广州地区无偿献血者抗-Mur筛查及Mur抗原基因型检测

目的了解广州地区无偿献血者中抗-Mur及Mur抗原基因型的频率,为指导临床输血及产前抗体监测提供依据。方法用微柱凝胶卡方法筛查2725名献血者血清中37℃有活性的抗-Mur;采用多重连接依赖的探针扩增技术(MLPA)对91名献血者的Mur抗原基因型进行检测,然后用人源抗-Mur血清检测Mur抗原基因型阳性样本的红细胞表型。结果无偿献血者血清中抗-Mur频率为0.04%(1/2725),Mur抗原基因型阳性频率为6.59%(6/91),经血型血清学方法验证基因型与表型符合率为100%(6/6)。结论广州地区无偿献血者中抗-Mur频率较低,而Mur抗原阳性则相对较常见;通过MLPA方法检测Mur抗原基因型可以准确推断其表型,解决了因缺乏商品化抗-Mur试剂导致Mur抗原鉴定难以开展的难题。

惠州地区无偿献血者抗-Mur筛查及Mur抗原频率分布

目的了解惠州地区无偿献血者中抗-Mur及Mur抗原的频率,为指导临床输血及建立稀有血型红细胞库提供依据。方法用微板盐水法和凝聚胺法筛查8686名自愿无偿献血者血浆中的抗-Mur,再用微柱凝胶卡方法进一步确认;采用人源抗-Mur血清检测1119名献血者Mur抗原的红细胞表型。结果无偿献血者血清中抗-Mur频率为0.35%(31/8686),男女间的差异有统计意义(P<0.05),女性高于男性;Mur抗原阳性频率为5.61%(63/1119)。结论惠州地区无偿献血者中抗-Mur频率较高,而Mur抗原阳性则相对较常见,在输血前检查项目中增加Mur血型抗原抗体检测是非常必要的。

广西贺州地区无偿献血人群Mur血型筛查及基因型研究

目的 筛查广西贺州地区无偿献血者Mur血型抗原分布频率,并对Mur抗原阳性样本进一步分析其分子基础。方法 采用微孔板血型血清学方法筛查广西贺州地区无偿献血者Mur表型,分析Mur血型抗原在不同少数民族人群中分布频率。对血清学筛查结果阳性样本通过PCR-SSP方法进行基因定型,验证血清学方法的准确性,并测序分析其基因背景。结果 在3 298例贺州地区无偿献血者标本中筛选出Mur抗原阳性432例(13.10%,432/3 298),PCR-SSP基因分型验证显示432例标本均为电泳阳性。其中,汉族献血者Mur抗原阳性占比12.79%(331/2 587),瑶族13.25%(64/483),壮族16.51%(36/218),3组数据无统计学差异(P>0.05)。进一步的测序结果显示,其中428例为GYP(B-A-B)Mur,即GYP.Mur型(12.98%,428/3 298),其余4例为GYP(B-A-B)Bun,即GYP.Bun型(0.12%,4/3 298)。结论 广西贺州地区无偿献血人群Mur血型频率较高,且以GYP.Mur基因型为主。由于民族融合等因素,汉族与壮族、瑶族等少数民族Mur血型分布频率无显著性差异。因此,本地区广泛开展Mur血型抗原抗体检测,对于保障临床输血安全具有重要意义。

KODE技术修饰红细胞在抗-Mur筛查中的应用及Mur抗原遗传背景研究

目的探讨KODE技术修饰红细胞(即利用KODE技术制备的Mur抗原修饰红细胞)应用于抗-Mur筛查中的可行性,同时了解广州地区人群Mur抗原的遗传特征。方法利用含KODE技术修饰红细胞的筛选细胞在微柱凝胶卡中筛查3 579名献血者血浆中的不规则抗体,并对阳性样本进行抗体鉴定;同时,采用单克隆抗-Mur筛查528名献血者红细胞上的Mur抗原,然后通过PCR产物直接测序法对Mur抗原阳性样本进行序列分析。结果 3 579名献血者血浆中不规则抗体阳性者有11例,其中抗-Mur 7例,抗-S 2例,抗-E 1例,抗-Lea 1例;528名献血者红细胞表面表达Mur抗原的有51名,经过DNA序列分析,发现该51名Mur抗原阳性献血者均携带有GYP(B-A-B)杂交基因,其中表达GP.Mur的有50名,表达GP.Bun的有1名。结论KODE技术修饰红细胞在抗-Mur筛查中的成功应用,表明利用该技术制备更多其他的人工修饰稀有红细胞用于抗体筛选与鉴定具有可行性,从而为输血安全提供保障;GYP(B-A-B)杂交基因是广州地区Mur抗原的遗传基础,并且,GP.Mur是表达Mur抗原的主要杂交糖蛋白。

云南怒族稀有血型MNSs系统——(Mur)抗原抽样调查分析

目的 :了解云南怒族稀有血型MNSs系统—(Mur)抗原布分情况 ,为解决临床寻找稀有血型提供理论依据。方法 :在怒族自然村采用随机抽样调查128人 ,进行血清学检测定型的方法。结果 :云南怒族稀有血型MNSs系统—(Mur)抗原阳性率特别高为22 65%(29/128)与上海汉族阳性率为0 66%(6/900)相比 ,怒族Mur抗原分布明显高于汉族Mur抗原。结论 :怒、汉两民族的Mur抗原阳性率有高度显著性差异(x2=158 14 ,P<0 005)

四川汉族人群Mur抗原频率调查

Miltenberger是与MNS血型系统有关的相对稀有的一系列血型,是极具多样性及复杂性的血型系统之一。Mur抗原属于Miltenberger血型系统。该血型在欧美属于极低频率抗原,临床意义极低,一直未受到重视。但研究表明,该血型在我国有一定的分布频率,近些年来不断有引起输血反应及新生儿溶血病（HDN）的报道,因此我们对本地区献血人群中Mur抗原的频率进行调查,为临床输血治疗提供依据。

MNS血型系统Mur抗原单克隆抗体的制备及应用

目的制备能用于Mur抗原血清学检测的抗-Mur试剂,并将其应用于献血者标本的筛查中。方法采用偶联了载体蛋白——钥孔血蓝蛋白(KLH)的Mur抗原特异性多肽免疫BALB/c小鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术获得分泌抗体的细胞株,用Mur抗原阳性细胞筛选阳性克隆,利用谱细胞鉴定单克隆抗体的特异性,利用制备的单克隆抗体对1062例献血者标本的Mur抗原进行检测。结果经筛选及鉴定后共获得4个能稳定分泌抗-Mur的单克隆,均为IgM型Kappa轻链,效价分别为64、128、256和256。制备的抗-Mur单克隆抗体与日本惠赠的人源单克隆抗-Mur分别检测了1062例献血者标本,其检测结果符合率为100%。结论成功建立了能稳定分泌抗-Mur单克隆抗体的杂交瘤细胞株,可用于临床上Mur抗原的血清学快速检测。

中国部分人群Mur血型抗原分布及分子基础的研究

目的调查上海地区和云南地区献血者中Mur抗原阳性的分布频率;研究其基因型和分子基础。方法用已知的抗-Mur抗血清在上海和云南少数民族的献血者中用U型微孔板法筛查Mur表型,得出Mur血型抗原表型在这2种人群中的分布频率。对血清学筛出的Mur阳性标本进行Miltenberger血型基因SSP分型,同时进行GYPB假外显子的PCR扩增和直接测序或克隆后测序分析。结果在1 673名上海献血者中筛选出Mur抗原阳性30例,即Mur抗原表型在上海地区中的频率为1.79%;在201名云南献血者中筛选出Mur抗原阳性7例,即Mur抗原表型在云南地区中的频率为3.48%。对实际获得的28份上海献血者和7份云南献血者DNA的分析显示,27份上海献血者阳性标本及6份云南阳性标本均为GYP(B-A-B)Mur,即为GP.Mur型。其余2例Mur抗原阳性献血者DNA测序结果为1种新的GYP(B-A-B)杂交基因型,我们命名为GYP MiⅢShanghai。突变的位点为GYPB上209C>A、220A>G、224A>G、227A>C、内含子3的1T>G,推测产生的蛋白序列与GP.Bun一致。结论本文统计了上海地区和云南地区献血者Mur抗原分布频率;同时发现了1种新的Mur抗原相关GYP(B-A-B)基因型。中国人群中Mur抗原阳性表型对应的基因型至少包括GYP MiⅢ和GYP MiⅢShanghai这2型。

不同地区MNS血型系统与M、N、S、s、Mur+抗原基因型一致性分析

目的探讨不同Mur表型人群在MNS血型系统上,应用不同方法和试剂检测结果的一致性。方法共检测2500人份的Mur抗原,采用血清学和荧光定量PCR方法,比较不同方法和试剂间检测结果的一致性。对所有Mur阳性血样和随机抽取的200例Mur阴性血样的M、N、S、s抗原,分别采用血清学和荧光定量PCR方法,探讨不同方法间结果的一致性。结果研究人群中通过血清学和基因分型方法,检测出Mur阳性个体119例(4.76%),Mur阴性个体2381例(95.24%),其中不同地区献血者中Mur阳性率分别为4.2%(渭南地区:42/1000)和4.6%(北京:23/500);不同地区三个月内无输血史的患者中Mur阳性率分别为3.8%(西安:19/500)和7%(佛山:35/500),三种方法经统计学检验一致性为100%(Kappa=1.000,P<0.05);对200例Mur阴性人群分别采用三个不同厂家单克隆抗-M、抗-N和MN基因型方法进行M、N抗原检测,其结果一致性分别为99.0%(Kappa=0.983),97.5%(Kappa=0.958),95.5%(Kappa=0.925);119例Mur阳性人群不同厂家单克隆抗-M、抗-N和基因分型检测结果的一致性分别为97.5%(Kappa=0.955),93.2%(Kappa=0.880),84.9%(Kappa=0.729);在S、s抗原检测方面,Mur阳性人群不同厂家单克隆抗体和基因型方法间检测结果一致性分别为97.5%(Kappa=0.736),93.3%(Kappa=0.625),41.2%(Kappa=0.057);Mur阳性人群不同厂家单克隆抗体和基因型方法间检测结果一致性分别为99.5%(Kappa=0.944),97.5%(Kappa=0.858),89.0%(Kappa=0.526)。结论不同方法和试剂对于Mur抗原的检测结果没有差异性,均可以作为Mur抗原的常规筛查方法;对于Mur阳性人群,在M、N、S、s抗原方面,常规应用单克隆抗体检测的血型血清学方法和荧光定量PCR基因分型方法,在结果上存在差异性,这提示我们MNSs抗原的正确定型需同时以Mur抗原的结果为参考。

6种蛋白酶对红细胞Mur、S、Dia抗原检测的影响

目的比较6种不同的蛋白酶对Mur、S、Dia抗原检测的影响。方法采用2步酶法,Mur抗原阳性红细胞分别与木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、链酶蛋白酶混合,37℃孵育10min后3洗红细胞,加入IgG抗-Mur,进行抗人球蛋白试验,记录反应强度;对照组平行试验,将酶替换为等量生理盐水。含有S抗原或Dia抗原的红细胞也进行此试验,加入的抗体与抗原相对应。结果木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、糜蛋白酶、链酶蛋白酶减弱甚至破坏Mur抗原,而菠萝蛋白酶、胰蛋白酶不影响它。木瓜蛋白酶、糜蛋白酶、链酶蛋白酶破坏S抗原,而菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、胰蛋白酶不影响它。6种蛋白酶均不破坏Dia抗原。结论不同种类的蛋白酶对红细胞抗原检测的影响不同,在酶法试验中应注意区分。

M血型检测的影响因素及M抗原与Mur血型的关联性

目的探讨M抗原和抗-M检测的影响因素,了解M抗原与Mur抗原的关联性,调查广东省中山地区人群M血型的发生频率。方法采用微孔板(或试管)盐水法,对该地区581例无偿献血者进行M和Mur血型抗原筛查,观察不同条件下人源性抗-M和单克隆抗-M检测的敏感性。结果该地献血者中M抗原与Mur抗原的发生频率分别为78.0%(453/581)、7.9%(46/581),其中Mur抗原者中M抗原阳性发生频率为100.0%(46/46)。孵育温度越低,抗-M活性越高,孵育时间过短易导致敏感性降低;试剂红细胞越新鲜,敏感性更高。结论M抗原与Mur抗原两者存在密切相关性。M抗原抗体检测最佳孵育温度和时间分别为4℃、15 min,单克隆抗-M试剂应选择效价高的试剂(如1∶16以上),抗体筛选红细胞试剂尽可能选择新鲜的,以纯合子最佳。

抗-Mur抗体引起的疑难配血及其临床意义分析

目的掌握Mur抗原的血型血清学特性,更好地指导临床输血,保证输血安全。方法对患者血清用室温盐水法、4℃盐水法、木瓜酶法、抗人-IgG、戴安娜卡式配血系统几种方法进行比较。结果室温盐水法与4℃盐水相同,效价是1∶2,抗人-IgG法与戴安娜卡式配血系统相同,效价1∶4,木瓜酶法不出现凝集。结论抗Mur抗体与Mur抗原在木瓜酶法中不能显示凝集反应,说明Mur抗原同MN系统的MN抗原一样能被木瓜酶破坏,使抗原抗体不能发生反应,其特性完全一致。提示我们在怀疑存在抗Mur抗体时,一定要选择两种以上的方法配血,切记不能单用木瓜酶法配血,防止假阴性漏检,导致输血发生溶血反应,给患者造成伤害。

低频率抗-Mur引起的疑难配血1例

目的研究抗-Mur血型血清学特征,调查其在输血医学中的临床意义。方法分别用盐水法和抗人球蛋白法对患者血清进行抗体鉴定,分析该患者抗体的特异性。用胰蛋白酶酶和木瓜酶处理后检测Mur抗原的活性。结果在患者血清中存在Miltenberger亚血型系统抗-Mur。胰蛋白酶处理后,Mur抗原活性基本没有受到破坏,木瓜酶处理后Mur抗原活性被完全消化破坏。结论在亚洲Miltenberger亚血型系统的抗体需引起临床输血科工作者的高度重视。

惠州地区无偿献血者Mur血型检索库的建立

目的通过对惠州地区无偿献血者抗-Mur及Mur抗原进行检测,了解其在人群中的分布,建立本地区的Mur血型检索库。方法分别采用高通量微板法和微柱凝胶法对献血者进行抗-Mur筛查和确认,并对其Mur抗原进行血清型检测。根据检测结果及献血者相关资料,建立Mur血型检索库,指导临床用血及献血者招募。结果总筛查人数32 305人,抗体阳性104人,阳性率0.32%,其中41例具有临床意义,男女间的差异具有统计意义(P<0.05),女性高于男性;抗原阳性1 862人,阳性率为5.76%。在近1年的临床输血应用中,共避免41袋含有抗-Mur血液流入临床,并为5例抗-Mur阳性患者找到相合血液。结论 Mur血型检索库的建立,能有效避免含有Mur抗体的血液制品流入临床,减少因此引起的疑难配血及输血不良反应,并快速找到相合血源,同时有利于稀有血型献血者的保留和电子配血的开展及推广。

低频率抗Mur抗体引起溶血性输血反应的调查研究

目的研究抗Mur抗体血型血清学特征,调查其在输血医学中临床意义。方法对2例患者的血清,与已知血型的试剂红细胞和4个已知Mur抗原,在盐水介质、低离子间接抗球蛋白介质,分析鉴定出其抗体的特异性。结果这2例患者与已知血型的试剂红细胞在多种反应介质中的反应结果显示患者血清中含有抗Mur抗体,患者血清与4个已知Mur抗原的反应证实该例抗体只与Mur抗原反应。结论该例同种抗体为特异性抗Mur抗体,在临床会引起溶血性输血反应。在东方人群中Miltenberger血型抗体常规筛选鉴定值得探讨。

Mur血型系统的最新研究进展

Mur血型抗原一种由血型糖蛋白A和血型糖蛋白B基因杂合产生的位于红细胞表面的新型抗原,由于目前对该抗原抗体的认识不足及其鉴定技术的限制,造成了人们在对Mur抗原阴性患者在抗体鉴定或交叉配血时的误区[1-2];患者因抗体类型迟迟未定或交叉配血实验无法通过,导致Mur抗原阴性患者因“无血可输”而贫血加重。本文针对Mur抗原血型系统、抗-Mur抗体的临床意义、Mur抗原和抗体的检测方法以及抗-Mur抗体阳性患者的临床输血对策等方面进行综述。

意外抗体筛查检出抗“Mur”抗体的临床意义

目的通过对"Mur"抗原的制备研究,探讨意外抗体筛查检出抗"Mur"抗体的临床意义,为临床选择合适的血液,预防输血反应,确保有效输血及输血安全。方法首先用含Mur抗原谱细胞筛查出抗"Mur"抗体,然后用该抗"Mur"抗体制备"Mur"抗原作为4号筛查细胞,用于输血前的意外抗体筛查。结果 8 200例抗体筛查中抗"Mur"抗体阳性68例,阳性率为0.83%。该68例患者中,33例有反复输血史,26例有妊娠史,由于产生意外抗体而引起疑难配血者38例。结论意外抗体筛查检出抗"Mur"抗体能有效提高临床输血安全,具有重要的临床价值。

献血人群Mur血型的筛查研究

目的对广州番禺地区的献血人群开展Mur抗原与抗-Mur抗体的筛查,了解该血型的分布频率和特征。方法采用96孔微量板法使用单克隆抗-Mur试剂对献血者样本进行Mur抗原检测;使用已知Mur抗原阳性试剂红细胞对献血者血浆样本进行抗-mur抗体筛查,并对筛查阳性的标本进行抗体特异性鉴定。结果在3 000份无偿献血者标本中,检出Mur抗原阳性215例,发生率约为7.17%;在15 000份献血者标本中筛选并鉴定出抗-Mur 30例,发生率为0.20%。结论本地区献血人群中存在相对较高的Mur抗原分布频率以及抗-Mur发生频率,有必要在配制不规则抗体筛选试剂细胞时增加含有Mur抗原的红细胞,防止抗-Mur抗体漏检,进一步降低临床血浆输注不良反应的风险。