复合扩增mtDNA-HVI和Cyt b片段鉴定混合血痕种属

目的探讨mtDNA-HVI和Cyt b片段复合扩增法鉴定人与动物混合血痕种属的应用价值。方法用chelex-100法从人、牛、猪、狗、兔、鱼、鸡和鼠血痕中提取DNA,复合扩增mtDNA-HVI片段和Cyt b片段,琼脂糖凝胶电泳检测。结果人类在mtDNA-HVI区和Cyt b区分别出现279bp和358bp各一条带,且279bp条带亮于358bp;动物均只有358bp一条带。人与7种动物血痕的检测灵敏度均为3.13ng。检测人与动物混合DNA,灵敏度仍为3.13ng,但358bp条带亮于279bp条带。结论当358bp带明显强于279bp带时,提示检材为人与动物的混合。

复合扩增mtDNA-HVⅠ、HVⅡ和cytb片段在法医学种属鉴定中的价值

目的探讨复合扩增mtDNAD-环HV、HV和细胞色素b片段进行种属鉴定的方法,以及在法医学生物检材种属鉴定中的应用价值。方法收集包括人在内的17种动物的血痕或肌肉组织样本,提取DNA后定量,用三对引物复合扩增mtDNAD-环HV、HV片段和细胞色素b(cytb)片段,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染显色后分析结果。结果人类DNA扩增产物为278bp、358bp、425bp三条带,动物DNA扩增产物为一条带,在电泳谱中位置与人358bp的条带存在差异。结论复合扩增mtDNAD-环HV、HV和细胞色素b片段进行种属鉴定,方法简单,灵敏度较高,可应用于法医学实践。

鉴别6种常见食用肉类的多重PCR检测体系的构建及验证

目的建立一种快速、准确、灵敏的多重PCR检测方法,用于同时鉴别6种常见食用肉类(牛、羊、鸡、猪、鹅、鸭),并评估其在肉类食品掺假鉴定中的应用价值。方法基于GenBank数据库中6个物种的线粒体全基因组序列,筛选具有种内保守性、种间特异性的DNA序列(牛16S rRNA、羊COX-1、鸡Cytb、猪COX-1、鹅NADH2、鸭16S rRNA),并设计物种特异性引物,以此构建一个可同时鉴别6种常见食用肉类的多重PCR检测体系。对该体系进行种属特异性、灵敏度和重复性研究,并进行模拟混合样品检测。结果成功构建了一个可同时鉴别6种常见食用肉类的多重PCR检测体系,该体系在非目标物种的DNA中均未有效扩增;在DNA模板量为0.0625~2ng/μL时,6个物种的扩增产物均能检见。在鸭肉和牛肉混合比例低至0.5%时,仍能检测到鸭肉成分。结论本研究构建了一个特异性强、灵敏度高、重复性好的多重PCR检测体系,可准确鉴别6种常见食用肉类食品中的动物源性成分,为我国常见食用肉类及肉制品的掺假鉴定提供了一种简单、实用的检测技术。

线粒体16srRNA和ND4基因在种属鉴定中的应用研究

目的 构建一种用于种属鉴定的线粒体DNA（mtDNA）16srRNA和ND4基因荧光标记复合扩增检测体系。方法 利用引物设计软件（Primer 5）对两个mtDNA序列ND4基因和16srRNA基因设计两对引物，每对引物中的一条在5’端标记荧光素（6-FAM）。按传统复合扩增技术建立复合扩增体系，用ABIPRISM 310基因分析仪对产物进行分析。结果 人类DNA扩增产物出现两个峰，片段大小分别为110bp的人类特异片段和149bp的人与动物共有片段，而动物DNA扩增产物出现一个峰，片段大小为149bp。对30个实验室存放5～15年的陈旧人血痕也能明确判断其种属来源。结论 该体系可以明确区分人源性生物检材与其它常见动物样本，对实验室长期存放的陈旧检材也具有较好的检测能力。