MutL蛋白同系物1/MutS蛋白同系物2表达缺失与弥漫浸润型胃癌临床病理特征及预后关系

目的探讨MutL蛋白同系物1(MLH1)/MutS蛋白同系物2(MSH2)表达缺失与弥漫浸润型胃癌临床病理特征及预后关系。方法回顾性分析2020年3月至2022年7月皖南医学院第二附属医院收治的157例弥漫浸润型胃癌患者的临床资料,分析MLH1/MSH2表达缺失与弥漫浸润型胃癌临床病理特征的关系,随访1年,记录患者生存情况,分析弥漫浸润型胃癌患者预后的影响因素。结果157例患者中,MLH1/MSH2表达缺失16例,缺失率为10.19%。低分化、Ⅲ期、淋巴结转移的患者MLH1/MSH2表达缺失率高于中高分化、Ⅰ~Ⅱ期、淋巴结未转移患者,差异有统计学意义(P<0.05)。随访1年,MLH1/MSH2表达未缺失患者生存曲线优于MLH1/MSH2表达缺失患者,差异有统计学意义(P<0.05)。TNM分期、术后并发症、MLH1/MSH2表达缺失为弥漫浸润型胃癌患者预后的危险因素(P<0.05)。结论MLH1/MSH2表达缺失与弥漫浸润型胃癌患者肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移及预后密切相关,且MLH1/MSH2表达缺失者预后更差。

猪非典型瘟病毒云南株Mut蛋白的特征分析及其对宿主细胞NF-κB转录活化的影响

猪非典型瘟病毒(APPV)是近年来新发现的猪病毒性病原,给养猪业健康发展带来了严重的威胁。课题组前期研究发现了APPV云南株(APPV-YN)导致感染猪临床症状非典型化的关键基因Mut,为探讨APPV-YN Mut的生物学特征及其对宿主细胞NF-κB信号通路转录活化的影响,揭示APPV非典型化的机制。利用SnapGene、ProtParam、PredictProtein、TMHMM、SignaIP 4、ProtScale等在线软件对APPV-YN Mut基因表达蛋白的理化性质、亚细胞定位、磷酸化位点等进行分析预测;将重组载体pCMV-Mut转染至HEK-293细胞,确定蛋白稳定表达后利用TNF-α刺激NF-κB信号通路使其活化,分析APPV-YN Mut对NF-κB转录活性及其对NF-κB P65核质转运的影响。生物信息学分析结果显示,Mut蛋白为亲水性的稳定蛋白,无跨膜结构和信号肽,可能主要定位于细胞质,二级结构主要以无规则卷曲为主,三级结构稳定,可能作用于PKC、P38MAPK、PKA、EGFR、CDK5等相关激酶及蛋白受体;Mut蛋白在HEK-293细胞成功表达,大小约为15 ku;Mut对TNF-α激活的NF-кB转录活化有明显抑制作用,干扰NF-κB P65的入核,抑制核质穿梭过程。研究结果为后续进一步在分子水平上探究Mut在APPV非典型化中的作用奠定了基础。

DNA错配修复蛋白MutS和MutL的相互作用研究(英文)

MutL和MutS是DNA错配修复系统中起关键作用的修复蛋白.利用基因融合技术高效表达了MutL和MutS融合蛋白,并利用它们发展了一种研究二者相互作用的简便方法.融合蛋白MutL-GFP(Trx-His6-GFP-(Ser-Gly)6-MutL),MutL-StreptagⅡ(Trx-His6-(Ser-Gly)6-StreptagⅡ-(Ser-Gly)6-MutL)和MutS(Trx-His6-(Ser-Gly)6-MutS)被构建并在大肠杆菌中高效表达.收集菌体细胞、超声波破碎后离心取上清进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,结果表明有与预期分子质量相应的诱导表达条带出现,其表达量约占全细胞蛋白的30%且以可溶形式存在.利用固定化金属离子配体亲和层析柱分别纯化融合蛋白,其纯度达到90%.通过将MutS蛋白固定的方法研究两种MutL融合蛋白分别与MutS之间的相互作用.结果表明:只有MutS蛋白与含有错配碱基DNA分子结合后才与MutL蛋白发生相互作用.通过检测MutL融合蛋白标记的绿色荧光信号或酶学显色信号来鉴定相互作用的发生.建立的融合分子系统方法也为研究其他的蛋白质或生物大分子之间的相互作用提供了一个技术平台.

MutL融合蛋白的高效表达及其伴侣功能研究(英文)

DNA错配修复蛋白MutL和其它的修复蛋白相互作用来共同完成大肠杆菌甲基介导的错配修复过程 .为研究修复蛋白MutL的体外生物功能构建了融合蛋白Trx His6 Linkerpeptide MutL(THLL)的表达载体并使其高效表达及易于纯化 .mutL基因片段是以E .coliK 12基因组为模板经PCR扩增获得 ,并通过基因的体外拼接成功构建了融合蛋白THLL表达载体pET32a linkerpeptide mutL .重组菌株E .coliAD4 94 (DE3) pET32a linkerpeptide mutL经过IPTG的诱导表达了融合蛋白THLL .收集菌体细胞、超声波破碎后离心取上清进行SDS PAGE分析 ,结果表明有一与预期分子量(84kD)相应的诱导表达条带出现 ,其表达量约占全细胞蛋白的 30 %且以可溶形式存在 .利用固定化金属离子 (Ni2 +)配体亲和层析柱纯化融合蛋白THLL ,其纯度达到 90 % .通过非变性凝胶电泳分析 ,对融合蛋白THLL在DNA错配修复过程中的分子伴侣生物功能进行了系统研究 .结果表明 ,THLL能增加融合蛋白Trx His6 Linkerpeptide MutS (THLS)与含有错配碱基DNA双链的结合 。

胃癌患者病灶组织CK7、HER2、MLH1、MSH2及MSH6的表达变化研究

目的:探究胃癌患者病灶组织角蛋白7(CK7)、人表皮生长因子受体-2(HER2)、错配修复蛋白MutL同源物1(MLH1)、错配修复蛋白MutS同源物2(MSH2)及错配修复蛋白MutS同源物6(MSH6)的表达变化情况。方法:选取2020年2月—2023年1月苏州市相城人民医院收治的120例胃癌患者为研究对象,比较病灶组织及癌旁组织的CK7、HER2、MLH1、MSH2及MSH6的表达情况,并比较不同性别、年龄、TNM分期、分化程度、淋巴结转移情况及病灶位置者的病灶组织CK7、HER2、MLH1、MSH2及MSH6表达情况。结果:胃癌患者病灶组织CK7、HER2阳性率及MLH1、MSH2、MSH6表达缺失率显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。不同性别、年龄及病灶位置病灶组织的CK7、HER2、MLH1、MSH2及MSH6表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);Ⅲ期、Ⅳ期病灶组织CK7、HER2阳性率高于Ⅰ期、Ⅱ期,MLH1、MSH2、MSH6表达缺失率均显著低于Ⅰ期、Ⅱ期,差异有统计学意义(P<0.05)。分化程度较低者病灶组织的CK7、HER2阳性率显著高于分化程度较高者,MLH1、MSH2及MSH6表达缺失率显著低于于分化程度较高者,差异有统计学意义(P<0.05)。有淋巴结转移者CK7、HER2阳性率显著高于无淋巴结转移者,MLH1、MSH2及MSH6表达缺失率显著低于无淋巴结转移者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:胃癌患者病灶组织的CK7、HER2、MLH1、MSH2及MSH6的表达相对异常,且不同TNM分期、分化程度及淋巴结转移情况者的差异较大。

毕赤酵母Mut^+和Mut^s重组子表达美洲商陆抗病毒蛋白基因的比较

将N末端信号肽和C末端毒性区域缺失突变的美洲商陆抗病毒蛋白 (pokeweedantiviralprotein ,PAP)基因表达载体pPIC9K P酶切线性化后 ,通过电击转化整合到巴氏毕赤酵母 (Pichiapastoris)GS115菌株细胞中 ,PCR筛选出表型为利用甲醇快速型(Mut+ )的重组子。在相同培养条件下比较Mut+ 重组子和利用甲醇缓慢型 (Muts)重组子在表达缺失突变型PAP方面的异同。结果表明 ,诱导培养 4 8h后 ,Mut+ 重组子表达产物在SDS PAGE胶上可见清晰目的带 ,而Muts 重组子培养 72h才能见到微弱的目的带。抗病毒活性实验表明Mut+ 重组子和Muts 重组子的表达产物均对TMV病毒侵染有明显的抑制作用 。

植物碱基错配修复系统中Muts蛋白家族研究进展

DNA错配修复(mismatch repair,MMR)是DNA损伤修复的一个重要途径,主要用于细胞中DNA合成和遗传重组时发生损伤过程中出现的单个或少数碱基的缺失、插入以及错配的修复,它对维持基因组稳定性和DNA复制保真度至关重要。原核生物和真核生物中都有非常保守的MMR系统。在人体DNA修复系统的研究中,发现癌症的发生与Muts蛋白家族功能缺陷密切相关。类似的在拟南芥和水稻中功能缺陷的Muts蛋白家族(同源蛋白Muts homolog,MSH)会产生增变基因表型,这将为植物的基因功能分析和育种利用奠定基础。基于此,本文综述了近年来有关植物DNA错配修复及相关基因功能的研究进展,特别是植物MMR功能缺陷导致基因突变和微卫星不稳定造成的性状畸形进行了描述,对Muts蛋白家族各个亚基功能做了分类说明,并对植物中如何利用MSH产生的增变基因突变和如何利用突变育种研究进行了展望。

噬菌体展示技术筛选DNA错配修复蛋白MutS高亲和性抗体

目的制备MutS的高亲和抗体,以有利于MutS的检测及应用。方法利用IPTG的诱导作用,在E.coli中诱导表达目标蛋白MutS。利用亲和层析方法获得目标蛋白,并利用凝胶阻滞实验分析其活性。将MutS作为抗原,在Tomlinson抗体库中利用噬菌体展示技术来筛选MutS的高亲和力噬菌粒。将其转化到大肠杆菌后,诱导表达并通过亲和层析的方法来获得可溶性的抗体片段,并检测其亲和力。结果纯化后的MutS具有识别、结合错配DNA双链的活性。ELISA分析表明,利用噬菌体展示技术可获得MutS高亲和力的噬菌粒。将其转化到大肠杆菌HB2151后,诱导表达并纯化到抗体片段,其亲和力为0.9×108L/mol。结论利用噬菌体展示技术筛选到MutS高亲和力的抗体。

猪静脉血管内皮细胞cDNA文库构建及与猪非典型瘟病毒云南株关键变异基因互作蛋白的筛选

近几年,猪非典型瘟病毒(APPV)在世界多个养猪国家相继报道,临床症状呈不典型性,给养猪业造成了较大的经济损失。为了解猪非典型瘟病毒云南株关键变异基因(APPV-YN Mut)与宿主可能存在相互作用的蛋白,深入研究APPV-YN Mut基因的功能及其非典型化机制,利用酵母双杂交技术,构建了猪静脉血管内皮细胞(SVEC)cDNA文库,并进一步采用建立的SVEC cDNA文库与诱饵质粒pGBKT7-Mut共转Y2H Gold酵母菌,筛选与Mut蛋白相互作用的蛋白,对筛选出的蛋白进行测序和生物信息学分析。结果表明,构建的诱饵载体在酵母细胞中成功表达,且无毒无自激活;构建的SVEC cDNA文库容量大于1×106 CFU/mL,文库滴度6.2×106 CFU/mL,PCR显示文库插入片段大小在250~3000 bp,条带大小不一,符合文库大小要求;与SVEC cDNA文库筛选发现14种与Mut蛋白存在潜在互作的宿主蛋白,通过蛋白功能分析发现这些蛋白主要与病毒复制、细胞凋亡、钙离子结合、蛋白代谢和降解有关。研究结果有助于进一步探索14种潜在互作蛋白中到底哪些与Mut发生密切互作,且与病毒感染宿主密切相关,为研究APPV-YN Mut基因功能及其致非典型化作用机制奠定了理论基础。

2型糖尿病PGC-1α基因单核苷酸多态性筛查及Gly482Ser变异分析

对120例T2DM和106例NGT研究对象,筛查其PGC1α基因的单核苷酸多态性(SNP)时应用PCRSSCP和DNA测序法。发现了4种SNP,即394Thr→Thr,482Gly→Ser,528Thr→Thr,612Thr→Met。其中,PGC1α基因的482Gly→Ser多态性相关于T2DM的发生。

310例结肠癌患者组织MutS同系物和绒毛蛋白的表达与临床病理特征的相关性

目的探究结肠癌患者错配修复蛋白MutS同系物(MutS homolog,MSH)2、MSH6、绒毛蛋白(villin)表达及与病理特征的关系。方法选取我院2017年1月–2021年9月经病理确诊的310例结肠癌患者,采用免疫组化法检测MSH2、MSH6和villin表达,分析MSH2、MSH6、villin表达与结肠癌患者临床病理特征的相关性。应用多因素logistic回归分析MSH2、MSH6、villin表达与结肠癌临床病理参数的相关性,用Kaplan-Meier生存曲线比较不同蛋白表达情况的结肠癌患者2年生存率。结果患者癌组织中的MSH2、MSH6和villin蛋白阴性表达率分别为8.71%(27/310)、9.35%(29/310)和46.13%(143/310);癌旁组织中的3种蛋白阴性表达率分别为3.23%(10/310)、4.19%(13/310)和9.68%(30/310),3种蛋白在癌组织中的阴性率均高于癌旁组织(P<0.05)。回归分析显示:癌组织中MSH2及MSH6的表达与结肠癌患者年龄、肿瘤病灶位置、肿瘤分化程度和淋巴结转移相关(P<0.05);癌组织中villin表达与结肠癌患者肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移、临床分期相关(P<0.05)。MSH2、MSH6阴性表达患者2年生存率分别为51.85%、44.83%,低于MSH2、MSH6阳性表达的患者(79.51%、80.43%,P<0.05);癌组织中villin阴性表达的患者2年生存率为67.83%,低于villin阳性表达患者(85.03%,P<0.05)。癌组织中的MSH2、MSH6、villin均阴性表达(简称“三阴表达”)的患者有13例(4.1%),其2年生存率为30.77%(4/13),低于不符合三阴表达的结肠癌患者[79.12%(235/297),P<0.05]。结论MSH2、MSH6、villin表达与结肠癌患者临床病理特征相关,检测这3种蛋白表达可能有利于辅助临床进行结肠癌诊治及预后评估。

重组人肿瘤坏死因子α突变体11a的I期临床药代动力学

目的 :在肿瘤患者中观察重组人肿瘤坏死因子α突变体rhTNF αD11a的药代动力学。方法 :在单次肌内注射 16 0× 10 4 U和 2 40× 10 4 U及连续肌内注射 16 0× 10 4 U ,qd× 7d后 ,用ELISA法测定其抗原浓度。结果 :方法学检验表明 ,灵敏度、特异性、线性、线性范围、精密度和回收率均符合要求。肌注 0 .5h后血清浓度显著高于内源水平 (P≤ 0 .0 5～ 0 .0 0 1) ,2 4h后多数患者恢复至药前水平。Cmax和AUC随剂量增高 ,平均Cmax分别为 10 .5和 14.7pg eq·mL-1,AUC分别为 5 0 .1和 10 6 .1pg eq·h·mL-1,但无统计学差异。Tmax随剂量有延长趋势。连续注射 7次后浓度明显低于首次注射 (P <0 .0 5 )。蓄积因子 (AUC第 7次/AUC第 1次)为 0 .6 5。结论 :在研究剂量范围内单次肌内注射药代动力学近似线性 ,连续注射后药物浓度呈降低趋势。

安徽三黄鸡β-防御素2(gal-2)在毕赤酵母细胞内的表达

目的:构建安徽三黄鸡β-防御素2(gal-2)基因的真核表达载体,表达gal-2蛋白。方法:提取鸡肺组织中总RNA,应用RT-PCR技术获得鸡β-防御素2(gal-2)全长cDNA基因片段,经PCR获得gal-2的成熟肽基因片段,并将其克隆入真核表达载体pPIC3.5K中,构建重组表达质粒pPIC3.5K-gal-2;经测序鉴定正确后,电转化巴斯德毕赤酵母菌GS115。经甲醇诱导表达gal-2蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析。结果:通过电转化方法成功将经酶切线性化的重组表达质粒整合入宿主菌基因组中,并在甲醇诱导的条件下成功表达出了目的蛋白。结论:成功构建了重组真核表达质粒pPIC3.5K-gal-2;并借助巴斯德毕赤酵母细胞表达出了gal-2的蛋白,其分子量大约为4.1kDa。该研究为下一步应用基因工程和蛋白质工程技术进行gal-2蛋白的规模化生产奠定了基础。

一个单纯性甲基丙二酸血症家系中MUT基因两个新突变的鉴定

目的对一个单纯性甲基丙二酸血症（methylmalonicacidemia，MMA）家系进行基因突变的检测和分析，探讨其发病的分子遗传学病因。方法PCR结合Sanger测序方法对先证者MUT、MMAA、MMAB3个基因的全部外显子及其旁侧序列进行分析，鉴别其中可能存在的基因突变。采用Polyphen2、SIFT、HSF、DNAMAN6．0和Swiss—PdbViewer4．1．0等软件对检测到的新的基因突变进行致病性分析。结果先证者MUT基因检测到两个杂合突变，分别为C．581C〉T（p．P194L）和c．1219A〉T（p．N407Y），家系分析显示，前者遗传于母亲，后者遗传于父亲。Polyphen2和SIFT软件预测这两个突变均可能致病。这两个位点所在的密码子在不同物种间高度保守，均位于MCM结构的底物结合区——（β，α）8barrel结构域，这两个突变可能通过影响MCM空间构象，从而影响蛋白质的功能。结论两个新的MUT基因突变可能是导致单纯性甲基丙二酸血症的致病原因。

大肠杆菌错配识别蛋白MutS的表达与活性鉴定

目的构建表达错配识别蛋白MutS,并进行错配识别活性鉴定。方法在大肠杆菌中表达MutS蛋白,并纯化获得目的蛋白;利用凝胶滞缓实验对错配识别活性进行验证,并计算MutS蛋白降低的错配率。结果纯化的MutS蛋白具有错配识别活性,并能降低DNA双链的错配率。结论表达纯化的MutS蛋白在体外具有特异性识别、结合含有错配碱基DNA双链的生物活性,从而有助于合成生物学的发展。

子宫内膜癌组织中MMR蛋白表达及MLH1基因甲基化的临床意义

目的探讨子宫内膜癌组织中错配修复(MMR)基因包括MLH1、MSH2、MSH6、PMS2基因的蛋白表达及MLH1甲基化的临床意义。方法收集2007—2016年10年间解放军总医院病理科确诊为子宫内膜癌的组织蜡块共420份,采用免疫组化EnVision二步法检测子宫内膜癌组织中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白的表达并分析其临床意义,当出现MMR蛋白表达缺失(即MLH1、PMS2、MSH2及MSH6中的任何1个或多个蛋白表达缺失)则高度疑为Lynch综合征相关子宫内膜癌(LS-EC);进一步采用甲基化特异性多重连接探针扩增(MS-MLPA)技术检测其中MLH1蛋白表达缺失(72份)的子宫内膜癌组织中MLH1基因的甲基化状态,当出现MLH1基因甲基化阳性时,可判定该患者为散发性子宫内膜癌,而非LS-EC。结果(1)420份子宫内膜癌组织中,MMR蛋白总缺失率为34.5%(145/420),其中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白缺失率分别为17.1%(72/420)、8.1%(34/420)、7.4%(31/420)、26.2%(110/420);MLH1和PMS2蛋白的联合缺失率为16.7%(70/420)、MSH2和MSH6蛋白的联合缺失率仅为6.2%(26/420)。(2)病理类型为子宫内膜样癌与非子宫内膜样癌组织中MMR蛋白总缺失率(分别为32.4%、58.8%)、PMS2蛋白缺失率(分别为23.6%、55.9%)分别比较均有明显差异(P<0.01)。不同病理分化程度的子宫内膜样癌组织中MMR蛋白总缺失率及MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白缺失率分别比较均有明显差异(P<0.05)。不同手术病理分期的子宫内膜癌组织中MSH2蛋白缺失率(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期分别为5.5%、10.6%、18.6%)比较有明显差异(P<0.01)。不同浸润深度的子宫内膜癌组织中MMR蛋白总缺失率(黏膜内、浅肌层、深肌层浸润分别为35.0%、30.8%、48.1%)比较有明显差异(P<0.05)。有、无淋巴结转移的子宫内膜癌组织中MMR蛋白总缺失率及MSH2、MSH6蛋白缺失率分别比较均有明显差异(P<0.05)。(3)72份MLH1蛋白表达缺失的子宫内膜癌组织中57份DNA质量检测合格,其中MLH1基因甲基化阳性27份,甲基化阳性率为47.4%(27/57)。结论子宫内膜癌组织中MMR蛋白表达缺失可能提示患者预后不良。免疫组化方法及进一步的MLH1基因甲基化检测可作为初步筛查LS-EC的方法。

大肠癌组织中Survivin、MSH2、MSH6表达及其临床意义

目的分析大肠癌组织中Survivin、MSH6、MSH2表达变化,探讨其与临床病理参数之间的关系。方法采用免疫组化法检测汉中市中心医院的197例大肠腺癌标本及20例炎性肠黏膜中Survivin、MSH6、MSH2的蛋白表达,分析其与大肠癌临床病理特征的关系及三者表达的相关性。结果 20例炎性非肿瘤肠黏膜组织(对照组)中,MSH2阳性表达率为95%,MSH6阳性表达率为95%,Survivin阳性表达率为10%;197例大肠癌组中MSH2阳性表达率88. 3%,MSH6阳性表达率74. 1%,Survivin阳性表达率84. 3%;大肠癌组织中Survivin阳性表达率明显高于炎性对照组(P <0. 05)。大肠癌组织中Survivin表达与浸润深度和淋巴结转移有关(P <0. 05),与性别、年龄、肿瘤大小、肉眼类型及分化程度无关(P> 0. 05);MSH2表达与肿瘤大小和淋巴结转移有关(P <0. 05),与性别、年龄、肉眼类型、浸润深度及分化程度无关(P> 0. 05);MSH6表达与性别和淋巴结转移有关(P <0. 05),与年龄、肿瘤大小、肉眼类型、浸润深度及分化程度无关(P> 0. 05)。大肠癌组织中MSH6与MSH2表达存在正相关(r=0. 326,P <0. 01),MSH2与Survivin阳性表达存在正相关(r=0. 277,P <0. 01),MSH6与Survivin阳性表达存在正相关(r=0. 435,P <0. 01)。结论大肠癌组织中Survivin呈现高表达,临床上对MSH2、MSH6、Survivin检测有助于大肠癌转移风险、预后评估、及临床治疗提供依据,特别是Survivin基因可能为基因治疗提供依据。

淋巴结转移性结直肠癌中MLH1与MSH2基因的表达水平及其临床意义

目的分析淋巴结转移性结直肠癌中DNA错配修复基因(mismatch repair,MMR)系统MLH1(Mut L homolog1)和MSH2(Mut S homolog 2)基因的表达水平及临床意义。方法选取2015年6月至2017年4月收治的120例淋巴结转移性结直肠癌患者为研究对象,同期选取120例无淋巴结转移的结直肠癌患者为对照;通过免疫组化法、实时荧光定量PCR法(q RT-PCR)、Western blot法,分别检测两组正常癌旁组织及病灶组织中MLH1、MSH2蛋白阳性表达缺失率,MLH1、MSH2 m RNA及蛋白表达水平。结果两组患者病灶组织MLH1、MSH2蛋白阳性表达缺失率均高于癌旁组织,而MLH1、MSH2 m RNA及蛋白相对表达水平均低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P均<0.05);淋巴结转移性结直肠癌组病灶组织MLH1、MSH2蛋白阳性表达缺失率均高于无淋巴结转移组,MLH1、MSH2 m RNA及蛋白相对表达水平均低于无淋巴结转移组,差异均有统计学意义(P均<0.05);两组癌旁组织MLH1、MSH2蛋白阳性表达缺失率、MLH1、MSH2 m RNA及蛋白相对表达水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05);MLH1、MSH阳性表达缺失率与淋巴结转移性结直肠癌患者的肿瘤直径、浸润深度、分化程度及淋巴结转移数有密切关系(P均<0.01),而与年龄无关(P>0.05)。结论淋巴结转移性结直肠癌中MLH1、MSH2表达水平显著降低,推测其在结直肠癌由无淋巴结转移进展为发生淋巴结转移中具有重要作用。

Increased sensitivity of colorectal cancer cell lines with microsatellite instability to 5-fluorouracil in vitro

OBJECTIVE: To study the relationship between sensitivity to 5-FU and the status of a panel of microsatellite loci in three human colon cancer cell lines. METHODS: Cell viability in several concentrations of 5-FU was assessed by the MTT test. Expression of hMSH2 and hMLH1 in LoVo, SW480 and SW1116 cells were analyzed by immunocytochemical staining.Ten mononucleotide and dinucleotide microsatellite loci were analyzed by the PCR-SSLP-silver staining method. RESULTS: By MTT assay, it showed that LoVo cells were more sensitive than SW480 and SW1116 cells (0.8 micromol/L,2.2 micromol/L and 1.9 micromol/L, respectively, P

658例结直肠癌错配修复蛋白的表达及其与临床病理特征的关系

目的探讨错配修复（mismatch repair，MMR）蛋白MLH1、MSH2、MSH6和PMS2在结直肠癌中的表达情况及其与患者临床病理特征之间的关系。方法收集中国医科大学附属盛京医院2016年1月至2017年1月间658例连续的结直肠癌病例，患者中男性409例，女性249例；年龄20-92岁，平均年龄（63±5）岁。采用免疫组织化学EnVision法检测结直肠癌组织中MLH1、MSH2、MSH6和PMS2蛋白表达缺失的情况，和MLH1蛋白表达缺失的结肠癌病例中的BRAF突变，分析MMR蛋白表达缺失与结直肠癌患者临床病理特征之间的关系。结果658例结直肠癌有44例（6．7％）发生MMR蛋白表达缺失，MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白表达缺失率分别为4．1％（27／658）、2．3％（15／658）、2．4％（16／658）、4．3％（28／658）。MMR蛋白表达缺失以MLH1与PMS2表达联合缺失（61．4％，27／44）、MSH2与MSH6表达联合缺失（34．1％，15／44）为主；PMS2和MSH6蛋白表达单独缺失的各有1例（2．3％，1／44）。进行BRAF V600E检测的27例MLH1蛋白缺失的病例中有7例（25．9％）为BRAF阳性，提示该7例患者可能存在因BRAF基因突变导致的MLH1蛋白表达缺失，属于散发型结直肠癌。结直肠癌组织中MMR蛋白表达缺失与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、脉管癌栓、临床分期以及肿瘤血行转移无关（P〉0．05），与更低程度的肿瘤组织分化、组织学类型和发病部位以及肿瘤浸润淋巴细胞数目增加显著相关（P〈0．01）：其中MLH1、PMS2蛋白表达缺失与组织学类型相关（P=0．049，P=0．013），常伴黏液腺癌分化；MLH1、PMS2蛋白表达缺失多发生于右半结肠（P=0．006，P=0．002）；MSH2与MSH6蛋白表达缺失的患者发病年龄相对较小（P=0．014，P=0．023）；MSH2与PMS2蛋白表达缺失与性别相关，MSH2蛋白缺失多发生于女性（P=0．048），PMS2蛋白表达缺失多发生于男性（P=0．031）。结论MMR蛋白缺失结直肠癌患者发病年龄低，组织分化程度低，发生部位多位于右半结肠，癌组织常伴有黏液腺癌分化。