程度的相关性及其对患者预后的预测价值。结果患者Gensini评分及血清sTim-3、Gal-9、IL-17水平随冠脉狭窄程度的加重而升高,且不同冠脉狭窄程度患者Gensini评分及血清sTim-3、Gal-9、IL-17水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。患者血清sTim-3、Gal-9、IL-17水平随心功能分级的增加而升高,且不同心功能分级患者血清sTim-3、Gal-9、IL-17水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,冠心病患者血清sTim-3、Gal-9、IL-17水平与Gensini评分均呈正相关(P<0.05)。预后良好组患者血清sTim-3、Gal-9、IL-17水平均低于预后不良组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清sTim-3、Gal-9、IL-17水平以及三者联合预测冠心病患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.834、0.781、0.789、0.852(P<0.05)。结论冠心病患者血清sTim-3、Gal-9、IL-17水平随冠脉狭窄程度加重以及心功能分级增加而升高,且在冠心病预后不良患者中呈高表达水平,对冠心病患者预后具有一定预测价值,三者联合检测的预测价值更高。

EBV miR-BART17-3p对原发免疫性血小板减少症患儿Treg/Th17平衡的影响

目的探讨EBV mi R-BART17-3p影响原发免疫性血小板减少症(ITP)患儿Treg/Th17平衡的机制。方法收集ITP患儿(ITP组,20例)和健康儿童(对照组,20例)外周血并分离CD_(4)^(+)T细胞。采用实时荧光定量聚合酶链式反应法、Western blot法、酶联免疫吸附法检测EBV mi R-BART17-3p、T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim-3)、叉头框蛋白P3(Fox P3)、白细胞介素17A(IL-17A)和转化生长因子-β(TGF-β)的m RNA、蛋白表达水平及含量。采用双荧光素酶报告基因实验考察EBV mi R-BART17-3p对Tim-3表达水平的影响。将15只BALB/C小鼠随机分为空白对照组、模型组、观察组,各5只。腹腔注射抗血小板抗体MWReg30以复制ITP小鼠模型,建模4 d后观察组小鼠予尾静脉注射携带EBV mi R-BART17-3p inhibitor的腺病毒载体。细胞染色并观察形态,检测外周血中TGF-β、IL-17A含量及血小板计数,采用流式细胞仪分别检测CD_(4)^(+)T细胞中Th17和Treg水平,并计算二者百分比。结果与对照组比较,ITP组患儿外周血EBV mi R-BART17-3p表达水平显著升高,Tim-3和TGF-βm RNA表达水平显著降低(P<0.05);Tim-3 m RNA表达水平与EBV mi R-BART17-3p表达水平呈显著负相关(r=-0.732,P<0.001)。Tim-3慢病毒载体p LKO.1-sh-Tim-3(sh-Tim-3)可显著降低Tim-3、Fox P3、TGF-β水平(P<0.05)。mi R-BART17-3p mimic显著升高了CD_(4)^(+)T细胞中mi R-BART17-3p的表达水平,并显著降低了Tim-3、Fox P3、TGF-βm RNA和蛋白表达水平(P<0.05);mi R-BART17-3p mimic可显著降低TGF-β含量,Tim-3+mi R-BART17-3p过表达逆转了mi R-BART17-3p mimic对TGF-β的抑制作用。动物实验结果显示,沉默EBV mi R-BART17-3p可促进Treg分化,减少脾脏和骨髓组织中的巨核细胞计数,并显著增加外周血中血小板计数。结论EBV mi R-BART17-3p可通过Fox P3/Tim-3途径调节ITP患儿Treg/Th17的免疫失衡。

白细胞介素-17A对鼻黏膜上皮细胞表达黏蛋白MUC5AC的刺激作用及分子机制

目的观察重组人白细胞介素17A(interleukin-1 7 A,I L-1 7 A)刺激离体培养的人鼻黏膜上皮细胞(human nasal epithelial cells,HNECs)后黏蛋白MUC5AC mRNA的表达变化,并检测相关的信号通路。方法离体培养的HNECs经过IL-17A诱导0～6 h后,通过定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chainreaction,Q-PCR)技术检测MUC5AC mRNA的表达变化;通过Western blot技术检测有无特异性阻断剂作用时p38信号通路的活化情况及相应MUC5AC mRNA的表达情况。结果 IL-17A在1 ng/ml即能诱导HNECs中MUC5AC的mRNA水平上调,并在浓度为100 ng/ml时达到峰值(F=48.60,P<0.01);p38信号通路在IL-17A诱导后开始活化,并在第30分钟达到最大程度,之后信号递减并趋于正常;采用p38特异性阻断剂SB203580抑制p38信号通路后,MUC5AC mRNA的上调得到抑制(F=223.8,P<0.01)。结论 IL-17A能通过p38信号通路诱导HNECs表达MUC5AC mRNA的过程,阻断p38信号通路可能作为干预由IL-17A诱导导致的气道黏液高分泌状态的一个关键靶点。

白介素-17A和MUC5AC在变应性鼻炎患者鼻黏膜中的表达及相互关系

目的探讨变应性鼻炎患者鼻黏膜中白介素(interleukin,IL)-17A及黏蛋白MUC5AC的表达及相互关系。方法总共纳入14例中-重度持续性变应性鼻炎患者和9例正常对照者,采用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和免疫组化检测下鼻甲黏膜中IL-17A和MUC5AC的mRNA及蛋白表达情况,评估两者之间的关联性。结果变应性鼻炎患者鼻黏膜中IL-17A和MUC5AC mRNA表达分别比对照组织上升3.7倍和8.9倍,差异有统计学意义(P<0.01),两者的蛋白表达强度也显著高于正常对照组(P<0.05)。而且IL-17A和MUC5AC的mRNA与蛋白表达之间存在显著正相关(r=0.79和r=0.85,P<0.05)。结论 IL-17A可能通过刺激MUC5AC的表达加重变应性鼻炎的临床严重度并且影响其疗效。

初诊活动性肺结核患者血浆IL-6,IL-17,IL-37及TIM-3水平表达及其临床意义

目的探讨初诊肺结核患者血浆白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-37(IL-37)及T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(TIM-3)水平变化及其临床意义。方法收集2018年1月~2020年10月百色市人民医院收治的活动性肺结核患者57例、肺炎患者50例和健康对照40例。57例肺结核患者中菌阳肺结核31例,菌阴肺结核26例。57例肺结核按病情轻重、病程长短及病变范围分为轻症组32例和重症组25例。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组血浆IL-6,IL-17,IL-37及TIM-3水平,并进行比较。结果肺结核组血浆IL-6(41.37±13.50 pg/ml vs 26.28±9.16pg/ml,3.05±1.08 pg/ml),IL-17(62.50±10.73pg/ml vs 30.47±7.18pg/ml,16.13±5.86pg/ml),IL-37(14.63±4.18pg/ml vs 9.85±2.74pg/ml,4.10±1.02 pg/ml)及TIM-3(18.17±5.16ng/ml vs 11.80±3.52ng/ml,6.24±2.15 ng/ml)水平均明显高于肺炎组和对照组,差异均有统计学意义(t=7.338~13.273,均P<0.001)。菌阳肺结核组血浆IL-6(52.60±15.71pg/ml vs 30.16±8.95 pg/ml),IL-17(72.35±15.20 pg/ml vs 46.52±9.13 pg/ml),IL-37(16.50±6.14 pg/ml vs 12.48±3.17 pg/ml)及TIM-3(21.70±7.93ng/ml vs 15.21±4.92 ng/ml)水平均明显高于菌阴肺结核组,差异具有统计学意义(t=8.472,10.161,6.925,9.106,均P<0.001)。重症组血浆IL-6(56.38±17.26pg/ml vs 25.84±9.27pg/ml),IL-17(79.50±16.38 pg/ml vs 48.20±8.74 pg/ml),IL-37(18.48±6.20 pg/ml vs 10.82±3.26pg/ml)及TIM-3(23.26±8.15ng/ml vs 13.90±4.71ng/ml)水平明显高于轻症组,差异具有统计学意义(t=12.642,14.513,10.205,13.172,均P<0.001)。结论血浆IL-6,IL-17,IL-37及TIM-3水平在肺结核患者中明显升高,对判断肺结核严重程度有一定的价值。

加减青蒿鳖甲汤对MRL/lpr小鼠肾组织IL-17、Tim-3表达的影响

目的:探讨加减青蒿鳖甲汤对自发SLE动物模型MRL/lpr小鼠肾组织IL-17、Tim-3的表达以及肾脏病变的影响。方法:24只MRL/lpr小鼠分为3组,每组8只,模型组予生理盐水,中药干预的2组分别予高、低剂量的加减青蒿鳖甲汤水煎剂浓缩液。用药6周后,ELISA法检测小鼠血清ds-DNA抗体浓度;观察小鼠肾脏病理改变;免疫组化法检测肾组织IL-17、Tim-3的表达水平。结果:中药高剂量组组MRL/lpr小鼠血清ds-DNA抗体浓度显著低于模型组(P=0. 001)和中药低剂量组(P=0. 007);中药高剂量组(P=0. 000)和中药低剂量组(P=0. 000)小鼠狼疮肾炎肾组织活动性指数(AI)评分均显著低于模型组;中药高剂量组IL-17表达的肾髓质评分(P=0. 028)及总评分(P=0. 024)较模型组均有显著性差异;小鼠肾组织Tim-3表达水平评分在各组间无显著差异;小鼠肾组织IL-17表达水平总评分与血清ds-DNA抗体浓度呈正相关(r=0. 5859,P=0. 0026)。结论:高剂量的加减青蒿鳖甲汤可能通过抑制IL-17在肾组织的表达而发挥抑制MRL/lpr小鼠肾损害、控制SLE病情进展的作用,但对MRL/lpr小鼠肾组织Tim-3的表达无显著影响。

MUC17基因在胃癌组织、细胞中的表达及对胃癌细胞侵袭增殖能力影响

目的观察人黏蛋白17(MUC17)基因在胃癌组织、细胞中的表达及对胃癌细胞侵袭增殖能力影响。方法收集胃癌及其对应癌旁组织标本各31例份,另取胃癌细胞AGS、MKN45、SGC7901、BGC823和人正常胃黏膜上皮细胞GES-1,采用qRT-PCR法检测组织和细胞中MUC17基因。取AGS细胞并分为观察组和对照组,观察组利用RNA干扰技术敲低AGS细胞中MUC17基因的表达,Western blotting法检测两组MUC17基因的表达(以评价干扰效果),Transwell细胞体外侵袭实验以及细胞划痕实验检测细胞侵袭能力,MTS法、平板克隆形成实验检测细胞增殖能力。结果与癌旁组织比较,胃癌组织中MUC17基因表达升高(P均<0. 05);与GES-1细胞比较,AGS、MKN45、BGC823、SGC7901细胞MUC17基因表达升高(P均<0. 05)。与对照组比较,观察组AGS细胞MUC17表达降低,侵袭细胞个数减少,细胞划痕愈合率及细胞增殖率降低,克隆形成能力减弱(P均<0. 05)。结论 MUC17在胃癌组织和细胞中表达上调,敲低MUC17表达可抑制AGS细胞的侵袭和增殖能力,这提示MUC17或将可能成为胃癌治疗的新靶标。

复发性流产患者滋养细胞T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子3的表达水平及其与辅助性T淋巴细胞17/调节性T细胞失衡的关系分析

目的分析复发性流产患者滋养细胞T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子3(Tim-3)表达水平及其与辅助性T淋巴细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)失衡的关系。方法选取2019年1月至2021年1月眉山市中医医院收治的45例行清宫术的复发性流产早孕患者作为观察组,另选取同期收治的40例正常早孕需做人工流产女性作为对照组。观察并比较两组滋养细胞Tim-3表达、Th17、Terg、Th17/Treg水平,采用Logistic回归分析滋养细胞Tim-3表达、Th17、Terg、Th17/Treg水平与复发性流产的相关性,采用Pearson相关性分析滋养细胞Tim-3表达水平与Th17、Terg、Th17/Treg水平的关系。结果两组年龄、孕周、月经周期比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组孕酮水平明显低于对照组,孕次明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组滋养细胞Tim-3表达、Th17水平均明显高于对照组,Terg、Th17/Treg水平均明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);Logistics回归分析结果显示,滋养细胞Tim-3表达、Th17、Terg、Th17/Treg与复发性流产的发生相关(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,复发性流产患者滋养细胞Tim-3表达与Th17、Terg、Th17/Treg水平均具有相关性(P<0.05)。结论复发性流产患者滋养细胞Tim-3表达明显升高,Th17/Treg细胞失衡更为严重,两者可能在介导复发性流产的过程中存在相互作用。

血清Tim-3、IL-17及IFN-γ在儿童糖尿病中的临床意义

目的探讨儿童糖尿病血清T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim-3)、白细胞介素17(IL-17)及干扰素γ(IFN-γ)的表达及临床意义.方法选择2016年2月至2020年2月儿童糖尿病患儿83例(观察组),另选择同期体检健康者60例作为对照组,分析血清Tim-3、IL-17、IFN-γ、空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbAlc)的变化情况及其相关性,采用受试者工作特征曲线分析血清Tim-3、IL-17及IFN-γ的预测价值.结果观察组患儿血清Tim-3、IL-17及IFN-γ水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患儿血清FPG、HbAlc水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);相关性分析结果中显示,血清Tim-3、IL-17及IFN-γ水平与FPG、HbAlc呈正相关(P<0.05);ROC曲线结果显示,血清Tim-3预测儿童糖尿病的曲线下面积(AUC)为0.983,95%CI:0.966~1.000,敏感度80.25%,特异度83.08%,截断值为1.43;IL-17预测儿童糖尿病的AUC为0.932,95%CI:0.893~0.972,敏感度75.00%,特异度79.53%,截断值为225.46 ng/L;IFN-γ预测儿童糖尿病的AUC为0.876,95%CI:0.821~0.932,敏感度82.50%,特异度83.14%,截断值为129.59 pg/mL;联合检测预测儿童糖尿病的AUC为0.999,95%CI:0.965~1.000,敏感度88.59%,特异度93.45%.结论儿童糖尿病患儿中血清Tim-3、IL-17及IFN-γ的表达与FPG、HbAlc之间存在密切关系,对儿童糖尿病具有较高的预测价值.

白头翁汤通过调节T淋巴细胞平衡治疗溃疡性结肠炎小鼠的机制研究

目的探讨白头翁汤(Baitouweng Decoction)通过调节T淋巴细胞平衡治疗溃疡性结肠炎(UC)小鼠的机制。方法将60只C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、美沙拉秦组(500 mg·kg^(-1))及白头翁汤低、中、高剂量组(5、10、15 g·kg^(-1)),每组10只。除正常组外,其他各组小鼠均采用自由饮用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液,连续7 d,诱导建立UC小鼠模型;给药组小鼠造模同时按上述剂量灌胃给药(20 mL·kg^(-1)),正常组和模型组给予等体积蒸馏水,每日1次,连续给药10 d。实验期间记录小鼠体质量变化,观察粪便性状,检测并记录小鼠便血情况,进行疾病活动指数(DAI)评分;测量结肠长度及脾脏、胸腺湿质量,计算脾脏及胸腺指数;采用HE染色法观察结肠组织病理变化,并进行病理学评分;采用阿尔新蓝染色法观察杯状细胞黏蛋白的表达;采用流式细胞术检测小鼠肠系膜淋巴结及脾脏中辅助性T细胞1(Th1)、辅助性T细胞17(Th17)及调节性T细胞(Treg)细胞的比例;采用ELISA法检测小鼠结肠组织中炎性细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、γ干扰素(IFN-γ)、IL-17A、转化生长因子β(TGF-β)的表达;采用免疫荧光法检测结肠组织紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达。结果与正常组比较,模型组小鼠的体质量显著降低(P<0.01),DAI评分显著升高(P<0.01);脾脏指数显著上升(P<0.01),胸腺指数显著下降(P<0.01),结肠长度显著缩短(P<0.01);结肠组织出现明显溃疡,上皮细胞大量脱落,腺体排列紊乱,黏膜层和黏膜下层有大量炎性细胞浸润,病理组织评分显著升高(P<0.01);肠系膜淋巴结及脾脏组织中CD4^(+)IFN-γ^(+)Th1、CD4^(+)IL-17A^(+)Th17细胞占比显著升高(P<0.05,P<0.01),而CD25^(+)FOXP3^(+)Treg细胞占比显著降低(P<0.01);结肠组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17A和IFN-γ水平显著升高(P<0.01),TGF-β水平显著降低(P<0.01);结肠组织中的黏蛋白含量及紧密连接蛋白ZO-1、Occludin表达量显著降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,白头翁汤组小鼠的体质量显著增加(P<0.01),DAI评分显著降低(P<0.01);脾脏指数显著下降(P<0.05,P<0.01),胸腺指数显著上升(P<0.05,P<0.01),结肠长度显著延长(P<0.05,P<0.01);结肠上皮细胞和腺体排列较紧密,炎性细胞浸润减少,病理组织评分显著降低(P<0.01);肠系膜淋巴结及脾脏组织中CD4^(+)IFN-γ^(+)Th1、CD4^(+)IL-17A^(+)Th17细胞占比显著降低(P<0.05,P<0.01),CD25^(+)FOXP3^(+)Treg细胞占比显著升高(P<0.05,P<0.01);结肠组织中的TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17A和IFN-γ水平明显降低(P<0.05,P<0.01),TGF-β水平明显升高(P<0.05,P<0.01);结肠组织中杯状细胞分泌的黏蛋白含量及紧密连接蛋白ZO-1、Occludin表达量显著增加(P<0.05,P<0.01)。结论白头翁汤可以改善DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎的症状,其作用机制可能是通过调节T淋巴细胞平衡,抑制促炎细胞因子的分泌及增加抑炎因子的分泌,从而减轻肠上皮损伤。

白介素17在实验性支气管哮喘小鼠气道杯状细胞化生和黏液分泌中的作用

目的观察经鼻滴入白介素17（interleukin-17，IL-17）对支气管哮喘（简称哮喘）小鼠气道杯状细胞表达Muc5ac黏蛋白的影响，探讨IL-17与哮喘黏液分泌的关系。方法应用免疫组织化学法测定正常对照组、哮喘组、IL-17组及抗IL-17组肺组织黏蛋白Muc5ac的表达及应用AB-PAS染色观察支气管壁杯状细胞数量的差异。结果Muc5ac蛋白阳性表达细胞均主要位于气道上皮，细胞胞浆呈棕黄色。与哮喘组相比，IL-17组黏蛋白Muc5ac表达量明显增加（P〈0．01），抗IL-17组表达显著减少（P〈0．01）。AB-PAS染色结果同上。结论IL-17具有增强哮喘小鼠气道黏液分泌的作用。

运脾泻肺化痰汤通过抑制PI3K/AKT/NF-κB信号轴减轻幼龄哮喘大鼠气道炎症及黏液高分泌

目的基于白细胞介素(IL)-23/辅助性T细胞17(Th17)炎症轴与磷酯酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/核因子κB(NF-κB)信号轴相关性探讨运脾泻肺化痰汤对幼龄哮喘大鼠气道炎症、黏液高分泌的影响。方法将幼龄SD大鼠56只随机分为7组:正常组、模型组、低剂量运脾泻肺化痰汤组(LTCM)、中剂量运脾泻肺化痰汤组(MTCM)、高剂量运脾泻肺化痰汤组(HTCM)、布地奈德组、联合组,每组各8只。除正常组外,其余各组大鼠腹腔注射卵清白蛋白与氢氧化铝凝胶混合液致敏,1%卵清蛋白雾化激发。正常组、模型组均灌胃0.9%氯化钠2 mL;LTCM、MTCM、HTCM分别灌胃运脾泻肺化痰汤灌胃10、20、40 g/kg;布地奈德组予0.01%布地奈德2 mL雾化吸入20 min;联合组给予MTCM灌胃及布地奈德组雾化,连续4周。分类计数肺泡灌洗液(BALF)中不同种类白细胞;HE、过碘酸-雪夫染色(PAS)观察肺组织病理改变;ELISA检测BALF及血清中IL-17、IL-23水平,免疫组化检测肺组织IL-17、IL-23表达;Western Blot检测肺组织PI3K/AKT/NF-κB信号通路相关蛋白及黏蛋白5AC(MUC5AC)蛋白表达,RTPCR检测肺组织中的IL-17、IL-23、PI3K、AKT、NF-κB p65、MUC5AC mRNA相对表达量。结果与正常组比较,模型组肺组织IL-23、IL-17表达、血清及BALF中IL-17、IL-23水平、BALF白细胞计数、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞比例、IL-17、IL-23、PI3K、AKT、NF-κB p65、MUC5AC mRNA表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、NF-κB p-p65/NF-κB p65、MUC5A蛋白表达升高(P<0.05),BALF嗜碱性粒细胞、淋巴细胞及单核细胞比例下降(P<0.05)。与模型组比较,干预组肺组织IL-23、IL-17表达、BALF白细胞计数、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞比例、IL-17、IL-23、PI3K、AKT、NF-κBp-65、MUC5AC mRNA表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、NF-κB p-p65/NF-κB p65、MUC5AC蛋白表达降低(P<0.05),嗜碱性粒细胞比例升高(P<0.05);MTCM、HTCM、布地奈德、联合组血清及BALF IL-17、IL-23水平下降(P<0.05);LTCM、MTCM、HTCM、联合组BALF单核细胞比例升高(P<0.05);MTCM及联合组BALF淋巴细胞比例升高(P<0.05)。联合组肺组织IL-23、IL-17表达、BALF嗜酸性粒细胞、中性粒细胞比例、p-PI3K/PI3K、MUC5AC蛋白表达较LTCM、MTCM、HTCM、布地奈德组不同程度降低(P<0.05)。结论运脾泻肺化痰汤可能通过IL-23/Th-17炎症轴抑制PI3K/AKT/NF-κB信号轴转导,通过降低血清及BALF中IL-23、IL-17水平,减少炎细胞迁移、气道炎性浸润及杯状细胞增生从而抑制MUC5AC过表达,减轻气道黏液高分泌及气道炎症。