家兔主动脉平滑肌细胞牛磺酸转运和缺氧－复氧损伤对其的影响

目的：观察血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）牛磺酸跨膜转运的特征及缺氧－复氧损伤后的改变。方法：用３Ｈ标记的牛磺酸在培养的家兔主动脉ＶＳＭＣ上进行实验。结果：ＶＳＭＣ的牛磺酸转运是钠浓度依赖的高亲和转运，Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶抑制剂哇巴因呈浓度依赖性地抑制其转运。ＶＳＭＣ经缺氧－复氧处理后Ｖｍａｘ下降３４％（Ｐ＜０．０１），但Ｋｍ值无明显改变。结论：ＶＳＭＣ具有高亲和牛磺酸转运系统，缺氧－复氧处理可能损伤这一转运系统。

高肺血流量对大鼠肺动脉压及肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的 :建立左向右分流所致肺动脉高压的大鼠模型 ,探讨高肺血流量对肺血流动力学及肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法 :采用腹主动脉 -下腔静脉分流术建立左向右分流的大鼠模型 ,观察术后 6周和 1 1周肺血流动力学 ,右心室肥厚和肺动脉舒张反应的改变。采用免疫组织化学和原位缺口末端标记方法对 1 1周组大鼠肺血管平滑肌细胞进行增殖和凋亡状态的研究。结果 :术后 6周与 1 1周大鼠肺动脉收缩压、肺动脉平均压、右心室 (RV)与左心室加室间隔 (LV +S)的比值较同龄对照组明显增加 ,而且 1 1周分流组肺动脉收缩压较 6周分流组进一步增高。在 1 1周分流组大鼠中 ,乙酰胆碱 (ACh)产生的肺动脉环舒张反应较对照组明显减弱 ,而硝普钠(SNP)产生的肺动脉环舒张百分比无明显变化。 1 1周分流组大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖指数 (PI)、凋亡指数(AI)、PI/AI比值明显高于 1 1周对照组大鼠肺动脉平滑肌细胞。结论 :腹主动脉 -下腔静脉分流术可导致肺动脉高压形成。高肺血流量引起的内皮依赖性肺血管舒张功能失调对肺动脉高压的形成有重要的影响 ,肺动脉平滑肌细胞增殖的增加和凋亡的相对减少在肺动脉高压的发生中起重要作用。该模型简单、可靠、重复性好。

钙信号在尾加压素-Ⅱ促血管平滑肌增殖中的作用

目的 :探讨钙信号在尾加压素 Ⅱ (urotensin Ⅱ ,UⅡ )促血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecell,VSMC)增殖中的作用。方法 :在离体培养的VSMC上 ,用流式细胞仪和3 H TdR参入的方法探讨UⅡ的促增殖效应 ;在离体孵育的大鼠主动脉平滑肌组织上观察UⅡ对平滑肌45Ca2 + 摄入的影响 ;应用激光共聚焦显微镜检测UⅡ作用后细胞内游离钙的改变。结果 :UⅡ (10 -9～ 10 -7mol·L-1)浓度依赖地刺激VSMC的DNA合成 ,并诱导细胞由静止向增殖状态转化。与对照组相比 10 -8mol·L-1UⅡ使细胞的增殖指数 [(G2 M +S) % ]增加 192 % (P <0 .0 1)。钙通道阻断剂尼卡地平和Ca2 + 螯合剂EDTA均可阻断UⅡ对VSMC的促增殖效应 ,其中UⅡ (10 -8mol·L-1)与尼卡地平 (10 -5mol·L-1)共同孵育的VSMCDNA合成量仅为单纯UⅡ (10 -8mol·L-1)组的 5 9.0 %。UⅡ (10 -10 ～ 10 -8mol·L-1)可浓度依赖地使胸主动脉对45Ca2 + 的摄入增加 ,尼卡地平 (10 -5mol·L-1)也可显著对抗UⅡ (10 -8mol·L-1)对45Ca2 + 摄入的诱导作用 (P值均小于 0 .0 1)。用激光共聚焦显微镜观察发现UⅡ作用后细胞内Ca2 + 浓度迅速升高 ,持续约 3min ,形成钙波。结论 :UⅡ可通过促进细胞Ca2 + 摄取和增加细胞内Ca2 + 浓度 。

黄芪、当归对血管平滑肌细胞粘着斑激酶表达和细胞凋亡的影响

目的:探讨黄芪、当归对体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC)粘着斑激酶(FAK)表达和细胞凋亡的影响。方法:应用RT-PCR、Western blot检测黄芪、当归对FAK表达的影响;应用 Greiss试剂检测 VSMC培养液中NO_2^-含量;应用流式细胞仪检测细胞凋亡及bcl-2和caspase-3表达活性。结果:黄芪、当归注射液可以显著抑制由碱性成纤维细胞生长因子所诱导的FAK表达,增加细胞培养液中的NO_2^-含量,诱导cas-pase-3表达。下调bcl-2表达,促进体外培养的VSMC凋亡。结论:黄芪、当归诱导VSMC凋亡与其促进NO合成、抑制FAK表达、诱导促凋亡基因caspase-3表达及下调抗凋亡基因bcl-2表达有关。

一氧化氮对肺动脉平滑肌细胞HO-1 mRNA表达的影响

目的 :研究一氧化氮 (NO)供体sodiumnitroprusside (SNP)对大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)HO 1mRNA的表达及CO含量影响 ,以探讨NO对血红素加氧酶 /一氧化碳 (HO/CO)体系的调节作用。方法 :体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞 ,分别与 10 -3 mol·L-1和 10 -4mol·L-1的SNP在常氧及低氧 12和 2 4h条件下共同孵育。用荧光定量逆转录聚合酶链反应 (FQ RT PCR)对大鼠PASMCHO 1mRNA表达进行检测 ,并用分光光度计检测PASMC培养液中CO与NO相对含量的变化。结果 :低氧使大鼠PASMCHO 1mRNA的表达及CO含量呈一致性增高。给予SNP ,HO 1mRNA的表达在常氧及低氧时呈剂量和时间依赖性增高趋势 ,并伴随CO含量的一致性改变。结论 :外源性NO能够诱导常氧及低氧大鼠PASMCHO 1mRNA的表达 ,使PASMCCO释放增多 ,上调HO/CO体系功能。

内质网应激在高糖所致血管平滑肌细胞钙化中的作用与机制

目的探讨内质网(endoplasmic reticulum,ER)应激在高糖引起的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化中的作用与机制。方法 35mmol/L D-葡萄糖(高糖)处理VSMCs,模拟糖尿病状态,观察高糖能否引起VSMCs的ER应激和VSMCs表型转化(收缩型转变为成骨样细胞),观察ER应激的抑制剂对VSMCs钙化的效应,采用比色法、o-cresolphthalein法和western blot观察碱性磷酸酶活性、钙沉积和骨分化转录因子(Runx2)等指标。结果应用35mmol/L D-葡萄糖分别处理VSMCs 3d或7d,可引起VSMCs的ER应激蛋白表达上调、碱性磷酸酶活性增加、钙沉积和骨分化标志蛋白增多;苯基丁酸(4-phenylbutyric acid,4-PBA)预处理在抑制VSMCs的ER应激的同时,能阻断高糖所致VSMCs钙化(表现为碱性磷酸酶活性、钙沉积和骨分化标志蛋白下降)。结论高糖能激活VSMCs的ER应激,继而引起VSMCs凋亡和钙化,提示ER应激在高糖引起的VSMCs钙化中起着重要作用。

血小板源生长因子受体结构域切除对肺血管平滑肌细胞增殖和c-sis基因表达的影响

目的探讨从血小板源生长因子α(PDGF-α)受体水平阻断对肺血管平滑肌细胞增殖的影响。方法在肺动脉平滑肌细胞(V SM C)培养液中分别给予不同剂量的受体结构域切除的PDGF-α受体腺病毒重组体A d5CM V-PaR tr(ACP),对细胞不同时相的增殖曲线和c-s is原癌基因表达进行测定。结果5 m l/L、10 m l/L剂量ACP对细胞增殖有明显抑制作用。在5 m l/L ACP作用下,加入PDGF-BB不能促进V SM C的增殖。不同剂量的ACP可使c-s is mRNA的表达上调。5 m l/L ACP作用下,加入PDGF-BB可下调c-s is mRNA的表达。结论5 m l/L、10 m l/L ACP能明显抑制肺V SM C的增殖,使c-s is mRNA的表达上调。

血小板源生长因子-α受体结构域切除对肺血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响

目的 探讨从血小板源生长因子 - α(PDGF- α)受体水平阻断对肺血管平滑肌增殖的影响。方法 将组织贴块法培养的肺动脉平滑肌细胞 (VSMC)分别施加小、中、大剂量的受体结构域切除的 PDGF- α受体腺病毒重组体 Ad5 CMV- Pa Rtr(ACP) ,通过四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法观察细胞不同时相的增殖曲线 ;采用流式细胞学技术观察不同干预条件下 VSMC细胞周期的变化。结果 中、大浓度 ACP对细胞增殖有明显抑制作用。中、大剂量 ACP干预后 ,VSMC生长明显受抑 ,波峰减弱或消失 ,第 7～ 9天生长曲线才呈现上升趋势。在中浓度的 ACP作用下 ,加入 PDGF- BB不能促进 VSMC的增殖。 ACP干预前后 ,VSMC增殖周期中各期细胞构成发生显著的变化 ,以 G0 +G1 期细胞增多、S+G2 +M期细胞减少为特征。与对照组相比 ,各组的 G0 +G1 期细胞均有显著升高 (P<0 .0 5 )。小剂量与中剂量、中剂量与大剂量间 G0 +G1 期细胞有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论 ACP作为细胞增殖抑制剂 ,能在中、大剂量下明显抑制肺 VSMC的增殖 ,可使 G0 /G1 期细胞数明显增多 ,且与

血管内皮剥脱后大鼠血管平滑肌线粒体摄钙功能的变化

目的：探讨血管损伤与血管平滑肌线粒体钙转运的关系。方法：建立大鼠腹主动脉球囊内皮剥脱模型，用同位素标记。结果：内皮损伤可致ＶＳＭＣ增生、内膜增厚。线粒体摄钙功能在内皮剥脱后３－ｄ和１０ｄ时明显增强；线粒体摄钙初速率和最大摄钙量均显著高于对照。结论：内皮剥脱后ＶＳＭＣ增生过程中线粒体摄钙功能发生了相应变化。

溶血磷脂酸刺激兔血管平滑肌细胞增殖的信号转导途径

目的：探讨溶血磷脂酸（ＬＰＡ）刺激兔血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的信号转导途径。方法：在培养的家兔血管平滑肌细胞上，测定３Ｈ胸腺嘧啶核苷（３ＨＴｄＲ）参入和丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）活性。结果：ＬＰＡ呈浓度依赖地刺激３ＨＴｄＲ参入，并平行地激活ＭＡＰＫ，二者间呈显著正相关。乙二醇双（氨基乙酯）四乙酸（ＥＧＴＡ）、尼卡地平、ｒｙａｎｏｄｉｎｅ、ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ、ｈｅｒｂｉｍｙｃｉｎＡ不影响ＬＰＡ促ＶＳＭＣ增殖作用。ＰＱ０９８０５９、Ｈ７、佛波酯（ＰＭＡ）及百日咳毒素（ＰＴＸ）均可抑制ＬＰＡ的促增殖和激活ＭＡＰＫ作用。结论：ＬＰＡ浓度依赖地促进ＶＳＭＣ增殖，其细胞内信号转导与ＰＴＸ敏感的Ｇ蛋白介导的蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）和ＭＡＰＫ途径有关。

氧化苦参碱对大鼠血管平滑肌细胞钙化抑制作用的研究

目的观察氧化苦参碱(Oxymatrine,OMT)对血管钙化的影响,探讨血管钙化的发生机制。方法以β-甘油磷酸盐诱导大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMCs)钙化,OMT干预。采用磷酸苯二钠法测定碱性磷酸酶(ALP)活性,Von Kossa染色鉴定细胞钙化,比色法测定细胞钙含量,硫代巴比妥酸法测定细胞丙二醛(MDA)含量。结果β-甘油磷酸盐可诱导VSMCs发生钙化,钙化组细胞总钙含量、ALP活性和丙二醛含量明显增高,OMT呈浓度依赖性地降低细胞总钙含量、ALP活性和丙二醛含量,VSMCs的钙化程度亦明显减轻。结论OMT能有效抑制β-甘油磷酸盐诱导的大鼠主动脉VSMCs钙化,其机制可能与减轻细胞的氧化损伤有关。

血管平滑肌细胞在动脉粥样硬化发生中的哲学思维

随着对血管平滑肌细胞增殖在动脉粥样硬化中研究的不断深入,逐步意识到细胞凋亡的存在及其相互之间的矛盾关系,对动脉粥样硬化的认识亦由从形态结构和生化组成等描述病变,发展为在细胞乃至分子基因水平上的深入研究,发现血管平滑肌细胞的增殖和凋亡在动脉粥样硬化形成过程中起重要作用。从哲学角度探讨血管平滑肌细胞在动脉粥样硬化发生中的作用,有助于科学的发现疾病的本质。

血管平滑肌细胞与动脉粥样硬化关系研究进展

随着对血管平滑肌细胞增殖在动脉粥样硬化中研究的不断深入,逐步意识到细胞凋亡的存在及其相互之间的关系,对动脉粥样硬化的认识亦由从形态结构和生化组成等描述病变,发展为在细胞乃至分子基因水平上的深入研究,发现血管平滑肌细胞的增殖和凋亡在动脉粥样硬化形成过程中起重要作用。

阿托伐他汀对高脂兔肺血管重构及平滑肌增殖肌化的影响

目的探讨阿托伐他汀对高脂兔肺动脉组织形态学、平滑肌增殖和肺小动脉肌化的影响。方法15只3月龄新西兰雄性兔随机分成对照组、高脂组及阿托伐他汀干预组,对肺组织石蜡切片进行α-平滑肌肌动蛋白、增殖细胞核抗原免疫组化检查及HE染色,观察阿托伐他汀对肺血管重构的影响。结果高脂组出现明显的肺血管重构;阿托伐他汀干预组肺动脉中膜厚度、小动脉肌化比例、中膜平滑肌细胞增殖指数均明显低于高脂组。结论阿托伐他汀可以抑制高脂兔肺动脉平滑肌细胞增殖及肺小动脉肌化,改善肺血管重构。

生长素抑制大鼠血管钙化及其可能机制

为探讨生长素调节血管钙化的可能机制 ,用肌肉注射维生素D3和口服尼古丁诱导大鼠血管钙化模型和 β 甘油磷酸盐诱导血管平滑肌细胞钙化模型 ,采用原子吸收分光光度法测定血管和细胞钙含量 ,磷酸苯二钠法测定碱性磷酸酶活性 ,4 5CaCl2 摄入测定钙沉积 ,逆转录—聚合酶链反应测定生长素、骨桥蛋白和内皮素mRNA表达水平 ,放射免疫分析方法测定血浆生长素和内皮素含量。结果表明 ,维生素D3和尼古丁明显诱导大鼠血管钙化 ,β 磷酸甘油可诱导血管平滑肌细胞钙化。采用 30和 30 0nmol kg生长素治疗大鼠均可抑制血管钙化 ,且高剂量时效应强于低剂量 ,与钙化组相比较 ,血管组织钙化指标均下降并且差异有显著性 ,而骨桥蛋白mRNA的表达明显上调。 10 - 8～ 10 - 6 mol L生长素呈浓度依赖性降低血管平滑肌细胞钙化指标 ,并上调骨桥蛋白mRNA表达。此外生长素明显下调血浆内皮素浓度及血管组织的内皮素表达 ,且高剂量生长素的效应更强。结果提示 ,生长素可能部分通过拮抗血浆和血管组织局部的内皮素系统效应而产生抑制血管组织和血管平滑肌细胞钙化的作用。

缺氧预处理对家兔血管平滑肌细胞缺氧──复氧损伤的保护

目的：观察缺氧预处理对家兔血管平滑肌细胞缺氧－复氧损伤的影响。方法：采用血管平滑肌细胞缺氧－复氧模型，用短暂缺氧进行预处理。结果：缺氧预处理能提高缺氧－复氧后血管平滑肌细胞存活率（ｐ＜０．０１）、减少细胞丙二醛产生（Ｐ＜０．０１）及乳酸脱氢酶的漏出（Ｐ＜０．０１）。结论：离体血管平滑肌细胞存在着预处理保护现象。

自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞缺氧预处理的延迟保护作用

目的：观察缺氧预处理（ＰＣ）对于自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）缺氧复氧（Ｈ／Ｒ）损伤的延迟保护作用，并探讨其可能机制。方法：对ＶＳＭＣ于缺氧ＰＣ２４ｈ后进行Ｈ（２ｈ）／Ｒ（１ｈ），结束实验时测定其Ｈ／Ｒ后细胞存活率、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放和ＡＴＰ含量，并测定其金属硫蛋白（ＭＴ）量。结果：缺氧ＰＣ明显减轻Ｈ／Ｒ造成的ＳＨＲ的ＶＳＭＣ存活率下降、ＡＴＰ耗竭和ＬＤＨ释放，并使细胞内应激蛋白ＭＴ含量升高１．３倍，上述指标与正常血压对照组ＷＫＹ大鼠ＶＳＭＣ的结果相近。结论：培养的ＳＨＲ的ＶＳＭＣ亦存在ＰＣ的延迟保护作用，其保护机制涉及ＭＴ合成增多。

人单纯疱疹病毒1型对血管平滑肌细胞脂质代谢的影响

目的：研究人单纯疱疾病毒1型（HSV－1）对血管平滑肌细胞（SMC）脂质代谢的影响，探讨HSV一且与动脉粥样硬化（AS）的关系。方法；以HSV－1感染体外培养的牛主动脉平滑肌细胞，观察细胞形态和超微结构的改变，以及细胞内脂质代谢的变化。结果：HSV－1感染后，用PCR法能检出SMC内存在HSV－1核酸片段；感染后24h和36h，感染组细胞内总胆固醇（CH）较对照组明显增高（P＜0．05），HE染色和电镜下均显示感染组细胞空泡样变。结论：HSV－1不但能在体外感染血管SMC，且能导致SMC内胆固醇积聚，可能促使SMC向SMC源性泡沫细胞转变，从而参与动脉粥样硬化的发病过程。

L-精氨酸和牛磺酸对同型半胱氨酸诱导平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的 观察Ｌ－精氨酸和牛磺酸对同型半胱氨酸（ＨＣＹ）诱导的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的影响。方法采用同位素技术测定ＶＳＭＣ３Ｈ－ＴｄＲ参入。结果ＨＣＹ可促进ＶＳＭＣ增殖。Ｌ－精氨酸及牛磺酸均可呈剂量依赖性抑制ＨＣＹ诱导的ＶＳＭＣ增殖，且合用Ｌ－精氨酸和牛磺酸的对ＶＳＭＣ增殖的抑制作用明显强于单纯应用Ｌ－精氨酸或牛磺酸组。结论Ｌ－精氨酸和牛磺酸均可抑制ＨＣＹ诱导的ＶＳＭＣ增殖。

p38 MAPK通路激活内质网应激参与高糖诱导血管平滑肌细胞钙化

目的探讨p38 MAPK通路是否通过激活内质网应激及凋亡参与高糖所致血管平滑肌细胞(vascular smooth muscular cell,VSMCs)钙化。方法大鼠VSMCs分为对照组、高糖组(35μmol/L D-葡萄糖)、内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)组、p38 MAPK通路抑制剂SB203580组、β-磷酸甘油组、4-PBA+高糖组、SB203580+高糖组、β-磷酸甘油+高糖组,分别用比色法、o-cresolphthalein法和Western blot测定碱性磷酸酶(ALP)活性、钙含量和骨分化转录因子(Runx2和Osterix)表达。结果 D-葡萄糖处理3、7d上调VSMCs ALP活性、钙含量和骨分化标志蛋白表达;SB203580下调ALP活性、钙含量和骨分化转录因子表达,而4-PBA抑制高糖引起VSMCs内质网应激及凋亡。结论 p38 MAPK通路通过激活内质网应激和凋亡可能是高糖诱导VSMCs钙化的重要机制。