超高效液相色谱质谱法快速测定血浆中6种蘑菇毒素

目的 建立超高效液相色谱质谱法快速测定血浆中异绒白乳菇醛、α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽和羧基二羟鬼笔毒肽的含量。方法 取血浆样本,以1∶3的比例加入乙腈,旋涡混匀1min后,以10 000转/min、4℃离心3min。吸取上清液,以0.03%氨水和乙腈进行超高效液相分离,在电喷雾正离子模式下进行多反应监测检测。结果 一次进样4min即可实现血浆中异绒白乳菇醛、α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽和羧基二羟鬼笔毒肽的分离检测。血浆中6种蘑菇毒素的线性范围为40~500μg/L,检出限分别为10.0μg/L、10.0μg/L、10.0μg/L、6.0μg/L、6.0μg/L和6.0μg/L(S/N=3),相对标准偏差为0.60%~1.90%(n=11),回收率为90.8%~127.0%。结论 本方法可实现血浆中包括异绒白乳菇醛在内的6种蘑菇毒素的快速同时测定,操作简单,结果准确,为中毒患者的蘑菇毒素快速确证提供技术平台。

关于蘑菇中毒诊疗的一些思考

毒蘑菇种类繁多,毒素复杂且未知,中毒后没有特效解毒药,且毒蘑菇种属不断更新,剧毒蘑菇中毒后病死率高,给临床诊治带来极大挑战。本文针对蘑菇中毒诊疗中遇到的问题提出一些思考及建议,以期减少蘑菇中毒发生率,提高临床救治成功率。

QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定野生菌中的15种蘑菇毒素

目的基于线性离子阱质谱的多重反应监测-信息依赖采集-增强子离子扫描(multiple reaction monitoring-information dependent acquisition-enhanced product ion scan,MRM-IDA-EPI)二级谱图筛查方法,建立超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)定量检测和定性筛查野生菌中15种蘑菇毒素。方法野生菌样本通过甲酸-甲醇-水-乙腈(1:40:40:19,V:V:V:V)混合溶液超声提取,QuEChERS试剂提取净化,采用UPLC-MS/MS和MRM-IDA-EPI方法对15种蘑菇毒素进行定量分析和定性筛查。结果通过野生菌样本前处理方法和色谱条件优化,对15种蘑菇毒素进行0.04、0.10和0.40 mg/kg三水平加标回收实验,方法准确度为76.6%~109.2%,精密度为0.3%~7.6%;15种蘑菇毒素的线性范围为10~1000μg/L,线性相关系数(r)在0.9980~0.9994之间;其中α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、光盖伞素和鹅膏蕈氨酸的方法检出限(limits of detection,LODs)和定量限(limits of quantification,LOQs)分别为10μg/kg和30μg/kg,二羟鬼笔毒肽、羧基二羟鬼笔毒肽、羧基三羟鬼笔毒肽、毒蝇碱、蝇蕈醇、甲基裸盖菇素、鹿花菌素、脱磷酸裸盖菇素、奥来毒素和鬼伞菌素的LODs和LOQs分别为20μg/kg和60μg/kg,采用QuEChERS前处理方法对野生菌样本进行处理,样本基质效应系数K值在0.91~1.08之间。结论所建立的野生菌样本前处理方法对15种蘑菇毒素的定量测定无基质干扰,15种蘑菇毒素的UPLC-MS/MS和MRM-IDA-EPI分析方法结果准确、重现性好、灵敏度高,该方法适用于有毒野生菌引起的食源性中毒定量分析和定性筛查。

毒蘑菇鉴别技术研究进展

大型真菌是地球上宝贵的生物资源,尤其是食药用价值丰富、生态功能显著的种类。毒蘑菇既是大型真菌资源的重要组成部分,也是限制野生经济真菌开发利用的关键阻碍。因此,无论是真菌分类的科学研究还是毒蘑菇中毒防治的公众科普教育,系统开展毒蘑菇鉴别技术研究和成分安全性检测都尤为重要。本文从毒蘑菇鉴别方法、毒蘑菇中毒类型及常见种类、蘑菇毒素与中毒机制、毒素检测技术等方面对国内外近几十年,有关毒蘑菇鉴别技术的研究现状、最新成果和发展趋势进行了综述,并基于互联网大数据、智能图像识别和化学反应融合发展等,对未来毒蘑菇快速检测试剂盒的研发及应用进行了展望,旨为毒蘑菇识别与中毒防治科学研究及科普教育提供系统性理论依据和参考。

超高效液相色谱-串联质谱法检测蘑菇中6种蘑菇毒素的不确定度评定

以BJS 202008《蘑菇中α-鹅膏毒肽等6种蘑菇毒素的测定》方法为基础,参照JJF 1059.1—2012《测量不确定度评定与表示》和CNAS-GL006《化学分析中的不确定度评估指南》建立相关数学模型,对高效液相色谱-串联质谱法检测蘑菇中6种蘑菇毒素的不确定度来源进行分析与评定,包括样品重复测量、液相色谱-串联质谱仪、标准溶液配制、标准曲线拟合、样品处理。通过计算各个不确定度分量,得到测量结果的合成相对标准不确定度和扩展不确定度。蘑菇中6种蘑菇毒素质量分数测定结果为136.4~141.4μg/kg时,扩展不确定度为3.98~5.74μg/kg(k=2)。测定结果的不确定度主要受样品重复测量和标准溶液配制的不确定度影响。

UPLC-MS/MS法测定蘑菇、科研用人血清和尿液中5种鹅膏肽类毒素的方法研究

本文建立了适用于蘑菇、科研用人血清和尿液样本中5种鹅膏肽类毒素的超高效液相色谱-串联质谱分析方法。样品经乙腈提取和水稀释后,采用XSelect HSS T3(3mm×150mm,2.5μm)进行色谱分离,以0.01%甲酸-乙腈和水为流动相进行梯度洗脱,串联质谱-电喷雾离子源(ESI)正离子模式检测。5种鹅膏肽类毒素在1~50ng/mL范围内呈现良好线性关系,相关系数均大于0.99,蘑菇样品方法检出限为0.06 mg/kg,定量限为0.2 mg/kg,在3个加标水平下平均回收率为92.6%~124.0%,相对标准偏差为3.2%~14.8%(n=6);科研用人血清样品方法检出限为0.01 mg/L,定量限为0.03 mg/L,在3个加标水平下平均回收率为85.5%~123.5%,相对标准偏差为0.9%~16.4%(n=6);科研用人尿液样品方法检出限为0.005 mg/L,定量限为0.015 mg/L,在3个加标水平下平均回收率为84.8%~119.3%,相对标准偏差为0.9%~16.1%(n=6)。本方法简单快速,高效准确,适用于蘑菇、科研用人血清和尿液中5种鹅膏肽类毒素的快速检测,为突发事件应急检验提供参考依据。

基于液相色谱-串联质谱技术快速检测6种蘑菇毒素及临床应用探讨

目的基于液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术建立快速检测血液、尿液中6种蘑菇毒素的分析方法,并将其应用于临床实际中毒案例。方法将0.1 mL血液、尿液经蛋白沉淀、氮吹复溶、超声过滤后用ACQUITY UPLC HSS T3液相色谱柱分离,质谱检测采用多反应监测模式(MRM)。结果该分析方法经过验证,符合方法学验证要求,其定量结果准确可靠,并于9例患者血液和(或)尿液样品中检出目标毒素,血液样品中浓度为1.12~5.63 ng/mL,尿液样品中浓度为1.01~9.27 ng/mL,检出物多为γ-鹅膏毒肽(γ-AMA)。新鲜蘑菇样品中检出目标物浓度为1.48~41.54 ng/mg,两份新苦粉孢牛肝菌样品中均检出羧基二羟基鬼笔毒肽(PCD)16.51~41.54 ng/mg。结论本研究中建立的LC-MS/MS方法前处理过程简单快速,具有较高的灵敏度,能同时检测多种蘑菇毒素类化合物,可为临床毒蕈中毒快速诊断提供策略和参考。

在线液相色谱-二极管阵列检测器-串联质谱法检测野生菌中鹅膏毒肽和鬼笔毒肽

建立了在线液相色谱-二极管阵列检测器-串联质谱技术(LC-DAD-MS/MS)同时测定野生菌中多肽类蘑菇毒素(鹅膏毒肽和鬼笔毒肽)的分析方法。样品经甲醇提取,水稀释后,在碱性条件下用XBridge^(TM) BEH C_(18)柱(150m m×3.0 m m,2.5μm)分离,并先后用DAD和MS/MS检测。使用碱性流动相能够实现5种多肽类蘑菇毒素在15 m in内达到基线分离,同时又能有效抑制质谱加钠峰[M+Na]^+的响应信号,保证检测的稳定性和灵敏度。5种蘑菇毒素在0.05~500 mg/kg范围内线性关系良好,相关系数(r)>0.99;检出限为0.005~0.02 mg/kg。通过实际样品检测,证明该法操作简单、快速,灵敏度高,宽的定量检测线性范围能满足实际样品中蘑菇毒素含量变化大的特点。

蘑菇的毒性成分及其应用研究现状

对主要蘑菇的毒性成分、中毒机理、鉴别方法及其在医药和生物学领域内的应用前景做一概述。

某市36起毒蕈中毒事件调查

目的 :了解长沙市毒蕈中毒发生情况 ,以预防类似事件的发生。方法 :统计了湖南省从 1994～ 2 0 0 0年的 36起毒蕈中毒事件 ,并测定了主要毒蕈的毒素含量。结果 :在中毒事件中 ,共有 2 10人食用 ,2 0 5人中毒 ,中毒率为 97.6 2 % ;83人死亡 ,死亡率为 39.5 2 %。引起中毒的主要毒蕈为 :灰花纹鹅膏、白毒鹅膏、鳞柄白毒鹅膏、亚稀褶黑菇。中毒多发生在6月至 8月。结论 :中毒原因主要是食用者缺乏对毒蕈的认识、中毒后死亡率高的原因是因为毒蕈含毒素量高、中毒后就诊确诊太晚和缺乏特效解毒药物。

超高效液相色谱-串联质谱法测定毒蘑菇中5种强毒性蘑菇毒素含量

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法快速检测毒蘑菇中α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、羧基二羟鬼笔毒肽和二羟鬼笔毒肽5种强毒性蘑菇毒素含量的分析方法。方法样品经甲醇/水(3:7, V:V)混合液超声提取,离心后取上清液过0.22μm微孔滤膜,C18色谱柱分离,超高效液相色谱-串联质谱仪上采用多反应监测正离子模式测定,外标法定量检测。结果蘑菇样本中检测出α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽和羧基二羟鬼笔毒肽4种蘑菇毒素,浓度分别为164、198、33、2208 mg/kg。结论本方法快速简便、准确,可用于因蘑菇毒素引起的食物中毒应急检测。

超高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中蘑菇毒肽的含量

提出了用超高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中6种蘑菇毒肽含量的方法。取人血浆样品1.0mL,先后用乙腈-甲醇(1+1)混合溶液(每次用3mL)超声提取10min,离心5min,合并2次上层提取液,于50℃吹氮至近干,加入甲醇和5%(体积分数)氨水(1+4)的混合溶液溶解残渣,并定容至1.0mL,此溶液经0.22μm滤膜过滤,取滤液进行色谱分离和质谱测定。选用BEH C18色谱柱作为固定相,并用不同比例的(A)甲醇和(B)5%(体积分数)氨水的混合液作为流动相进行梯度洗脱。质谱分析时,选择电喷雾离子源正离子(ESI+)模式在弱碱性条件下,用多反应监测(MRM)模式测定6种蘑菇毒肽(α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、二羟基鬼笔毒肽、羧基二羟基鬼笔毒肽和羧基三羟基鬼笔毒肽)的含量。上述6种蘑菇毒肽标准曲线的线性范围均在3.12~125μg·L-1之间,其测定下限(10S/N)在2.0~5.0μg·L-1之间。回收试验测得回收率在78.4%~106%之间,测定值的相对标准偏差(n=6)在2.3%~14%之间。

TurboFlow在线净化-液相色谱-串联质谱法快速检测人尿中鹅膏肽类毒素

鹅膏肽类毒素是一类环状多肽类蘑菇毒素,中毒后会造成急性肝损伤,病死率非常高。我国因误食野生毒蘑菇导致的中毒事件常有发生,测定人尿中鹅膏肽类毒素的浓度,可为临床早期诊断和救治提供有价值的信息。该研究建立了TurboFlow(TF)在线净化-液相色谱-三重四极杆质谱快速定量检测尿液中5种鹅膏肽类毒素(α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、羧基二羟鬼笔毒肽和二羟鬼笔毒肽)的新方法。尿液样品经高速离心后,直接注入TurboFlow在线净化-液相色谱-串联质谱进行分析。对影响TF在线净化的参数如TF净化柱、上样溶剂、洗脱溶剂、转移流速、转移时间等进行了优化。在优化后的实验条件下,以TurboFlow TM Cyclone柱(50 mm×0.5 mm)为净化柱,Hypersil GOLD C 18柱(100 mm×2.1 mm)为分析柱,甲醇和4 mmol/L乙酸铵为流动相进行梯度洗脱,电喷雾正离子选择反应监测(SRM)模式下进行检测,基质匹配外标法定量。结果表明,鹅膏肽类毒素在1.0~50.0μg/L范围内呈现良好的线性关系,相关系数均可达到0.997以上。方法的检出限为0.15~0.3μg/L,定量限为0.5~1.0μg/L。在2.0、5.0和10.0μg/L的加标水平下,5种鹅膏肽类毒素的日内和日间回收率分别为87.0%~108.6%和86.8%~112.7%,日内、日间相对标准偏差(RSD)均小于14.5%。该检测方法准确、快速、灵敏度高、易操作,适用于公共卫生应急检测或临床中毒病因识别检测。

河南的鹅膏菌属毒菌及毒素与中毒类型

鹅膏菌属（Ａｍａｎｉｔａ）隶属于鹅膏菌科（Ａｍａｎｉｔａｃｅａｅ），有毒菌多。本文就河南境内生长分布的鹅膏菌属毒菌种类及其毒素和中毒类型进行论述和分析，以供防治中毒与毒素的研究应用。

蕈菌毒素检测技术研究进展

世界各国每年都会发生误食毒蕈的中毒事件,我国突发公共卫生事件管理信息系统收到的食物中毒类突发公共卫生事件中,毒蕈食物中毒事件占比最多,严重危害了人们的健康。为了防止毒蕈中毒和中毒后准确确定中毒因子,为临床治疗提供科学的依据,采用快速、有效、准确的蕈菌毒素检测技术具有重要的意义。本文对目前主要的蕈菌毒素种类、中毒类型以及相应的检测技术进行了概述,重点介绍了化学显色法、薄层层析法、放射免疫法、酶联免疫法、傅里叶变换红外光谱法、高效液相色谱法及液相色谱-质谱法等7种检测技术的研究进展及各方法的实用性和优缺点,同时对蕈菌毒素的检测技术在我国的应用和发展进行了讨论和展望。

毒蘑菇菌株及毒素粗提液对樟子松枯梢病菌生长的影响

厚环鹅膏、鹅膏菌、珊瑚菌、白霜杯伞、冠状柄环菇、细鳞环柄菇、鳞柄白鹅膏、绒白乳菇、毒蝇鹅膏9个毒蘑菇菌株及毒素粗提液对樟子松枯梢病原菌菌丝生长影响的研究结果表明:除厚环鹅膏和鹅膏菌外,其他7个菌株对病原菌生长均有一定的抑制作用;鳞柄白鹅膏和细鳞环柄菇相对抑制效果最好,分别为10.80和10.40。除毒蝇鹅膏外,其他8个菌株的毒素粗提液对病原菌菌丝生长均有一定的抑制作用,珊瑚菌和绒白乳菇毒素粗提液的抑菌效果最好,抑菌率分别达到63.89%和58.89%。

毒蕈毒素及其应用

对毒蕈毒素的性质、中毒机理及其在医药和生物学领域的应用做一概述。

毒蕈鉴别及毒素检测研究进展

我国各地每年经常发生人误食毒蕈中毒事件,危害严重,对可食蘑菇与毒蕈之间的区分识别是预防中毒的基本措施。对一些毒蕈的鉴别及各类毒蕈毒素的检测方法进行了概述,最后提出慎重采食的建议,以此避免毒蕈中毒悲剧的发生。

急性重症毒蕈中毒心肌损害临床研究

目的:探讨急性重症毒蕈中毒心肌损害及对预后的影响。方法:收集我院1998～2007年18例急性重症毒蕈中毒患者临床资料,对其进行回顾性分析,比较治疗前后的生化指标变化。结果:18例急性重症毒蕈中毒不仅有胃肠道、肝、肾毒性作用,心肌的毒性作用尤为突出,主要表现为心肌酶谱增高、心电图改变及恶性心律失常。给予常规解毒、心肌保护、抗心律失常、血液净化等综合治疗后,血CR、BUN、ALT、AST、LDH、CK、C-MB、HBDH明显下降,治疗前后有显著性差异(P<0.05),全组死亡2例,均死于室性心动过速。结论:重症毒蕈中毒具有明显心肌毒性作用,易引起恶性心律失常,是死亡的主要原因。运用血液灌流和血液透析等综合治疗,疗效显著,改善预后。

致幻蘑菇及其毒素

致幻蘑菇是一类具有致幻作用的真菌,随着服用毒品人数的增加,致幻蘑菇逐渐为人们所重视.本文从种类、性质,中毒症状及毒蘑菇鉴别等方面,综述了近十年来国内外致幻蘑菇研究概况和最新进展,并对该毒素的结构性质、检测方法进行了探讨.