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Establishment and biological characteristics of human multiple myeloma cell line CZ-1 被引量:8
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作者 侯健 林法迎 +2 位作者 张波 张玲珍 丁思奇 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2004年第1期115-119,共5页
Background There were only 3 multiple myeloma (MM) cell lines established in China. In this study,we succeeded in establishing a novel MM cell line and analyzed its biological characteristics. Methods Mononuclear... Background There were only 3 multiple myeloma (MM) cell lines established in China. In this study,we succeeded in establishing a novel MM cell line and analyzed its biological characteristics. Methods Mononuclear cells isolated from the peripheral blood (PB) and bone marrow (BM) of a patient with advanced MM (λ light chain type) were cultured in medium. Cell morphology was analyzed by Wright-Giemsa-staining and cytochemical staining,immunophenotyping by flow cytometry and cytogenetic analysis by chromosome RHG-banding technique. Quantitative fluorescent polymerase chain reaction (PCR) was used to detect Epstein - Barr virus (EBV) DNA. Results The established cell line could survive and proliferate in the presence of feeder cells or conditioned medium. The cells secreted λ light chain and were negative for EBV. The Wright-Giemsa-staining showed typical plasmablast or plasma cell morphology. The cytochemical staining of the cells showed the following reactivity patterns: positive for acid phosphatase,negative for myeloperoxidase. The immunoprofile of the cells was concordant with that of MM cells: positive for CD_ 10 ,CD_ 28 ,CD_ 38 ,CD_ 138 ,CD_ 56 ,CD_ 49d ,CD_ 44 ,CD_ 54 and CD_ 58 ,negative for CD_ 19 , CD_ 40 ,CD_ 95 ,CD_ 95L ,CD_ 34 ,CD_2 and CD_5. The cytogenetic analysis showed complex chromosome abnormality of i (1q+),8q+,13q+,i (17q),i (18q) and +M. There was no difference in morphology,immunophenotype and cytogenetics between cells from PB and BM. Conclusions An MM cell line secreting λ light chain named CZ-1 was established. The cells from both PB and BM have the same biological characteristics. 展开更多
关键词 multiple myeloma·cell line·biological characteristics
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U266细胞在组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275诱导下凋亡观察
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作者 马健 赵名 +1 位作者 于晓妉 王志红 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第9期835-838,共4页
目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人多发性骨髓瘤U266细胞的增殖和凋亡的影响.方法:台盼蓝拒染法观察MS-275对细胞活力的影响;瑞氏—姬姆萨染色观察药物对细胞形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期;West-ernBlot检测凋亡信号通路... 目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人多发性骨髓瘤U266细胞的增殖和凋亡的影响.方法:台盼蓝拒染法观察MS-275对细胞活力的影响;瑞氏—姬姆萨染色观察药物对细胞形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期;West-ernBlot检测凋亡信号通路中Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9活化及蛋白聚ADP核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymer-ase,PARP]裂解情况.结果:MS-275呈时间和剂量依赖性抑制U266细胞增殖,阻断细胞周期于G0/G1期.MS-275作用48h的IC50为1.39μmol/L;2μmol/LMS-275作用细胞24h后,G0/G1期64.57%;36h占82.20%.瑞氏—姬姆萨染色显示细胞发生明显变化.WesternBlot检测表明MS-275作用U266细胞后,Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9被裂解活化,其底物蛋白聚ADP核糖聚合酶发生剪切,细胞发生凋亡.结论:MS-275可抑制细胞增殖,并使细胞阻滞在G0/G1期,通过激活细胞内外2条凋亡级联信号通路诱导U266细胞凋亡. 展开更多
关键词 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 多发性骨髓瘤 细胞系u266 MS-275 凋亡
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对U266细胞增殖的影响
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作者 马健 赵名 +1 位作者 于晓妉 王志红 《军医进修学院学报》 CAS 2009年第4期565-567,共3页
目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人多发性骨髓瘤细胞U266增殖的影响。方法将不同浓度的MS-275以不同时间作用于U266细胞,用台盼蓝拒染法观察药物对细胞活力的影响;瑞氏-姬姆萨染色观察药物对细胞形态学变化;流式细胞仪分析细胞... 目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人多发性骨髓瘤细胞U266增殖的影响。方法将不同浓度的MS-275以不同时间作用于U266细胞,用台盼蓝拒染法观察药物对细胞活力的影响;瑞氏-姬姆萨染色观察药物对细胞形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期;Western Blot检测P21、Cdk4、Acetyl-histone H3及PARP等的蛋白表达。结果MS-275呈时间和剂量依赖性抑制U266细胞增殖,阻断细胞周期于G0/G1期,细胞发生明显变化。出现P21表达增加,Cdk4表达下降,同时出现PARP的裂解。结论组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275具有抑制人骨髓瘤细胞U266增殖作用,使细胞阻滞在G0/G1期,最终诱导U266细胞凋亡。 展开更多
关键词 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 多发性骨髓瘤 细胞系 u266 MS-275 细胞增殖
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烷化溶血磷脂对U266细胞作用的实验研究
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作者 黄春玲 陈志哲 +3 位作者 陈君敏 王少元 刘庭波 杨婷 《细胞生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期370-375,共6页
为研究烷化溶血磷脂 (ET 1 8 OCH3 )对骨髓瘤细胞系U2 66的体外杀伤作用。通过台盼蓝拒染法和克隆形成率来反映ET 1 8 OCH3 对U2 66细胞的抗增殖效应 ;通过荧光显微镜、电镜观察细胞形态学变化 ,琼脂糖凝胶电泳观察DNA降解片段 ,流式细... 为研究烷化溶血磷脂 (ET 1 8 OCH3 )对骨髓瘤细胞系U2 66的体外杀伤作用。通过台盼蓝拒染法和克隆形成率来反映ET 1 8 OCH3 对U2 66细胞的抗增殖效应 ;通过荧光显微镜、电镜观察细胞形态学变化 ,琼脂糖凝胶电泳观察DNA降解片段 ,流式细胞仪作DNA倍体分析来观察ET 1 8 OCH3 诱导U2 66细胞凋亡的作用 ;通过RT PCR检测bcl 2、c mycmRNA水平 ,流式细胞仪检测Bcl 2、C myc蛋白的表达来初步探讨其相关的作用机制。结果显示 ,U2 66细胞经ET 1 8 OCH3 处理后细胞生长明显受抑 ,呈时间和剂量依赖性 ;荧光显微镜 ,电镜下观察均可见凋亡形态学改变 ,7.5μg/mlET 1 8 OCH3 作用 2 4小时后出现典型的DNA降解片段。流式细胞仪检测凋亡率为 1 7.53 % ;RT PCR显示bcl 2、c mycmRNA表达均随ET 1 8 OCH3 作用时间的增加而减弱 ,ET 1 8 OCH3 作用 2 4小时后 ,bcl 2、c mycmRNA分别减少了 86 %、72 % ;流式细胞仪检测Bcl 2蛋白、C myc蛋白分别减少了原来的 1 7%、60 %。研究结果表明 ,ET 1 8 OCH3 对U2 66细胞的生长具有明显的抑制作用 ,并可诱导细胞的凋亡 。 展开更多
关键词 烷化溶血磷脂 u266细胞 多发性骨髓瘤 细胞凋亡
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姜黄素对人多发性骨髓瘤细胞表达Survivin、Bcl-2、Bax的影响 被引量:13
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作者 刘波 白庆咸 +2 位作者 陈协群 高广勋 顾宏涛 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第4期762-766,共5页
为探讨姜黄素对人多发性骨髓瘤细胞RPMI8226的抑制生长和诱导凋亡的作用机制,应用MTT法检测姜黄素对肿瘤细胞的杀伤效应;用流式细胞术(FCM)分析姜黄素作用后肿瘤细胞凋亡及细胞周期的变化;用RT-PCR方法检测Survivin、Bcl-2、Bax mRNA水... 为探讨姜黄素对人多发性骨髓瘤细胞RPMI8226的抑制生长和诱导凋亡的作用机制,应用MTT法检测姜黄素对肿瘤细胞的杀伤效应;用流式细胞术(FCM)分析姜黄素作用后肿瘤细胞凋亡及细胞周期的变化;用RT-PCR方法检测Survivin、Bcl-2、Bax mRNA水平的变化。结果表明:姜黄素明显抑制RPMI8226细胞的增殖,并表现为时间、剂量依赖性,24、48小时IC50值分别为12.15μmol/L、4.9μmol/L;凋亡率由10.6%增加到36.9%(p<0.05),细胞发生G2/M期阻滞;RPMI8226细胞细胞强表达Survivin、Bcl-2,弱表达Bax。RPMI8226细胞经10μmol/L姜黄素处理24小时后,survivin、Bcl-2 mRNA表达下调,而Bax表达上调。结论:姜黄素抑制多发性骨髓瘤细胞RPMI8226增殖,并诱导凋亡。姜黄素的抗瘤机制可能与凋亡相关蛋白survivin、bcl-2、bax在转录水平的调节有关。 展开更多
关键词 姜黄素 多发性骨髓瘤 RPMI8226细胞系 SURVIVIN BCL-2 BAX
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多发性骨髓瘤局部成瘤小鼠模型的建立 被引量:8
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作者 刘瑜 周美玉 +1 位作者 孟文彤 徐才刚 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第3期647-651,共5页
本研究探讨多发性骨髓瘤小鼠模型建立的方法。于BALB/c小鼠皮下接种6×105MPC-11骨髓瘤细胞,待荷瘤小鼠出现皮下结节后随机将其中5只处死,取其皮下结节进行HE染色及免疫组织化学(CD138,κ轻链)检测。同时,在荷瘤第5、7、9、11、12... 本研究探讨多发性骨髓瘤小鼠模型建立的方法。于BALB/c小鼠皮下接种6×105MPC-11骨髓瘤细胞,待荷瘤小鼠出现皮下结节后随机将其中5只处死,取其皮下结节进行HE染色及免疫组织化学(CD138,κ轻链)检测。同时,在荷瘤第5、7、9、11、12、35、65天进行荷瘤小鼠血清免疫固定电泳的动态监测。在荷瘤前、荷瘤后第15天和30天对荷瘤小鼠进行血红蛋白的检测。在荷瘤第35及65天进行荷瘤小鼠血清IL-6水平检测。每周观察荷瘤小鼠的生存情况,测量荷瘤小鼠的肿瘤大小,体重变化。结果表明:荷瘤小鼠出现皮下结节的高峰为荷瘤后12-15天,在荷瘤第12天荷瘤小鼠血清中可检测到单克隆免疫球蛋白。皮下结节HE染色、免疫组织化学检测CD138(+)及κ轻链(+)证实了瘤组织为浆细胞来源。荷瘤后第12天时可在小鼠血清中检测出M蛋白,表现为IgG及κ轻链的浓聚条带。荷瘤小鼠的死亡高峰为荷瘤后第20-40天,中位生存时间为31天。在荷瘤第15天时小鼠开始逐渐出现贫血,荷瘤组与正常对照组小鼠的Hb水平在荷瘤第15天及30天时差异有统计学意义(p<0.05)。荷瘤小鼠血清IL-6水平高于正常对照组。结论:采用MPC-11骨髓瘤细胞于BALB/c小鼠皮下接种(接种浓度为6×105个肿瘤细胞)建模,具有造模简单、荷瘤成功率较高、肿瘤生长变化易于观察等优点。监测本模型肿瘤大小的变化、血清IL-6水平及血清免疫固定电泳的变化可用于对多发性骨髓瘤疗效的评价。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 BALB/C小鼠 MPC-11骨髓瘤细胞株 动物模型
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奥沙利铂诱导人骨髓瘤细胞RPMI8226凋亡机制的实验研究 被引量:5
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作者 刘保兰 刘心 +2 位作者 周柰岑 齐美颖 徐波 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期99-104,共6页
本研究探讨奥沙利铂对人骨髓瘤细胞RPMI8226的增殖抑制作用及其分子机制。将奥沙利铂作用于骨髓瘤细胞,用MTT法检测细胞增殖抑制率,光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态及超微结构变化,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布,半定量RT... 本研究探讨奥沙利铂对人骨髓瘤细胞RPMI8226的增殖抑制作用及其分子机制。将奥沙利铂作用于骨髓瘤细胞,用MTT法检测细胞增殖抑制率,光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态及超微结构变化,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布,半定量RT-PCR检测Bcl-2、caspase-8及caspase-3 mRNA表达量的变化,Western blot检测Bcl-2蛋白表达量变化。结果表明,奥沙利铂可抑制RPMI8226细胞增殖,抑制率呈时间(r=0.979)和浓度(r=0.949)依赖性增强;24 h后在光学显微镜下可见奥沙利铂组细胞数量减少,排列紊乱,细胞形态变得不规则,体积变小,细胞碎片增多,可见凋亡细胞;48 h电子显微镜下可见细胞典型凋亡改变,凋亡小体形成。流式细胞术检测结果显示,奥沙利铂组RPMI8226细胞凋亡率明显增高(P<0.05);奥沙利铂作用24 h后,骨髓瘤细胞被阻滞于S期(P<0.05);而作用48 h后G0/G1期细胞所占比例明显增高(P<0.05);奥沙利铂作用48 h,细胞Bcl-2 mRNA与Bcl-2蛋白表达量未见明显变化,caspase-8及caspase-3 mRNA表达量增加(P<0.05)。结论:奥沙利铂可诱导RPMI8226细胞凋亡,其机制可能与其将细胞阻滞于S期,上调caspase-8、caspase-3 mRNA表达有关;奥沙利铂诱导RPMI8226细胞凋亡可能不通过调节Bcl-2基因表达实现。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 RPMI8226细胞株 奥沙利铂 细胞凋亡 CASPASE BCL-2
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雷公藤内酯醇对硼替佐米诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响 被引量:4
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作者 杨洋 董红娟 +3 位作者 高广勋 王一苇 顾宏涛 陈协群 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期335-338,共4页
本研究旨在探讨雷公藤内酯醇对硼替佐米诱导骨髓瘤细胞株NCI-H929(H929)凋亡的影响。通过MTT法检测不同浓度的雷公藤内酯和硼替佐米单用及联用对H929细胞的增殖抑制作用;采用Annexin Ⅴ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率。结果表明... 本研究旨在探讨雷公藤内酯醇对硼替佐米诱导骨髓瘤细胞株NCI-H929(H929)凋亡的影响。通过MTT法检测不同浓度的雷公藤内酯和硼替佐米单用及联用对H929细胞的增殖抑制作用;采用Annexin Ⅴ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率。结果表明:雷公藤内酯醇(10-100 ng/ml)和硼替佐米(10-100 nmol/L)单用和联用均可抑制H929细胞增殖,呈浓度依赖性,雷公藤内酯醇和硼替佐米联用组的细胞凋亡率明显高于单用硼替佐米组。经非抑制浓度的雷公藤内酯醇(10 ng/ml)联合硼替佐米(40 nmol/L)处理H929细胞24 h后的凋亡率明显高于单用硼替佐米组(P<0.05)。结论:雷公藤内酯醇能够显著增强硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞的促凋亡活性。 展开更多
关键词 雷公藤内酯醇 硼替佐米 骨髓瘤 NCI-H929细胞
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多发性骨髓瘤血管新生的体外研究 被引量:4
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作者 陈文明 吴垠 +2 位作者 朱嘉芷 Jeannette Soria Massoud Mirshahi 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第4期310-314,共5页
探讨多发性骨髓瘤细胞系培养上清液对人骨髓来源内皮细胞系(HBMEC)的增殖、迁移及血管新生的作用。用含2%胎牛血清(FBS)的RPMI 1640培养液培养骨髓瘤细胞系获得上清液,将此培养液培养HBMEC,研究其时HBMEC的增殖及迁移的影响,并将此液... 探讨多发性骨髓瘤细胞系培养上清液对人骨髓来源内皮细胞系(HBMEC)的增殖、迁移及血管新生的作用。用含2%胎牛血清(FBS)的RPMI 1640培养液培养骨髓瘤细胞系获得上清液,将此培养液培养HBMEC,研究其时HBMEC的增殖及迁移的影响,并将此液放入含有携带HBMEC微珠的三维纤维蛋白中,研究其对血管新生的影响。结果表明,与含2%FBS的RPMI 1640培养液比较,骨髓瘤细胞系培养液对HBMEC的增殖有明显促进作用(P<0.001),并促进HBMEC的迁移,诱导毛细血管管腔的形成(长度及宽度)(P<0.001)。结论:骨髓瘤细胞系可能通过分泌某些细胞因子促进HBMEC增殖、迁移及血管新生。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 多发性骨髓瘤细胞系 骨髓来源内皮细胞系 血管新生 MM
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泊马度胺的抗骨髓瘤细胞株MM1.S活性及对CRBN表达的影响 被引量:4
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作者 樊文静 范枝俏 +5 位作者 潘耀柱 杨柯 尹娇娇 赵宵晨 姚浩 白海 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1907-1911,共5页
目的:探讨不同浓度泊马度胺对人多发性骨髓瘤细胞株MM1.S的作用及对CRBN表达的影响。方法:应用CCK-8法检测泊马度胺对MM1.S细胞增殖抑制作用;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测MM1.S细胞凋亡率;实时定量PCR检测CRBN基因表达水平;West... 目的:探讨不同浓度泊马度胺对人多发性骨髓瘤细胞株MM1.S的作用及对CRBN表达的影响。方法:应用CCK-8法检测泊马度胺对MM1.S细胞增殖抑制作用;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测MM1.S细胞凋亡率;实时定量PCR检测CRBN基因表达水平;Western blot法检测泊马度胺对MM1.S细胞CRBN蛋白表达的影响。结果:泊马度胺对MM1.S细胞具有抑制作用,其增殖抑制作用呈时间和剂量依赖性(r=0.981,r=0.990);泊马度胺能够诱导MM1.S细胞凋亡;浓度为0、40和80μmol/L的泊马度胺作用于MM1.S细胞72 h后,CRBN基因表达水平分别为:1.487±0.340,0.211±0.054和0.055±0.005;泊马度胺作用后,CRBN蛋白表达水平明显下降,差异均有统计学意义。结论:泊马度胺能够抑制MM1.S细胞增殖并促进其凋亡,一定浓度泊马度胺可降低MM1.S细胞CRBN基因表达并下调其蛋白表达水平。 展开更多
关键词 泊马度胺 Cereblon 骨髓瘤细胞株MM1.S 免疫调节剂
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鞣花酸对骨髓瘤SP2/0细胞的作用 被引量:4
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作者 赵宁 黄永吉 +1 位作者 马广斌 严冬雪 《医药导报》 CAS 北大核心 2014年第10期1321-1325,共5页
目的探讨五倍子提取物鞣花酸抗骨髓瘤的生物学活性及相关机制。方法 20,40和60μg·mL-1鞣花酸体外孵育骨髓瘤SP2/0细胞株,采用细胞形态学、细胞增殖实验和流式细胞仪检测鞣花酸对SP2/0细胞株增殖、凋亡和细胞周期的影响,通过Wester... 目的探讨五倍子提取物鞣花酸抗骨髓瘤的生物学活性及相关机制。方法 20,40和60μg·mL-1鞣花酸体外孵育骨髓瘤SP2/0细胞株,采用细胞形态学、细胞增殖实验和流式细胞仪检测鞣花酸对SP2/0细胞株增殖、凋亡和细胞周期的影响,通过Western blotting技术检测肿瘤细胞增殖与凋亡相关基因COX-2的表达。结果 20,40,60μg·mL-1鞣花酸孵育骨髓瘤SP2/0细胞株48 h后,细胞周期阻滞于G1期,G1期细胞百分率分别为(55.21±3.01)%,(64.48±0.43)%,(75.10±2.46)%,与对照组(34.04±1.74)%比较,差异有统计学意义(P<0.01)。20,40和60μg·mL-1鞣花酸细胞抑制率分别为(21.18±5.92)%,(44.58±3.43)%和(70.15±2.90)%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。细胞早期凋亡率分别为(9.60±0.56)%,(19.30±1.51)%和(35.10±5.26)%,与对照组(3.23±0.85)%比较,差异有统计学意义(P<0.01),随药物浓度的增加COX-2的表达逐渐下降。结论鞣花酸能够抑制骨髓瘤SP2/0细胞增殖,促进其凋亡。 展开更多
关键词 鞣花酸 骨髓瘤 SP2/0细胞 增殖 凋亡
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多西他赛对人骨髓瘤细胞RPMI8226增殖与凋亡的影响 被引量:2
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作者 刘保兰 刘心 +2 位作者 齐美颖 周柰岑 徐波 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1378-1383,共6页
本研究旨在观察多西他赛对人骨髓瘤细胞系RPMI8226增殖和凋亡的影响,探讨其作用的分子机制。采用MTT法检测骨髓瘤细胞增殖抑制率,光学显微镜及电子显微镜观察多西他赛对骨髓瘤细胞形态的影响,Annex-in-ⅤFITC/PI双染流式细胞术检测细胞... 本研究旨在观察多西他赛对人骨髓瘤细胞系RPMI8226增殖和凋亡的影响,探讨其作用的分子机制。采用MTT法检测骨髓瘤细胞增殖抑制率,光学显微镜及电子显微镜观察多西他赛对骨髓瘤细胞形态的影响,Annex-in-ⅤFITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,PI染色流式细胞术检测骨髓瘤细胞周期分布情况,半定量RT-PCR检测多西他赛对BCL-2、caspase-8及caspase-3 mRNA表达影响,Western blot法检测多西他赛作用前后骨髓瘤细胞BCL-2蛋白表达变化。结果显示:0.25-8.0μg/ml终浓度的多西他赛均可抑制RPMI8226细胞增殖,抑制率呈时间(r=0.927)和浓度(r=0.726)依赖性;多西他赛处理组光学显微镜下可见细胞数量明显减少,排列紊乱,高倍镜可见凋亡细胞,偶见坏死细胞;电子显微镜下可见细胞典型凋亡改变以及少数坏死细胞;多西他赛可明显诱导骨髓瘤细胞凋亡(P<0.01),主要将细胞阻滞于G2/M期(P<0.01),作用48 h时BCL-2 mRNA与BCL-2蛋白表达量减少(P<0.05),caspase-8、caspase-3 mRNA表达量增加(P<0.05)。结论:多西他赛通过诱导细胞凋亡可抑制骨髓瘤细胞增殖,其诱导细胞凋亡可能与细胞周期阻滞,激活细胞内、外源性凋亡通路有关。 展开更多
关键词 多西他赛 多发性骨髓瘤 RPMI8226细胞系 细胞凋亡 CASPASE BCL-2
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HMy2细胞cDNA表达文库的构建和鉴定 被引量:2
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作者 陈刚 张王刚 +3 位作者 付杰 李福洋 刘新平 药立波 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2003年第1期8-10,共3页
目的 :构建人骨髓瘤细胞株HMy2cDNA表达文库 .方法 :提取HMy2细胞总RNA ,分离mRNA ,反转录合成双链cDNA ,消平cDNA末端 ,连接EcoRⅠ适配子 ,磷酸化EcoRⅠ适配子 5′端 ,Sephacryl S4 0 0柱除去小于 4 0 0bpcDNA片段 ,与去磷酸化的噬菌体... 目的 :构建人骨髓瘤细胞株HMy2cDNA表达文库 .方法 :提取HMy2细胞总RNA ,分离mRNA ,反转录合成双链cDNA ,消平cDNA末端 ,连接EcoRⅠ适配子 ,磷酸化EcoRⅠ适配子 5′端 ,Sephacryl S4 0 0柱除去小于 4 0 0bpcDNA片段 ,与去磷酸化的噬菌体λgt11连接 ,体外包装后建成cDNA文库 .取出一部分倍比稀释感染E .coliY10 90 ,测定文库大小、重组率 ,并以PCR鉴定cDNA插入片段的大小 .结果 :构建成含 1.5× 10 6重组子的人骨髓瘤细胞cDNA文库 ,重组子平均插入外源片段长约 1.4kb .结论 :所建文库合格 ,适合用于筛选目的cDNA克隆 . 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 HMy2细胞 CDNA文库 PCR 免疫学
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整合常规技术探索肿瘤差异表达基因 被引量:1
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作者 李守新 刘尚勤 +1 位作者 雷小妹 何培根 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期230-232,共3页
目的 建立一种简单实用的、探索肿瘤差异表达基因的方法。方法 从骨髓瘤细胞株U2 6 6中分离出CD4 5 +和CD4 5 -细胞 ,结合应用减法杂交、抑制性PCR、T/A克隆、测序等技术 ,寻找CD4 5 +和CD4 5 -细胞间的差异表达基因。结果 减法杂交... 目的 建立一种简单实用的、探索肿瘤差异表达基因的方法。方法 从骨髓瘤细胞株U2 6 6中分离出CD4 5 +和CD4 5 -细胞 ,结合应用减法杂交、抑制性PCR、T/A克隆、测序等技术 ,寻找CD4 5 +和CD4 5 -细胞间的差异表达基因。结果 减法杂交可缩减约 2 0倍的高丰度表达基因 ,意即低丰度表达基因富聚约 2 0倍。用正向或负向减法探针 ,分别和来源于CD4 5 +细胞克隆的质粒DNA杂交 ,筛选 5 0 0个表达克隆 ,发现了几个差异表达基因 ,并经RT PCR证实。结论 采用常规分子生物学方法建立起来的综合技术 ,可以用来研究肿瘤性疾病的差异表达基因 ,且简单实用 。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 CD45^+细胞 CD45^-细胞 差异表达基因 细胞培养 分子生物学
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米托蒽醌对人骨髓瘤细胞RPMI8226增殖与凋亡的影响 被引量:1
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作者 齐美颖 刘心 +2 位作者 刘保兰 周柰岑 徐波 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1633-1639,共7页
本研究探讨米托蒽醌对人骨髓瘤细胞RPMI8226的增殖抑制作用及其分子机制。将米托蒽醌作用于骨髓瘤细胞,用MTT法检测细胞增殖抑制率,光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态及超微结构变化,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布,半定量RT... 本研究探讨米托蒽醌对人骨髓瘤细胞RPMI8226的增殖抑制作用及其分子机制。将米托蒽醌作用于骨髓瘤细胞,用MTT法检测细胞增殖抑制率,光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态及超微结构变化,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布,半定量RT-PCR检测BCL-2、BAX及caspase-3 mRNA表达量的变化,Western blot检测BCL-2、BAX和caspase-3 mRNA蛋白表达量变化。结果表明,米托蒽醌可抑制RPMI8226细胞增殖,抑制率呈时间(r=0.924)和浓度(r=0.947)依赖性增强。米托蒽醌作用24 h后在光学显微镜下可见米托蒽醌组细胞数量减少,排列紊乱,细胞形态变得不规则,可见凋亡细胞;在48 h后电子显微镜下可见细胞典型凋亡改变,凋亡小体形成。流式细胞术检测结果显示,在米托蒽醌组RPMI8226细胞凋亡率明显增高(P<0.05);米托蒽醌作用48 h后,在低浓度1.0μg/ml组RPMI8226细胞阻滞于G2/M期(P<0.05),在高浓度2.0μg/ml组RPM I8226细胞阻滞于S期(P<0.05);米托蒽醌作用48 h,BCL-2 mRNA与BCL-2蛋白表达量减少(P<0.05),BAX、caspase-3mRNA及蛋白表达量增加(P<0.05)。结论:米托蒽醌可诱导RPM I8226细胞凋亡,此细胞凋亡可能与细胞周期阻滞,激活细胞内、外源性凋亡的通路有关。 展开更多
关键词 米托蒽醌 多发性骨髓瘤 RPMI8226细胞系 细胞凋亡 CASPASE BCL-2 BAX
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靶向抑制miR-21对多发性骨髓瘤细胞凋亡、增殖的影响及其作用机制的初步研究 被引量:2
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作者 宋慧慧 李原 +3 位作者 马钰 凌孙凯歌 葛峥 黄培林 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2018年第5期819-823,共5页
目的:研究miR-21对多发性骨髓瘤细胞增殖及凋亡产生的作用,初步探讨其作用机制。方法:qRTPCR法检测miR-21在多发性骨髓瘤各细胞株中的表达水平。将miR-21抑制物及其阴性对照物转染至U266细胞株,RT-PCR法检测U266细胞miR-21的表达变化,CC... 目的:研究miR-21对多发性骨髓瘤细胞增殖及凋亡产生的作用,初步探讨其作用机制。方法:qRTPCR法检测miR-21在多发性骨髓瘤各细胞株中的表达水平。将miR-21抑制物及其阴性对照物转染至U266细胞株,RT-PCR法检测U266细胞miR-21的表达变化,CCK-8法检测miR-21对U266细胞增殖的影响,流式细胞术分析miR-21对U266细胞凋亡的作用,Western blotting检测U266细胞中PETN及FOXO1蛋白表达水平。结果:转染后实验组miR-21相对表达水平为0. 286±0. 031,低于阴性对照组(1. 015±0. 14)(P <0. 05)。实验组U266细胞的增殖抑制率为(53. 04±0. 02)%,显著高于阴性对照组[(20. 89±0. 17)%](P <0. 05);流式分析显示实验组U266细胞比阴性对照组凋亡明显增加[(28. 53±3. 23)%vs(5. 12±0. 63)%],差异具有统计学意义(P <0. 05)。Western blotting结果显示,与阴性对照组、空白对照组相比,实验组U266细胞的PTEN、FOXO1蛋白表达水平均上调(P <0. 05)。结论:靶向抑制miR-21可以促进多发性骨髓瘤细胞凋亡,抑制细胞增殖,这种作用可能是通过上调PTEN和FOXO1水平来实现的。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 微小RNA-21 细胞株u266 PTEN FOXO1
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Xbp-1基因沉默对硼替佐米诱导人多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响 被引量:1
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作者 杨洋 董红娟 +5 位作者 高广勋 王一苇 顾宏涛 舒汨汨 朱华锋 陈协群 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第5期1177-1180,共4页
本研究旨在探讨xbp-1基因沉默对硼替佐米诱导骨髓瘤细胞株NCI-H929(H929)凋亡的影响。通过小发夹RNA(shRNA)干扰xbp-1基因表达,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测靶细胞凋亡率,采用Wes-ternblot检测XBP-1蛋白水平。结果表明:通... 本研究旨在探讨xbp-1基因沉默对硼替佐米诱导骨髓瘤细胞株NCI-H929(H929)凋亡的影响。通过小发夹RNA(shRNA)干扰xbp-1基因表达,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测靶细胞凋亡率,采用Wes-ternblot检测XBP-1蛋白水平。结果表明:通过慢病毒载体PLL3.7介导的xbp-1 shRNA表达,能有效抑制H929细胞XBP-1蛋白表达,xbp-1 shRNA表达细胞的凋亡率显著高于对照组[(10.13±0.61)%vs(2.5±0.2)%,p<0.05];经硼替佐米处理后,xbp-1基因功能缺陷的H929细胞的凋亡率显著高于空载体组[(45.07±1)%vs(2.73±0.25)%,p<0.05]。结论:xbp-1基因沉默能够显著增强硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞的促凋亡活性。 展开更多
关键词 xbp-1基因 多发性骨髓瘤 NCI-H929细胞 硼替佐米 细胞凋亡
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硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞凋亡及分子伴侣BiP表达的影响 被引量:1
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作者 董红娟 陈协群 +4 位作者 高广勋 顾宏涛 潘耀柱 高瑛 朱华锋 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第1期107-110,共4页
本研究旨在探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞株NCI-H929(H929)的凋亡诱导作用及其对H929细胞中分子伴侣BiP表达的影响。以不同浓度硼替佐米处理H929细胞24小时后,采用Annexin V-FITC/PI双染联合流式细胞术检测靶细胞凋亡率... 本研究旨在探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞株NCI-H929(H929)的凋亡诱导作用及其对H929细胞中分子伴侣BiP表达的影响。以不同浓度硼替佐米处理H929细胞24小时后,采用Annexin V-FITC/PI双染联合流式细胞术检测靶细胞凋亡率;用RT-PCR和Western blot检测靶细胞BiP mRNA和BiP蛋白的表达。结果表明:不同浓度硼替佐米(20、40、80nmol/L)均可诱导靶细胞凋亡,凋亡率分别为(15.73±0.67)%、(27.83±1.26)%及(44.17±2.25)%,呈剂量依赖性,且均显著高于未处理组(1.21±0.07%)(p<0.05);经不同浓度硼替佐米处理后,靶细胞BiP mRNA和BiP蛋白水平均高于未处理组,且二者变化一致;在相近的促凋亡条件下(凋亡率约40%-50%),标准内质网应激诱导剂brefeldin A(500ng/ml,24小时)对H929细胞BiP mRNA和BiP蛋白表达的上调作用与硼替佐米(80nmol/L,24小时)基本一致。结论:硼替佐米诱导H929细胞凋亡并伴有分子伴侣BiP mRNA和BiP蛋白表达上调,表明硼替佐米诱导的H929细胞凋亡极可能涉及内质网应激反应。 展开更多
关键词 硼替佐米 骨髓瘤 NCI-H929细胞 BIP 内质网应激 细胞凋亡
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环氧合酶-2对多发性骨髓瘤细胞血管内皮生长因子表达的调节作用 被引量:2
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作者 赵建宝 陈琛 《实用癌症杂志》 2011年第3期245-249,共5页
目的探讨多发性骨髓瘤(MM)细胞中环氧合酶-2(COX-2)对血管内皮生长因子(VEGF)表达的调控作用及其临床意义。方法应用人淋巴细胞分离液提取43例多发性骨髓瘤患者骨髓中的单个核细胞,Western blotting(WB)方法检测COX-2及VEGF的蛋白表达,... 目的探讨多发性骨髓瘤(MM)细胞中环氧合酶-2(COX-2)对血管内皮生长因子(VEGF)表达的调控作用及其临床意义。方法应用人淋巴细胞分离液提取43例多发性骨髓瘤患者骨髓中的单个核细胞,Western blotting(WB)方法检测COX-2及VEGF的蛋白表达,分析其与MM的国际分期系统(ISS)分期、预后的相关性;RT-PCR方法检测多发性骨髓瘤U266细胞COX-2及VEGF mRNA的表达;MTT方法检测COX-2特异性抑制剂对多发性骨髓瘤U266细胞的生长抑制效应。结果多发性骨髓瘤细胞患者COX-2及VEGF过度表达,与ISS分期及预后密切相关;年龄、β2-微球蛋白(β2-MG)、血钙(Ca)及骨髓中浆细胞百分比(BMPC)等预后指标与COX-2的相关系数分别为0.692,0.791,0.571及0.856,与VEGF的相关系数分别为0.731,0.645,0.511及0.823;应用选择性COX-2抑制剂塞来昔布作用于U266细胞48 h,VEGF mRNA及蛋白的表达明显下调,与未处理组相比,统计学差异显著(P<0.01)。结论 COX-2与VEGF高表达于多发性骨髓瘤患者,与疾病的ISS分期及预后密切相关,干预COX-2可部分下调VEGF的表达,COX-2可望成为多发性骨髓瘤治疗的靶点。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 u266细胞株 环氧合酶-2 血管内皮生长因子
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马法兰和阿霉素耐药人骨髓瘤细胞系的建立 被引量:1
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作者 熊文杰 张莉 汪鹏程 《岭南急诊医学杂志》 2007年第4期246-248,共3页
目的:建立对马法兰和阿霉素耐药的人骨髓瘤细胞系。方法:在人骨髓瘤细胞系RPMI8226培养体系中分别加入1.0×10-8M的阿霉素(DOX)和1.0×10-6M的马法兰(LP),每周3次换液,DOX于10月后增加至1.0×10-7M,LP于47周后增加至5×... 目的:建立对马法兰和阿霉素耐药的人骨髓瘤细胞系。方法:在人骨髓瘤细胞系RPMI8226培养体系中分别加入1.0×10-8M的阿霉素(DOX)和1.0×10-6M的马法兰(LP),每周3次换液,DOX于10月后增加至1.0×10-7M,LP于47周后增加至5×10-6M。MTT法测定敏感细胞系和耐药系8226/DOX的IC50值,在耐LP细胞系8226/LP中加入丁硫氨酸亚砜胺(BSO)阻断谷胱甘肽的合成,MTT法测定细胞系8226/S、8226/LP细胞及8226/LP+BSO细胞的IC50值。HE染色普通光学显微镜下观察各组细胞形态,流式细胞仪检测各组细胞表面P-糖蛋白、CD38、CD45、CD19。台盼蓝拒染法测出8226/S、8226/DOX、8226/LP细胞的生长曲线。结果:所培养耐药细胞系8226/DOX、R8226/LP具有亲母细胞系的生物学特点,形态相似,均为CD38+CD45-CD19-表达细胞,倍增时间与亲母细胞系相近。比较IC50,8226/DOX对DOX的耐药约15倍于亲母细胞系。8226/LP对LP的耐药约7倍于亲母细胞系,而经过BSO阻断,其敏感性明显增加。结论:建立的骨髓瘤细胞系RPMI8226/LP、RPMI8226/DOX可作为骨髓瘤耐药研究的有效模型。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 细胞系 耐药性 马法兰 阿霉素
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