鲨鱼肠道蛋白酶的分离纯化及性质的初步研究

以鲨鱼肠为材料，经柠檬酸缓冲液抽提，硫酸按分级分离，ＣＭ－纤维素离子交换柱层析纯化，获得蛋白酶（Ｉ）和蛋白酶（Ⅱ）．研究了蛋白酶Ⅱ性质．酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一蛋白纯，酶的紫外吸收特征峰在２７５ｎｍ处．测得酶的分子量为１８ｋｄ．在ｐＨ８．０、３７Ｃ下酶催化酪蛋白水解的Ｋｍ、值为６．９５×１０￣（－６）ｍｏｌ／Ｌ．酶水解酪蛋白的最适温度为５２℃，活化能为７６．５３ｋＪ／ｍｏｌ．几种金属离子对酶活力的影响研究表明：Ｃａ￣（２＋）对酶有激活作用，而Ｃｕ￣（２＋）、Ａｇ￣＋、Ｈｇ￣（２＋）有不同程度的抑制作用。

鲨鱼肠蛋白酶活性必需基团的研究

用化学修饰法结合酶的紫外吸收光谱变化研究灰星鲨（ＭｕｓｔｅｔｕｓＧｒｉｓｅｕｓ）肠蛋白酶的功能基团性质，结果表明：色氨酸残基、组氨酸残基、赖氨酸残基及精氨酸残基均与酶活性有关，而羧基、巯基与酶活性无关。