广西贺州地区无偿献血人群Mur血型筛查及基因型研究

目的 筛查广西贺州地区无偿献血者Mur血型抗原分布频率,并对Mur抗原阳性样本进一步分析其分子基础。方法 采用微孔板血型血清学方法筛查广西贺州地区无偿献血者Mur表型,分析Mur血型抗原在不同少数民族人群中分布频率。对血清学筛查结果阳性样本通过PCR-SSP方法进行基因定型,验证血清学方法的准确性,并测序分析其基因背景。结果 在3 298例贺州地区无偿献血者标本中筛选出Mur抗原阳性432例(13.10%,432/3 298),PCR-SSP基因分型验证显示432例标本均为电泳阳性。其中,汉族献血者Mur抗原阳性占比12.79%(331/2 587),瑶族13.25%(64/483),壮族16.51%(36/218),3组数据无统计学差异(P>0.05)。进一步的测序结果显示,其中428例为GYP(B-A-B)Mur,即GYP.Mur型(12.98%,428/3 298),其余4例为GYP(B-A-B)Bun,即GYP.Bun型(0.12%,4/3 298)。结论 广西贺州地区无偿献血人群Mur血型频率较高,且以GYP.Mur基因型为主。由于民族融合等因素,汉族与壮族、瑶族等少数民族Mur血型分布频率无显著性差异。因此,本地区广泛开展Mur血型抗原抗体检测,对于保障临床输血安全具有重要意义。

Mur血型分子诊断方法的建立与应用

目的建立Mur血型的分子生物学诊断方法。方法根据Mur血型的分子背景,设计特异性引物,采用PCR-SSP技术,优化反应体系及扩增参数,建立Mur血型分子检测方法;同时采用标准抗血清、标准细胞,用血清学方法予以验证并初步应用于献血者Mur血型的检测。结果建立了Mur血型PCR-SSP检测方法,用以检测14份已知抗-Mur阳性或阴性的献血者标本,同时用血清学方法平行检测:抗-Mur阳性11/11、抗-Mur阴性3/3,结果完全一致;用本法对随机抽取的107名献血者血样检测,检出2例阳性,同时采用标准抗血清用血清学方法所做的复核结果也完全一致。结论所建立的Mur血型PCR-SSP检测方法可以准确地检出Mur抗原,弥补了Mur血型血清学检测方法的局限性,有助于Mur血型检测方法的标准化、规范化。

Mur基因分型方法的建立及西安地区无偿献血者的频率分布

目的建立Mur基因分型的方法,同时检测西安地区无偿献血人群中Mur血型的基因频率。方法根据Mur基因序列特异性设计引物,建立了Mur血型的基因检测方法。同时对379例西安地区无偿献血者进行GYP（BA-B）Mur基因检测,检出的阳性样本用抗-Mur进行确认,并随机抽取20例基因检测阴性的样本,用抗-Mur检测作为对照。结果建立的Mur基因检测方法的检测结果与血清学检测结果吻合,证明该方法具有很好的特异性。西安市无偿献血者样本379例,检出Mur阳性4例,Mur抗原在西安地区无偿献血人群中的频率为1.05%。结论建立的Mur基因分型方法可以替代血清学的方法用于鉴定Mur血型抗原,对于了解人群分布频率,筛查和提供相合的血液,保障临床输血安全具有重要的作用。

低频率抗体抗-Mur引起的溶血性输血反应

目的 :研究抗Mur抗体的血清学特异性及其在输血中的临床意义。方法 :患者的血清 ,与 3组试剂红细胞 (其中二组为Miltenberger抗原试剂红细胞组 )和 2 8个低频率血型抗原 ,在盐水介质、低离子强度介质和低离子间接抗球蛋白介质中反应 ,分析鉴定其抗体的特异性。结果 :患者血清与三组试剂红细胞在多种反应介质中的反应的结果显示患者血清中含有抗Mur抗体 ,患者血清与 2 8个低频率血型抗原的反应证实该例抗体只与Mur抗原反应。结论 :该例同种抗体为特异性抗Mur抗体 ,且引起溶血性输血反应。在亚洲人中Miltenberger血型系抗体筛选意义值得探讨。

低频率抗Mur抗体引起溶血性输血反应的调查研究

目的研究抗Mur抗体血型血清学特征,调查其在输血医学中临床意义。方法对2例患者的血清,与已知血型的试剂红细胞和4个已知Mur抗原,在盐水介质、低离子间接抗球蛋白介质,分析鉴定出其抗体的特异性。结果这2例患者与已知血型的试剂红细胞在多种反应介质中的反应结果显示患者血清中含有抗Mur抗体,患者血清与4个已知Mur抗原的反应证实该例抗体只与Mur抗原反应。结论该例同种抗体为特异性抗Mur抗体,在临床会引起溶血性输血反应。在东方人群中Miltenberger血型抗体常规筛选鉴定值得探讨。

Mur血型抗原抗体调查及应用研究

目的了解广东地区人群抗-Mur发生频率、性质和来源以及Mur抗原的分布;建立献血者Mur稀有血型库服务于临床用血。方法以微量板的盐水法和聚凝胺法对广东省中山、深圳、江门、东莞、惠州市34 419名献血者做抗-Mur筛查,用抗-Mur做红细胞Mur抗原筛查,部分标本采用固相免疫吸附试验(SPIA)筛查。结果本组筛查对象共检出抗-Mur 48例,占0.14%(48/34 419),其中IgM占79.2%(38/48),IgM+IgG占16.7%(8/48),IgG占4.2%(2/48);献血者抗-Mur频率比较,无显著性差异(P>0.05);中山患者抗-Mur频率为0.17%(5/3010),与献血者比较无明显差异(P>0.05);中山地区,Mur抗原在献血者、患者中的发生率分别为7.31%(128/1 752)vs 7.14%(80/1 120),P>0.05,献血者男性和女性中分别为7.7%(72/931)vs 6.5%(33/504),P>0.05;本组Mur阳性者均为汉族,其中广东省籍贯占66.7%(70/105);建立了中山地区献血者Mur稀有血型库;SPIA技术从2 541份血浆标本中检出4例抗-Mur。结论 SPIA可以检出37℃活性有较高临床意义的抗-Mur,广东地区献血人群Mur血型抗体、抗原发生频率均明显高于Rh D血型抗体、抗原发生频率,不规则抗体检测应增加Mur阳性筛选红细胞,供受血者均应检测Mur血型是否相合,以进一步提高输血免疫安全性。

中国部分人群Mur血型抗原分布及分子基础的研究

目的调查上海地区和云南地区献血者中Mur抗原阳性的分布频率;研究其基因型和分子基础。方法用已知的抗-Mur抗血清在上海和云南少数民族的献血者中用U型微孔板法筛查Mur表型,得出Mur血型抗原表型在这2种人群中的分布频率。对血清学筛出的Mur阳性标本进行Miltenberger血型基因SSP分型,同时进行GYPB假外显子的PCR扩增和直接测序或克隆后测序分析。结果在1 673名上海献血者中筛选出Mur抗原阳性30例,即Mur抗原表型在上海地区中的频率为1.79%;在201名云南献血者中筛选出Mur抗原阳性7例,即Mur抗原表型在云南地区中的频率为3.48%。对实际获得的28份上海献血者和7份云南献血者DNA的分析显示,27份上海献血者阳性标本及6份云南阳性标本均为GYP(B-A-B)Mur,即为GP.Mur型。其余2例Mur抗原阳性献血者DNA测序结果为1种新的GYP(B-A-B)杂交基因型,我们命名为GYP MiⅢShanghai。突变的位点为GYPB上209C>A、220A>G、224A>G、227A>C、内含子3的1T>G,推测产生的蛋白序列与GP.Bun一致。结论本文统计了上海地区和云南地区献血者Mur抗原分布频率;同时发现了1种新的Mur抗原相关GYP(B-A-B)基因型。中国人群中Mur抗原阳性表型对应的基因型至少包括GYP MiⅢ和GYP MiⅢShanghai这2型。

人源Mur血型抗体的鉴定和应用——附1例报告

目的对1名AB型献血者血液中的抗-Mur抗体系统地进行特异性、反应能力等检测,并利用此抗体对中山市人群Mur抗原发生频率进行调查。方法在本实验室,应用合成的Mur抗原特异性多肽,通过红细胞多肽凝集抑制试验鉴定抗-Mur;英国国际血型参比实验室对该抗体进行了经典血型血清学试验、试管凝集方法和Miltenberger抗原谱细胞鉴定抗-Mur。观察蛋白水解酶、酸碱度对Mur抗原抗体反应的影响,以微量板盐水法检测广东中山地区Mur抗原发生频率。结果确定了该抗体是高质量的Mur血型抗原检测试剂;木瓜酶、菠萝酶能破坏Mur抗原,弱酸性环境能增强Mur抗原抗体反应,中山地区献血者Mur抗原占7.31%(128/1 752)。结论我们发现的这例人源抗-Mur,无ABO天然抗体存在,效价高,特异性强,为理想的Mur血型定型抗体,为今后国内外输血界对Mur血型相关研究提供了基本保证。中山地区Mur抗原发生频率较高,输血时应该予以充分的重视。

献血者Mi^a和Mur血型研究及1例GP.Vw结合子的检出

目的了解Mia和Mur血型抗原的关联和差异性,研究单克隆抗-Mia特性,评估通过抗-Mia检测目前时髦的Mur血型可靠性。方法以微量板盐水法用单克隆抗-Mia和人源抗-Mur平行筛查当地献血者红细胞上的Mia、Mur抗原,试管法复查,异常结果标本用分子生物学技术鉴定,抗-Mia用微量板法、微柱凝胶卡法、试管法确认其性能。结果在中山市1 789名献血者中,Mia阳性114例占6. 4%（114/1 789）,Mur阳性112例占6. 3%率（112/1 789）（P〉0. 05）; Mia、Mur血型抗原同时阳性112例,同时阴性1 675例,只有剩余2例异常且均为Mia＋Mur-,后被确认为含有GYP. Vw基因的GP. Vw表型（红细胞Vw＋Mia＋）,发生率0. 11%（2/1 789）;发现1例罕见的GP. Mur纯合子;建立了中山地区献血者Mia和Mur同时兼有的稀有血型库;该单克隆抗-Mia为IgG性质,在盐水和抗球蛋白中均有活性,文中的抗-Mia和抗-Mur不适合于立即离心法,它们检测对应抗原的孵育时间不能少于10min。结论中山地区献血者Mia和Mur血型抗原频率表达密切关联（≥98. 2%）,有条件地区开展输血前检查时,应该检测供、受者血液Mia或Mur血型;单克隆抗-Mia检测Mia血型可代替Mur血型筛查,以做到同型输注,提高输血安全性。

不同地区MNS血型系统与M、N、S、s、Mur+抗原基因型一致性分析

目的探讨不同Mur表型人群在MNS血型系统上,应用不同方法和试剂检测结果的一致性。方法共检测2500人份的Mur抗原,采用血清学和荧光定量PCR方法,比较不同方法和试剂间检测结果的一致性。对所有Mur阳性血样和随机抽取的200例Mur阴性血样的M、N、S、s抗原,分别采用血清学和荧光定量PCR方法,探讨不同方法间结果的一致性。结果研究人群中通过血清学和基因分型方法,检测出Mur阳性个体119例(4.76%),Mur阴性个体2381例(95.24%),其中不同地区献血者中Mur阳性率分别为4.2%(渭南地区:42/1000)和4.6%(北京:23/500);不同地区三个月内无输血史的患者中Mur阳性率分别为3.8%(西安:19/500)和7%(佛山:35/500),三种方法经统计学检验一致性为100%(Kappa=1.000,P<0.05);对200例Mur阴性人群分别采用三个不同厂家单克隆抗-M、抗-N和MN基因型方法进行M、N抗原检测,其结果一致性分别为99.0%(Kappa=0.983),97.5%(Kappa=0.958),95.5%(Kappa=0.925);119例Mur阳性人群不同厂家单克隆抗-M、抗-N和基因分型检测结果的一致性分别为97.5%(Kappa=0.955),93.2%(Kappa=0.880),84.9%(Kappa=0.729);在S、s抗原检测方面,Mur阳性人群不同厂家单克隆抗体和基因型方法间检测结果一致性分别为97.5%(Kappa=0.736),93.3%(Kappa=0.625),41.2%(Kappa=0.057);Mur阳性人群不同厂家单克隆抗体和基因型方法间检测结果一致性分别为99.5%(Kappa=0.944),97.5%(Kappa=0.858),89.0%(Kappa=0.526)。结论不同方法和试剂对于Mur抗原的检测结果没有差异性,均可以作为Mur抗原的常规筛查方法;对于Mur阳性人群,在M、N、S、s抗原方面,常规应用单克隆抗体检测的血型血清学方法和荧光定量PCR基因分型方法,在结果上存在差异性,这提示我们MNSs抗原的正确定型需同时以Mur抗原的结果为参考。

抗-Mur流式微球检测技术的建立及应用

目的合成Mur血型抗原多肽及重复多肽序列,比较2者抗原性,并建立不依赖新鲜红细胞的可用于抗-Mur检测的流式微球实验技术。方法采用固相化学合成法合成制备生物素Biotin标记的Mur血型抗原多肽及重复多肽序列:Biotin-GGDGDGDGDGDTYPAHTANEVSE和Biotin-GGDGDGDGDGDTYPAHTANEVSETYPAHTANEVSE,经凝集抑制试验验证其抗原特异性后,通过链亲和素streptavidin包被于羧基流式微球表面,建立抗-Mur流式微球检测技术。采用该方法检测本研究室制备的抗-Mur参考血清1份和2 300例临床患者血液标本,并与试管法血凝试验比较。同时验证多肽抗原微球的稳定性和保存期限。结果 Mur血型抗原多肽及重复多肽序列被高效包被于流式微球表面;通过抗-Mur流式微球检测技术可检测出参考血清中的抗-Mur;流式微球检测技术与试管法血凝试验对临床患者血液标本抗-Mur阳性检出率皆为0.35%(8/2 300)。通过对参考血清检测实验比较,流式微球检测技术的Mur血型抗原重复多肽序列阳性检测结果明显优于Mur血型抗原多肽,该多肽抗原微球4℃保存稳定性可维持> 11个月。结论基于合成重复多肽序列抗原的抗-Mur流式微球检测技术用于检测抗-Mur,弥补了临床难以获得Mur表型阳性红细胞及保存期短的局限性,有助于临床常规开展抗-Mur检测。

安徽省汉族人群Miltenberger血型调查分析

目的调查安徽省Miltenberger血型的分布情况,为建立红细胞库奠定基础。方法随机采集安徽省血液中心2 660例非血缘关系汉族无偿志愿献血者外周血样乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝血标本,并提取DNA。采用序列特异性引物PCR(PCR-SSP)方法对Miltenberger血型系统进行检测,并通过血清学及测序方法验证。结果 2 660例献血者中有24例PCR-SSP阳性,经血清学及测序确认均为GP.Mur表型。结论在安徽省汉族人群中,GP.Mur表型的频率为0.9%。目前还未发现Miltenberger血型系统的其他表型。

四川汉族人群Mur抗原频率调查

Miltenberger是与MNS血型系统有关的相对稀有的一系列血型,是极具多样性及复杂性的血型系统之一。Mur抗原属于Miltenberger血型系统。该血型在欧美属于极低频率抗原,临床意义极低,一直未受到重视。但研究表明,该血型在我国有一定的分布频率,近些年来不断有引起输血反应及新生儿溶血病（HDN）的报道,因此我们对本地区献血人群中Mur抗原的频率进行调查,为临床输血治疗提供依据。

海南黎族人群MNS和Mur血型系统基因频率分布及与其他民族人群比较

目的了解海南黎族人群MNS和Mur血型系统基因频率分布及其与其他民族人群的差异,为稀有血型库的建立及临床输血提供参考依据。方法于2020年1月在海南省琼中县黎母山地区采集300份(男性180份、女性120份)三代以内均为黎族的18~60岁志愿者静脉血3~5 mL,采用聚合酶链式反应-序列特异性引物法(PCR-SSP)对MNS、Mur血型系统等位基因进行检测和分型,分析其基因频率并与其他民族人群进行比较。结果海南300名黎族人群的MNS血型系统中,MM表型199人,MN表型93人,NN表型8人,SS表型1人,Ss表型15人,ss表型284人,等位基因频率为M=0.8183、N=0.1817、S=0.0283、s=0.9717;与湖南岳阳汉族人群、四川成都汉族人群、山西运城汉族人群、新疆回族人群、新疆维吾尔族人群、新疆哈萨克族人群、西藏藏族人群和四川彝族人群的MNS血型等位基因频率比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。海南300名黎族人群的Mur血型系统中,Mur^(+)表型173人,Mur^(-)表型127人,等位基因频率为Mur^(+)=0.5767、Mur^(-)=0.4233;与上海汉族人群、陕西西安汉族人群、广东番禺汉族人群、四川汉族人群、黑龙江哈尔滨满族人群和湖南岳阳汉族人群的Mur血型基因频率比较,差异均有统计学意义(均P<0.001)。M/N和S/s对偶抗原的不配合率(MP)分别为25.76%和5.35%。结论海南黎族人群MNS和Mur血型系统基因遗传状况保持相对稳定,MNS血型基因频率呈多态性分布、Mur血型阳性基因频率较高,与国内其他不同民族相比具有独特的民族分布特征。

低频抗-Mur抗体鉴定及血型特征研究

目的:通过对1例冰冻保存的抗筛阴性、交叉配血不合的献血者标本进行检测分析,了解低频血型抗体类型和血型特征。方法:采用不同厂家的抗体筛选细胞对冰冻保存标本和新采集标本进行抗体检测和鉴定,并检测抗体效价;采用多种血型血清学方法检测抗-Mur抗体与Mur抗原的红细胞凝集反应特征。结果:该献血者标本与具有Mur抗原的筛选细胞血清凝集反应阳性,与其余筛选细胞反应均为阴性;抗体鉴定结果为IgG抗-Mur抗体;冰冻保存标本和新采集标本的抗体效价均为16;Mur抗原抗体在酶介质中不凝集。结论:导致抗筛阴性、交叉配血不合的不规则抗体为IgG抗-Mur抗体,IgG抗-Mur抗体冰冻保存效价比较稳定且可在人体内较长时间稳定存在,Mur抗原抗体反应符合MN血型抗原抗体血型血清学凝集反应特征。

1例冷反应性IgG抗-Mur引起新生儿溶血病的血清学研究

目的对1例由IgG抗-Mur引起的新生儿溶血病(HDN)进行血清学分析,并了解其抗体的特性。方法采用常规血型血清学方法进行ABO血型鉴定、Rh分型、MN、Mur表型、直接抗人球蛋白试验(DAT)、不规则抗体筛查、抗体特异性鉴定及抗体效价(不同放散法、不同温度)检测。结果患儿血型为AB型、CCDee、MN、Mur抗原阳性,患儿父母血型分别为A型、Cc DEe、MM、Mur抗原阳性和AB型、CCDee、MN、Mur抗原阴性。患儿DAT弱阳性。患儿血清检出IgG抗-E、抗-Mur抗体,红细胞放散液中检出IgG抗-Mur抗体;其母亲血清中检出(IgM+IgG)抗-E、抗-Mur抗体。患儿血清IgG抗-Mur效价:患儿血清、放散液、母亲血清在4℃下的效价明显高于37℃,且热放散效价高于酸放散效价。结论抗-Mur可导致严重的新生儿溶血病,该IgG抗体具有冷反应特性。