结膜松弛症患者泪膜稳定性、杯状细胞及黏蛋白5AC表达的变化

目的检测和观察结膜松弛症患者泪膜稳定性、杯状细胞变化及黏蛋白5AC的表达情况,探讨结膜松弛症的发病机制。方法收集在我院就诊的结膜松弛症患者30例30眼)为结膜松弛症组,另选取单纯老年性白内障手术患者15例(15眼)为正常对照组,对所有入选者进行眼部症状评价[国际眼表面疾病指数(ocular surface disease index,OSDI)积分法]、泪膜破裂时间检测、Schirmer I试验、泪液羊齿状结晶试验,分别对结膜松弛症组和正常对照组的结膜组织标本行HE染色、AB染色、黏蛋白5AC免疫组织化学染色观察,行统计学分析。结果结膜松弛症组OSDI评分为(37.80±8.94),高于正常对照组(11.40±4.08)(P<0.01)。结膜松弛症组泪膜破裂时间为(6.70±2.76)s,低于正常对照组(13.67±3.48)s(P<0.01)。SchirmerⅠ试验结膜松弛症组为(6.23±3.13)mm,明显低于正常对照组(13.40±3.74)mm(P<0.01)。结膜松弛症组患者泪液中羊齿状结晶较正常对照组明显减少(χ~2=14.309,P=0.003)。光镜下结膜松弛症组较正常对照组球结膜厚度变薄,胶原纤维少,弹力纤维缺失,固有层间质淤血水肿,杯状细胞减少,黏蛋白5AC染色阳性细胞数低于正常对照组(χ~2=9.499,P=0.023)。结论结膜松弛症患者泪膜功能受到影响,杯状细胞减少,泪液中羊齿状结晶减少,黏蛋白5AC含量减少,最终导致球结膜过度松弛,出现眼表泪液学异常。

白细胞介素13在嗜酸粒细胞性慢性鼻-鼻窦炎合并鼻息肉组织中的表达及其与黏蛋白高分泌的相关性研究

目的明确白细胞介素13(IL-13)在嗜酸粒细胞性慢性鼻-鼻窦炎(eosinophilic chronic rhinosinusitis with nasal polyps,EOS-CRSwNP)中的表达,探讨在EOSCRSwNP中IL-13和黏蛋白5AC(mucin 5AC,MUC5AC)的相关性。方法利用免疫组化和ELISA方法观察和测量MUC5AC在对照组鼻黏膜组织和EOS-CRSwNP组织的表达,ELISA法检测IL-13在对照组鼻黏膜组织和EOS-CRSwNP组织的表达;双变量相关性分析研究EOSCRSwNP中IL-13和MUC5AC的相关性。IL-13与原代培养鼻黏膜上皮细胞共孵育,ELISA检测细胞上清中MUC5AC的表达。结果免疫组化染色见MUC5AC主要表达在鼻黏膜上皮,通过ELISA检测,EOS-CRSwNP中MUC5AC和IL-13均较对照组显著升高。双变量相关性分析表明在EOS-CRSwNP中MUC5AC与IL-13存在高度相关,进一步通过IL-13与气液界面原代培养人鼻黏膜上皮细胞共孵育,MUC5AC分泌显著增加。结论 MUC5AC和IL-13在EOSCRSwNP中表达升高,MUC5AC的高分泌与IL-13高表达密切相关。

链霉蛋白酶对胃组织中治疗幽门螺杆菌药物浓度的影响

目的明确链霉蛋白酶应用对胃组织中阿莫西林和甲硝唑浓度的影响。方法C57BL／6小鼠随机分为实验组和对照组（每组70只），给予奥美拉唑（138．2mg／kg）＋阿莫西林（28．6mg／kg）＋甲硝唑（22．5mg／kg），并分别予链霉蛋白酶（110mg/kg）或等量的无菌PBS，上述药物灌胃1次，给药后15～360min共10个时间点（每组7只／时间点）取血浆和胃组织，高效液相色谱法检测阿莫西林和甲硝唑浓度，并检测给药后120、360min的胃组织黏膜层胃炎指数（HE法）和黏蛋白5AC的相对表达量（蛋白质印迹法）。结果阿莫西林和甲硝唑的胃组织浓度达峰时间早于在血浆出现的时间（均为15min比60min），实验组的胃组织浓度明显高于对照组（P〈0．05），主要集中在15～90min。实验组药物血浆浓度在15和30min较对照组高（P〈0．05）。给药后120、360min，实验组与对照组的胃黏膜层胃炎指数的差异均无统计学意义（0．28±0．18比0．14±0．14，P〉0．05；0．43±0．20比0．28±0．18，P〉0．05）；黏蛋白5AC的相对表达量实验组较对照组低（0．036±0．006比0．197±0．058，P〈0．05；0．039±0．008比0．208±0．072，P〈0．05）。结论链霉蛋白酶明显增加了抗菌药物从胃腔向胃黏膜方向的弥散量，使局部胃组织和血浆浓度升高，且以局部胃组织浓度升高为主，持续时间更长。

p38丝裂原激活蛋白激酶信号通路参与高渗应激诱导黏蛋白5AC高表达研究

目的探讨p38丝裂原激活蛋白激酶(P38)信号通路参与高渗应激诱导黏蛋白5AC(MUC5AC)高表达的作用机制。方法利用545、695、855、1055和1280mOsm/L高渗氯化钠溶液培养人气道上皮NCl-H292细胞。同时以1280m Osm/L高渗氯化钠为刺激因素,以P38特异性抑制剂SB203580、c-jun氨基末端激酶(JNK)特异性抑制剂SP600125及细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)特异性抑制剂U0126为干预因素,采用RT-PCR技术及ELISA观察培养细胞MUC5AC转录水平和MUC5AC蛋白水平改变。采用Western blotting法检测1280mOsm/L高渗氯化钠培养上清液中细胞匀浆磷酸化P38(p-P38)、磷酸化JNK(p-JNK)及磷酸化ERK(p-ERK)蛋白水平。结果分别以545、695、855、1055和1280mOsm/L高渗氯化钠刺激后,培养细胞中MUC5AC mRNA及蛋白含量显著高于对照组(P<0.01),且呈现出与渗透浓度相关的趋势。SB203580显著下调1280mOsm/L高渗氯化钠所致的p-P38含量升高,同时显著下调MUC5AC mRNA及蛋白含量(P<0.05);SP600125则明显下调p-JNK的含量,并下调MUC5AC mRNA转录及蛋白含量(P<0.05),但作用弱于SB203580;1280m Osm/L高渗氯化钠对ERK的含量无影响(P>0.05),U0126对MUC5AC mRNA转录及蛋白含量也无明显影响(P>0.05)。结论高渗应激可呈浓度依赖性地从转录水平诱导气道上皮细胞呈现黏液高分泌状态,且P38信号通路起主要作用。