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结合内标的小鼠诺如病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:13
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作者 袁文 王静 +3 位作者 赵维波 张钰 郭鹏举 黄韧 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期49-56,共8页
目的建立一种快速、特异、敏感的荧光定量RT-PCR检测方法,用于小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的检测。方法根据MNV ORF1-ORF2结合区域中保守序列设计一对特异性引物和Taqman探针,同时设计和制备了内标用于监控假阴性,建立含有内标... 目的建立一种快速、特异、敏感的荧光定量RT-PCR检测方法,用于小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的检测。方法根据MNV ORF1-ORF2结合区域中保守序列设计一对特异性引物和Taqman探针,同时设计和制备了内标用于监控假阴性,建立含有内标的荧光定量RT-PCR检测体系,通过优化,得到最佳反应体系和反应条件;构建质粒标准品并以之为模板绘制标准曲线;进行特异性、敏感性和重复性试验,最后用建立的方法检测344份小鼠临床样本,验证在临床应用中的效果。结果该方法特异性强,与小鼠肝炎病毒、小鼠脑脊髓炎病毒、仙台病毒、小鼠肺炎病毒、呼肠孤病毒Ⅲ型、出血热病毒和淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒不发生交叉反应。构建的荧光定量标准曲线Ct值与模板浓度呈良好的线性关系相关系数r2=0.9986,可以检测到10 copies/μL的质粒标准品,对MNV活病毒检测可检测到1.78×10-2TCID50/m L的病毒,检测灵敏度比常规RT-PCR高10倍,比病毒分离高100倍。对5份样品进行5次批内和批间重复检测,检测结果变异系数均小于2%。通过对344份临床样品检测,检测到阳性样品103份,阳性率29.94%。有5份样本结果为假阴性。结论建立的MNV荧光定量RTPCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,由于加入了内标,能有效地监控假阴性的出现,适合用于MNV日常监测、临床诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 小鼠诺如病毒 荧光定量RT-PCR 内标
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广东省实验小鼠自然感染鼠诺如病毒的调查 被引量:22
2
作者 袁文 张钰 +4 位作者 刘忠华 潘金春 王静 罗琴芳 黄韧 《中国比较医学杂志》 CAS 2010年第2期78-82,共5页
目的了解广东省实验小鼠自然感染小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的情况。方法随机抽取广东省7个繁育设施的小鼠206只,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测其感染MNV的情况。结果共检测小鼠盲肠内容物206份,阳性样本为77份,阳... 目的了解广东省实验小鼠自然感染小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的情况。方法随机抽取广东省7个繁育设施的小鼠206只,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测其感染MNV的情况。结果共检测小鼠盲肠内容物206份,阳性样本为77份,阳性率为37.38%。3个设施的小鼠感染MNV,各品系小鼠易感性差异无显著。结论证实广东省小鼠存在MNV感染,部分设施小鼠MNV感染率很高,需加强动物的饲养管理。RT-PCR方法可以应用于MNV感染检测。 展开更多
关键词 鼠诺如病毒 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 自然感染
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小鼠诺如病毒间接免疫荧光检测方法的建立 被引量:4
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作者 田胜男 佟巍 +6 位作者 张丽芳 常慧 李雨函 苏静芬 刘先菊 向志光 刘云波 《中国比较医学杂志》 CAS 2014年第6期58-62,F0004,共6页
目的建立小鼠诺如病毒(MNV)的间接免疫荧光试验(IFA)的检测方法。方法将MNV-1接种RAW264.7细胞,培养36 h收集病毒培养物及未感染细胞培养物,点制抗原玻片;以107TCID50的MNV-1灌胃接种BALB/c小鼠,收集感染血清做阳性对照血清。收集... 目的建立小鼠诺如病毒(MNV)的间接免疫荧光试验(IFA)的检测方法。方法将MNV-1接种RAW264.7细胞,培养36 h收集病毒培养物及未感染细胞培养物,点制抗原玻片;以107TCID50的MNV-1灌胃接种BALB/c小鼠,收集感染血清做阳性对照血清。收集人工感染后不同时间点的血清样品,以1:10的稀释度使用IFA法测定感染血清MNV抗体滴度。选取80份送检小鼠血清样品,以IFA和ELISA方法测定,差异样品使用Western blot方法进行验证。结果 MNV-1感染RAW264.7细胞(36~48)h,细胞感染率为60%,以36 h感染细胞状态为佳;IFA法测定感染小鼠血清,小鼠感染1周后抗体水平逐渐提高,在4周时抗体滴度达到最高值,之后维持稳定,采集感染4周的动物血清做IFA方法的阳性质控品;80份血清中,IFA法测定阳性27份,阴性53份,ELISA法测定阳性32份,阴性48份;Western blot方法对差异样品验证,其中阳性3份,阴性2份,IFA法和ELISA法检测符合率分别为96.0%和97.5%。结论 IFA方法检测小鼠诺如病毒基本可以反应小鼠的感染情况,偶有假阴性的出现,可以选择IFA方法和ELISA方法作为初筛,差异样品用Western blot方法验证。 展开更多
关键词 间接免疫荧光法 小鼠诺如病毒
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两株小鼠诺如病毒的分离与鉴定 被引量:2
4
作者 马畅 张旭亮 +1 位作者 刘捷 恽时锋 《实验动物科学》 2016年第4期11-17,共7页
目的了解江苏地区常用实验小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的感染情况及进化特征。方法在江苏地区抽取三个实验动物中心的实验小鼠,采集直肠及内容物样本,应用RT-PCR方法检测MNV ORF2特异性基因(547bp,MNV nt5104-5650)。阳性样本经... 目的了解江苏地区常用实验小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的感染情况及进化特征。方法在江苏地区抽取三个实验动物中心的实验小鼠,采集直肠及内容物样本,应用RT-PCR方法检测MNV ORF2特异性基因(547bp,MNV nt5104-5650)。阳性样本经RAW264.7细胞分离病毒,对MNV分离株的VP1基因进行扩增,将其连接在p EASY-Blunt载体上,转化至大肠杆菌Trans1-T1感受态细胞,通过Kanamycin抗性筛选,挑取菌落进行PCR鉴定,鉴定为阳性的克隆送检测定其VP1基因序列,构建系统发生进化树。结果共检测小鼠直肠内容物30份,检出MNV阳性样本4份,包括ICR小鼠(2/8)、BALB/c小鼠(1/12)和C57BL/6J小鼠(1/10),感染率为13.3%;RAW264.7细胞接毒盲传三代,两只ICR小鼠样品接种的细胞产生明显细胞病变(CPE),表现为细胞圆缩聚集,大部分脱落死亡,而C57BL/6J和BALB/c小鼠样本接种RAW264.7细胞无CPE;应用VP1特异引物经RT-PCR检测,表现CPE的细胞样本出现特异条带,测序结果显示分离到的2株MNVVP1核酸序列均为1626bp,与引物设计参考毒株S7-P2(Gen Bank登录号:AB435514)VP1基因大小相同,进化树图表显示检测到的2株MNV属同一独立小分支与参考株BJ10-2062、CR4最为相近。结论此次抽检的实验小鼠MNV感染率为13.3%(4/30),考虑可能在同一设施内传播。常用实验小鼠携带病毒的生物学意义有待进一步研究。 展开更多
关键词 诺如病毒 小鼠 病毒分离 鉴定
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小鼠诺如病毒感染实验小鼠的抗体变化规律分析 被引量:1
5
作者 李晓波 付瑞 +6 位作者 王淑菁 李威 王莎莎 黄宗文 秦骁 王吉 岳秉飞 《实验动物与比较医学》 CAS 2021年第4期343-350,共8页
目的研究KM、BALB/c、NIH、C57BL/6J及BALB/c-nu共5个品系小鼠感染小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)后总IgG抗体及中和抗体的变化规律。方法收集KM、BALB/c、NIH、C57BL/6J及BALB/c-nu共5个品系小鼠,每个品系分为对照组和感染组,感... 目的研究KM、BALB/c、NIH、C57BL/6J及BALB/c-nu共5个品系小鼠感染小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)后总IgG抗体及中和抗体的变化规律。方法收集KM、BALB/c、NIH、C57BL/6J及BALB/c-nu共5个品系小鼠,每个品系分为对照组和感染组,感染组灌胃接种MNV液,对照组灌胃同等体积的生理盐水(即0.9%NaCl溶液)。分别在感染后第1~9周采血分离血清,ELISA法测定总IgG抗体水平(即吸光度值),RAW264.7细胞病变法测定中和抗体滴度(即半数保护剂量,PD50)。t检验比较感染组和对照组在每个时间点的总IgG抗体吸光度均值差异;单因素方差分析比较各品系小鼠感染组总抗体及中和抗体滴度,分析各品系小鼠的抗体变化规律。结果经t检验,KM、BALB/c、NIH、C57BL/6J及BALB/c-nu小鼠分别在第21、35、14、14及28天感染组总IgG抗体吸光度均值显著高于对照组(P<0.01)。各品系小鼠的总IgG抗体水平相比,NIH>C57BL/6J>KM>BALB/c>BALB/c-nu,且BALB/c及BALB/c-nu总抗体吸光度均值显著低于NIH和C57BL/6J小鼠(P<0.05);NIH、C57BL/6J、KM及BALB/c小鼠感染第6周时抗体水平升高较快,NIH小鼠第49天进入平台期,其余3个品系小鼠在实验周期内总IgG抗体水平仍处于上升趋势,其中BALB/c-nu小鼠总抗体水平最低。各品系小鼠的中和抗体滴度比较,C57BL/6J>NIH>KM>BALB/c>BALB/c-nu,其lgPD50均值分别为3.881、3.819、3.746、3.146及2.338;经方差分析显示,BALB/c及BALB/c-nu小鼠中和抗体滴度显著低于C57BL/6J、NIH及KM小鼠(P<0.01)。除了BALB/c-nu小鼠外,其余4个品系小鼠感染第2周时中和抗体滴度升高较快,BALB/c-nu小鼠中和抗体一直处于较低水平。结论NIH、C57BL/6J及KM小鼠感染MNV的体液免疫应答较强,BALB/c及BALB/c-nu小鼠体液免疫应答较弱。 展开更多
关键词 小鼠诺如病毒 感染 抗体变化规律 小鼠
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不同途径感染小鼠诺如病毒对小鼠抗体水平和病毒复制的影响
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作者 罗银珠 张钰 +7 位作者 袁文 何丽芳 黄碧洪 吴瑞可 闵凡贵 王静 潘金春 黄韧 《实验动物与比较医学》 CAS 2018年第4期272-277,共6页
目的探讨小鼠诺如病毒(MNV)不同接种途径对小鼠血清抗体水平和病毒复制的影响。方法 MNV(4×104拷贝/μL)分别以静脉、腹腔联合注射(iv+ip)、饮水(dw)、灌胃(ig)3种不同途径接种ICR小鼠,各组于感染前(0 d)、感染后3 d、6 d、14 d、2... 目的探讨小鼠诺如病毒(MNV)不同接种途径对小鼠血清抗体水平和病毒复制的影响。方法 MNV(4×104拷贝/μL)分别以静脉、腹腔联合注射(iv+ip)、饮水(dw)、灌胃(ig)3种不同途径接种ICR小鼠,各组于感染前(0 d)、感染后3 d、6 d、14 d、25 d、34 d、51 d随机剖检2~3只小鼠,收集血清和心、肝、脾、肺、肾、脑、胃肠内容物,利用酶联免疫吸附法(ELISA)和实时定光定量(q RT-PCR)方法分别检测血清抗体和病毒载量。结果所有感染小鼠均无明显临床症状。3种途径接种的小鼠在感染后25 d均可检测到特异性抗体。抗体产生初期以ig接种组抗体水平最高,随后iv+ip接种组抗体水平上升幅度最大并在51 d高于其它接种组。小鼠接种MNV 3 d可在3组接种鼠的胃肠道、脾、脑中检测到病毒核酸,各组的组织脏器病毒载量有差异,其中iv+ip接种组盲肠内容物(3~51 d)、脾(6 d)和肝(14 d)病毒载量高于其它两组。结论不同接种途径对MNV在小鼠抗体水平和病毒载量影响较大。iv+ip感染效果较好,可作为MNV病毒感染模型的有效接种方式。血清抗体ELISA检测结合盲肠内容物核酸检测有利于MNV早期监测。 展开更多
关键词 小鼠诺如病毒(mnv) 血清学 病毒复制 感染 途径
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小鼠诺如病毒检测方法团体标准的编制
7
作者 李晓波 付瑞 +7 位作者 王吉 王淑菁 王莎莎 李威 秦骁 黄宗文 贺争鸣 岳秉飞 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第3期79-83,共5页
随着生命科学的发展,对实验动物质量的要求也越来越高,实验动物标准的不断完善就变得尤为重要,小鼠诺如病毒在实验小鼠中有很高的感染率,小鼠感染后不仅对动物本身造成危害,对实验结果也会产生较大影响。我国的实验动物国家标准目前还... 随着生命科学的发展,对实验动物质量的要求也越来越高,实验动物标准的不断完善就变得尤为重要,小鼠诺如病毒在实验小鼠中有很高的感染率,小鼠感染后不仅对动物本身造成危害,对实验结果也会产生较大影响。我国的实验动物国家标准目前还未将小鼠诺如病毒纳入常规检查项目,我们参考国内外小鼠诺如病毒的最新研究成果及国外相关标准,编制了小鼠诺如病毒的团体标准。本文介绍了小鼠诺如病毒检测方法团体标准编制的背景、法律法规依据,对标准内容的设置进行了解释。本标准的编制完善了实验动物相关标准,为推动实验动物质量的提高,适应实验动物国际化发展的需求提供了技术支持。 展开更多
关键词 实验动物 团体标准 小鼠诺如病毒
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实验室病毒检测能力验证与粪便样本中小鼠诺如病毒的检测
8
作者 付瑞 王莎莎 +3 位作者 王吉 李晓波 王淑菁 岳秉飞 《实验动物科学》 2022年第3期33-39,共7页
目的通过对国际实验动物科学理事会(the International Council for Laboratory Animal Science,ICLAS)能力验证计划(Performance Evaluation Program,PEP)提供的4份病毒盲样进行检测,从而对实验室病毒检测能力进行验证,进一步提高实验... 目的通过对国际实验动物科学理事会(the International Council for Laboratory Animal Science,ICLAS)能力验证计划(Performance Evaluation Program,PEP)提供的4份病毒盲样进行检测,从而对实验室病毒检测能力进行验证,进一步提高实验室的病毒检测水平。方法对ICLAS提供的盲样信息进行分析,提取核酸进行PCR检测并对阳性产物进行测序验证。对诺如病毒阴性盲肠内容物进行不同倍数的稀释后,与诺如病毒培养液1∶1混合,使用两种不同的核酸提取试剂盒进行核酸提取,通过荧光定量PCR方法进行诺如病毒核酸检测,比较检测的核酸拷贝数。结果经过检测确定ICLAS提供的盲样分别为小鼠脑脊髓炎病毒、小鼠诺如病毒、小鼠轮状病毒以及小鼠乳酸脱氢酶增高症病毒。比较不同稀释度的盲肠内容物诺如病毒荧光定量PCR检测结果发现,使用病毒DNA/RNA提取试剂盒提取核酸,稀释度不高于1∶16时,检测结果相比于病毒对照出现不同程度的偏差,稀释度为1∶32时检测结果与病毒对照检测结果相近。使用病毒RNA提取试剂盒提取核酸,稀释度不低于1∶8时,检测结果与病毒对照相近。结论通过国际比对能力验证,说明本实验室病毒检测能力可靠,且经过污染实验研究,粪便样本1∶8稀释后使用病毒RNA提取试剂盒提取核酸为粪便中诺如病毒检测的最佳预处理方法。 展开更多
关键词 国际实验动物科学协会 能力验证 诺如病毒
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鼠诺沃克病毒特征及其检测技术
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作者 翟新验 卢胜明 《实验动物与比较医学》 CAS 2007年第4期276-279,共4页
鼠诺沃克病毒-1(MNV-1)是一个新认知的鼠病原体,可引起固有免疫系统应答组分缺陷鼠的致死性感染,是目前唯一一个能够在细胞以及小动物体中复制的诺沃克病毒。通过病毒分离、免疫组化、RT-PCR技术,均可检测鼠诺沃克病毒-1。
关键词 鼠诺沃克病毒-1 检测技术
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蜂胶提取物对诺如病毒的体外抑制作用研究 被引量:5
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作者 唐梦旋 陈莉莉 +3 位作者 廖宁波 陈江 程东庆 吴国平 《食品科学技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期40-47,共8页
为研究蜂胶提取物对人源诺如病毒的体外抑制作用,采用小鼠诺如病毒和噬菌体MS2病毒为替代病毒,研究蜂胶水提物和醇提物随浓度及时间变化对小鼠诺如病毒和噬菌体MS2病毒的抑制作用及其机制。浓度相关性实验表明:随着蜂胶醇提物浓度增加,... 为研究蜂胶提取物对人源诺如病毒的体外抑制作用,采用小鼠诺如病毒和噬菌体MS2病毒为替代病毒,研究蜂胶水提物和醇提物随浓度及时间变化对小鼠诺如病毒和噬菌体MS2病毒的抑制作用及其机制。浓度相关性实验表明:随着蜂胶醇提物浓度增加,小鼠诺如病毒和MS2病毒滴度呈显著下降趋势,当醇提物质量浓度达到500μg/mL时,小鼠诺如病毒和MS2病毒滴度分别下降了6.93 lgPFU/mL和3.75 lgPFU/mL。时间相关性实验表明:将质量浓度为250μg/mL蜂胶醇提物与小鼠诺如病毒和MS2病毒培养60 min,前40 min小鼠诺如病毒和MS2病毒滴度分别下降4.18 lgPFU/mL和3.30 lgPFU/mL,随后下降趋势减缓,在60 min时,小鼠诺如病毒和MS2病毒的总滴度分别下降了4.48 lgPFU/mL和3.67 lgPFU/mL。机制研究表明:蜂胶醇提物可能与宿主细胞(受体)结合,或直接与病毒颗粒结合,使病毒衣壳蛋白变性,阻止病毒进入宿主细胞;透射电镜图像进一步证实了蜂胶醇提物直接作用病毒导致其膨胀破裂。最后,经蜂胶醇提物处理后,人为污染病毒的蔬菜汁和果汁中病毒的滴度显著降低。研究结果将有可能为果蔬在鲜榨过程中,挑选合适的添加剂提供更多的选择。 展开更多
关键词 蜂胶提取物 人源诺如病毒 小鼠诺如病毒 噬菌体 天然添加剂
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鼠诺如病毒在新生小鼠坏死性小肠结肠炎模型中的保护作用 被引量:5
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作者 胡坤 余加林 +5 位作者 艾青 程晨 李秋平 贺雨 肖洒 侯婷 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期898-903,共6页
目的探讨鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)在新生小鼠坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)模型中的作用,并分析其可能的作用机制。方法将75只新生1 d的C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为3组(n=25):正常对照组、给予PBS的NE... 目的探讨鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)在新生小鼠坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)模型中的作用,并分析其可能的作用机制。方法将75只新生1 d的C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为3组(n=25):正常对照组、给予PBS的NEC模型组(PBS+NEC组)和给予MNV干预的NEC模型组(MNV+NEC组)。正常对照组与母鼠同笼,不予任何处理;其余两组进行NEC动物模型构建。新生小鼠于生后1 d给予联合抗生素,连续灌胃10 d模拟无菌后,行NEC建模3 d,建模前后固定时间点称量体质量,第14天处死小鼠,HE染色观察回盲部肠组织病理学变化;qPCR法检测TLR-3、MDA-5、IL-6、IL-10、IL-1β、IL-22基因表达水平;流式细胞仪检测3型天然淋巴样细胞(type 3 innate lymphoid cells,ILC3)数量;ELISA法检测肠组织匀浆IL-10水平。结果与正常对照组相比,PBS+NEC组、MNV+NEC组小鼠体质量明显降低(P<0.01),肠道损伤明显。与PBS+NEC组相比,MNV+NEC组体质量下降较少(P<0.05),肠上皮损伤也较轻;而在mRNA表达水平上,TLR-3(0.73±0.26 vs 0.62±0.40,P>0.05)、MDA-5(0.98±0.35 vs 0.67±0.39,P>0.05)、IL-10(1.22±0.36 vs 0.60±0.31,P<0.01)、IL-22(1.20±0.38 vs 0.65±0.22,P<0.05)基因表达增高,IL-6(0.75±0.33 vs 1.22±0.34,P<0.05)、IL-1β(0.39±0.2 vs 1.25±0.59,P<0.01)炎症因子基因表达降低;IL-10水平显著升高[(165.55±53.51)pg/mL vs(129.59±26.22)pg/mL,P<0.05],ILC3数量差异无统计学意义[(12.88±1.45)%vs(12.80±0.76)%,P>0.05],但其分泌的IL-22表达升高。结论 MNV在新生小鼠NEC模型肠道损伤中起保护作用,可能与MNV下调炎症因子IL-6、IL-1β,上调抑炎因子IL-10及分泌IL-22的ILC3的功能有关。 展开更多
关键词 鼠诺如病毒 坏死性小肠结肠炎 3型天然淋巴样细胞 白介素22
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常用实验小鼠感染诺如病毒后外周血免疫指标分析 被引量:4
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作者 李晓波 付瑞 +8 位作者 王吉 王淑菁 李威 王莎莎 秦骁 黄宗文 贺争鸣 岳秉飞 赵德明 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第7期67-75,共9页
目的通过小鼠感染MNV后外周血免疫指标的改变来评估MNV感染对小鼠免疫功能的影响。方法选取KM,BALB/c,BALB/c-nu,C57BL/6及NIH等五个品系小鼠,每个品系分成MNV感染组和对照组,于感染前(第0天)和感染后的第7、14、21、28天从眼周静脉采... 目的通过小鼠感染MNV后外周血免疫指标的改变来评估MNV感染对小鼠免疫功能的影响。方法选取KM,BALB/c,BALB/c-nu,C57BL/6及NIH等五个品系小鼠,每个品系分成MNV感染组和对照组,于感染前(第0天)和感染后的第7、14、21、28天从眼周静脉采集抗凝血,流式细胞术测定总T细胞、CD4^+T细胞、CD8^+T细胞、总B细胞、NK细胞及NK-T细胞占总淋巴细胞的百分比及干扰素、白介素、趋化因子等13种细胞因子的含量,比较感染后各指标总体均值的差异,分析各时间点变化情况。结果与对照组相比,KM小鼠感染组总T细胞、CD4^+T细胞含量显著增高(P<0.01),CD4/CD8显著增高(P<0.05),总B细胞及CXCL10含量显著降低(P<0.01);BALB/c小鼠CD8^+T细胞显著降低(P<0.05),IFN-γ含量显著增高(P<0.01);BALB/c-nu小鼠各免疫细胞均无统计学差异,TNF-α、CXCL1及CXCL10显著增高(P<0.01),CCL2显著增高(P<0.05),IFN-β显著降低(P<0.05);C57BL/6小鼠CD4^+(P<0.05)CD8^+T细胞(P<0.01)均显著降低,总B细胞及IL-10显著增高(P<0.05),CCL5及GM-CSF显著降低(P<0.05);NIH小鼠总T细胞和CD8^+T细胞显著增高(P<0.01),CD4/CD8显著降低(P<0.05),总B细胞显著降低(P<0.01),细胞因子均无统计学差异。对于有统计学差异的免疫指标,有半数感染第7天即出现显著差异,大多数第28天仍存在显著差异。结论MNV的感染会影响正常小鼠的细胞免疫和体液免疫应答,而且不同品系的动物影响不同,建议在进行免疫相关的动物实验时选择MNV阴性小鼠,以避免实验结果出现偏差。 展开更多
关键词 小鼠诺如病毒 品系 外周血 免疫功能 小鼠
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小鼠诺如病毒荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:8
13
作者 高洁 贺争鸣 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第12期70-76,共7页
目的建立小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)实时荧光定量PCR检测方法,为建立MNV规范化检测方法提供依据。方法根据NCBI公布的60个MNV病毒株核酸序列设计特异性引物,构建标准阳性质控品,建立MNV实时荧光定量PCR方法,并进行特异性、灵... 目的建立小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)实时荧光定量PCR检测方法,为建立MNV规范化检测方法提供依据。方法根据NCBI公布的60个MNV病毒株核酸序列设计特异性引物,构建标准阳性质控品,建立MNV实时荧光定量PCR方法,并进行特异性、灵敏度、重复性及稳定性评价。用该方法对766只送检小鼠的盲肠内容物样品进行检测,初步了解北京地区实验小鼠MNV感染状况。结果成功建立MNV实时荧光定量PCR检测方法,该方法特异性好,与同种属人类诺如病毒(Hu No Vs)、猫杯状病毒(FCV)均无交叉反应,检测灵敏度可达101copies/μL。批内及批间CT值变异系数均小于2%。应用该方法在766份小鼠盲肠内容物样品中检出301份MNV核酸阳性样品,阳性率39.3%。结论建立的MNV实时荧光定量PCR检测方法特异性好,灵敏度高,重复性好,可以用于MNV的快速定量检测。 展开更多
关键词 鼠诺如病毒mnv 实时荧光定量PCR 检测
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三种小鼠RNA病毒样品储运条件对核酸检测的影响 被引量:1
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作者 李欣悦 佟巍 +3 位作者 张丽芳 阮研硕 丛日旭 向志光 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第4期98-102,共5页
目的分析实验动物小鼠三种肠道病毒MHV、Reo-3、MNV生物样品的储运条件对病原核酸检测结果的影响。方法将MHV、Reo-3、MNV三种RNA病毒与小鼠盲肠内容物混合制备参考品;保存剂包括RNA提取试剂裂解液(Buffer AVL)及生理盐水,存储温度为4... 目的分析实验动物小鼠三种肠道病毒MHV、Reo-3、MNV生物样品的储运条件对病原核酸检测结果的影响。方法将MHV、Reo-3、MNV三种RNA病毒与小鼠盲肠内容物混合制备参考品;保存剂包括RNA提取试剂裂解液(Buffer AVL)及生理盐水,存储温度为4℃及室温(22℃~25℃);在保存1、2、3、7、14 d时间点提取各样品核酸,采用实时荧光定量PCR方法检测病毒样品量的变化。结果生理盐水作为保存剂核酸样品检出量低于RNA提取试剂裂解液组,且检出量下降明显;Buffer AVL组样品储于4℃条件的样品检出量优于室温25℃的条件;4℃-buffer AVL组的三种病毒参考品在3 d时间点的病毒检出量在50%以上,在7 d时间点仍有检出,但14 d时已检测不到。结论三种小鼠RNA病毒样品储运条件优选使用RNA提取试剂裂解液,并在低温条件下储运,最好在3 d内完成核酸检测。 展开更多
关键词 MHV Reo-3 mnv 实时荧光定量PCR 储运
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RT-PCR检测实验小鼠自然和实验感染鼠诺如病毒 被引量:4
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作者 向丹丹 魏晓锋 +2 位作者 胡建华 林金杏 高诚 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2013年第3期63-69,共7页
为了解小鼠自然感染鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的情况,采集80只实验小鼠的粪便样本,应用RT-PCR方法扩增粪便样本的MNV ORF2特异性基因(187bp,MNV nt 5473-5659)片段。对PCR检测为阳性的粪便样本经10倍体积的PBS稀释后灌胃到4只IC... 为了解小鼠自然感染鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的情况,采集80只实验小鼠的粪便样本,应用RT-PCR方法扩增粪便样本的MNV ORF2特异性基因(187bp,MNV nt 5473-5659)片段。对PCR检测为阳性的粪便样本经10倍体积的PBS稀释后灌胃到4只ICR小鼠体内,1周后,将3只ICR小鼠与灌胃的小鼠同居饲养,观察小鼠是否出现异常症状,定期采集粪便做RT-PCR检测,研究小鼠实验感染MNV的情况。1个月后,处死小鼠,采集粪便、盲肠、十二指肠、脾、肝、大脑、肾、肺、心脏、胸腺、子宫、卵巢和唾液腺等器官做RT-PCR检测,研究MNV的主要感染部位。结果表明,自然感染的阳性率为13.75%(11/80);实验感染的小鼠外表健康、活泼、没有腹泻现象,阳性率为100%;主要的感染部位为小鼠的消化系统。本研究是首次在上海地区实验小鼠粪便中检测到MNV。 展开更多
关键词 鼠诺如病毒 RT-PCR 自然感染 实验感染
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小鼠诺瓦克病毒研究现状 被引量:1
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作者 刘芹 魏晓锋 高诚 《实验动物与比较医学》 CAS 2014年第2期167-170,共4页
诺瓦克病毒(Norwalk virus,NV),也称为诺如病毒(norovirus,NV),是引起人类非细菌性胃肠炎的主要病原体,此外,在牛、猪和小鼠也发现了诺瓦克病毒的存在.该病毒可分5个基因型(GⅠ~Ⅴ),鼠诺瓦克病毒(Murine norovirus,MNV)属于GV... 诺瓦克病毒(Norwalk virus,NV),也称为诺如病毒(norovirus,NV),是引起人类非细菌性胃肠炎的主要病原体,此外,在牛、猪和小鼠也发现了诺瓦克病毒的存在.该病毒可分5个基因型(GⅠ~Ⅴ),鼠诺瓦克病毒(Murine norovirus,MNV)属于GV,是一种新发现的感染实验小鼠的病毒,并且被认为是目前小鼠中最流行的一种病毒.MNV是诺瓦克病毒中在细胞内有效复制的病毒,被作为研究诺瓦克病毒复制分子机制的模型,同时MNV与人诺瓦克病毒(Human noroviruses,HuNV)有许多相似的分子生物学特点,也被认为是研究人诺瓦克病毒的理想病毒模型. 展开更多
关键词 小鼠诺瓦克病毒(mnv) 生物学特点 流行病学
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鼠诺如病毒特性、免疫学及检测方法研究进展
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作者 高洁 贺争鸣 《实验动物与比较医学》 CAS 2015年第5期414-420,共7页
鼠诺如病毒(routine norovirus,MNV)是唯一可在体外有效扩增的诺如病毒,其病毒株的分离及在鼠巨噬细胞RAW264.7细胞的增殖成功为诺如病毒分子机制的研究奠定了基础,也为人类诺如病毒(HuNoVs)致病机制的研究和疫苗的制备提供了... 鼠诺如病毒(routine norovirus,MNV)是唯一可在体外有效扩增的诺如病毒,其病毒株的分离及在鼠巨噬细胞RAW264.7细胞的增殖成功为诺如病毒分子机制的研究奠定了基础,也为人类诺如病毒(HuNoVs)致病机制的研究和疫苗的制备提供了帮助。MNV是小鼠中传播最广泛的感染因子之一,具嗜免疫细胞性,对免疫缺陷小鼠可产生致死性,加强该病毒感染的控制具有重要意义。 展开更多
关键词 鼠诺如病毒(mnv) 特性 机制 检测
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鼠诺如病毒概述 被引量:4
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作者 田胜男 刘云波 《中国比较医学杂志》 CAS 2013年第7期68-71,共4页
实验动物的质量与动物实验能否顺利进行关系非常密切。我国要求实验用SPF级小鼠必须排除的病毒有11种,尽管如此仍然会因为动物本身携带的微生物而干扰实验结果。鼠诺如病毒就是从意外死亡的实验小鼠中分离得到,免疫缺陷小鼠感染这种病... 实验动物的质量与动物实验能否顺利进行关系非常密切。我国要求实验用SPF级小鼠必须排除的病毒有11种,尽管如此仍然会因为动物本身携带的微生物而干扰实验结果。鼠诺如病毒就是从意外死亡的实验小鼠中分离得到,免疫缺陷小鼠感染这种病毒后发生炎症反应甚至死亡。我国关于鼠诺如病毒的报道还比较少,其致病力及对实验研究的影响尚不完全清楚,也没有明确的感染情况调查。本文重点阐述了鼠诺如病毒的发现及危害、检测情况、病原特性和国内现状,并给出建议以便更好的了解MNV并控制该病毒的传播。 展开更多
关键词 小鼠 诺如病毒
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鼠诺如病毒MNV—CW1感染C57BL/6小鼠的特点 被引量:1
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作者 庞立丽 靳淼 +6 位作者 王慧敏 王莹 陈爱珺 李慧颖 章青 高福 段招军 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2016年第3期263-265,共3页
目的 探讨鼠诺如病毒(Murinenoroviurs,MNV)感染C57BL/6小鼠后临床及生物学特征,了解MNV的感染特点。方法将MNV—CWI毒株以高剂量(10^4PFU/只)和低剂量(102PFU/只)分别灌胃到C57BL/6小鼠体内,建立MNV感染小鼠模型。对感染... 目的 探讨鼠诺如病毒(Murinenoroviurs,MNV)感染C57BL/6小鼠后临床及生物学特征,了解MNV的感染特点。方法将MNV—CWI毒株以高剂量(10^4PFU/只)和低剂量(102PFU/只)分别灌胃到C57BL/6小鼠体内,建立MNV感染小鼠模型。对感染小鼠进行体征观察和体温检测,检测粪便和血液排毒情况、组织中病毒的分布情况以及十二指肠病理切片检查。结果感染的小鼠没有明显的体表变化,没有腹泻、发热等临床症状和病理改变。粪便检测感染后1~2d排毒。在感染后第3天部分血液中检测到MNVRNA。主要感染部位为消化系统和脾脏。结论本研究建立的MNV—CW1感染C57BL/6小鼠模型为MNV感染小鼠致病机制进一步研究提供实验信息和技术支撑。 展开更多
关键词 鼠诺如病毒 小鼠 实验感染
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鼠诺如病毒的体外分离与鉴定 被引量:11
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作者 李晓波 付瑞 +1 位作者 岳秉飞 贺争鸣 《中国病毒病杂志》 CAS 2011年第4期293-296,共4页
目的体外分离出小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)毒株,并对其进行鉴定。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对小鼠进行MNV筛查,将检测出的MNV阳性小鼠的盲肠内容物经过处理接种至鼠源巨噬细胞系RAW264.7细胞,培养一段时间后用RT-... 目的体外分离出小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)毒株,并对其进行鉴定。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对小鼠进行MNV筛查,将检测出的MNV阳性小鼠的盲肠内容物经过处理接种至鼠源巨噬细胞系RAW264.7细胞,培养一段时间后用RT-PCR法扩增测序。结果成功通过传代RAW264.7细胞分离出MNV,并经过鉴定确认,对RT-PCR扩增序列进行初步分析,与韩国MNV4 S18株同源性最高,达99%。结论 MNV在体外的复制成功,为MNV的生物学特性、致病机制和诊断试剂等方面的研究提供了基础,同时作为人诺如病毒研究的理想模型,对人诺如病毒的研究也有重大意义。 展开更多
关键词 鼠诺如病毒 RAW264.7细胞 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)
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