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Optimization of the Process for Preparing Bivalent Polysaccharide Conjugates to Develop Multivalent Conjugate Vaccines against Streptococcus pneumoniae or Neisseria meningitidis and Comparison with the Corresponding Licensed Vaccines in Animal Models 被引量:1
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作者 Fang HUANG Xiao-bing JING +4 位作者 Yin-bo LI Qian WANG Si-li LIU Zhi-rong YANG Su FENG 《Current Medical Science》 SCIE CAS 2023年第1期22-34,共13页
Objective:This study aimed to describe,optimize and evaluate a method for preparing multivalent conjugate vaccines by simultaneous conjugation of two different bacterial capsular polysaccharides(CPs)with tetanus toxoi... Objective:This study aimed to describe,optimize and evaluate a method for preparing multivalent conjugate vaccines by simultaneous conjugation of two different bacterial capsular polysaccharides(CPs)with tetanus toxoid(TT)as bivalent conjugates.Methods:Different molecular weights(MWs)of polysaccharides,activating agents and capsular polysaccharide/protein(CP/Pro)ratio that may influence conjugation and immunogenicity were investigated and optimized to prepare the bivalent conjugate bulk.Using the described method and optimized parameters,a 20-valent pneumococcal conjugate vaccine and a bivalent meningococcal vaccine were developed and their effectiveness was compared to that of corresponding licensed vaccines in rabbit or mouse models.Results:The immunogenicity test revealed that polysaccharides with lower MWs were better for Pn1-TT-Pn3 and MenA-TT-MenC,while higher MWs were superior for Pn4-TT-Pn14,Pn6A-TT-Pn6B,Pn7F-TT-Pn23F and Pn8-TT-Pn11A.For activating polysaccharides,1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate(CDAP)was superior to cyanogen bromide(CNBr),but for Pn1,Pn3 and MenC,N-(3-dimethylaminopropyl)-N’-ethylcarbodiimide hydrochloride(EDAC)was the most suitable option.For Pn6A-TT-Pn6B and Pn8-TT-Pn11A,rabbits immunized with bivalent conjugates with lower CP/Pro ratios showed significantly stronger CP-specific antibody responses,while for Pn4-TT-Pn14,higher CP/Pro ratio was better.Instead of interfering with the respective immunological activity,our bivalent conjugates usually induced higher IgG titers than their monovalent counterparts.Conclusion:The result indicated that the described conjugation technique was feasible and efficacious to prepare glycoconjugate vaccines,laying a solid foundation for developing extended-valent multivalent or combined conjugate vaccines without potentially decreased immune function. 展开更多
关键词 multivalent conjugate vaccine pneumococcal conjugate vaccine meningococcal conjugate vaccine BIOCONJUGATION IMMUNOGENICITY
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Development of a Multivalent Inactivated Vaccine against Pathogenic Escherichia coli Infection in Forest Musk Deer 被引量:1
2
作者 罗燕 康纪平 +5 位作者 程建国 蔡永华 代晓阳 李秋波 王成旭 杨杰 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2010年第9期97-100,共4页
A multivalent inactivated Escherichia coli vaccine for forest musk deer by using serotypes O4,O26,and O139 with Al(OH)3 adjuvant was prepared.The vaccine did not cause any adverse reactions in forest musk deer.The i... A multivalent inactivated Escherichia coli vaccine for forest musk deer by using serotypes O4,O26,and O139 with Al(OH)3 adjuvant was prepared.The vaccine did not cause any adverse reactions in forest musk deer.The immunogenic effects of the vaccine were experimentally investigated in pregnant and young forest musk deer.The serum antibody titers of pregnant and young forest musk deer were determined by performing the micro-agglutination test.The serum antibody titers of pregnant forest musk deer were more stable from 35th to 68th d after the third vaccination,and the serum antibody titers of four pregnant forest musk deer were maintained 25,25,25,and 24 on 68th d after the third vaccination.Young forest musk deer showed serum antibody titers which were obtained due to nursing.Young forest musk deer were administered the first intramuscular vaccine injection at an age of approximately 60 days due to a fall in maternal antibody titers.The serum antibody titers of young forest musk deer were higher after the third vaccination and maintained at approximately the same level until they were 137 days old.The maternal antibodies and the antibodies produced by young forest musk deer could be helpful for protecting the young musk deer from the infections of pathogenic Escherichia coli strains(serotypes O4,O26,and O139)for 137 days after birth(during the nursing period and the period when the forest musk deer were susceptible to diseases). 展开更多
关键词 Forest musk deer Pathogenic Escherichia coli multivalent inactivated vaccine Al(OH)3 adjuvant Serum antibodies Micro-agglutination test
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From Monovalent to Multivalent Vaccines, the Exploration for Potential Preventive Strategies Against Hand, Foot, and Mouth Disease(HFMD) 被引量:16
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作者 Xiangchuan He Miaomiao Zhang +3 位作者 Chen Zhao Peiyong Zheng Xiaoyan Zhang Jianqing Xu 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2021年第2期167-175,共9页
Hand,foot,and mouth disease(HFMD)recently emerged as a global public threat.The licensure of inactivated enterovirus A71(EV-A71)vaccine was the first step in using a vaccine to control HFMD.New challenges arise from c... Hand,foot,and mouth disease(HFMD)recently emerged as a global public threat.The licensure of inactivated enterovirus A71(EV-A71)vaccine was the first step in using a vaccine to control HFMD.New challenges arise from changes in the pathogen spectrum while vaccines directed against other common serotypes are in the preclinical stage.The mission of a broad-spectrum prevention strategy clearly favors multivalent vaccines.The development of multivalent vaccines was attempted via the simple combination of potent monovalent vaccines or the construction of chimeric vaccines comprised of epitopes derived from different virus serotypes.The present review summarizes recent advances in HFMD vaccine development and discusses the next steps toward a safe and effective HFMD vaccine that is capable of establishing a crossprotective antibody response. 展开更多
关键词 Hand foot and mouth disease(HFMD) Inactivated whole virus vaccine Virus-like particles multivalent vaccines Chimeric vaccines
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Immune responses against Schistosoma japonicum after vaccinating mice with a multivalent DNA vaccine encoding integrated membrane protein Sj23 and cytokine interleukin-12 被引量:13
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作者 甘燕 石佑恩 +3 位作者 卜玲毅 朱晓华 宁长修 朱红刚 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2004年第12期1842-1846,共5页
Background The vaccination of mice with DNA encoding single candidate antigens has failed to induce significant protection against Schistosoma japonicum (S. japonicum) challenge infections In this study, we evaluated ... Background The vaccination of mice with DNA encoding single candidate antigens has failed to induce significant protection against Schistosoma japonicum (S. japonicum) challenge infections In this study, we evaluated the feasibility of using a multivalent DNA vaccine which co expressed S japonicum integral membrane protein Sj23 and murine cytokine IL 12 to induce protective immune responses Methods The plasmid pVIVO2 IL12 Sj23, a eukaryotic expression vector expressing Sj23 and murine IL 12 simultaneously, was constructed, identified, and tested for expression in vitro Its ability to protect against S japonicum challenge infections was analyed according to worm reduction rate and egg reduction rate after vaccination of BALB/c mice The serum levels of specific IgG antibody were determined by enzyme linked immuno sorbent assay (ELISA) and Western blot analysis Using cultured spleen cells, IFN γ and IL 4 post stimulation were quantified by ELISA The phenotypes of splenocyte populations were analyzed by flow cytometry (FCM) Results The plasmid DNA pVIVO2 IL12 Sj23 was proven to express well in vitro by transient transfection of HEK 293 cells Immunization resulted in a worm reduction rate of 45 53% and egg reduction rate of 58 35% ELISA and Western blot analysis indicated that immunized mice generated specific IgG against Sj23 Spleen cells showed significant increases in IFN γ but decreases in IL 4 No significant differences in CD4 + and CD8 + subgroup ratios were observed after the challenges Conclusions The multivalent DNA vaccine pVIVO2 IL12 Sj23 is sufficient to elicit moderate but highly significant levels of protective immunity against challenge infections Cytokine IL 12, as a gene adjuvant, was able to enhance the Th1 responses and, hence, the protective immunity 展开更多
关键词 multivalent DNA vaccine · Sj23 · IL-12 · protective immunity · Schistosoma japonicum
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Design of a heterosubtypic epitope-based peptide vaccine fused with hemokinin-1 against influenza viruses 被引量:1
5
作者 Shahla Shahsavandi +6 位作者 Mohammad Majid Ebrahimi Kaveh Sadeghi Homayoon Mahravani 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2015年第3期200-207,共8页
Influenza viruses continue to emerge and re-emerge, posing new threats for public health. Control and treatment of influenza depends mainly on vaccination and chemoprophylaxis with approved antiviral drugs. Identifica... Influenza viruses continue to emerge and re-emerge, posing new threats for public health. Control and treatment of influenza depends mainly on vaccination and chemoprophylaxis with approved antiviral drugs. Identification of specific epitopes derived from influenza viruses has significantly advanced the development of epitope-based vaccines. Here, we explore the idea of using HLA binding data to design an epitope-based vaccine that can elicit heterosubtypic T-cell responses against circulating H7N9, H5N1, and H9N2 subtypes. The hemokinin-1(HK-1) peptide sequence was used to induce immune responses against the influenza viruses. Five conserved high score cytotoxic T lymphocyte(CTL) epitopes restricted to HLA-A*0201-binding peptides within the hemagglutinin(HA) protein of the viruses were chosen, and two HA CTL/HK-1 chimera protein models designed. Using in silico analysis, which involves interferon epitope scanning, protein structure prediction, antigenic epitope determination, and model quality evaluation, chimeric proteins were designed. The applicability of one of these proteins as a heterosubtypic epitopebased vaccine candidate was analyzed. 展开更多
关键词 epitope-based vaccine hemokinin-1 heterosubtypic immunity INFLUENZA virus
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日本血吸虫多价DNA疫苗的构建 被引量:18
6
作者 李柳哲 石佑恩 江侃 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期205-208,共4页
目的 构建日本血吸虫多价 DNA疫苗。 方法 在本室已构建的克隆载体 p Bluescript- Sj2 6、p Bluescript- Sj32及 p Bluescript- Sj2 3的基础上 ,根据 Sj2 6 k Da、Sj32 k Da和 Sj2 3k Da基因序列分别设计一对引物 ,且在引物中引入 1... 目的 构建日本血吸虫多价 DNA疫苗。 方法 在本室已构建的克隆载体 p Bluescript- Sj2 6、p Bluescript- Sj32及 p Bluescript- Sj2 3的基础上 ,根据 Sj2 6 k Da、Sj32 k Da和 Sj2 3k Da基因序列分别设计一对引物 ,且在引物中引入 1个含多肽接头甘氨酸 -甘氨酸 -丝氨酸 (G- G- S)的碱基序列。首先将 Sj2 3基因连接入载体 p BK中 ,构建重组质粒 p BK - Sj2 3,然后将 Sj2 6 k Da或 32 k Da基因分别连接入载体 p BK- Sj2 3中 ,构建成多价 DNA疫苗p BK- Sj2 6 - Sj2 3和 p BK- Sj32 - Sj2 3。对重组基因鉴定后 ,检测了质粒在小鼠肌肉中的表达情况。 结果 多价 DNA疫苗 p BK- Sj2 6 - Sj2 3和 p BK- Sj32 - Sj2 3转入了完整的 Sj2 6、Sj2 3和 Sj32基因。多价基因质粒能在小鼠肌肉组织中表达。结论 构建了日本血吸虫多价 DNA疫苗。 展开更多
关键词 日本血吸虫 SJ26 SJ23 SJ32 多价DNA疫苗
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羊源链球菌的分群鉴定及多价灭活苗的研制 被引量:6
7
作者 欧阳素贞 王双山 +3 位作者 王国栋 刘书梅 梁秀丽 蔡敏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期448-454,共7页
2000~2003年,从安阳、邯郸等6个地区采取280份羊的病料,从中分离到150株链球菌,对其中20株典型分离株进行了生化分群鉴定及兰氏分群A~G诊断试剂鉴定。结果表明,6个地区发生的羊的链球菌病主要由C群兽疫链球菌(7/20),D群(8/20),E群(2/... 2000~2003年,从安阳、邯郸等6个地区采取280份羊的病料,从中分离到150株链球菌,对其中20株典型分离株进行了生化分群鉴定及兰氏分群A~G诊断试剂鉴定。结果表明,6个地区发生的羊的链球菌病主要由C群兽疫链球菌(7/20),D群(8/20),E群(2/20)引起。其分布无明显地域性。选择C、D、E群中各1株为菌种,制备多价链球菌灭活苗,通过免疫试验,保护率达92%以上,免疫期半年以上,疫苗4℃保存期1年以上,证明该灭活苗安全性好,免疫效果明显。 展开更多
关键词 链球菌 分群鉴定 多价灭活苗 研制
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同时表达多种外源基因的非复制型重组痘苗病毒的构建 被引量:16
8
作者 马海伦 孙朝晖 +4 位作者 陆柔剑 娄元梅 郭斐 张帆 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期21-28,共8页
利用非复制型痘苗病毒载体,构建了能同时表达乙型肝炎(乙肝)病毒SS1、麻疹病毒HA和F及白细胞介素2(IL2)的非复制型重组痘苗病毒VHFIL2ΔCKSS1,及其相应的复制型重组痘苗病毒VHFIL2SS1。这两株重组... 利用非复制型痘苗病毒载体,构建了能同时表达乙型肝炎(乙肝)病毒SS1、麻疹病毒HA和F及白细胞介素2(IL2)的非复制型重组痘苗病毒VHFIL2ΔCKSS1,及其相应的复制型重组痘苗病毒VHFIL2SS1。这两株重组病毒在CEF细胞上连续传至第25代,经Southernblot证实,两株病毒均在A24、A27间稳定整合有SS1基因,非复制型重组病毒C、K间基因稳定缺失。经RIA、ELISA及Westernblot方法检测,这两株病毒均可稳定分泌表达SS1蛋白,其分泌表达的SS1蛋白与CHO细胞表达的SS1蛋白性质相近,接近于天然。经免疫打点检测,两株病毒均可稳定表达麻疹病毒的HA与F蛋白以及IL2。而且VHFIL2ΔCKSS1与VHFIL2SS1表达多种外源抗原的水平无显著性差异。VHFIL2ΔCKSS1经皮内注射免疫家兔,4周后可诱发抗乙肝病毒SS1、抗麻疹病毒及抗痘苗病毒的特异性IgG抗体;加强免疫2周后,特异性抗体滴度可上升4~16倍,与其初始病毒VHFIL2ΔCK诱发的抗体水平相同,比VHFIL2SS1诱发的抗体滴度低0~4倍。非复制型多价重组痘苗病毒的构建,为评价非复制型痘苗病毒载体作为多价疫苗载? 展开更多
关键词 多价疫苗 痘苗病毒载体 遗传稳定性 免疫效果
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日本血吸虫多价DNA疫苗免疫保护作用的研究 被引量:9
9
作者 王晓婷 朱荫昌 +7 位作者 管晓虹 D.A.Harn 司进 赵松 徐明 殷旭仁 梁幼生 何伟 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2006年第1期1-5,共5页
目的研究日本血吸虫多价DNA疫苗诱导BALB/c小鼠的免疫保护作用。方法65只BALB/c雌性小鼠随机分为5组,各组小鼠分别肌肉注射纯化的质粒DNApcDNA3.1(对照组)、pcDNA3.1-TPI(TPI)、pcDNA3.1-(CDR3)6[(CDR3)6]、pcDNA3.1-TPI-linker-(CDR3)6... 目的研究日本血吸虫多价DNA疫苗诱导BALB/c小鼠的免疫保护作用。方法65只BALB/c雌性小鼠随机分为5组,各组小鼠分别肌肉注射纯化的质粒DNApcDNA3.1(对照组)、pcDNA3.1-TPI(TPI)、pcDNA3.1-(CDR3)6[(CDR3)6]、pcDNA3.1-TPI-linker-(CDR3)6(TLC)和pcDNA3.1-(CDR3)6-linker-TPI(CLT),每鼠100μg。每隔2周加强免疫1次,共3次。末次免疫后4周每鼠经腹部皮肤攻击感染(45±1)条日本血吸虫尾蚴,45d后剖杀,计数成虫及肝脏虫卵数。首次免疫前2天及感染前2天经尾静脉采血检测IgG抗体水平、抗体亚类IgG1、IgG2a。末次免疫后2周取小鼠脾脏制备单个脾细胞,检测细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ的水平。结果TPI、TLC组和CLT组小鼠血清都检测到特异性IgG抗体,抗体亚类IgG2a/IgG1的比值分别为1.71、2.71和4.70,而其他两组则未检测到特异性IgG抗体;TPI、TLC组和CLT组小鼠的IL-2、IFN-γ较对照组均有不同程度的升高,IL-4则无明显差异。多价DNA疫苗TLC组和CLT组减虫率分别达到37.30%、39.09%,减卵率分别为41.61%、49.54%,均显著高于TPI组和(CDR3)6组(P均<0.05)。结论多价DNA疫苗相对于单价DNA疫苗能诱导小鼠产生较高的免疫保护作用,且诱导宿主产生较高的以Th1为主的免疫应答。 展开更多
关键词 日本血吸虫 多价DNA疫苗 免疫保护作用
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日本血吸虫多价DNA疫苗的构建及鉴定 被引量:9
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作者 王晓婷 朱荫昌 +7 位作者 管晓虹 司进 赵松 D.A.Harn 殷旭仁 何伟 梁幼生 徐明 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2005年第3期166-171,F003,共7页
目的构建含日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶(TPI)基因和日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30H链CDR3区6倍重复表位基因(CDR3)6的多价DNA疫苗,并观察该融合基因在真核细胞中表达。方法设计合成连接肽(Gly4Ser)3基因的两条互补单链,退... 目的构建含日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶(TPI)基因和日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30H链CDR3区6倍重复表位基因(CDR3)6的多价DNA疫苗,并观察该融合基因在真核细胞中表达。方法设计合成连接肽(Gly4Ser)3基因的两条互补单链,退火成双链后克隆到真核表达载体pcDNA3.1,改建为pcDNA3.1-linker。分别将SjCTPIDNA片段及NP30的(CDR3)6DNA片段克隆到连接肽的上游或下游,构建pcDNA3.1-TPI-linker-(CDR3)6和pcD-NA3.1-(CDR3)6-linker-TPI2种多价疫苗。设计引物分别扩增TPI-linker-(CDR3)6和(CDR3)6-linker-TPI,再分别插入真核表达载体pEGFP-N1多克隆位点,绿色荧光蛋白基因的上游,重组质粒用脂质体导入真核细胞COS-7,观察插入基因在真核细胞的表达。结果经双酶切及测序鉴定证实多价疫苗pcDNA3.1-TPI-linker-(CDR3)6和pcDNA3.1-(CDR3)6-linker-TPI构建成功;构建的pEGFP-N1-TPI-linker-(CDR3)6和pEGFP-N1-(CDR3)6-linker-TPI在导入COS-7细胞后能成功表达。结论日本血吸虫TPI和NP30-(CDR3)6的多价DNA疫苗构建成功,且该融合基因能在真核细胞中表达。 展开更多
关键词 日本血吸虫 磷酸丙糖异构酶 NP30-(CDR3) 多价DNA疫苗
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日本血吸虫多价核酸疫苗的构建及免疫保护试验 被引量:9
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作者 魏峰 翟羽佳 +6 位作者 刘全 高胜岩 门静涛 商立民 林矫矫 傅志强 朱兴全 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1013-1016,共4页
利用PCR技术获得日本血吸虫GST抗原基因,通过分子克隆技术将GST、FABP基因克隆至pVAX1载体,并将其克隆至含有Sj23基因表达核的pIRESneo载体,构建重组质粒pVAX-GST、pVAX-GST-FABP、pIRESneo-Sj23和pIRESneo-GST-FABP-Sj23。将50只昆明... 利用PCR技术获得日本血吸虫GST抗原基因,通过分子克隆技术将GST、FABP基因克隆至pVAX1载体,并将其克隆至含有Sj23基因表达核的pIRESneo载体,构建重组质粒pVAX-GST、pVAX-GST-FABP、pIRESneo-Sj23和pIRESneo-GST-FABP-Sj23。将50只昆明小鼠随机分成5组,每组10只,分别以肌肉注射质粒pIRESneo-GST-FABP-Sj23、pIRESneo-Sj23、pVAX-GST、pVAX-GST-FABP和空白质粒pIRESneo,50μg/只,免疫2次,每次间隔21 d。测定小鼠免疫前后血清抗体水平,30 d经腹部皮肤感染血吸虫尾蚴,45 d后剖杀小鼠,计数各组小鼠虫卵数及成虫数。结果表明,重组质粒pVAX-GST、pIRESneo-Sj23、pVAX-GST-FABP和pIRESneo-GST-FABP-Sj23均能诱导小鼠产生特异性的IgG抗体,pIRESneo-GST-FABP-Sj23免疫组所诱导的IgG水平最高;减虫率分别为26.1%、30.8%、33.2%和47.5%;减卵率分别为25.4%、45.0%、48.4%和69.8%。pIRESneo-GST-FABP-Sj23的减卵率和减虫率明显高于其他DNA疫苗。结果表明,日本血吸虫多价核酸疫苗能产生较强的免疫反应,并能获得较好的免疫保护效果。 展开更多
关键词 日本血吸虫 SJ23 脂肪酸结合蛋白 GST 多价DNA疫苗
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日本血吸虫重组抗原SjPGAM-SjEnol的保护性免疫效果评价 被引量:6
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作者 郭凡吉 王艳 +7 位作者 李晔 彭金彪 洪炀 邱春辉 陈实 傅志强 石耀军 林矫矫 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期246-251,共6页
目的构建日本血吸虫重组表达质粒pET32a-SjPGAM-SjEnol并在大肠埃希菌(E.coli BL21)中表达,观察重组抗原在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法利用生物信息学技术筛选SjPGAM和SjEnol富含人源(HLA)Ⅱ类、鼠源(H2-d)Ⅱ细胞结... 目的构建日本血吸虫重组表达质粒pET32a-SjPGAM-SjEnol并在大肠埃希菌(E.coli BL21)中表达,观察重组抗原在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法利用生物信息学技术筛选SjPGAM和SjEnol富含人源(HLA)Ⅱ类、鼠源(H2-d)Ⅱ细胞结合表位且与宿主同源性较小的肽段,将对应编码的核苷酸序列进行拼接,构建重组质粒pET32a(+)-SjPGAM-SjEnol,并在E.coli BL21中表达。用蛋白质印迹(Western blotting)分析该重组抗原的抗原性。用小鼠实验评估重组抗原的免疫保护效果,即将55只雄性BALB/c小鼠均分成5组,其中3个试验组分别用重组抗原pET32a-SjPGAM-SjEnol(A组)、pET28a-SjPGAM(B组)、pET28a-SjEnol(C组)(各27μg)与206佐剂混合后免疫小鼠,每次间隔2周,共免疫3次。同时设佐剂对照组(D组)和空白对照组(E组)。末次免疫后2周,每鼠经腹部皮肤分别感染日本血吸虫尾蚴40±2条,感染后6周,经肝门静脉灌注法收集成虫和检测每克肝虫卵数(EPG),计算减虫率和肝脏减卵率。各组小鼠分别于免疫前、各次免疫后1周尾部取血和剖杀时收集血清,应用ELISA检测血清特异性IgG抗体水平。结果确定SjPGAM的96~147、SjEnol的233~312肽段为重组片段。PCR扩增出一条含编码这两个肽段的核苷酸序列的重组DNA序列,大小447bp。获得的重组蛋白pET32a-SjPGAM-SjEnol相对分子质量(Mr)为33000。Westernblotting结果显示,该重组蛋白可被日本血吸虫成虫抗原免疫兔血清识别,具有良好的抗原性。小鼠免疫实验结果显示,与空白组相比,A组获得39.7%的减虫率和64.9%的肝减卵率,其减虫率与B组(18.5%)、C组(14.7%)比较,差异有统计学意义(均P〈0.05);肝减卵率与B组(47.5%)、C组(30.5%)比较,差异也有统计学意义(P〈0.05,P〈0.01)。ELISA结果显示,第3次免疫后A组的特异性IgG抗体达到较高水平(2.372±0.268),与D组(0.490±0.138)、E组(0.220±0.088)间的差异有统计学意义(P〈0.01)。结论成功构建了重组表达质粒pET32a-SjPGAM-SjEnol,多表位重组蛋白pET32a-SjPGAM-SjEnol在小鼠抗血吸虫感染中比单一重组抗原pET28a-SjPGAM和pET28a-SjEnol诱导了更高的免疫保护作用。 展开更多
关键词 日本血吸虫 磷酸甘油酸变位酶 烯醇酶 多表位疫苗 免疫保护
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日本血吸虫二价DNA疫苗的免疫保护效果研究 被引量:16
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作者 张冉 易新元 +4 位作者 曾宪芳 张顺科 蔡春 黄跃龙 Larry McReynolds 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2004年第1期27-31,共5页
目的 观察本课题组所构建日本血吸虫大陆株二价 DNA疫苗 VR10 12 - Sj GST- Sj31和VR10 12 - Sj GST- Sj32的免疫保护效果。方法 用纯化质粒免疫昆明鼠 :6 0只小鼠分为 5组 ,2个对照组的小鼠分别于股四头肌注射生理盐水 10 0μl或空质... 目的 观察本课题组所构建日本血吸虫大陆株二价 DNA疫苗 VR10 12 - Sj GST- Sj31和VR10 12 - Sj GST- Sj32的免疫保护效果。方法 用纯化质粒免疫昆明鼠 :6 0只小鼠分为 5组 ,2个对照组的小鼠分别于股四头肌注射生理盐水 10 0μl或空质粒 VR10 12 10 0μg,3个实验组的小鼠则同法分别注射 VR10 12 - Sj GST、VR10 12 - Sj GST- Sj31和 VR10 12 - Sj GST- Sj32各 10 0 μg,每隔 3周免疫1次 ,共免疫 3次 ,以间接免疫荧光法观察 VR10 12 - Sj GST- Sj31、VR10 12 - Sj GST- Sj32在肌肉组织中的表达后 ,每只鼠经腹部感染 10条尾蚴 ,4 5 d后剖杀计数各小鼠成虫数及肝卵数 ,并用 EL ISA分析小鼠血清中的抗体。结果  EL ISA分析表明 ,第 3次免疫后小鼠出现特异性 Ig G抗体。与生理盐水组比较 ,3个实验组的减虫率分别为 33.90 %、33.90 %及 2 7.14 % (P <0 .0 1) ,减卵率分别为6 1.86 %、74 .88%及 6 8.87% (均为 P<0 .0 1) ,每雌肝减卵率分别为 4 4 .6 7%、5 9.4 0 %、5 4 .32 % (P<0 .0 1)。与 VR10 12 - Sj GST组相比 ,VR10 12 - Sj GST- Sj31和 VR10 12 - Sj GST- Sj32组的减卵率分别为34.19% (P<0 .0 1)、18.5 1% (P<0 .0 1) ,每雌肝减卵率为 2 6 .6 2 %、17.4 6 % (P<0 .0 1)。结论  DNA疫苗 VR10 12 - 展开更多
关键词 日本血吸虫 二价DNA疫苗 VR1012-SjGST VR1012-SjGST-Sj31 VR1012-SjGST-Si32 ELISA 免疫保护
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日本血吸虫DNA多价疫苗SjGST-FABP/pcDNA3的构建及其保护性免疫研究 被引量:11
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作者 李建国 张阳德 +1 位作者 李罗丝 向秋 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第14期1709-1712,1716,共5页
目的构建日本血吸虫DNA多价疫苗SjGST-FABP/pcDNA3,用以免疫小鼠,观察其在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法根据质粒pGEX-4T-1中SjGST-ORF和SjFABP基因序列,利用基因重组、PCR等技术将SjGST和SjFABP编码基因拼接在一起,得到融合... 目的构建日本血吸虫DNA多价疫苗SjGST-FABP/pcDNA3,用以免疫小鼠,观察其在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法根据质粒pGEX-4T-1中SjGST-ORF和SjFABP基因序列,利用基因重组、PCR等技术将SjGST和SjFABP编码基因拼接在一起,得到融合基因SjGST-FABP,将融合基因SjGST-FABP定向克隆到pcDNA3多克隆位点上,转化大肠杆菌,经质粒扩增和DNA序列测定后,进行小鼠动物免疫和日本血吸虫尾蚴攻击感染及免疫保护性评价。结果成功构建了日本血吸虫DNA多价疫苗SjGST-FABP/pcDNA3。免疫小鼠获得42.39%的减虫率和56.09%肝减卵率(P<0.05)。结论日本血吸虫DNA多价疫苗SjGST-FABP/pcDNA3可诱导部分抗血吸虫尾蚴攻击感染的免疫保护效果,具有疫苗研究与开发价值。 展开更多
关键词 日本血吸虫 GST 脂肪酸结合蛋白 多价DNA疫苗
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日本血吸虫pVAX1/SjRPS4·CB多价疫苗免疫对小鼠肝脏虫卵肉芽肿形成的影响 被引量:3
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作者 彭微 汪世平 +2 位作者 郑长黎 宋海鹏 刘怀 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1216-1219,共4页
目的观察血吸虫pVAX1/SjRPS4.CB多价疫苗诱导免疫对小鼠肝脏虫卵肉芽肿大小的影响。方法 55只昆明小鼠随机分成5组。PBS对照组、pVAX1空质粒组、pVAX1/SjRPS4单价疫苗组、pVAX1/SjCB单价疫苗组、pVAX1/SjRPS4.CB多价疫苗组,每组小鼠在... 目的观察血吸虫pVAX1/SjRPS4.CB多价疫苗诱导免疫对小鼠肝脏虫卵肉芽肿大小的影响。方法 55只昆明小鼠随机分成5组。PBS对照组、pVAX1空质粒组、pVAX1/SjRPS4单价疫苗组、pVAX1/SjCB单价疫苗组、pVAX1/SjRPS4.CB多价疫苗组,每组小鼠在左后腿股四头肌肌注100μg相应质粒或等量PBS。每隔2周加强免疫1次,共3次。末次免疫后2周经腹部皮肤攻击感染日本血吸虫尾蚴。感染后第6周剖杀小鼠,取出肝脏,常规切片染色,光镜下进行组织学观察及单个虫卵肉芽肿大小的测量。结果与对照组相比,pVAX1/SjRPS4.CB多价疫苗免疫组虫卵肉芽肿平均周长和面积明显减小(P<0.05)。形态学观察免疫小鼠肝脏虫卵肉芽肿周围仅有少量的嗜酸性粒细胞聚集,很少见到胶原纤维。结论 pVAX1/SjRPS4.CB多价疫苗具有明显抑制肝脏血吸虫卵肉芽肿的效果。 展开更多
关键词 血吸虫疫苗 肝脏 虫卵肉芽肿
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日本血吸虫DNA多价疫苗pVIVO_2SjFABP-23的构建及其保护性免疫 被引量:9
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作者 李春艳 余龙江 +4 位作者 刘智 朱路 朱晓华 胡媛 石佑恩 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期122-126,共5页
目的构建日本血吸虫多价DNA疫苗pVIVO2SjFABP-23,并观察其在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法根据Sj FABP和Sj23的基因序列合成两对特异性引物,利用重组PCR技术将日本血吸虫Sj FABP和Sj23的基因片段进行拼接,得到融合基因SjFABP-... 目的构建日本血吸虫多价DNA疫苗pVIVO2SjFABP-23,并观察其在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法根据Sj FABP和Sj23的基因序列合成两对特异性引物,利用重组PCR技术将日本血吸虫Sj FABP和Sj23的基因片段进行拼接,得到融合基因SjFABP-23,再将该片段重组于p GEM-T载体中,进行PCR扩增及DNA序列测定。然后经双酶切将目的片段SjFABP-23克隆到pVIVO2的一个多克隆位点上转化E.coliGT 110获得重组质粒pVIVO2SjFABP-23,免疫小鼠进行免疫保护性实验。结果PCR扩增出一条大小约为1.1Kb的目的片段。免疫小鼠获得52.14%减虫率(P<0.01)和60.93%的减卵率(P<0.01),且均高于单价疫苗pVIVO2Sj23(P<0.05)。结论PCR成功扩增SjFABP-23的基因片段,血吸虫DNA多价疫苗pVI-VO2SjFABP-23构建成功,该疫苗在小鼠抗血吸虫感染中具有比单价疫苗pVIVO2Sj23更好的免疫保护作用。 展开更多
关键词 日本血吸虫 23K Da膜蛋白 脂肪酸结合蛋白 多价DNA疫苗 免疫保护
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非复制型多价重组痘苗病毒粘膜与细胞免疫效果 被引量:7
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作者 马海伦 郭斐 +3 位作者 孙朝晖 陆柔剑 张帆 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期14-20,共7页
对已构建的同时表达乙型肝炎病毒SS1、麻疹病毒HA和F以及IL2的非复制型重组痘苗病毒VHFIL2ΔCKSS1,及其相应的复制型重组病毒VHFIL2SS1,进行了兔皮内毒力、粘膜免疫和细胞免疫效果的比较研究。发现VH... 对已构建的同时表达乙型肝炎病毒SS1、麻疹病毒HA和F以及IL2的非复制型重组痘苗病毒VHFIL2ΔCKSS1,及其相应的复制型重组病毒VHFIL2SS1,进行了兔皮内毒力、粘膜免疫和细胞免疫效果的比较研究。发现VHFIL2ΔCKSS1在兔皮内的毒力明显低于VHFIL2SS1。VHFIL2ΔCKSS1经空肠内免疫家兔4周后,可在肠粘膜表面诱发特异性IgA抗体,在血液中诱发特异性的IgG抗体,其抗SS1和抗麻疹病毒IgA和IgG的抗体滴度与VHFIL2SS1免疫组相同,抗痘苗病毒IgG抗体比VHFIL2SS1免疫组低16倍。VHFIL2ΔCKSS1经腹腔注射免疫4周的小鼠脾细胞,可在体外刺激产生高水平的麻疹病毒及痘苗病毒特异性CTL,与VHFIL2SS1无显著性差异。这些结果初步证实了非复制型痘苗病毒载体作为多价疫苗载体的有效性及安全性。 展开更多
关键词 毒力 粘膜免疫 细胞免疫 VHFIL2△CKSS1
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日本血吸虫pVAX1/SjRPS4·CB多价疫苗免疫对小鼠肝脏虫卵肉芽肿形成中TNF-α表达的影响(英文) 被引量:3
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作者 彭微 汪世平 +2 位作者 郑长黎 刘洁 周国兴 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期537-542,共6页
目的观察血吸虫pVAX1/SjRPS4.CB多价疫苗对小鼠肝脏虫卵肉芽肿中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis fac-torα;TNF-α)表达的影响。方法 55只昆明小鼠随机均分为pVAX1/空质粒组、pVAX1/SjRPS4组、pVAX1/SjCB组、pVAX1/SjRPS4.CB组和PBS对照... 目的观察血吸虫pVAX1/SjRPS4.CB多价疫苗对小鼠肝脏虫卵肉芽肿中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis fac-torα;TNF-α)表达的影响。方法 55只昆明小鼠随机均分为pVAX1/空质粒组、pVAX1/SjRPS4组、pVAX1/SjCB组、pVAX1/SjRPS4.CB组和PBS对照组,各组小鼠分别于左腿股四头肌注射100μg相应重组质粒,PBS组注射100μl PBS。每隔2周加强免疫1次,共3次。末次免疫后2周每鼠经腹部皮肤攻击感染日本血吸虫尾蚴(20±1)条。感染后6周剖杀小鼠,分离肝脏,运用免疫组化和原位杂交法检测TNF-α蛋白和TNF-αmRNA的表达情况。结果多价疫苗pVAX1/SjRPS4.CB组TNF-αmRNA和蛋白在肝虫卵肉芽肿中的染色评分得分(9.00±2.17,9.13±2.33),均明显高于pVAX1/SjCB组(6.33±3.06,9.13±2.33),pVAX1/SjRPS4(6.00±3.30,6.53±2.50)单价疫苗组和pVAX1空质粒组(0.67±0.72,0.93±0.59)以及PBS(0.00±0.00,0.00±0.00),P<0.05。结论多价疫苗pVAX1/SjRPS4.CB组TNF-αmRNA和蛋白信号呈棕黄色、棕褐色,主要位于肝脏虫卵肉芽肿周围。以强阳性表达为主。TNF-α表达上调可能是pVAX1/SjRPS4.CB多价疫苗免疫机制之一,能加强宿主的Th1型免疫反应,产生比单价疫苗更好的免疫效果。 展开更多
关键词 日本血吸虫 多价疫苗 肝虫卵肉芽肿 TNF-Α
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仔猪水肿病蜂胶佐剂多价灭活苗的研制 II免疫保护期和疫苗保存期试验 被引量:6
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作者 李鹏 王家乡 +3 位作者 程太平 何会时 刘伟 龚大春 《动物医学进展》 CSCD 2004年第6期125-126,共2页
对仔猪水肿病蜂胶佐剂多价灭活苗进行了免疫产生期、免疫持续期和疫苗保存期试验。研究表明 :仔猪接种该疫苗 5~ 7d后便产生免疫力 ,到第 9天时抗体产生水平已经很高 ;以免疫仔猪攻毒后的存活率不低于 95%为标准 ,疫苗的免疫持续期可... 对仔猪水肿病蜂胶佐剂多价灭活苗进行了免疫产生期、免疫持续期和疫苗保存期试验。研究表明 :仔猪接种该疫苗 5~ 7d后便产生免疫力 ,到第 9天时抗体产生水平已经很高 ;以免疫仔猪攻毒后的存活率不低于 95%为标准 ,疫苗的免疫持续期可达 9个月以上 ;以物理性状合格和免疫仔猪攻毒后的存活率不低于95%为标准 ,疫苗置 4℃时保存期为 1 8个月 ,2 5℃保存 展开更多
关键词 仔猪 水肿病蜂胶佐剂 多价灭活苗 研制技术 免疫保护期 疫苗保存期 试验
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多效价载体疫苗免疫大菱鲆效果评价 被引量:12
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作者 王秀华 周凌云 +1 位作者 王玉娟 刘琴 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期918-923,共6页
采用注射与浸泡2种方法,对构建的多效价载体疫苗MVAV6203A-1进行了免疫保护效果和血清效价的研究。结果显示,用多效价载体疫苗注射免疫大菱鲆(Scophthalmus maximus),可同时获得对鳗弧菌(Vibrio anguil-larum)和嗜水气单胞菌(Aeromonas ... 采用注射与浸泡2种方法,对构建的多效价载体疫苗MVAV6203A-1进行了免疫保护效果和血清效价的研究。结果显示,用多效价载体疫苗注射免疫大菱鲆(Scophthalmus maximus),可同时获得对鳗弧菌(Vibrio anguil-larum)和嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的免疫保护效果,免疫相对保护率分别为80.6%和77.0%;用ELISA方法测定血清效价的结果显示,免疫MVAV6203A-1后大菱鲆血清效价最高达到2 048,均值为891,明显高于对照组的97;用多效价载体疫苗浸泡免疫大菱鲆后,对鳗弧菌与嗜水气单胞菌的免疫相对保护率分别为62.2%和11.7%。血清效价分析显示,实验组与对照组的均值均为64。上述结果表明,所构建的疫苗MVAV6203A-1可有效提高大菱鲆对鳗弧菌和嗜水气单胞菌的免疫力,并且免疫和攻毒的途径可能是影响免疫保护效果的因子。本研究旨在为鳗弧菌与嗜水气单胞菌引起的鱼类疾病防治提供技术支撑。 展开更多
关键词 多效价载体疫苗 大菱鲆 鳗弧菌 嗜水气单胞菌 免疫保护率 抗体效价
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