利用长链非编码RNAs与mRNAs联合分析半番鸭及番鸭胚胎期性腺发育差异

本研究旨在筛选影响鸭胚胎期性腺发育的关键mRNAs和长链非编码RNAs(long non-coding RNAs,lncRNAs),科学解释半番鸭性腺发育缺陷问题。采集半番鸭(BF_(1)、BF_(2)、BF_(3))和番鸭(F_(1)、F_(2)、F_(3))各3个雄性胚胎性腺组织并提取其RNA,通过高通量测序筛选差异基因和lncRNAs,预测靶基因并进行功能注释,最后应用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)对测序结果进行验证。结果显示:从半番鸭和番鸭性腺组织中共筛选出1109个差异基因;相对于番鸭,半番鸭中上调表达基因共857个,下调表达基因共252个,其中,醛酮还原酶家族1成员D1基因(aldo-keto reductase family 1 member D1gene,AKR1D1)、17β-羟基类固醇脱氢酶3基因(17β-hydroxysteroid dehydrogenase 3 gene,17β-HSD3)和胆固醇侧链裂解酶基因(cholesterol side-chain cleavage enzyme gene,P450scc)等可能与半番鸭性腺分化发育相关。同时,获得了733个显著差异表达的lncRNAs;相对于番鸭,半番鸭中显著上调的lncRNAs共660个,显著下调的lncRNAs共73个。靶基因预测分析显示,136个下调的lncRNAs和893个上调的lncRNAs可能参与差异基因表达并存在潜在的调控关系,其中,TCONS_00246198靶向17β-HSD3,TCONS_00229529靶向四次穿膜蛋白2基因(tetraspanin-2 gene,TSPAN2),说明以上lncRNAs可能通过靶向关键基因来参与鸭胚胎期性腺发育。qRT-PCR结果显示,差异基因和lncRNAs表达水平与转录组测序中的表达趋势一致,表明通过高通量测序获得的数据较为可靠。RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation,RIP)试验结果发现,与IgG相比,TCONS_00246198富集水平达71.51倍,表明TCONS_00246198与17β-HSD3蛋白存在直接或间接的相互作用,即两者可能存在靶向关系。综上所述,本研究获得了一批可能影响鸭胚胎期性腺发育的关键mRNAs和lncRNAs,推测差异lncRNAs可以调控差异基因的表达,为了解鸭胚胎期性腺发育差异及禽类性腺发育机制提供了科学依据。

番鸭血浆酶活性及其与产肉性能关系的研究

用法国×本地二元杂交番鸭为研究对象，分析其宰前血浆ＧＯＴ、ＧＰＴ、Ａｋｐ、ｒ－ＧＴ、Ａｍｙ活性与７个产肉性状的表型相关，结果表明ＧＯＴ活性与屠宰率、胸肌率、腿肌率、瘦肉率，ＧＰＴ活性与胸肌率、瘦肉率，ｒ－ＧＴ活性与胸肌率、腹脂率均呈显著正相关；而Ａｍｙ活性与胸肌率呈显著的负相关。屠宰率与５种血浆酶活性的模型效应估计表明ＧＯＴ和Ａｍｙ活性对屠宰率的效应达显著水平。

番鸭基因型与环境互作对屠宰性能影响的研究

本文以番鸭为研究对象,从出雏至70日龄屠宰,设计两种基因型、两种日粮、两种性别、两个试验场的试验,考虑主效应及互作效应进行方差分析和最小二乘均数估计,结果表明:屠宰率、全净膛率、胸肌率、腿肌率、瘦肉率的番鸭品种主效应、皮脂率的日粮主效应和瘦肉率的性别主效应达显著或极显著水平(P<0.05或P<0.01);腿肌率的品种与日粮互作,胸肌率、瘦肉率、腹脂率的品种与性别互作,屠宰率的品种与场互作显著。本文以番鸭为研究对象,研究基因型、日粮蛋白水平、性别、试验场址四个因素对七个屠宰性状的主效应和互作效应。

Lnc46198半番鸭胚胎期特异性表达及对鸭胚成纤维细胞增殖和凋亡的影响

为分析TCONS_00246198(简称lnc46198)在半番鸭胚胎期发育过程中的特异性表达及对鸭胚成纤维细胞(Duck embryo fibroblasts,DEF)增殖或凋亡的影响,本研究采用RT-qPCR分析lnc46198在10、15、20和25 d不同胚龄半番鸭性腺及半番鸭12.5 d胚龄大脑、心脏、肝脏、肺脏、肌肉、性腺和肾脏等不同组织中的表达情况。采用全基因合成法构建鸭胚成纤维细胞lnc46198-pcDNA3.1过表达载体,利用流式细胞术和CCK8法检测细胞增殖情况,采用Annexin V-FITC/PI流式和RT-qPCR检测细胞凋亡情况。结果表明:1)lnc46198在半番鸭各种组织和不同胚龄性腺中均表达,其在半番鸭12.5 d胚龄性腺的表达量极显著高于其他组织(P<0.01),且性腺中相对表达量随着胚龄增加逐渐升高,提示lnc46198可能在半番鸭性腺发育中发挥重要作用。2)鸭胚成纤维细胞lnc46198过表达组细胞活力与对照组相比极显著降低(P<0.01),表明过表达lnc46198可抑制鸭胚成纤维细胞的增殖活力。3)过表达组细胞凋亡率是pcDNA3.1组的7.30倍(P<0.01),表明过表达lnc46198可促进鸭胚成纤维细胞凋亡。综上,lnc46198在不同胚龄半番鸭性腺中动态表达,在半番鸭12.5胚龄性腺中特异表达,可抑制鸭胚成纤维细胞增殖,并促进鸭胚成纤维细胞凋亡,本研究揭示了lnc46198的特异性表达及在鸭细胞增殖或凋亡中的功能,可为半番鸭性腺发育差异机制提供科学参考依据。