2004年江苏省蚊蝇抗药性调查

目的了解江苏省蚊、蝇对4种常用杀虫剂的抗药性状况,为科学合理使用杀虫剂提供依据。方法分别用浸渍法和点滴法测定淡色库蚊和家蝇的抗药性。结果江苏省连云港和苏州地区的蚊虫对敌敌畏已产生高水平抗性,镇江地区蚊虫对氯氰菊酯、氯菊酯均敏感;仪征、扬中地区家蝇对敌敌畏产生高抗,仪征地区家蝇对溴氰菊酯最高抗,扬中地区则为低抗。结论应根据抗药性调查结果科学合理使用杀虫剂,积极提倡综合防制。

家蝇幼虫抗菌肽的超声诱导及分离纯化和活性研究

目的:分离纯化家蝇(Musca domestica)幼虫免疫血淋巴中的抗菌肽,研究抗菌肽的性质和抑菌特性。为进一步研究家蝇幼虫抗菌肽的产生及应用提供实验基础。方法:通过超声处理诱导家蝇幼虫产生免疫血淋巴,经沸水浴热变性,结合高速离心,两步CM-Sepharose离子交换层析,冷冻干燥浓缩等步骤,分离得到一种具抗菌活性的蛋白质。用Tricine-SDS-PAGE鉴定抗菌肽的纯度和性质,抑菌试验分析抗菌肽的抑菌特性。结果:300W,50Hz超声处理60s能够诱导家蝇幼虫产生抗菌肽,经分离纯化后Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳结果显示为一条带,相对分子量大约为5.8kD。纯化蛋白对阴沟肠杆菌,绿脓杆菌等G-杆菌的抑菌活性较强,而对金黄色葡萄球菌效果不显著。结论:诱导和纯化了一种家蝇幼虫抗菌肽,为此类活性物质的分离纯化提供了有效的方式。

家蝇溴氰菊酯抗性治理的初步研究

目的为了延缓和克服抗性的发生和发展,更好地选用卫生杀虫剂,控制卫生害虫,测定抗溴氰菊酯家蝇对常用杀虫剂混用的敏感性。方法采用点滴法,以Finncy几率分析软件计算LD50。结果家蝇对溴氰菊酯+辛硫磷,溴氰菊酯+DDT,溴氰菊酯+PB+二氧威,二氯+马拉硫磷,二氯+巴沙+胺菊酯,二氯+PB+DDT,氯氰+丙体六六六,氯氰+残杀威,氯氰+PB+敌百虫,苄呋菊酯+辛硫磷+DDVP,苄呋菊酯+残杀威和苄呋菊酯+PB+丙体六六的抗性系数分别为4.167 9、6.813 7、3.276 8、11.217 0、9.375 0、16.1430、9.788 8、7.847 6、4.100 2、3.180 0、4.001 0、6.964 9。结论当家蝇对溴氰菊酯产生抗性后,拟除虫菊酯与有机磷或氨基甲酸酯类进行混用能取得较好的防治效果。

中内毒素(LPS)诱导后家蝇幼虫抗菌肽Cec Md基因的克隆、生物信息学分析及其表达载体的构建(英文)

从脂多糖（LPS）诱导或非诱导的家蝇幼虫体内抽提总RNA，根据家蝇Cecropin基因（GenBank：DQ 232774）设计特异性引物，应用RT—PCR技术扩增出编码CecMd开放阅读框（ORF）的eDNA序列，将其克隆入pMD18-T载体，经PCR、双酶切和测序鉴定正确后，将CecMd亚克隆基因与线性化的pET32a（＋）连接，构建重组表达载体pET32a（＋）／CecMid，并对此基因及其推导氨基酸序列进行系统的生物信息学分析。结果表明从脂多糖（LPS）诱导的家蝇幼虫体内成功的扩增出家蝇抗菌肽Cecropin基因，命名为CecMd，但是从未诱导的虫体内未能获得此基因；CecMd开放阅读框的cDNA全长为192bp，编码由63个氨基酸残基组成的多肽；此多肽最可能的裂解位点在氨基酸残基A23和G24之间，提示1～23氨基酸残基组成信号肽，24～63氨基酸残基构成成熟肽；CecMd的全长肽包含4个螺旋，成熟肽（不包括信号肽）含有2个螺旋，两者均不合二硫键；CecMd与果蝇Cecropins的同源性显著高于其他昆虫，达到81．0％以上；经PCR，限制酶切和DNA测序鉴定表明，成功构建了重组表达载体pET32a（＋）／Cec Md 。重组表达载体pET32a（＋）／Cec Md的构建及其CecMd基因的生物信息学分析对其生物学功能研究和高效表达工程菌的构建具有重要意义。

全长家蝇抗菌肽基因diptericin的克隆及生物信息学分析

目的克隆新的家蝇抗菌肽基因双翅肽(diptericin)的全长序列并对其进行相关生物信息学分析。方法根据本实验室已经克隆的家蝇抗菌肽基因diptericin片段设计1对引物,运用cDNA末端快速扩增技术(GeneRacer)、T-A克隆和序列测定,将所得序列与GenBank中已知的diptericin基因进行同源性分析。结果成功地从免疫诱导的3龄幼虫中得到一个全长433bp的基因cDNA,该全长cDNA具有完整的编码框,编码99个氨基酸,相关生物信息学分析结果表明,其与厩蜇蝇diptericinA基因的同源性最高,为77%。结论初步推断此全长cDNA是家蝇抗菌肽的一个新基因,可能广泛存在于蝇类昆虫中,为进一步研究其生物活性奠定基础。

牛多杀性巴氏杆菌诱导家蝇幼虫抑制性消减文库的构建

采用牛多杀性巴氏杆菌针刺法诱导3日龄家蝇幼虫,提取诱导后的家蝇幼虫总RNA并分离纯化得到高质量的mRNA。运用抑制性消减杂交(Suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建家蝇幼虫差异表达的cD-NA消减文库,并利用反向Northern杂交技术筛选差异表达基因。结果表明,随机挑取的阳性克隆片段大小均在200～750bp,通过反向Northern杂交共筛选出183个差异表达基因,经BLAST比对分析后鉴定出大量与家蝇免疫防御功能相关的基因和一部分无同源性基因。