Musculin影响小鼠骨髓来源树突状细胞生物学功能的初步研究

目的探讨新型转录因子Musculin对小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDC)生物学功能的影响。方法获取野生型(wildtype,WT)和Musculin敲除(knockout,KO,-/-)小鼠骨髓细胞,用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)和IL-4体外诱导BMDC,7 d后加入脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),继续培养24 h;动态观察细胞形态变化,收集WT组和Musculin-/-组BMDC及上清,流式细胞术分析各组细胞表达CD11c、CD40、CD80、CD86、PD-L1和IAIE的比例,CCK-8法检测各组细胞刺激异源淋巴细胞增殖情况,并计算刺激指数(stimulation indexes,SI),ELISA法检测各组细胞上清中IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12(P40)、IL-12(P70)和TNF-α的水平。结果与WT组比较,Musculin-/-组BMDC形态相似,纯度无明显差异;表面共刺激分子CD40、CD80和CD86的比例显著下降(P<0.05),共抑制分子PD-L1和MHC-Ⅱ分子IAIE的比例也降低,但差异无统计学意义;刺激异源淋巴细胞后的数量和刺激指数上升,尤其是刺激5 d以后(P<0.05);上清中促炎因子IL-1β、IL-6、IL-12(P40)、IL-12(P70)和TNF-α水平显著升高(P<0.05),但抗炎因子IL-10的水平变化不明显。结论Musculin可能增强BMDC介导的免疫功能并抑制炎症反应,提示Musculin能够调控BMDC的生物学功能。

Musculin KO-Foxp3-GFPKI小鼠模型的制备及在严重创伤介导Treg-Th17失衡中的初步应用

目的制备转录因子Musculin(MSC)敲除(knockout,KO)-叉状头转录因子家族成员3(forkhead box P3,Foxp3)-绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)敲入(knockin,KI)小鼠模型,并初步应用于严重创伤介导调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)-Th17失衡研究。方法通过MSCKO纯合子(homozygote,-/-)小鼠和Foxp3-GFPKI纯合子(homozygote,+/+)小鼠杂交,获取MSCKO(heterozygote,+/-)-Foxp3-GFPKI(+/-)杂合子小鼠,再按同笼兄妹近亲繁殖方法进行杂合子配对,直到获取MSCKO-Foxp3-GFPKI纯合子小鼠。将获得MSCKO-Foxp3-GFPKI小鼠连续交配5代以上,观察各代小鼠的基因型、表现型和遗传稳定性。对获取的MSCKO-Foxp3-GFPKI小鼠和Foxp3-GFPKI小鼠实施失血/骨折,3 h后取周围淋巴结(lymph nodes,LN)、肠系膜淋巴结(mesenteric lymph nodes,MLN)、肠道集合淋巴结(Peyer’s patches,PP)、脾(spleen,SP)、骨髓(bone marrow,BM)和胸腺(thymus,Thy)。流式细胞术检测机体免疫器官和组织Treg的分布变化,qPCR检测MSC、Foxp3、孤核受体-γt(orphan nuclear receptor-γt,ROR-γt)的表达水平,进一步验证MSCKO-Foxp3-GFPKI小鼠的实用性,并初步探讨MSC对严重创伤介导Treg-Th17失衡的影响。结果杂交获得的各代MSCKO-Foxp3-GFPKI纯合子小鼠均能表达各分子标志物,活力、体质量和繁育能力正常。流式细胞术检测结果显示,各免疫器官和组织中均存在不同强度的GFP信号;严重创伤3 h后,MSCKO-Foxp3-GFPKI小鼠Treg在LN、MLN、PP和SP中的百分比分别为5.81%、4.81%、1.41%和3.1%,较创伤前差异有统计学意义。qPCR检测结果显示,相对正常组而言,野生型创伤组MSC在外周淋巴器官MLN(6.154 9)和PP(7.789 7)中的相对表达量显著升高(P<0.05,P<0.01);Foxp3在MSCKO创伤组MLN(2.591 2)和PP(1.506 4)中的相对表达量上升(P<0.01),表明MSC缺失可使创伤后Treg-Th17平衡左移;而ROR-γt在同组MLN(0.5395)和PP(0.544 9)中的相对表达量下降(P<0.01),同样证实了Treg-Th17平衡发生了偏移。结论成功制备MSCKO-Foxp3-GFPKI小鼠,遗传性状稳定,分子标志物和表现型明确。严重创伤后MSC可以影响Treg的分布,并使Treg-Th17平衡发生偏移,提示MSC可能作为严重创伤后恢复机体内环境免疫稳态的潜在调节靶点。

Musculin调控免疫细胞的研究进展

作为碱性螺旋–环–螺旋结构的新型转录抑制因子,Musculin不仅参与哺乳动物骨骼肌的发生、组织发育和分化,还可以调控T细胞、B细胞及天然淋巴细胞的分化与功能,可能作为免疫疾病中相关免疫细胞的关键调控因子。因此,该文就近年来Musculin调控免疫细胞的研究进展作一综述。

曲古抑菌素A抑制小鼠周围淋巴结细胞分泌功能

目的研究曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对小鼠周围淋巴结细胞分泌功能的影响,并初步探讨其机制。方法颈椎脱臼法处死成年雄性C57BL/6小鼠,取周围淋巴结(peripheral lymph nodes, LN)、肠系膜淋巴结(mesenteric lymph nodes, MLN)、派伊尔结(Peyer’s patches, PP)、脾脏(spleen, SP)、骨髓(bone marrow, BM)和胸腺(thymus, Thy),采用qPCR检测各免疫器官中Musculin(MSC)、IL-17A和IL-22的mRNA水平。取小鼠高表达MSC、IL-17和IL-22的免疫组织制备细胞悬液,采用完全随机试验设计分为对照组、1μg/mL脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)组、1μg/mL LPS+10 ng/mL TSA组、1μg/mL LPS+30 ng/mL TSA组和1μg/mL LPS+50 ng/mL TSA组,置于37℃、5%CO2培养箱中分别培养6、12 h和24 h。收集上清及细胞,采用ELISA检测细胞上清中TNF-α和IL-10的分泌水平,确定TSA处理的最佳时间点。采用qPCR检测该时间点细胞MSC、IL-17A和IL-22的mRNA水平。结果与野生型小鼠中枢免疫器官BM相比,小鼠LN高表达MSC、IL-17A和IL-22(P<0.01,P<0.05);同样与Thy相比,小鼠LN也高表达MSC、IL-17A和IL-22(P<0.05)。与LPS组相比,不同浓度TSA能够降低各时间点小鼠LN细胞分泌TNF-α和IL-10的水平(P<0.01,P<0.05),并下调IL-17A和IL-22的表达(P<0.01),同时上调MSC(P<0.01,P<0.05),其最佳时间点是12 h。结论 TSA能够抑制LPS刺激LN细胞的分泌功能,其机制可能与MSC、IL-17A和IL-22的表达变化有关。

女性电影的情感视角

电影家们在创作中自觉地探讨女性意识,以鲜明的颠覆父权中心文化的女性主义创作方式书写女性的生存状态与喜怒哀乐,以独特的视点和非凡的胆识在电影史上赢得重要的席位;运用女权主义的观点对女性重新定位,其文化视角主要是对父权中心文化的颠覆、消解与反叛;对女性主题的深刻的人文化的关注;对女性的欣赏甚至膜拜;对男权文化或隐或显的嘲弄与抨击。同时,运用各种细腻圆熟、精雕细刻的手法对女性喜怒哀乐的抒写,构成独特的女性化的话语诉说。女性电影美学无疑是对百年的电影艺术的一大贡献。而在女性电影繁荣下的隐藏的深刻危机,恰是强大的男权话语笼罩的危机所致。