家蝇蛹抗弓形虫抗菌肽的分离纯化

目的从家蝇蛹血淋巴中分离纯化具有抗弓形虫作用的抗菌肽。方法通过损伤加感染的方法诱导家蝇蛹大量表达抗菌肽,然后经过研磨、离心和AKTATM purifier层析等步骤,将家蝇蛹抗菌肽进行分离纯化,采用血细胞计数法和MTT比色法筛选对弓形虫速殖子有抑制作用的抗菌肽。结果经Resource S阳离子柱层析,测定280nm处紫外吸收值,在保留体积为9.4ml处出现1个紫外吸收峰,经检测对弓形虫速殖子有杀伤作用,再将其用于Superdex G75凝胶柱层析后,测定280nm处紫外吸收值,出现6个紫外吸收峰,发现第6个峰具有抗弓形虫作用。结论家蝇蛹血淋巴中存在抗弓形虫作用的抗菌肽。

家蝇蛹抗菌肽对肿瘤细胞膜破坏作用

目的观察4种肿瘤细胞在家蝇蛹抗菌肽作用下细胞表面的变化,探讨抗菌肽杀伤肿瘤细胞的机制。方法用针刺对家蝇幼虫感染大肠埃希菌,诱导其产生抗菌肽,然后至蛹期提取该抗菌肽并作用于4种肿瘤细胞(人髓样白血病细胞株K562;人淋巴瘤细胞株Daudi;人食管癌细胞株Eca109;人膀胱癌细胞株T24)。36 h后用扫描电镜观察其细胞表面变化。结果4种肿瘤细胞表面出现大小不等的创伤,且大部分创伤为孔洞型。

低温对家蝇卵及蛹的影响

目的探讨低温对家蝇卵孵化率以及蛹羽化率的影响。方法室内连续饲养的家蝇第4代卵,置于2℃分别处理1、2、3、4和5d后,取出置于室内(26℃)孵化,记录处理不同时间后的孵化率。第4代1日龄蛹和3日龄蛹,分别置于2℃和6℃处理1、2、3、4和5d后,取出置于室内羽化,记录不同日龄以及不同时间的低温处理后的羽化率。结果家蝇卵经不同时间2℃低温处理后的孵化率依次为(91.52±7.70)%、(85.93±18.99)%、(48.52±19.48)%、0、0;家蝇1日龄蛹经不同时间2℃低温处理后的羽化率依次为(75.00±13.54)%、(51.25±13.15)%、(30.00±15.81)%、(6.25±6.29)%、(6.25±4.79)%;1日龄蛹经不同时间6℃低温处理后的羽化率依次为(88.75±4.79)%、(66.25±10.31)%、(40.00±12.91)%、(37.50±18.48)%、(12.50±6.45)%;3日龄蛹经不同时间2℃低温处理后的羽化率依次为(90.0±7.07)%、(78.75±11.09)%、(57.50±9.57)%、(61.25±11.09)%、(32.50±22.55)%;3日龄蛹经不同时间6℃低温处理后的羽化率依次为(92.50±5.00)%、(90.00±10.80)%、(88.75±2.50)%、(90.00±5.77)%、(66.25±10.31)%。结论家蝇卵经2℃低温处理4d后即不能孵化幼虫,卵对低温的耐受力比蛹弱。温度越低,蛹羽化率越低,低温处理时间越长,蛹羽化率越低;蛹日龄越大。

家蝇蛹血淋巴及其提取物的免疫调节作用

目的:观察家蝇蛹血淋巴及其提取物对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。方法:以不同浓度血淋巴及其提取物与脾淋巴细胞、T细胞和B细胞共孵育72小时,采用MTT法测定淋巴细胞的吸光度值,观察它们对淋巴细胞增殖的促进作用,采用免疫印迹法研究提取物对B淋巴细胞增殖的信号转导通路。结果:与对照组相比,血淋巴冻干粉、分子量在50kD以上的冻干粉及其提取物对混合淋巴细胞和B细胞增殖有显著促进作用,然而对于T细胞的增殖却没有明显的促进作用。MTT实验和免疫印迹结果表明血淋巴提取物激活了B淋巴细胞的ERK通路,促进了B淋巴细胞的增殖。结论:家蝇蛹血淋巴及其提取物具有免疫调节作用,为天然免疫增强剂的开发提供了一定的参考依据。

微波对病媒昆虫卵与蛹的杀灭效果初探

目的研究微波对病媒昆虫卵、蛹的杀灭处理效果。方法用微波设备进行定量杀灭试验。结果微波设备在放入模拟垃圾条件下,经微波6 kw照射6 min对家蝇蛹及淡色库蚊蛹杀灭率达100%;经微波6kw照射7 min,对美洲大蠊卵杀灭率达100%。结论微波对家蝇蛹、淡色库蚊蛹、美洲大蠊卵具有良好杀灭效果,值得进一步研究。

低温对家蝇室内种群不同日龄蛹羽化率的影响

目的探讨低温对家蝇蛹羽化率的影响。方法室内连续饲养的家蝇第4代1日龄蛹和3日龄蛹,分别置于2℃和6℃处理1、2、3、4、5d后,取出置于室内羽化,记录不同日龄以及不同时间的低温处理后的羽化率。结果家蝇1日龄蛹经不同时间2℃低温处理后的羽化率(%)依次为:75.0±13.54、51.25±13.15、30.0±15.81、6.25±6.29、6.25±4.79;1日龄蛹经不同时间6℃低温处理后的羽化率依次为:88.75±4.79、66.25±10.31、40.0±12.91、37.50±18.48、12.50±6.45。3日龄蛹经不同时间2℃低温处理后的羽化率依次为:90.0±7.07、78.75±11.09、57.50±9.57、61.25±11.09、32.50±22.55;3日龄蛹经不同时间6℃低温处理后的羽化率依次为:92.50±5.0、90.0±10.80、88.75±2.50、90.0±5.77、66.25±10.31。结论温度越低,蛹羽化率越低,低温处理时间越长,蛹羽化率越低;蛹日龄越大,耐受低温能力越强。

家蝇室内连续饲养6代蛹期特征观察

为观察家蝇室内连续饲养的各代蛹期特征 ,将家蝇引入室内 ,采用人工配制的幼虫饲料在室内进行连续饲养 ,分别随机挑取室内第 1～ 6代 1日龄蛹 ,及时称量鲜蛹重及干蛹重 ,测量蛹长 ,并记录各代羽化率。结果发现 ,第 1代羽化率为 70 ,其余几代羽化率均高于 90。第 5代蛹长显著性小于第 2、3代蛹长 ,第 6代蛹长显著性小于第 1～ 3代蛹长。第 5代鲜蛹重显著性小于第 2、3代鲜蛹重 ,第 6代鲜蛹重显著性小于第 1～ 5代鲜蛹重。第 4～ 6代干蛹重均显著性小于第 2、3代干蛹重。提示室内饲养的家蝇各代羽化率稳定在较高水平 ,而蛹期形态从第 4代开始有减小趋势。

家蝇蛹凝集素对免疫低下小鼠免疫功能的影响

将家蝇蛹凝集素(MPL)分别按400μg/(kg·d)、800μg/(kg·d)、1200μg/(kg·d)连续给小鼠灌胃10.d,于第8.d和第9.d给阴性对照组和3个剂量组小鼠腹腔注射环磷酰胺,造成小鼠免疫功能低下.观察家蝇蛹凝集素对免疫低下小鼠免疫器官指数、巨噬细胞的吞噬能力、脾脏淋巴细胞增殖和血清溶血值HC50的影响.结果表明,家蝇蛹凝集素能显著拮抗环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠的免疫器官指数下降,提高巨噬细胞的吞噬能力,明显促进脾脏淋巴细胞增殖,且能使血清溶血素含量显著增加.说明家蝇蛹凝集素对环磷酰胺所致小鼠免疫功能低下有较好的预防作用.

家蝇蛹凝集素的纯化及对巨噬细胞免疫活性的影响

采用缓冲液浸提、亲和层析、超滤和离子交换4种方法,从家蝇蛹中分离纯化出一种D–半乳糖特异性结合的凝集素(MPL-1),该组分具有明显的凝血活性和免疫调节活性.聚丙烯酰胺凝胶电泳和高效液相色谱分析结果表明,MPL-1为单一成分的蛋白,其分子质量为80 ku.中性红吞噬实验结果显示,此种凝集素能提高巨噬细胞的吞噬活性,其作用效果具有时间和浓度依赖性.扫描电镜(SEM)观察结果表明,MPL-1作用后的巨噬细胞呈现明显的活化状态,证明MPL-1对巨噬细胞具有明显的免疫调节作用.

家蝇蛹中多酚氧化酶的分离纯化及抑菌活性的研究

采用缓冲液浸提、超滤、亲和层析和高效液相色谱4种方法,从家蝇蛹中分离纯化一种D-半乳糖专一性的多酚氧化酶(PO),并对其抑菌活性进行了研究.在SDS-PGAGE中呈现出两个条带,其中表观分子质量为78ku的条带为目的蛋白;经过高效液相色谱分析,呈现出了分别和SDS-PAGE结果中相对应的两个峰,其中第一个峰为要纯化的目的蛋白;目的蛋白经过肽指纹图谱检测为PO,精确分子质量为79ku.1mL纯化的PO在1g/L的质量浓度下对1mL稀释后的大肠埃希菌、枯草芽胞杆菌和伤寒沙门菌(106 mL-1)的抑制率分别为43.2%、38.7%和50.1%.

以冷冻和新鲜家蝇蛹为寄主的蝇蛹俑小蜂实验种群生命表参数比较

【目的】为了阐明以冷冻保存家蝇Musca domestica蛹为寄主对繁殖蝇蛹俑小蜂Spalangia endius的影响。【方法】本研究分别利用新鲜和-20℃冷冻保存的家蝇蛹为寄主,记录了小蜂日存活数、日后代数量和性别等,并分别构建了实验种群生命表,分析比较了两种类型家蝇蛹对小蜂寄生率、日后代数量和性比、生命表参数等的影响。【结果】与新鲜家蝇蛹为寄主时相比,小蜂在以冷冻蛹为寄主时寄生率、后代数量和雄性百分比均较低(P<0.01),成蜂寿命和产卵期差异不大(P>0.05)。在以新鲜和冷冻家蝇蛹为寄主时,小蜂寄生率和后代数量均随日龄的增加而显著降低(P<0.01);以新鲜和冷冻家蝇蛹为寄主时小蜂的净生殖率(R0)分别为34.91和20.16,种群内禀增长率(rm)分别为0.17和0.11,均以寄生新鲜家蝇蛹时较大(P<0.01);在以冷冻家蝇蛹为寄主时,世代时间和种群倍增时间较以新鲜家蝇蛹为寄主时有所延长(P<0.01)。【结论】蝇蛹俑小蜂可以利用冷冻家蝇蛹为寄主完成生活史;在规模化繁殖蝇蛹俑小蜂时,使用冷冻方式保存家蝇蛹的方法具有重要价值。

家蝇蛹甘露糖结合凝集素的结构及免疫调节作用

分析了一种分子量为24kDa，具有免疫活性的新型家蝇蛹甘露糖结合凝集素（MBL-1）的结构，为深入研究其结构与功能之间的关系提供依据。首先通过凝胶电泳及Schiff’s染色确定此新型家蝇蛹凝集素具有糖链结构。通过β-消除反应、红外光谱、原子力显微镜和蛋白N端测序仪对其结构进行分析。结果表明MBL-1是-种存在N-糖苷键，蛋白含量为97．20％、糖含量为2．55％，直径60～100nm的椭球状蛋白单体，肽链N-端封闭。MTT实验证明MBL—1可以明显促进巨噬细胞的增殖且具有浓度依赖性，扫描电镜观察结果表明，MBL—1作用后的巨噬细胞形态呈现活化状态。可见，分离纯化出的MBL-1是一种具有明显的免疫调节活性的新型凝集素，为开发天然免疫增强剂和进一步分析其结构及其作用机制提供了参考。