抗藻酸盐血清对粘液型铜绿假单胞菌粘附性和生物被膜渗透性的影响

目的：研究抗藻酸盐血清对粘液型铜绿假单胞菌粘附性及其生物被膜渗透性的影响。方法：采用结晶紫染色法测定粘液型铜绿假单胞菌的粘附性，采用ＨＰＬＣ法测定加替沙星在粘液型铜绿假单胞菌生物被膜的渗透浓度，从而观察抗藻酸盐血清对于粘液型铜绿假单胞菌生物被膜渗透性的影响。结果：１：１抗藻酸盐血清在同 ８Ｘ ＭＩＣ加替沙星联用的情况下，使细菌对硅胶片粘附性显著降低，硅胶片洗脱液在５４０ｎｍ波长处的光密度值从０．１２６ ± ０．０１１降低到０．１１４±０．０１０；同时使加替沙星对细菌生物被膜的渗透性增强，４，８和１６ｍｇ·Ｌ－１ 的加替沙星通过细菌生物被膜的浓度分别从１．２１０±０．０９１，２．９１１±０．１１２和５．５１１±０．２１３ｍｇ·Ｌ－１显著提高至１．７５２±０．１２２、３．９０８±０．１５４和７．８９８±０．３２１ｍｇ·Ｌ－１。结论：抗藻酸盐血清能够降低粘液型铜绿假单胞菌对于生物医学材料的粘附性，增强抗生素对于生物被膜的渗透能力。

黏液型和非黏液型铜绿假单胞菌临床分布和耐药表型分析

目的了解黏液型和非黏液型铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa,PAE)的临床分布及耐药性特点,为临床合理选择抗菌药物和预防控制院内感染提供依据。方法对2010-2013年济南军区总医院黏液型和非黏液型PAE的临床分布、耐药表型及药敏结果进行回顾性分析。结果 4年内共分离出1 465株PAE,黏液型PAE共44株(占3.0%),非黏液型PAE共1 421株(占97.0%);44株黏液型PAE除1例来自尿液外,其余均来自痰液标本,74.9%的非黏液型PAE标本分离自痰液;黏液型菌株医院感染患者的基础疾病主要是慢性呼吸系统疾病,占64.5%;非黏液型菌株则多见于术后感染和呼吸系统疾病患者,分别占25.8%、19.6%。44株黏液型PAE中,多重耐药菌占11.4%;而非黏液型PAE中多重耐药菌为19.0%;黏液型PAE对部分原本敏感的抗菌药物逐年产生耐药性,且各药的耐药率呈逐年上升趋势,但耐药率均较低;而非黏液型PAE的耐药率自2011年起逐年降低。结论 PAE分离标本以痰液为主,阳性感染者多为慢性呼吸系统疾病患者,与非黏液型PAE相比,黏液型PAE对抗菌药物的耐药性逐年增强。

不同方法检测黏液型铜绿假单胞菌药物敏感性结果准确性探讨

目的探讨黏液型铜绿假单胞菌(PA)药物敏感性检测方法准确性,以找出适合临床开展的、准确的药物敏感性检测方法。方法分别用药物敏感性纸片琼脂扩散法(K-B法)、假单胞菌和非发酵菌药物敏感性试剂盒(ATB PSE5)、仪器法(MicroScan WalkAway 96 plus和VITEK 2)和微量肉汤稀释法同时检测66株黏液型PA,以微量肉汤稀释法作为参考方法,其余方法作为测试方法进行对照分析。结果 K-B法与微量肉汤稀释法的完全符合率(CA)为92.63%,严重错误(VME)为0.30%,重大错误(ME)为3.13%,一般错误(MIE)为3.94%;ATB PSE5与与微量肉汤稀释法的CA为88.89%,VME为0.83%,ME为5.83%,MIE为4.44%;MicroScan仪器法与微量肉汤稀释法的CA为89.38%,VME为0.34%,ME为5.19%,MIE为5.07%。VITEK 2因结果缺失严重未进行比较。结论临床常用检测PA药物敏感性的方法中,以K-B法检测黏液型PA最为可靠,但应延长孵育时间至48 h或放至CO2孵箱24 h后读取结果更为直观、准确。

病原性铜绿假单胞菌超微结构

本文用扫描电镜和透射电镜对７０株患者痰中分离的铜绿假单胞菌临界点干燥、超薄切片和负染标本进行了超微结构观察。发现菌细胞一端只有单一鞭毛，长约５３０ｎｍ，呈中空管状；有４７／７０的菌细胞壁外层可见一厚度为２３ｎｍ的粘多糖包绕；５８／７０的菌细胞壁上有菌毛；此外，尚可见到菌细胞表面带有直径为７ｎｍ左右的外分泌颗粒。

黏液型与非黏液型铜绿假单胞菌的耐药性比较

目的探讨黏液型铜绿假单胞菌(PA)的耐药性及其耐药机制,为临床抗感染治疗提供合理的选药依据。方法采用API鉴定卡及K-B纸片扩散法对菌株进行鉴定及药敏试验,并应用WHONET5.4软件对数据进行统计分析。结果黏液型和非黏液型PA对常用12种抗菌药物的耐药性比较结果为:非黏液型PA对庆大霉素、头孢噻肟、氨曲南、头孢吡肟、环丙沙星和左氧氟沙星的耐药性显著高于黏液型PA(P<0.05),而对亚胺培南、美罗培南、哌拉西林/舒巴坦、阿米卡星、头孢他啶和头孢哌酮的耐药性,两者差异无统计学意义(P>0.05)。抗菌药物联合治疗黏液型PA感染前后,常用的12种抗菌药物耐药性比较结果为:对亚胺培南和美罗培南的耐药性一致;对阿米卡星、头孢噻肟的耐药性,治疗后明显高于治疗前(P<0.05);其他抗菌药物的耐药性也出现不同程度的变化。结论黏液型PA体外药敏试验耐药性较低,但体内用药治疗效果不佳,而使用体外药敏试验敏感药物与能抑制细菌表面生物膜作用的药物联合使用,治疗效果较为明显。

黏液型铜绿假单胞菌的毒力基因、产金属酶检测与耐药性研究

目的比较两种表型铜绿假单胞菌(PAE)毒力基因、产金属酶(MBLs)及耐药性,为临床治疗和医院感染控制提供依据。方法采用ATB鉴定系统进行菌株鉴定,筛选出两种表型菌株;纸片扩散法检测耐药性;PCR方法检测毒力基因exoS、exoU和exoY;改良Hodge试验(PAE-MHT)法检测MBLs。结果非黏液型PAE对各种抗生素的耐药率均高于黏液型,其中对庆大霉素、氨曲南、左氧氟沙星、亚胺培南、美罗培南的耐药率明显高于黏液型;同时非黏液型MBLs阳性率明显高于黏液型;3种毒力基因阳性率黏液型均高于非黏液型,但两者比较无显著性差异;6种基因型中,除exoU+/exoS-/exoY-和exoU-/exoS-/exoY-两种基因型非黏液型明显高于黏液型外,其余四种基因型的比较无显著性差异。结论针对PAE感染,应尽早尽快选择敏感药物治疗,以免非黏液型转化成黏液型后,增加治疗难度。

铜绿假单胞菌胞外粘液多糖结合菌苗的实验研究

目的 探讨绿脓杆菌胞外粘液多糖 (MEP)制备的结合菌苗的免疫效果。方法 将绿脓杆菌MEP与B群脑膜炎球菌外膜蛋白复合物 (OMPC)交联制成MEP -OMPC结合菌苗。免疫小鼠后 ,以ELISA法检测血清中抗MEP(IgG)抗体水平 ,并观察其对细菌腹腔攻击的保护作用。结果 以MEP -OMPC免疫小鼠后 ,所产生的抗MEP(IgG)抗体水平明显高于单纯MEP免疫组和PBS对照组 ,并能有效地预防绿脓杆菌的全身感染。结论 绿脓杆菌MEP -OMPC结合菌苗较单纯MEP具有更强免疫原性 。

绿脓杆菌胞外粘液多糖的实验研究

本实验提纯了绿脓杆菌粘液株的胞外粘液多糖物质（ＭＥＰ），并对其在细菌粘附中的作用进行了研究。结果发现纯化的ＭＥＰ制品或抗ＭＥＰ血清可以阻断绿脓杆菌粘液株对健康人的颊上皮细胞的粘附作用，证明ＭＥＰ确是绿脓杆菌粘液株的粘附素。

2015-2018年某院支气管扩张症患者感染铜绿假单胞菌的药物敏感性变迁分析

目的分析支气管扩张症患者感染铜绿假单胞菌(PA)的抗菌药物敏感性变迁。方法收集某医院2015年9月1日至2016年8月31日(第1阶段)、2016年9月1日至2017年8月31日(第2阶段)、2017年9月1日至2018年8月31日(第3阶段)扩张症患者感染的PA。采用琼脂稀释法检测PA对11种常用抗菌药物的敏感性。结果在第1、2、3阶段检出的黏液型PA分别占16.0%、25.0%和29.3%。第3阶段的整体PA和非黏液型PA对哌拉西林-他唑巴坦(TZP)、头孢哌酮(CFP)、头孢哌酮-舒巴坦(SCF)、头孢吡肟(FEP)、亚胺培南(IMI)、环丙沙星(CIP)的敏感性均明显高于第1阶段(P<0.05)。3年间的整体黏液型PA对TZP、CFP、SCF、FEP、IMI和CIP的敏感率亦明显高于非黏液型PA(P<0.05)。结论在支气管扩张症患者中,PA的药物敏感性逐年升高,且黏液型PA比非黏液型PA升高更明显。

抗藻酸盐血清对黏液型铜绿假单胞菌生物被膜杀菌活性的影响

目的 :研究抗藻酸盐血清与加替沙星联用对黏液型铜绿假单胞菌生物被膜杀菌活性的影响。方法 :采用MTT方法测定黏液型铜绿假单胞菌生物被膜活菌数 ,用微量稀释法测定抗菌药物最低生物被膜清除浓度(MBEC)。结果 :1∶1抗藻酸盐血清与 1×MIC ,4×MIC和 8×MIC加替沙星联用可以使细菌生物被膜中的活菌数量 (单位为lgcfu·cm-2 )分别从 ( 6 .6 3± 0 .85 ) ,( 6 .48± 1.12 )和 ( 5 .73± 1.10 )显著降低至 ( 5 .76± 0 .90 ) ,( 5 .0 2±0 .93)和 ( 4.70± 0 .6 2 ) ,使加替沙星对铜绿假单胞菌的MBEC从 8μg·mL-1降低至 4μg·mL-1。结论 :抗藻酸盐血清与加替沙星联用后 ,能够增强抗菌药物对黏液型铜绿假单胞菌生物被膜的杀菌活性。

黏液型铜绿假单胞菌耐药性分析

目的:了解我院分离的黏液型铜绿假单胞的耐药特性,探讨其耐药机理,为临床治疗选药提供依据.方法:应用K-B法分别测试40株黏液型和40株非黏液型铜绿假单胞菌对常见12种抗生素的耐药性,并进行统计分析.结果:黏液型铜绿假单胞菌对12种抗生素的耐药率为10%～35%,非黏液型铜绿假单胞菌的耐药率为40%～60%.结论:黏液型铜绿假单胞菌的体外耐药性较弱,且明显弱于非黏液型铜绿假单胞菌的耐药性,但因其存在生物膜,体内用药时耐药率较高,因此临床培养鉴定出铜绿假单胞菌时,应注意是否为黏液型,以便临床医生选择合适的药物进行治疗.

黏液型铜绿假单胞菌耐药特征和耐药株相关基因型分析

目的探讨携带不同基因型黏液型铜绿假单胞菌与抗菌药物耐药性的相关性,为临床合理使用抗菌药物治疗携带不同基因型黏液型铜绿假单胞菌提供理论参考依据。方法 110株铜绿假单胞菌通过药敏试验和PCR方法检测。结果与24h药敏结果相比,48h黏液型铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率均为13.6%,而对阿米卡星、妥布霉素、庆大霉素、头孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦、左氧氟沙星和头孢他啶的耐药率在6.4%～11.8%,差异有统计学意义(P<0.05)。携带AmpC阳性基因的菌株有12株(80.00%),携带VIM-2阳性基因的菌株有9株(60.00%),携带OprD2阴性基因的菌株有11株(73.33%)。结论不同时间检测的黏液型铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南耐药率显著不同,其机制与AmpC、VIM-2和OprD2基因密切相关。

2013-2015年某院痰黏液型铜绿假单胞菌分离和耐药性变迁

目的了解2013-2015年该院痰黏液型铜绿假单胞菌的分离及耐药性变迁,为临床合理选择抗菌药物提供科学依据。方法细菌分离、培养和鉴定按照《全国临床检验操作规程》第四版操作,药敏试验采用纸片扩散法(K-B法),以临床实验室标准委员会2014版(CLSI 2014)标准判定药敏试验结果,应用WHONET5.6软件分析试验数据。结果 2013-2015年临床痰液标本中检出铜绿假单胞菌1 653株,其中黏液型铜绿假单胞菌255株,占15.4%;3年平均耐药率最高的抗菌药物为哌拉西林,耐药率为29.0%;耐药率均低于10.0%的抗菌药物有阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦;耐药率增幅较大的抗菌药物为亚胺培南、左氧氟沙星、环丙沙星、头孢他啶,分别由2013年的12.5%、9.7%、8.3%、9.7%上升至2015年的20.5%、17.0%、19.3%、15.9%。结论 2013-2015年间痰黏液型铜绿假单胞菌分离率逐年升高,耐药率近3年呈上升趋势,医院应加强黏液型铜绿假单胞菌耐药性监测。

黏液型与非黏液型铜绿假单胞菌的比较蛋白组学分析

目的探讨黏液型与非黏液型铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,P.a)的差异蛋白谱,以发现黏液型P.a潜在的生物标志物。方法采用来自于临床囊性纤维化患者分离的3株黏液型P.a菌株,脉冲场凝胶电泳以确定它们的同源性;采用同位素相对和绝对定量标记(isobaric tags for relative and absolute quantitation,i TRAQ)结合二维液相色谱串联质谱(two-dimensional liquid chromatography-tandem mass spectrometry,2D LC-MS/MS)技术分析3株黏液型与对照组1株非黏液型P.a的差异蛋白谱,并采用RT-q PCR方法对5个共同差异蛋白进行验证。结果 3株黏液型P.a菌株不具有同源性,i TRAQ结果没有明显差异。3组共有219个上调和101个下调差异蛋白。pa2815、pa2018、dnak、pa5046和acef基因转录水平与i TRAQ结果一致。结论不同黏液表型P.a的i TRAQ结果没有明显差异,219个上调和101个下调差异蛋白可以作为研究黏液型与非黏液型P.a致病机制的候选生物标志物。

黏液型铜绿假单胞菌β-内酰胺酶的表达状况及耐药性研究

目的了解该院黏液型铜绿假单胞菌(PA)β-内酰胺酶的表达状况及耐药情况,为临床合理用药和院内感染监测提供有效的依据。方法收集该院2015年1月至2018年12月分离的黏液型PA 82株,用K-B法进行药敏试验,同时分别检测其4种β-内酰胺酶,产酶组与非产酶组间药敏差异用χ2检验进行比较。结果82株黏液型PA主要分离自痰液标本,患者主要分布在呼吸内科;12种抗菌药物中敏感率最高的是妥布霉素和阿米卡星(均为92.7%),最低的是左氧氟沙星(51.2%)。β-内酰胺酶阳性的黏液型PA一共19株,占23.2%;产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)12株,占14.6%,产C类头孢菌素酶(AmpC)5株,占6.1%,产A类碳青霉烯酶2株,占2.4%,产B类碳青霉烯酶即金属酶(MBLs)4株,占4.9%,其中有1株同时产ESBLs和AmpC,3株同时产ESBLs和MBLs。产酶与非产酶组之间的药敏比较,哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、氨曲南、左氧氟沙星、环丙沙星、哌拉西林、头孢吡肟、亚胺培南、美罗培南和庆大霉素,差异有统计学意义(P<0.05),妥布霉素和阿米卡星差异无统计学意义(P>0.05)。结论该院黏液型PA产β-内酰胺酶以ESBLs为主,产酶株比非产酶株的耐药率明显提高。

增强的中性粒细胞呼吸爆发对黏液型铜绿假单胞菌生物膜及其藻酸盐的影响

目的:在体内探讨中性粒细胞呼吸爆发增强后对黏液型铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,P.a)生物膜(biofilm,BF和其重要的胞外基质藻酸盐的影响。方法:建立大鼠气道黏液型P.a BF感染模型,分别用呼吸爆发增强剂(PMA)(BF-PMA组)和生理盐水(BF-对照组)干预,平板计数法检测BF内活菌数目,扫描电镜观察BF的结构;硫酸-咔唑法测定BF内藻酸盐含量;HE染色观察2组肺组织病理损伤情况、ELISA分析炎症反应水平。结果:扫描电镜显示BF-PMA组的BF结构较对照组更复杂、更厚,且BF-PMA组的BF活菌数目明显高于对照组(P=0.000);BF-PMA组BF内藻酸盐合成明显高于对照组(P=0.004);HE染色发现BF-PMA组肺组织病理改变更严重,且炎症反应更重,γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)水平较对照组高(P=0.002),IFN-γ与白介素-10(interleukin-10,IL-10)的比值也高于对照组(P=0.023)。结论:在体内中性粒细胞呼吸爆发增强后可能通过促进黏液型P.a BF的重要胞外基质藻酸盐的合成,导致黏液型P.a BF清除更难,同时伴随更严重的病理损害和炎症反应。

临床药师参与支气管扩张伴耐药铜绿假单胞菌感染患者临床用药的药学监护

目的:探究临床药师参与支气管扩张伴耐药铜绿假单胞菌感染患者抗感染治疗的药学监护。方法:临床药师结合患者病情变化及检查结果,根据耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌(CRPA)、黏液型铜绿假单胞菌特点及抗感染药物作用特点,协助临床医师制定抗感染治疗方案,并实施药物疗效的观察和药学监护。结果:治疗后患者感染症状得到有效控制,治疗过程中未发生明显的药物不良反应症状。结论:临床药师参与个体化抗感染方案的制订,有利于促进抗菌药物的合理使用,确保了患者用药安全性和有效性。

替加环素联合亚胺培南对黏液型铜绿假单胞菌的体外抗菌活性及生物膜抑制作用分析

目的评价替加环素联合亚胺培南对黏液型铜绿假单胞菌(MPA)体外浮游菌和生物膜的抑制作用及联合抗菌效果。方法采用微量肉汤稀释法测定不同浓度组合的替加环素和亚胺培南对89株MPA的最小抑菌浓度(MIC),采用棋盘法测定替加环素与亚胺培南的体外协同作用,并计算分级抑菌浓度指数(FICI),采用时间杀菌曲线判定2种药物的联合效应,采用96孔板结合结晶紫半定量染色法判定生物膜清除效应。结果替加环素联合亚胺培南对MPA临床分离株浮游菌的协同抑制作用为46.07%(41株),部分协同作用为14.6%(13株),相加作用为12.36%(11株),无关作用为26.97%(24株),无拮抗作用。培养24 h,亚胺培南、替加环素联用与单独使用比较,菌量抑制>2 log10 CFU/mL。与单独使用1/4 MIC替加环素比较,加入1/4、1/2、1 MIC亚胺培南后,可明显降低生物膜黏附性(P<0.05);与单独使用1/4 MIC亚胺培南比较,加入1/4、1/2、1 MIC替加环素后,可明显降低生物膜黏附性(P<0.05)。结论替加环素联合亚胺培南具有协同或部分协同抑制MPA的作用,联合用药比单独用药具有更高的抗菌效能,同时对于生物膜抑制作用具有一定的协同效应。

抗生物膜治疗黏液型铜绿假单胞菌感染的研究进展

铜绿假单胞菌是临床上常见的重要条件致病菌,常引起慢性囊性肺纤维化患者、慢性创伤患者及滞留导尿管患者感染,当感染未得到有效控制时,菌体形成生物膜,包裹于外周,转化成黏液型铜绿假单胞菌,对抗菌药物极不敏感,疗效不佳,感染难以治愈。因此,防止生物膜的形成、破坏已形成的生物膜成为治疗黏液型铜绿假单胞菌的关键。本文就抗生物膜治疗相关的研究进行汇总概述,为临床有效治疗黏液型铜绿假单胞菌感染提供依据。

黏液型铜绿假单胞菌感染实验鉴定和病例回顾分析

目的探讨黏液型铜绿假单胞菌的临床分布特点及对常用抗菌药物敏感度。方法对医院2013年分离的53株非重复性黏液型铜绿假单胞菌感染病例进行回顾性分析，通过查阅病历获得患者一般资料、疾病情况、抗生素使用等信息，并对菌株进行药敏分析。结果所有菌株均分离自痰标本，患者以老年人为主，平均年龄66.7±.1岁。50例患者有呼吸道感染的慢性病史；所有患者住院期间均使用了2种或2种以上抗菌药物，联合使用过大环内酯类的仅11例。53株菌对临床常用的抗菌药物均表现了较高的体外敏感性，除替卡西林／克拉维酸（64.2％）、头孢吡肟（60.4％）以外，其它药物敏感率均高于70％。结论黏液型铜绿假单胞菌的易感人群为老年有呼吸道感染慢性病史的患者，体外培养对抗菌药物敏感性较高，临床上多采用联合抗菌药物治疗，大环内酯类药物使用率较低。