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The Influence of Aerial Exposure on Sea Anemones Aulactinia veratra Mucin Genes Expression Using the RNA Sequencing
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作者 Alaa Haridi 《Open Journal of Marine Science》 2024年第1期1-18,共18页
Mucin genes are the main component of mucus. The sea anemone species, Aulactinia veratra (Phylum Cnidaria) contains different types of mucin genes. In the intertidal zone, A. veratra is found to be exposed to air duri... Mucin genes are the main component of mucus. The sea anemone species, Aulactinia veratra (Phylum Cnidaria) contains different types of mucin genes. In the intertidal zone, A. veratra is found to be exposed to air during the low tide and produces large quantities of mucus as an external covering. The relation between low tide and mucus secretion is still unclear, and what is the role of mucin during arial exposure is not yet investigated. This study hypothesised that the mucin genes in A. veratra would have significantly high expression in response to aerial exposure. Therefore, the aim of current study was to examine and analyses the response of A. veratra mucins in response to an experiment involving three hours of aerial exposure. To achieve this, aim the RNA-sequencing and bioinformatics analyses were used to examine the expression profile of A. veratra mucin genes in response to aerial exposure. The generated results have shown that, Mucin4-like and mucin5B-like were up-regulated in response to the three hours of aerial exposure in A. veratra. This finding shows a significant role of mucin5B-like and mucin4-like genes in response to air stress at low tide. The data generated from this study could be used in conjunction with future mucin gene studies of sea anemones and other cnidarians to compare A. veratra mucin gene expression results across time, and to extend our understanding of mucin stress response in this phylum. 展开更多
关键词 Aulactinia veratra mucin4-Like mucin5B-Like CNIDARIA mucin Gene Expression RNA-Sequencing Sea Anemones MUCUS Aerial Exposure
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血清TIM-4、HBD2表达水平与肺炎支原体肺炎儿童病情的相关性研究
2
作者 张娟 徐建英 何苗 《中国妇幼健康研究》 2024年第10期37-42,共6页
目的探讨血清T细胞免疫球蛋白与黏蛋白域分子-4(TIM-4)和人β-防御素2(HBD2)表达水平与肺炎支原体肺炎(MPP)儿童病情的相关性。方法选取本院于2020年7月至2023年1月收治的142例MPP患儿为研究对象,根据病情严重程度分为普通MPP组(n=99)... 目的探讨血清T细胞免疫球蛋白与黏蛋白域分子-4(TIM-4)和人β-防御素2(HBD2)表达水平与肺炎支原体肺炎(MPP)儿童病情的相关性。方法选取本院于2020年7月至2023年1月收治的142例MPP患儿为研究对象,根据病情严重程度分为普通MPP组(n=99)和难治性MPP组(n=43),另选取同期140例健康体检儿童为对照组。使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清TIM-4和HBD2水平;收集患儿临床资料,并采用多因素Logistic回归分析发生难治性MPP的影响因素;使用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清TIM-4和HBD2水平对难治性MPP的诊断价值。结果普通MPP组和难治性MPP组在发热时间、住院时间、阿奇霉素治疗时间、中性粒细胞百分比、白细胞计数、反复呼吸道感染、肺外并发症方面比较差异具有统计学意义(t/χ^(2)值介于2.195~21.265,P<0.05);与对照组相比,研究组血清TIM-4和HBD2表达水平均明显升高(t=34.527、40.646,P<0.001);与普通MPP组相比,难治性MPP组血清TIM-4和HBD2表达水平均明显升高(t=12.410、15.316,P<0.001);多因素Logistic回归分析结果显示,血清TIM-4水平(OR=1.423,95%CI:1.140~1.776)、HBD2水平(OR=1.436,95%CI:1.162~1.775)、发热时间(OR=1.349,95%CI:1.056~1.724)、中性粒细胞百分比(OR=1.334,95%CI:1.032~1.725)、反复呼吸道感染(OR=1.521,95%CI:1.245~1.858)和肺外并发症(OR=1.432,95%CI:1.152~1.780)均是发生难治性MPP的独立危险因素(P<0.05)。ROC结果显示,血清TIM-4水平单独诊断难治性MPP发生的曲线下面积(AUC)为0.845(95%CI:0.774~0.900),灵敏度、特异度分别为69.77%、85.86%;血清HBD2水平单独诊断难治性MPP发生的AUC为0.815(95%CI:0.742~0.875),灵敏度、特异度分别为74.42%、82.83%;二者联合诊断难治性MPP发生的AUC为0.908(95%CI:0.848~0.950),灵敏度、特异度分别为90.70%、81.82%,显著高于血清TIM-4水平单独诊断(Z=2.047,P=0.040)和血清HBD2水平单独诊断(Z=2.443,P=0.015)。结论血清TIM-4及HBD2水平在肺炎支原体肺炎儿童中表达升高,且二者水平对难治性肺炎支原体肺炎具有一定诊断价值。 展开更多
关键词 肺炎支原体肺炎 T细胞免疫球蛋白与黏蛋白域分子-4 重组人β-防御素2
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重症肺炎患者血清ANXA1、TIM-4表达水平及临床意义 被引量:3
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作者 孙源 赵立涵 +1 位作者 曾玮 吴宁涛 《临床肺科杂志》 2023年第11期1635-1639,共5页
目的 探讨血清膜联蛋白A1(ANXA1)、T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4(TIM-4)在重症肺炎患者血清中表达水平及临床意义。方法 选取2019年5月至2021年12月本院收治的90例重症肺炎患者纳入重症肺炎组和90例普通肺炎患者为普通肺炎组为研究对象,另... 目的 探讨血清膜联蛋白A1(ANXA1)、T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4(TIM-4)在重症肺炎患者血清中表达水平及临床意义。方法 选取2019年5月至2021年12月本院收治的90例重症肺炎患者纳入重症肺炎组和90例普通肺炎患者为普通肺炎组为研究对象,另选90例健康体检者为对照组。ELISA法检测血清ANXA1、TIM-4表达水平;多分类Logistic回归分析影响重症肺炎患者预后的因素。ROC曲线分析血清ANXA1、TIM-4对预后的预测价值。Kaplan-Meier曲线分析ANXA1、TIM-4表达与预后的关系。结果 对照组、普通肺炎组、重症肺炎组患者血清ANXA1、TIM-4水平依次上调(P<0.05)。Pearson分析表明,重症肺炎患者血清ANXA1和TIM-4表达水平呈正相关(P<0.05)。与生存组相比,死亡组ANXA1、TIM-4水平明显升高(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,ANXA1、TIM-4是影响重症肺炎患者预后的危险因素(P<0.05)。ANXA1、TIM-4联合预测重症肺炎预后的AUC显著大于单独预测。Kaplan Meier生存分析显示ANXA1、TIM-4低表达组生存率显著高于高表达组。结论 重症肺炎患者血清ANXA1、TIM-4表达水平升高,两者是影响重症肺炎患者预后的危险因素,两者联合预测重症肺炎患者预后具有较高的价值。 展开更多
关键词 重症肺炎 膜联蛋白A1 T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4 预后
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Mucin-4在百里醌抑制肝癌生长中的作用
4
作者 唐珍 《中国当代医药》 2013年第31期10-13,共4页
目的探讨百里醌对体内外肝癌生长的影响,并对其机制进行初步探讨。方法不同浓度百里醌作用人肝癌细胞株SMMC-7721后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其对细胞生长的抑制作用;Hoechst染色后荧光显微镜下观察细胞形态学变化;RT-PCR检测... 目的探讨百里醌对体内外肝癌生长的影响,并对其机制进行初步探讨。方法不同浓度百里醌作用人肝癌细胞株SMMC-7721后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其对细胞生长的抑制作用;Hoechst染色后荧光显微镜下观察细胞形态学变化;RT-PCR检测Mucin-4 mRNA在SMMC-7721细胞中的表达;Western blotting检测肝癌细胞中Mucin-4蛋白表达;建立裸鼠肝癌皮下移植模型,完全随机法分为对照组和低(10μmol/L)、中(20μmol/L)、高剂量(40μmol/L)百里醌组,观察不同剂量百里醌对裸鼠肝癌皮下移植瘤生长的影响;免疫组织化学法检测肿瘤组织中Mucin-4的阳性表达。结果不同浓度(10、20、40μmol/L)百里醌作用人肝癌SMMC-7721 24 h后,细胞存活率分别为(80.14±9.84)%、(71.68±6.51)%和(64.58±5.24)%;百里醌作用后,SMMC-7721细胞出现典型凋亡形态学改变;百里醌干预后SMMC-7721细胞中Mucin-4蛋白和mRNA的表达均明显下调,呈浓度依赖性;实验结束后,对照组和低、中、高剂量百里醌组肿瘤体积分别为(1056.3±236.3)、(672.3±178.8)、(529.4±165.7)、(473.1±141.5)mm2,各百里醌组肿瘤体积明显低于对照组(P<0.05),低、中、高剂量百里醌组抑瘤率分别为36.5%、49.9%和30.3%;百里醌可明显降低肿瘤组织中Mucin-4的阳性表达。结论百里醌可显著抑制体内外肝癌生长,该作用可能通过抑制Mucin-4的表达而实现。 展开更多
关键词 肝癌 百里醌 mucin-4
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种植体周围炎患者MMP-7、MUC-4的表达水平及其与牙周健康状况的相关性 被引量:3
5
作者 张琳 何祥一 李欣忆 《海南医学》 CAS 2023年第15期2195-2197,共3页
目的探讨种植体周围炎患者基质金属蛋白酶7(MMP-7)、黏蛋白4(MUC-4)的表达水平及其与牙周健康状况的相关性。方法选择2021年6月至2022年1月西安市红会医院接诊的45例种植体周围炎患者作为观察组,选择同期在本院行口腔检查健康的人群45... 目的探讨种植体周围炎患者基质金属蛋白酶7(MMP-7)、黏蛋白4(MUC-4)的表达水平及其与牙周健康状况的相关性。方法选择2021年6月至2022年1月西安市红会医院接诊的45例种植体周围炎患者作为观察组,选择同期在本院行口腔检查健康的人群45例作为对照组。比较两组受检者的牙周状况和血清MMP-7、MUC-4水平;采用Pearson相关分析法分析血清MMP-7、MUC-4水平与牙周探诊深度(PD)、临床附着丧失(CAL)、牙龈指数(GI)、菌斑指数(PLI)的相关性。结果观察组患者血清MMP-7水平为(21.70±5.08)ng/mL,明显高于对照组的(16.18±3.15)ng/mL,MUC-4水平为(3.10±0.58)ng/mL,明显低于对照组的(6.02±1.04)ng/mL,PD、CAL、GI、PLI水平分别为(3.65±0.73)mm、(4.45±0.97)mm、(2.30±0.25)分、(2.37±0.63)分,明显高于对照组的(2.03±0.27)mm、(1.17±0.15)mm、(0.58±0.14)分、(0.50±0.12)分,差异均有统计学意义(P<0.05);经Pearson相关分析结果显示,血清MMP-7与PD、CAL、GI、PLI均呈正相关(r=0.565、0.730、0.306、0.788,P<0.05),MUC-4与PD、CAL、GI、PL均呈负相关(r=-0.537、-0.359、-0.921、-0.811,P<0.05)。结论种植体周围炎患者的MMP-7、MUC-4表达水平与牙周健康状况密切相关,临床上联合检测这些指标可为临床的治疗方案提供参考。 展开更多
关键词 种植体周围炎 基质金属蛋白酶7 黏蛋白4 牙周探诊深度 菌斑指数 相关性
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黏蛋白4在脑膜瘤组织中的表达及其诊断意义
6
作者 李立 李成之 +1 位作者 蔡晓燕 李红全 《中外医药研究》 2023年第1期129-131,共3页
目的:探讨黏蛋白4(MUC4)在脑膜瘤组织中的表达及其诊断意义。方法:选取2015年1月—2022年9月广东省台山市人民医院神经外科收治的脑膜瘤患者100例为观察组,选取同期中枢神经系统非脑膜瘤肿瘤患者50例为对照组。两组患者行免疫组织化学检... 目的:探讨黏蛋白4(MUC4)在脑膜瘤组织中的表达及其诊断意义。方法:选取2015年1月—2022年9月广东省台山市人民医院神经外科收治的脑膜瘤患者100例为观察组,选取同期中枢神经系统非脑膜瘤肿瘤患者50例为对照组。两组患者行免疫组织化学检测,观察MUC4、上皮性钙黏连蛋白、上皮细胞膜抗原(EMA)、人β-连环蛋白(β-cat)、孕激素受体(PR)的表达情况,判断MUC4在脑膜瘤疾病中的诊断价值。结果:观察组患者MUC4表达率高于对照组,差异有统计学意义(P=0.000);MUC4在各型脑膜瘤中均存在一定表达;EMA、β-cat、PR在脑膜瘤患者中表达率低于MUC4表达率,差异有统计学意义(P=0.000)。结论:在脑膜瘤疾病诊断中采用MUC4检验具有显著优势,可提升提前诊断率。 展开更多
关键词 诊断意义 MUC4 观察组 免疫组织化学检测 中枢神经系统 脑膜瘤 疾病诊断 神经外科
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人T细胞免疫球蛋白粘蛋白-4基因真核表达载体的构建和生物信息学分析 被引量:4
7
作者 陈治中 王琳 +4 位作者 王晓蓓 毛晓露 陈凤花 刘峰 胡丽华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期104-108,113,共6页
目的:构建人T细胞免疫球蛋白粘蛋白-4(TIM-4)基因的真核表达载体,用生物信息学分析了解TIM-4蛋白的特性。方法:采用Trizol法从人外周血单个核细胞提取总mRNA,逆转录合成cDNA,以此为模版,两步法RT-PCR扩增TIM-4,将其克隆至表达载体pcDNA3... 目的:构建人T细胞免疫球蛋白粘蛋白-4(TIM-4)基因的真核表达载体,用生物信息学分析了解TIM-4蛋白的特性。方法:采用Trizol法从人外周血单个核细胞提取总mRNA,逆转录合成cDNA,以此为模版,两步法RT-PCR扩增TIM-4,将其克隆至表达载体pcDNA3.1(+)中,构建FTIM-4质粒,通过PCR及测序进行鉴定。同时,我们构建pEGFP-N1-TIM-4真核表达载体,并测序鉴定其准确性;将pEGFP-N1-TIM-4质粒转染CHO细胞,用RT-PCR和荧光显微镜证实其表达。应用生物信息学初步分析TIM-4蛋白的物理化学性质、结构域和功能。结果:从逆转录的cDNA扩增出TIM-4;经PCR、酶切鉴定、测序分析表明扩增产物与GenBank提供的序列完全相同。真核表达载体pEGFP-N1-TIM-4在CHO细胞中稳定表达,表达蛋白主要位于细胞质和细胞膜上。生物信息学分析表明TIM-4蛋白为不稳定亲水性蛋白,有1个跨膜螺旋结构,含约10.32%的α-螺旋,29.89%的延伸链,59.79%的不规则卷曲,有1段由24个氨基酸组成的信号肽。亚细胞主要定位于细胞质、细胞核、分泌系统的小囊泡、线粒体、内质网、高尔基体上。功能分析预测该蛋白具有受体和信号转导功能。结论:成功构建TIM-4基因真核表达载体,利用生物信息学分析洞察了TIM-4蛋白的性质,为进一步研究该基因的免疫调节机制奠定了基础。 展开更多
关键词 T细胞免疫球蛋白粘蛋白-4基因 生物信息学分析 克隆
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胰腺癌高表达抗原MUC4 CTL表位肽的筛选与改造 被引量:4
8
作者 范柳笛 刘辉 +1 位作者 袁磊 时冉冉 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期811-816,共6页
目的:观察胰腺癌高表达抗原黏蛋白4(MUC4)的改造表位是否有HLA-A2限制性抗肿瘤能力。方法:首先运用RT-PCR和Western blot方法检测MUC4在胰腺癌细胞系CAPAN-2和ASPC-1的表达情况。通过Net CTL 1.2、BIMAS、SYFPEITHI和IEDB软件预测打分... 目的:观察胰腺癌高表达抗原黏蛋白4(MUC4)的改造表位是否有HLA-A2限制性抗肿瘤能力。方法:首先运用RT-PCR和Western blot方法检测MUC4在胰腺癌细胞系CAPAN-2和ASPC-1的表达情况。通过Net CTL 1.2、BIMAS、SYFPEITHI和IEDB软件预测打分来选取MUC4的HLA-A2限制性表位;替换MUC4抗原锚定位点氨基酸获得改造肽;候选表位肽的合成方法为标准的Fmoc化学合成法,结合力实验用于检测候选表位与T2A2细胞表面HLA-A2分子的结合能力,ELISPOT实验检测候选表位肽诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)分泌IFN-γ的能力,体外细胞毒实验活性检测候选肽诱导CTL的能力。结果:MUC4在胰腺癌细胞系CAPAN-2和ASPC-1均有表达。P1944-1Y、P1944-2L、P1944-1Y2L、P2004和P2004-1Y9V具有较好的结合力,且P2004-1Y9V、P1944-1Y2L等改造肽与HLA-A2的结合力高于原肽。ELISPOT实验结果显示表位肽P1944、P1944-1Y2L、P2004和P2004-1Y9V诱导的CTL具有分泌IFN-γ的能力。P1944-1Y2L和P2004-1Y9V诱导特异性T细胞免疫分泌的IFN-γ略高于原肽。细胞毒实验结果显示表位P1944、P1944-1Y2L、P2004和P2004-1Y9V对CAPAN-2细胞均有一定的杀伤作用。P1944-1Y2L和P2004-1Y9V特异性CTLs对CAPAN-2细胞杀伤率高于原肽特异性CTLs。结论:MUC4抗原改造表位P1944-1Y2L、P2004-1Y9V与天然表位P1944、P2004相比有更高的HLA-A2分子亲和力,保留了原有的免疫原性,并且改造肽抗肿瘤免疫效应强于天然表位。P1944-1Y2L和P2004-1Y9V是优秀的MUC4抗原的HLAA2限制性CTL候选表位,可以成为新的抗肿瘤多肽免疫治疗疫苗的候选表位。 展开更多
关键词 黏蛋白4 表位 细胞毒性T淋巴细胞
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4型黏蛋白及表皮生长因子受体在膀胱尿路上皮癌中的表达及临床意义 被引量:3
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作者 温雯静 李飞 +1 位作者 徐松涛 马永超 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第14期35-38,共4页
目的研究4型黏蛋白(MUC4)及表皮生长因子受体(EGFR)在膀胱尿路上皮癌中的表达,探讨其相互关系及临床病理意义。方法采用免疫组织化学法检测MUC4及EGFR蛋白在78例膀胱尿路上皮癌和13例膀胱正常黏膜中的表达。结果膀胱尿路上皮癌组织中MUC... 目的研究4型黏蛋白(MUC4)及表皮生长因子受体(EGFR)在膀胱尿路上皮癌中的表达,探讨其相互关系及临床病理意义。方法采用免疫组织化学法检测MUC4及EGFR蛋白在78例膀胱尿路上皮癌和13例膀胱正常黏膜中的表达。结果膀胱尿路上皮癌组织中MUC4蛋白阳性率为52.6%,显著高于膀胱正常黏膜组织(0.0%)(P<0.05)。EGFR蛋白在膀胱尿路上皮癌组织中阳性率为60.3%,显著高于膀胱正常黏膜组织(0.0%)(P<0.05)。结论 MUC4及EGFR蛋白表达增高与膀胱尿路上皮癌的临床分期、病理分级,复发密切相关。MUC4与EGFR呈正相关。联合检测MUC4和EGFR有助于膀胱尿路上皮癌的早期诊断及判断患者预后。 展开更多
关键词 膀胱癌 4型黏蛋白 表皮生长因子受体 免疫组织化学
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过敏性哮喘患儿外周血T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域4和血清免疫球蛋白G4的水平变化及意义 被引量:16
10
作者 刘英贤 谢燕丕 +1 位作者 李惠怡 孟琼 《中国医药》 2020年第5期685-689,共5页
目的研究过敏性哮喘患儿外周血T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域4(TIM4)、血清免疫球蛋白G4(Ig G4)的水平变化及诊断价值。方法选取2016年12月至2019年2月广东省第二人民医院收治的过敏性哮喘患儿80例,按照病情严重程度将入选患者分为轻度哮喘... 目的研究过敏性哮喘患儿外周血T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域4(TIM4)、血清免疫球蛋白G4(Ig G4)的水平变化及诊断价值。方法选取2016年12月至2019年2月广东省第二人民医院收治的过敏性哮喘患儿80例,按照病情严重程度将入选患者分为轻度哮喘组(24例)、中度哮喘组(29例)和重度哮喘组(27例)。另取同期于我院进行体检的健康儿童30例作为对照组。比较4组儿童治疗前后外周血TIM4和血清Ig G4水平,分析外周血TIM4、血清Ig G4水平与过敏性哮喘患儿病情严重程度的相关性,探讨外周血TIM4、血清Ig G4对过敏性哮喘的诊断价值。结果治疗前,轻、中、重度哮喘组患儿外周血TIM4、血清Ig G4水平均高于对照组,重度哮喘组患儿外周血TIM4、血清Ig G4水平高于轻、中度哮喘组(均P <0. 05)。治疗后中、重度哮喘组患儿外周血TIM4、Ig G4水平明显低于治疗前,且高于轻度哮喘组,重度哮喘组外周血TIM4、血清Ig G4水平高于中度哮喘组(均P <0. 05)。Pearson相关性分析结果显示,外周血TIM4、血清Ig G4水平与过敏性哮喘患儿病情严重程度均呈正相关(r=0. 481、0. 475,P=0. 032、0. 029)。外周血TIM4、血清Ig G4对过敏性哮喘诊断的曲线下面积分别为0. 723、0. 791,理论诊断阈值为1. 5%、0. 8 g/L,敏感度为0. 721、0. 784,特异度为0. 706、0. 765。二者联合检测诊断过敏性哮喘患儿的敏感度为0. 841,特异度为0. 812,均高于上述两项指标单独检测。结论过敏性哮喘患儿外周血TIM4、血清Ig G4水平存在明显高表达,且随着病情不断加重,上述两项指标表达水平随之升高,临床工作中联合检测外周血TIM4、血清Ig G4水平有助于过敏性哮喘的诊断。 展开更多
关键词 过敏性哮喘 T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域4 免疫球蛋白G4 诊断价值
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人类TIM-4-EGFP融合蛋白重组体的构建、表达和特性分析 被引量:2
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作者 陈治中 胡丽华 卿吉琳 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期262-268,共7页
目的构建TIM-4-EGFP融合蛋白的原核表达载体,并评价表达的TIM-4-EGFP蛋白生物学活性。方法采用RT-PCR方法分别扩增TIM-4和EGFP的cDNA片段,将其克隆至pET28a重组质粒中。重组载体转化大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白表达,经镍金... 目的构建TIM-4-EGFP融合蛋白的原核表达载体,并评价表达的TIM-4-EGFP蛋白生物学活性。方法采用RT-PCR方法分别扩增TIM-4和EGFP的cDNA片段,将其克隆至pET28a重组质粒中。重组载体转化大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白表达,经镍金属螯合层析柱纯化。通过SDS-PAGE蛋白电泳和Western blot鉴定重组蛋白。并通过荧光显微镜观察评价其生物活性。结果成功构建TIM-4-EGFP的原核表达载体并在大肠埃希菌中表达,TIM-4-EGFP融合蛋白经SDS-PAGE蛋白电泳和Western blot鉴定证实。TIM-4-EGFP融合蛋白可以直接识别和结合凋亡细胞,而与活细胞不能结合。同时证实TIM-4-EGFP融合蛋白与凋亡细胞的相互作用可以被TIM-4-Ig融合蛋白阻断。结论成功构建TIM-4-EGFP表达载体并在大肠埃希菌中表达融合蛋白,表达的融合蛋白具有生物活性,可为将来TIM-4及其受体的研究提供可靠生物来源。 展开更多
关键词 T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白-4 大肠埃希菌 绿色荧光蛋白 细胞凋亡
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人T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4 cDNA全长真核表达载体的构建及其在16HBE细胞中的表达 被引量:2
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作者 吴小慧 李一荣 +2 位作者 陈凤花 王琳 胡丽华 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期304-308,共5页
目的克隆人T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4(TIM-4)基因cDNA,构建其真核表达载体pEGFP-C2-TIM-4,并转染16HBE细胞。方法根据GeneBank中人TIM-4 cDNA序列(编号:NM-138379.2),设计出带有EcoRI和BamHI的上下游引物,应用RT-PCR技术,从人骨髓中扩增... 目的克隆人T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4(TIM-4)基因cDNA,构建其真核表达载体pEGFP-C2-TIM-4,并转染16HBE细胞。方法根据GeneBank中人TIM-4 cDNA序列(编号:NM-138379.2),设计出带有EcoRI和BamHI的上下游引物,应用RT-PCR技术,从人骨髓中扩增出TIM-4基因编码区序列,克隆到pMD18-T载体,形成pMD18-T-TIM-4重组质粒,经菌落PCR,双酶切,测序鉴定获得人TIM-4基因cDNA片段,然后将其亚克隆入pEGFP-C2绿色荧光载体中,并通过菌落PCR,双酶切,测序鉴定其重组体。将测序正确的pEGFP-C2-TIM-4质粒转染人气道上皮细胞(16HBE),用实时定量PCR检测目的基因的表达。结果成功扩增出人TIM-4 cDNA全长1134 bp,经T-A克隆构建的pMD18-T-TIM-4重组质粒经菌落PCR,双酶切,测序证实载体中含有正确的TIM-4编码区片段。由此构建的真核表达载体pEGFP-C2-TIM-4,经菌落PCR扩增出1134 bp左右的片段,经双酶切后产生4.7 kb和1134 bp左右的2条带,DNA测序显示与GeneBank中人TIM-4 cDNA序列一致。重组质粒转染16HBE细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光,经实时定量PCR分析,转染细胞TIM-4基因的表达显著增加。结论首次从人骨髓中扩增出TIM-4基因cDNA全长,构建了其真核表达载体pEGFP-C2-TIM-4,并在16HBE细胞内成功高表达,为进一步研究TIM-4的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4(TIM-4) 基因克隆 真核表达载体 聚合酶链反应(PCR) 转染
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血清黏蛋白抗原4对胰腺癌的诊断价值研究 被引量:1
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作者 龚道元 伏红霞 +3 位作者 彭艳 游永强 易正山 李子萍 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期533-534,537,共3页
目的研究血清黏蛋白抗原4(mucin antigen 4,MUC4)对胰腺癌诊断价值。方法用ELISA法测定胰腺癌患者血清中MUC4的含量,根据ROC曲线确定MUC4的cut off值并计算ROC曲线下面积(AUCROC),根据诊断效能评估表评价MUC4、CA19-9和CA242对胰腺癌诊... 目的研究血清黏蛋白抗原4(mucin antigen 4,MUC4)对胰腺癌诊断价值。方法用ELISA法测定胰腺癌患者血清中MUC4的含量,根据ROC曲线确定MUC4的cut off值并计算ROC曲线下面积(AUCROC),根据诊断效能评估表评价MUC4、CA19-9和CA242对胰腺癌诊断价值。结果胰腺癌患者血清MUC4的浓度和阳性率与慢性胰腺炎组及健康对照组比较有显著性差异(P<0.01),而慢性胰腺炎组与健康对照组之间无明显差异(P>0.05);MUC4的cut off值为4.54 ng/mL,AUCROC为0.880;胰腺癌患者血清MUC4表达敏感性、特异性和准确性明显优于CA19-9和CA242(P<0.01)。结论 MUC4可单独或与其他指标联合应用诊断胰腺癌,作为鉴别胰腺癌和慢性胰腺炎的重要参考指标。 展开更多
关键词 黏蛋白抗原4 糖类抗原19-9 糖类抗原242 胰腺癌 诊断
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胰腺癌高表达抗原MUC4 CTL表位肽的体内免疫原性 被引量:1
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作者 范柳笛 张岩 时冉冉 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期441-446,共6页
目的:检测来源于黏蛋白4(MUC4)的人白细胞抗原(HLA)-A2限制性表位肽免疫BALB/c小鼠后产生细胞免疫应答的水平,筛选出体内具有免疫原性的HLA-A2限制性表位肽。方法:将来源于MUC4的候选HLA-A2限制性表位肽、通用性Th表位和弗氏不完全佐剂... 目的:检测来源于黏蛋白4(MUC4)的人白细胞抗原(HLA)-A2限制性表位肽免疫BALB/c小鼠后产生细胞免疫应答的水平,筛选出体内具有免疫原性的HLA-A2限制性表位肽。方法:将来源于MUC4的候选HLA-A2限制性表位肽、通用性Th表位和弗氏不完全佐剂联合应用皮下免疫BALB/c小鼠,用酶联免疫斑点实验(ELISPOT)和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测小鼠脾细胞表位肽特异性细胞免疫应答的水平,体内细胞毒实验活性检测候选肽诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)的能力,并用流式细胞术检测表位肽特异性的CD8+T细胞所占比例。结果:在检测的4个表位肽中,P2004-1Y9V诱导BALB/c小鼠产生的细胞免疫应答最强,细胞毒实验结果显示,P2004和P2004-1Y9V对CAPAN-2细胞均有一定的杀伤作用,且P2004-1Y9V特异性CTLs对CAPAN-2细胞杀伤率高于原肽(P<0.05)。胞内因子染色实验进一步表明P2004-1Y9V免疫后可产生特异性的CD8^+T细胞。结论:在来源于MUC4的HLA-A2限制性表位肽中,P2004-1Y9V具有较强的体内免疫原性,可以作为潜在的肿瘤多肽疫苗应用于临床研究。 展开更多
关键词 黏蛋白4 表位 体内免疫原性 HLA-A2限制性表位肽
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靶向RNA干扰TIM4表达对T细胞的影响 被引量:1
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作者 张琦 张艳霞 +2 位作者 方勇 杨李辉 夏荣 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期832-834,共3页
目的构建靶向RNA干扰T细胞免疫球蛋白及粘蛋白域蛋白4(TIM4)基因的慢病毒重组表达载体,分析TIM4基因对T细胞的影响。方法根据Gene Bank报道的TIM4 mRNA序列(NM_178759.4)设计干扰片段,通过基因工程方法构建靶向RNA干扰TIM4基因的慢病毒... 目的构建靶向RNA干扰T细胞免疫球蛋白及粘蛋白域蛋白4(TIM4)基因的慢病毒重组表达载体,分析TIM4基因对T细胞的影响。方法根据Gene Bank报道的TIM4 mRNA序列(NM_178759.4)设计干扰片段,通过基因工程方法构建靶向RNA干扰TIM4基因的慢病毒载体,体外转染DCs后与T淋巴细胞共培养,检测细胞增殖情况及细胞因子分泌水平。结果成功构建基因干扰的慢病毒载体并转染DCs。MTT实验表明TIM4-DC组T细胞的增殖受到抑制;ELISA检测显示:TIM4-DC组IL-12和IFN-γ的分泌均明显高于对照组(P<0.05)。结论 RNA干扰TIM4基因在DCs表达后,可抑制T细胞增殖的作用以及T细胞向Th2细胞分化。 展开更多
关键词 T细胞免疫球蛋白及粘蛋白域蛋白4 RNA干扰 树突状细胞 TH细胞
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TLR4在慢性支气管炎大鼠气道粘液高分泌中的作用 被引量:2
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作者 万宁 张建勇 +3 位作者 唐凤鸣 李永春 张健 陈德 《四川医学》 CAS 2015年第11期1521-1524,共4页
目的观察TLR4在细菌内毒素(LPS)致慢性支气管炎大鼠气道粘液高分泌中的作用。方法 SPF级雄性Wistar大鼠40只,随机分为4组,正常对照组(NS组)10只,慢性支气管炎组(LPS组)10只,多粘菌素B干预组(LPS+PMB组)10只,多粘菌素B自身对照组(PMB组)1... 目的观察TLR4在细菌内毒素(LPS)致慢性支气管炎大鼠气道粘液高分泌中的作用。方法 SPF级雄性Wistar大鼠40只,随机分为4组,正常对照组(NS组)10只,慢性支气管炎组(LPS组)10只,多粘菌素B干预组(LPS+PMB组)10只,多粘菌素B自身对照组(PMB组)10只。用气管内注入LPS 200μg/200μL及每日LPS溶液雾化吸入1h的方法建立慢性支气管炎动物模型,3周后对大鼠肺脏进行病理学检查,肺组织阿先蓝-过碘酸雪夫(AB-PAS)阳染面积,用免疫组化法观察粘蛋白Muc5AC、TLR4在支气管肺内的表达及荧光定量RT-PCR Muc5AC mRNA、TLR4 mRNA在肺内的表达。结果 LPS组在AB-PAS阳染面积、粘蛋白Muc5AC、TLR4蛋白及Muc5AC mRNA、TLR4 mRNA表达与LPS+PMB组比较差异有统计学意义(P<0.05),NS组和PMB组在上述指标则组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TLR4介导LPS诱发的慢性呼吸道炎症反应可能导致气道粘蛋白基因Muc5AC mRNA的高表达和粘蛋白Muc5AC的高分泌。多粘菌素B可能通过抑制肺组织TLR4 mRNA及其蛋白的表达而抑制气道粘液高分泌。 展开更多
关键词 慢性支气管炎 内毒素 多粘菌素B TLR4 MUC5AC
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TLR4在慢性支气管炎大鼠气道粘液高分泌中的作用及多粘菌素B干预的影响 被引量:6
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作者 万宁 张建勇 +3 位作者 唐凤鸣 李永春 张健 陈德 《西部医学》 2015年第12期1780-1784,共5页
目的观察TLR4在细菌内毒素(LPS)致慢性支气管炎大鼠气道粘液高分泌中的作用及多粘菌素B(PMB)干预的影响,并探讨其可能的机制。方法 SPF级雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组(NS组)、慢性支气管炎组(LPS组)、多粘菌素B干预组(LPS+PMB... 目的观察TLR4在细菌内毒素(LPS)致慢性支气管炎大鼠气道粘液高分泌中的作用及多粘菌素B(PMB)干预的影响,并探讨其可能的机制。方法 SPF级雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组(NS组)、慢性支气管炎组(LPS组)、多粘菌素B干预组(LPS+PMB组)和多粘菌素B自身对照组(PMB组)各10只。用气管内注入LPS 200μg/200μl及每日LPS溶液雾化吸入1小时的方法建立慢性支气管炎动物模型,3周后收集支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞学计数和白细胞分类检测,酶联免疫吸附实验(ELISA)测定BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,病理学检测大鼠肺组织阿先蓝-过碘酸雪夫(AB-PAS)阳染面积,用免疫组化法检测粘蛋白Muc5AC、TLR4在支气管肺内的表达及荧光定量RT-PCR法检测Muc5AC mRNA、TLR4mRNA在肺内的表达。结果 LPS组在BALF中细胞总数、中性粒细胞、TNF-α含量及AB-PAS阳染面积、粘蛋白Muc5AC、TLR4蛋白及Muc5AC mRNA、TLR4mRNA表达与LPS+PMB组比较,差异均有显著性(均P<0.05),NS组和PMB组上述指标间差异无显著性(P>0.05)。结论TLR4介导LPS诱发的慢性呼吸道炎症反应可能导致气道粘蛋白基因Muc5AC mRNA的高表达和粘蛋白Muc5AC的高分泌。PMB可能通过抑制肺组织TLR4 mRNA及其蛋白的表达而抑制气道粘液高分泌。 展开更多
关键词 慢性支气管炎 内毒素 多粘菌素B TLR4 MUC5AC
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安肠愈疡汤对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中TFF3、MUC2和TLR4基因表达的影响 被引量:13
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作者 迟莉丽 袁浩 +6 位作者 宋钦兰 程艳 孙大娟 闫华 王帅 梁峻尉 张晶晶 《胃肠病学》 2016年第2期85-89,共5页
背景:TLR4可介导免疫和炎症反应,TFF3、MUC2为肠黏膜保护因子,维持肠黏膜屏障功能。目的:观察安肠愈疡汤对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中TFF3、MUC2和TLR4基因表达的影响。方法:应用TNBS制备溃疡性结肠炎大鼠模型。将90只Wistar大鼠随机... 背景:TLR4可介导免疫和炎症反应,TFF3、MUC2为肠黏膜保护因子,维持肠黏膜屏障功能。目的:观察安肠愈疡汤对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中TFF3、MUC2和TLR4基因表达的影响。方法:应用TNBS制备溃疡性结肠炎大鼠模型。将90只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、安肠愈疡汤低、中、高剂量组和美沙拉嗪组,分别给予蒸馏水、不同剂量安肠愈疡汤和美沙拉嗪。21 d后处死大鼠,行结肠黏膜组织病理学评分,采用RT-PCR法检测结肠组织中TFF3、MUC2和TLR4基因表达。结果:与模型组相比,安肠愈疡汤中、高剂量组和美沙拉嗪组组织病理学评分、TLR4表达均显著降低(P<0.05),TFF3、MUC2表达均显著升高(P<0.05)。与安肠愈疡汤中剂量组相比,安肠愈疡汤高剂量组和美沙拉嗪组组织病理学评分显著降低(P<0.05),TFF3表达显著升高(P<0.01)。与安肠愈疡汤中剂量组和美沙拉嗪组相比,安肠愈疡汤高剂量组MUC2表达显著升高(P<0.01),TLR4表达显著降低(P<0.01)。结论:安肠愈疡汤可明显促进溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜修复,其作用机制可能与上调TFF3和MUC2基因表达以及下调TLR4基因表达有关。 展开更多
关键词 结肠炎 溃疡性 安肠愈疡汤 三叶因子3 黏蛋白2 Toll样受体4 治疗
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阻断Kupffer细胞的TIM-4蛋白功能对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响 被引量:3
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作者 刘彦 吴皓 +1 位作者 龚建平 李旭宏 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期48-55,共8页
目的探讨阻断Kupffer细胞(Kupffer cells,KCs)的TIM-4蛋白功能对小鼠肝脏缺血再灌注损伤(hepatic ischemia reperfusion injury,HIRI)的影响。方法建立小鼠肝缺血再灌注损伤模型,术后Western blot检测KCs和树突状细胞(dendritic cells,D... 目的探讨阻断Kupffer细胞(Kupffer cells,KCs)的TIM-4蛋白功能对小鼠肝脏缺血再灌注损伤(hepatic ischemia reperfusion injury,HIRI)的影响。方法建立小鼠肝缺血再灌注损伤模型,术后Western blot检测KCs和树突状细胞(dendritic cells,DCs) TIM-4表达,免疫组化检测肝组织TIM-4表达;IR小鼠模型采用随机数字表法分为Sham组(PBS处理)、Ctr Ig组(TIM-4同型对照抗体处理)以及TIM-4 m Ab组(TIM-4抗体处理),术后检测血清肝功、炎症指标、肝组织病理变化、肝细胞凋亡以及NF-κB通路相关蛋白的表达。结果 KCs表达TIM-4蛋白随再灌注时间逐渐增加,然而DCs表达TIM-4不随时间变化;组化结果提示TIM-4主要表达于肝血窦巨噬细胞;与Ctr Ig组比较,TIM-4 m Ab组血清肝功、促炎因子产物水平明显减低,而抗炎因子IL-10以及抗氧化应激产物CAT、SOD逐渐增高,且差异具有统计学意义(P <0. 05);肝组织病理学结果示Ctr Ig组部分炎症细胞浸润,肝血窦轻度充血,TIM-4m Ab组无明显变化;TUNEL结果示,TIM-4 m Ab组凋亡程度明显低于Ctr Ig组,Ctr Ig组和TIM-4 m Ab组细胞早期凋亡程度分别为(25. 56±1. 26)%、(5. 35±0. 33)%,且两组差异具有统计学意义(P <0. 05);阻断KCs TIM-4功能后,KCs TLR4以及下游p-IKKα、p-IκBα、p-p65蛋白表达水平逐渐减低;另外,TPCA-1(IKK-2阻断剂)进行预处理小鼠,进一步验证了阻断KCs TIM-4可通过抑制NF-κB信号通路减轻IRI程度。结论阻断KCs TIM-4的功能能够抑制NF-κB炎症通路的激活,改善IR炎症反应以及肝细胞凋亡,从而对HIRI起到一定的保护作用。 展开更多
关键词 T细胞免疫球蛋白黏蛋白4 KUPFFER细胞 肝缺血再灌注损伤 核转录因子ΚB
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Tim4基因定量检测方法的建立及在消化道肿瘤中的初步应用 被引量:2
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作者 钱晖 彭秀娟 +6 位作者 许晓蒙 顾红兵 王梅 徐会涛 陶洋 徐三荣 许文荣 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2009年第6期465-468,共4页
目的:建立T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域分子4(T cells immunoglobu lin-and muc in-dom ain-contain ing mole-cu le 4,Tim4)基因表达的实时荧光定量PCR(实时RT-PCR)的检测方法,探讨Tim4基因在消化道肿瘤中的表达差异。方法:构建包含Tim4... 目的:建立T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域分子4(T cells immunoglobu lin-and muc in-dom ain-contain ing mole-cu le 4,Tim4)基因表达的实时荧光定量PCR(实时RT-PCR)的检测方法,探讨Tim4基因在消化道肿瘤中的表达差异。方法:构建包含Tim4基因片段的标准质粒,通过RT-PCR,实时RT-PCR等检测并比较Tim4基因在37例胃癌组织、19例结直肠癌组织与对应癌旁组织中的表达水平。结果:建立的Tim4基因定量检测方法准确可靠;在37例胃癌组织中,26例癌旁组织Tim4基因表达量高于对应癌组织(26/37),且在26例癌旁组织高表达的样本中,18例(69.2%)胃癌癌旁组织与癌组织表达比率大于2;在19例结直肠癌中12例癌旁组织表达高于对应的癌组织(12/19),其中癌旁组织高表达率(大于2)为75.0%(9/12)。结论:成功建立了检测Tim4基因的实时RT-PCR方法,Tim4基因在结直肠癌和胃癌的癌组织中表达呈低趋势,这为深入探讨Tim4基因与肿瘤的关系提供了实验基础。 展开更多
关键词 T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域分子4 实时荧光定量RT-PCR 胃癌 结直肠癌
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