瓜蒂催吐作用有效部位的初步筛选

目的:分离并初步筛选瓜蒂催吐作用的有效部位。方法:以80%乙醇回流提取制得的瓜蒂总提取物后,用硅胶柱溶剂极性依次递增分离法(石油醚-乙酸乙酯-甲醇连续洗脱)制得的分段提取物(石油醚Ⅰ、乙酸乙酯Ⅱ、甲醇Ⅲ)为药效研究对象,筛选对犬致吐作用有活性的有效部位,最后通过特殊颜色反应确定有效部位的化学性质。结果:瓜蒂中乙酸乙酯提取物具有催吐作用,与蒸馏水组相比差异有显著性(P<0.01)。颜色反应说明该部位主要含有葫芦素等物质。结论:瓜蒂催吐作用有效部位可能是总葫芦素类。

瓜蒂水提物和醇提物对食管癌TE-1、EC-1细胞的增殖、迁移、克隆形成的影响及机制研究

目的:研究瓜蒂水提物和醇提物对食管癌TE-1、EC-1细胞增殖、迁移、克隆形成的影响及作用机制。方法:体外培养TE-1、EC-1细胞,分别加入质量浓度均为0、1.5625、3.125、6.25、12.5、25、50、100、200μg/mL的瓜蒂水提物或醇提物(以提取物粉末计)进行培养,采用MTT法检测细胞的生长抑制率并计算半数抑制浓度(IC50)。将TE-1、EC-1细胞分为TE-1/EC-1空白组、TE-1/EC-1瓜蒂水提物组(药液浓度均为IC50)、TE-1/EC-1瓜蒂醇提物组(药液浓度均为IC50),采用实时无标记细胞分析(RTCA)法检测各组细胞的增殖与迁移,绘制细胞增殖、迁移曲线;采用显微镜观察各组细胞形态学的变化;采用软琼脂克隆形成试验分析各组细胞克隆形成能力的变化,并计算细胞克隆形成率;采用流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期、凋亡率;采用Western blotting检测各组细胞表皮生长因子受体(EGFR)、蛋白激酶C-α(PKC-α)的相对表达量。结果:瓜蒂水提物作用于TE-1、EC-1细胞的IC50分别为49.24、76.38μg/mL,瓜蒂醇提物作用于TE-1、EC-1细胞IC50分别为9.08、14.53μg/mL;瓜蒂水提物和醇提物加药后30 h内对细胞有增殖抑制作用;瓜蒂水提物和醇提物加药后60 h内对细胞有迁移抑制作用。与TE-1/EC-1空白组比较,各加药组细胞数量明显减少,细胞结构松散,多数细胞轮廓消失、变圆等;细胞克隆形成率显著下降(P<0.01);G2期细胞百分率显著升高(P<0.01),G1期、S期细胞百分率显著降低(P<0.05);早、晚期凋亡率均显著增加(P<0.05);EGFR、PKC-α蛋白相对表达量显著降低(P<0.01)。与TE-1/EC-1瓜蒂水提物组比较,TE-1/EC-1瓜蒂醇提物组细胞克隆形成率显著下降(P<0.05);G2期细胞率显著升高(P<0.05);EGFR、PKC-α蛋白相对表达量显著降低(P<0.01);TE-1瓜蒂醇提物组早、晚期细胞凋亡率显著降低(P<0.05);EC-1瓜蒂醇提物组早、晚期细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。结论:瓜蒂水提物和醇提物可影响TE-1、EC-1细胞增殖、迁移、克隆形成的能力,促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调EGFR、PKC-α蛋白有关。