毛霉蛋白酶在腐乳成熟中的作用

采用SDS-PAGE与ESI-MS相结合的方法研究了毛霉蛋白酶和Alcalase蛋白酶对SPI的酶促降解作用,研究结果表明,Alcalase是一种典型的内切型蛋白酶,它能在1h内催化大豆蛋白降解为分子量10000D以下的肽段,但降解产物容易相互聚合而沉淀,毛霉蛋白酶则具有较强的肽酶活性,能够以大豆蛋白或多肽为底物酶促降解生成多量的水溶性肽,为后期嗜盐菌的生长提供了可供利用的速效氮素营养,毛霉蛋白酶还具有消除苦味、形成鲜味物质的作用,与腐乳风味形成有关。

腐乳发酵中毛霉菌丝的自溶及其影响因素研究

对腐乳发酵过程中甲壳素酶、脱乙酰甲壳质酶、壳多糖酶和N-乙酰氨基葡萄糖酶进行研究,旨在探索腐乳毛霉后发酵菌丝自溶机理。在保持腐乳发酵所需各种酶活力的同时,达到后期腐乳成熟及毛霉菌丝充分自溶,以提高腐乳品质。结果表明:甲壳素酶是影响毛霉菌丝自溶的关键酶;温度是影响菌丝自溶的主要因素;香辛料(砂仁)对几丁质酶活力影响较大。通过正交试验确定:控制适宜的香辛料比例,温度30℃,初始pH6.5,初始酒精度10°,初始NaCl浓度11%并添加0.2%几丁质进行腐乳发酵。70d完全成熟,腐乳毛霉菌丝长度比对照低4.1倍。

自然发霉条件下腐乳醅中优势微生物的分离与初步鉴定

对自然发酵腐乳醅中的优势微生物进行分离和初步鉴定,测定其最适生长温度及蛋白酶种类。结果表明:腐乳醅中优势微生物为毛霉M1和毛霉M5,毛霉M1经鉴定为总状毛霉,毛霉M5为鲁氏毛霉。毛霉M1以麦麸曲为培养基,在25℃下培养时间为72h,其产碱性蛋白酶能力达到2808.765u/g干基、产中性蛋白酶能力2453.314u/g干基,产酸性蛋白酶能力较弱为383.330u/g干基。

双霉菌混合发酵腐乳前发酵条件优化及酶活研究

八公山腐乳前发酵工艺对其总体风味具有重要影响,在总状毛霉和米根霉单独发酵腐乳的基础上,探索总状毛霉(Mucorracemosus)和米根霉(Rhizopusoryzae)混合发酵腐乳的发酵工艺。在单因素的基础上,以蛋白酶活力和糖化酶活力为评价指标,选取发酵时间、发酵温度和混合比例为影响因子,采用响应面法优化总状毛霉和米根霉混合发酵腐乳的前发酵条件,比较最优条件下混合发酵和总状毛霉与米根霉单独发酵的前发酵情况。研究结果表明总状毛霉和米根霉混合发酵的前发酵条件为:发酵时间56 h、发酵温度28℃、混合比例(总状毛霉和米根霉)1∶1,此时分泌产蛋白酶活力50.51 U/m L,糖化酶活力为15.15 U/m L。通过对比双菌和单菌发酵腐乳前发酵情况可知:总状毛霉和米根霉混合发酵较总状毛霉更能耐高温,且在菌丝的生长和酶系的分泌积累较单独发酵都更有优势,为后期发酵的一系列生化反应奠定了良好的基础,有利于改善腐乳的发酵周期,提高腐乳的品质。

黄色毛霉腐乳抗氧化能力的研究

以黄豆为原材料,分别接种黄色毛霉,雅致放射毛霉制作腐乳,用二苯代苦味酰基自由基(DPPH:2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl hydrate)及2,2-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)[ABTS:2,2′-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)]自由基清除试验,抑制油脂过氧化试验和还原能力试验评价黄色毛霉腐乳的抗氧化能力,并以雅致放射毛霉发酵的腐乳作为对照。结果显示:黄色毛霉腐乳具有更高的抗氧化能力。

航天诱变毛霉ZY-3在腐乳生产中的应用研究

航天诱变毛霉（Mucor） ZY-3菌株是一株能够耐高温的菌株,产酶适宜温度较高,在38～42℃的条件下ZY-3的生长状况最好,蛋白酶活性达到较高范围.用ZY-3代替原始高大毛霉（Mucor mucedo）菌种接种豆腐坯,结果表明,腐乳发酵阶段抗污染力强、长势好,成品滋味鲜美.毛霉ZY-3生产的腐乳符合商业标准SB/T 10170-2007编乳》的要求,以颜色、风味、特色、固形物含量等作为影响论域的主要因素,进行了产品的模糊综合评价,证明毛霉ZY-3菌株可以用于腐乳生产.

八公山腐乳酿制过程中毛霉和根霉的前期发酵比较研究

八公山腐乳前期发酵工艺对其总体风味具有重要影响,围绕腐乳酿制中常用的总状毛霉（Mucor racemosus）和米根霉（Rhizopus oryzae）开展工艺探索具有重要意义。在单因素试验的基础上,选取发酵时间、发酵温度和接种量为影响因子,以蛋白酶活力为评价指标,采用响应面法优化总状毛霉和米根霉发酵腐乳的前期发酵条件,比较最优条件下二者前期发酵分泌酶系和氨基酸。研究结果表明总状毛霉的前期发酵条件为：发酵时间60 h、发酵温度24℃、接种量1.0×10^5 CFU/mL,此时分泌产蛋白酶活力为42.79μg/mL;米根霉的前期发酵条件为：发酵时间50 h、发酵温度32℃、接种量1.0×10^5 CFU/mL,此时分泌产蛋白酶活力为33.51μg/mL。通过对二者前期发酵的情况比较分析可知：总状毛霉发酵前期产物中蛋白酶活力高于米根霉,而淀粉酶、糖化酶、脂肪酶活力低于米根霉。总状毛霉发酵产物的氨基酸总量高于米根霉,但其中呈味氨基酸和疏水氨基酸差别不大。两种菌的前期发酵互有优势,为协同作用提供了一定的理论依据。

腐乳毛霉蛋白酶菌株紫外线诱变育种

目的:选育酶活力高、耐热性好的毛霉蛋白酶菌株,用于腐乳发酵实验或生产。方法:从腐乳中分离毛霉蛋白酶菌株,对其出发菌株进行紫外线诱变,并经控温培养,选育优良变株。结果:获得一株酶活力高、耐热性强的优良变株SCLG—毛霉16,该菌株在32℃条件下,生长茂盛,其HE值为1.39、蛋白酶活力为180.375u/g,分别较出发菌株高出7.8%和51.4%。结论:将此优良变株用于腐乳发酵实验或生产,在缩短发酵时间,提升腐乳质量,延长生产季节等方面具有一定的应用价值。

宜宾豆腐乳毛霉分离及应用

为了解决宜宾地区豆腐乳制作中培菌周期长、易染菌、产品品质差等问题,从宜宾豆腐乳中分离得到15株毛霉菌。以生长良好的SH12为生产用菌,制作菌悬液应用于豆腐乳制作。通过对比实验表明:培菌温度以20℃最好,后熟时间以45~60天最好,豆腐坯口感柔滑细腻,香气纯正。自制豆腐乳氨基酸态氮、水溶性蛋白含量分别为0.803,8.828g/100g,均达到国家标准SB/T 10170-2007的要求。通过采用优选的毛霉菌提高了生产效率,减少了杂菌污染,使产品品质大大提升。

腐乳毛霉高产蛋白酶菌株的分离与鉴定

从贵州各地风味较好的腐乳样品中分离到20株疑似毛霉菌株，经理化鉴定。并采用福林-酚试剂法检测产蛋白酶活力，获得1株发酵风味良好且蛋白酶活性较高的腐乳毛霉菌株MGC317。鉴定为雅致放射毛霉Actinomucor elegans（Eid）Benjam et Hesseh。将MGC317菌株接种麸皮培养基，28℃培养48h。其蛋白酶活性为57．26μL；对其16SrDNA的ITS序列进行克隆和分析，其分子长为711bp，与雅致放射毛霉比较。序列同源性为96％-97％。前发酵结果显示，MGC317菌株的菌丝高度为3．1cm。48h时蛋白酶活性为13.82μL。

多菌种腐乳发酵剂的研制

试验以腐乳发酵中常见的毛霉为主要发酵菌,添加提高风味的乳酸菌与酵母菌制作多菌种腐乳发酵剂。运用均匀试验和正交试验对腐乳发酵剂制备工艺中的培养料配方、菌种比例、菌种接种量、培养条件、干制条件等工艺参数进行研究。结果表明:将麸皮、米粉、豆粉按照65%,25%,10%比例混合均匀,然后加入培养料总质量105%的水制备成培养料,经灭菌后接入3%的混合菌液(霉菌液∶酵母菌液∶乳酸菌液为9∶1∶1),置于25℃培养5天,取出后揉散,在40℃干制18h,可制得微生物活性良好的腐乳发酵剂。

中国腐乳的现代研究

从腐乳现代研究的营养价值、生产菌种、辅料介质与工艺和品质、腐乳独有的发酵变化以及腐乳的生物活性物质等方面进行了详尽的论述,并根据多年的生产实践提出了一些新颖的观点,阐述了腐乳的研发思路。

腐乳毛霉SH12生长性能及产酶特性研究

研究了腐乳毛霉SH12的生长性能及产酶特性。结果表明:在温度26℃、pH为7.5时,生长速率最大。Ca^(2+),Mg^(2+)浓度低于0.2%时,对毛霉的生长几乎没有影响。在36h时,毛霉菌丝体干重达到较大值。产酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、糖化酶、脂肪酶活力分别为67.3,339.4,372.3,293.1U/g,0.67U/mL,以蛋白酶为主。在豆腐培养基上中性蛋白酶和碱性蛋白酶活力在48h达到最大,而酸性蛋白酶活力在60h达到最大。研究结果可为毛霉SH12用于腐乳生产提供理论依据。

毛霉40899和毛霉M/T混合发酵腐乳的研究

从腐乳毛坯中分离得到毛霉M/T,以毛霉40899和毛霉M/T为混合发酵剂,采用单因素法和响应面法研究混合菌种发酵腐乳的前发酵工艺,并在最优前发酵条件下考察混合菌种发酵过程中腐乳的氨基酸态氮、质构特性和色度的变化,得出如下结果:经鉴定,毛霉M/T为放射毛霉属;腐乳前发酵最优条件为发酵时间60 h,毛霉40899与毛霉M/T质量比1∶1,乳酸pH值3. 5.在此条件下,腐乳的蛋白酶活力达到最大值48. 015 U/m L.腐乳后发酵至30 d时,腐乳中氨基酸态氮含量为0. 53 g/(100 g),达到腐乳行业标准中的成熟标准.腐乳成熟时的硬度、黏附性、弹性等质构特性良好,色差值与市售成熟腐乳接近.

中国独具特色的发酵豆制品——论四川固态辅料类豆腐乳、毛霉型豆豉及豆瓣辣酱

从四川的地域、气侯、生态环境和微生物资源的特征出发,重点论述了四川固态辅料类豆腐乳、毛霉型豆豉、豆瓣辣酱在中国特色发酵豆制品酿制工艺中的唯一性与独特性。强调只有工业化才是四川名特优发酵豆制品健康发展的必由之路。

生产菌种及环境微生物与腐乳品质关系研究进展

腐乳作为一种传统发酵食品,其中微生物对其品质起着决定性作用。腐乳的生产模式为开放式,因此除了发酵菌种以外,来自环境及原材料中的各种微生物都有可能侵入,进而形成复杂的微生物群落。该文归纳了我国各地腐乳生产人工接种常用菌种,并对其生长特征、与腐乳品质关系进行总结;此外,全面阐述了腐乳在生产过程中侵入的非人工接种微生物,并详细介绍了其中霉菌、酵母、芽孢杆菌、乳酸菌等微生物的研究及其对腐乳品质的积极和消极影响,旨在为腐乳及其相关发酵食品中的微生物研究提供参考,并为后续腐乳多菌种混合发酵奠定基础。

腐乳生产用毛霉高产端肽酶菌株诱变条件及发酵特性的研究

毛霉在腐乳的酿造过程时对腐乳的独特的风味的形成起极其重要的作用,要提高腐乳产品风味,既提高鲜味又降低苦味,从根本上是要解决高蛋白酶系生成及端肽酶产率的问题。本实验通过复合诱变的方法确定一种高产酶系,并端肽酶系含量较高的菌株,通过复合诱变(Co60、紫外)克服单一诱变的缺点,同一诱变因子的重复作用效果不明显,多种诱变因子共同作用效果最好,使菌株产氨基酸的能力提高22%,确定了诱变的辐射剂量在8万伦琴,紫外诱变时间60s为最佳条件。优选出产端肽酶高的菌株,经过诱变,通过新菌种及生产条件的优化,在此基础上又提高30%。确定培养适宜温度为28℃,较佳培养时间48h,最佳起始pH7.2,接菌量10%的培养条件下产蛋白酶活最高,发酵产氨基酸含量也最高,即端肽酶活力最高。由于受腐乳产品自身特点限制,食盐及乙醇的浓度分别设定在6%和4%,为发酵最佳条件。发酵后腐乳产品风味有了明显的改善,鲜味提高、苦味降低。对于生产具有更重要的意义,尤其对提高腐乳这一传统食品的营养效价更具深远意义。

腐乳毛霉培养条件及工艺探讨

腐乳质量关键取决于腐乳毛霉的生长,但目前稳定控制难度很大。本文通过对影响腐乳毛霉生长的主要影响因素的探讨,比对影响程度和效果,拟定温度、干坯水分、供氧量、杂菌控制等四个方面为主要影响条件,并对工艺范围、控制方法、预防措施、改进方向进行了综合分析,总结出一些行之有效的改进思路。

油腐乳发酵过程中的品质分析

采用不同毛霉发酵油腐乳,对其发酵过程中的蛋白酶活性、成熟度、微观结构、流变和感官性质进行分析,探究不同毛霉菌种对油腐乳品质的影响。结果表明:在发酵过程中雅致放射毛霉和五通桥毛霉的蛋白酶活性最高;筛选菌种发酵的油腐乳水溶性蛋白、氨基态氮和总酸含量高于其他3组,而菌种对油腐乳的水分和盐含量的影响不显著;筛选菌种发酵油腐乳的微观结构最致密;雅致放射毛霉发酵油腐乳涂抹性优于其他3组;总状毛霉和雅致放射毛霉感官评价相对较优。4种毛霉菌种各有优势,为毛霉混合发酵油腐乳提供了一定的理论依据。

腐乳生产菌种的选育

从毛霉ＭｕｃｏｒＺ３ｌ８出发，选育出Ｍ．Ｚ３２８变异株。研究了Ｍ．Ｚ３２８变异株的前酵条件：Ｔ＝３０±１℃，相对湿度９５％．采用新工艺进行生产实验，前酵时间仅需２２ｈ．首次发现毛霉菌丝能渗透到豆腐坯的最深层。用正交试验确定后酵条件。优化结果表明，采用低盐控温后酵新工艺，能将后酵时间缩短到１０～１２ｄ，即可生产出氨基酸态氮高达１．７５ｇ／１００ｇ干腐乳以上的白腐乳。其质构、颜色等均能达到质量要求。研究了腐乳发酵过程的流变特性，微细结构及ＤＳＣ．图谱的变化情况。