Cloning and Sequence Analysis of Ma-14-3-3d Encoding a Homologue 14-3-3 Protein from Banana

[Objective] The aim of the study is to clone and analyze the gene encoding 14-3-3 protein from banana. [Method] Combined with PCR amplification, RACE (rapid amplification of cDNA ends) technique was employed to clone 14-3-3 gene from banana; then the amplified sequence was sequenced and homologically analyzed. [Result] A new cDNA homologous with 14-3-3 protein genes were obtained by RT-PCR and RACE ( rapid amplification of cDNA ends ) approaches. The full length of this cDNA was 866 bp encoding 197 amino acids. Alignment of deduced amino acid sequence with those from other plants revealed that the cDNA shared high homology with 14-3-3 protein genes from other plants, and was designated as Musa acuminata 14-3-3 gene (Ma-14-3-3d). Phylogenetic analysis reveals that Ma-14-3-3d has closer genetic relationship with those from monocotyledon species than those from other species. [Conclusion] Ma-14-3-3d belongs to the same lineage of 14-3-3 from monocotyledon.

在继代培养中贡蕉胚性悬浮细胞的分化能力和染色体数目的变化

将贡蕉[Musa acuminata cv.Mas(AA)]胚性悬浮细胞通过不同时间的培养后,对其体胚发生能力和染色体数目进行了分析。结果表明,随着培养时间的延长,贡蕉胚性悬浮细胞的体胚发生能力下降,继代培养1.5a的悬浮细胞体胚发生能力为1.76×104个/mLPCV(packed cell volume,细胞密实体积)胚性悬浮细胞,继代培养3a后下降到0.85×104个/mL PCV胚性悬浮细胞。整个胚性细胞悬浮系为混倍体,细胞的染色体数目变化从3个到70个不等,既有含染色体数目为整倍体的细胞,也含有大量染色体数目为非整倍体的细胞;继代培养1.5a时,含正常二倍体染色体数目的细胞比例为15.8%,继代培养3.0a时下降到9.7%。

香蕉柠檬酸合酶基因MaGCS的克隆及生物信息学分析

采用RACE-PCR的方法首次在香蕉中获得一个柠檬酸合酶基因的cDNA序列。经序列测定和Blastx比对分析表明,该cDNA全长1885bp,编码513个氨基酸残基,具有植物柠檬酸合酶基因的特征结构域,并与其他植物来源的乙醛酸循环体的柠檬酸合酶具有很高的序列相似性,将其命名为MaGCS(Musa glyoxysomal citrate synthase),并对其进行生物信息学分析,初步预测其理化性质及功能等。

香蕉腺苷酸核糖基化作用因子1(MaArf1)基因的克隆及序列结构分析

Arf(ADP-ribosylation factors)作为小G蛋白家族中的一类,在植物细胞的胞内运输中起着重要的作用。从采后2d的香蕉(Musa accuminata L.AAA group)果实cDNA文库中筛选到一条Arf基因,命名为MaArf1。序列分析表明,MaArf1在植物中是高度保守的。与水稻、苜蓿、马铃薯、小麦和拟南芥等物种中Arf基因的相似性都超过95%。并且MaArf1分别在24-31(序列为GLDAAGKT,Arf蛋白P结构域),67-71(序列为DVGGQ,G'结构域),126-130(序列为NKQDL,G结构域)的氨基酸处也具有保守的GTP结合结构域。根据已获得的cDNA序列设计引物,研究又获得了该基因的基因组序列。对其结构分析发现,该序列全长1998bp,由5个外显子和4个内含子组成。内含子序列中存在大量的重复序列,并且在第4个内含子中有一个完整的开放阅读框,推测这些序列可能参与基因的表达调控,也可能与RNA水平上的可变剪接有关。

贡蕉胚性悬浮细胞原生质体分离的研究

目的:研究不同方法对贡蕉胚性悬浮细胞原生质体分离的影响,筛选适合用于贡蕉胚性悬浮细胞原生质体分离的方案。方法:用不同的酶浓度、酶组合及不同的酶解时间对贡蕉胚性悬浮细胞进行原生质体分离,并对不同继代时间的胚性悬浮细胞的原生质体产量和活力进行研究。结果:贡蕉胚性悬浮细胞在酶组合为3.5%纤维素酶R-10、1%离析酶R-10和0.15%果胶酶Y-23的酶溶液中,酶解8h可获得高产量的原生质体,采用继代7d的贡蕉胚性悬浮细胞进行原生质体分离时获得的原生质体产量最高,达到1.2×107个/mL PCV ECS,原生质体活力达到85%以上。结论:合适的酶组合、酶浓度和酶解时间有利于贡蕉胚性悬浮细胞的原生质体分离,继代7d后的贡蕉胚性悬浮细胞最适合用于原生质体分离。

贡蕉胚性细胞悬浮培养过程中几个参数的变化

以贡蕉(Musa acuminata cv. Mas)未成熟雄花序来源的胚性愈伤组织为材料建立了贡蕉胚性细胞悬浮系(Embryogenic cell suspensions,ECS),测定了其培养过程中培养物的鲜重、干重及培养液的pH值、阿拉伯半乳糖蛋白(Arabinogala ctan proteins,AGPs)含量等生长参数在培养过程中的变化动态.结果表明:在培养周期内,培养物的鲜重在继代后第24 d达到高峰,干重在继代后第21 d达到高峰;培养液中的pH值表现为先下降,第3 d下降到最低,随后开始升高;培养液中AGPs含量随培养天数而增加,在第14 d含量达到最高,随后保持稳定状态.

UPLC法测定香蕉、皇帝蕉皮及其果肉中羽扇豆酮含量

目的:建立超高效液相色谱法分离和测定不同收集期的香蕉和皇帝蕉皮及其果肉中羽扇豆酮含量的方法,并优化提取条件。方法:采用甲醇回流提取法对2种蕉皮及其果肉的羽扇豆酮进行提取分离,减压浓缩,选用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),流动相为乙腈-水(85∶15,V/V)溶液,流速0.3 mL/min,柱温30℃,检测波长206 nm。结果:香蕉和皇帝蕉果肉中均未检测出羽扇豆酮,但2种蕉皮中有较高含量的羽扇豆酮,并且在16.70~59.96 mg/100 mL质量浓度范围内有良好线性关系(r=0.999 6),羽扇豆酮平均回收率为99.00%,相对标准偏差为3.0%。结论:该法回收率高、重复性好,且具有专属性强、准确性高和简便快捷等特点,适用于香蕉、皇帝蕉皮中羽扇豆酮的含量测定。