草鱼Mx蛋白基因的克隆与原核表达

根据已报道的Mx蛋白cDNA序列设计合成特异引物,应用逆转录 聚合酶链式反应(RT PCR)方法,从草鱼呼肠孤病毒(GCRV)诱导的草鱼(Ctenopharyngodonidellus)肝脏总RNA中扩增获得Mx蛋白cDNA,回收纯化后克隆到pGEM TEasyVector系统的T载体上。重组子的序列分析表明:所克隆的Mx蛋白cDNA长722bp,编码240个氨基酸,包括1个三联GTP结合区域和1个发动蛋白(dynamin)族特征的序列。与已知鱼类Mx蛋白基因序列比较表明,草鱼Mx蛋白基因序列与其它鱼类Mx基因相应序列具有较高的同源性,其中与斑马鱼Mx蛋白E型基因碱基序列比较同源性最高,为87.1%。将此基因改造后定向克隆至原核表达质粒pBV220,构建成重组草鱼Mx蛋白基因表达质粒pBVgcMx,并在大肠杆菌中获得高效表达,重组草鱼Mx蛋白的表达量占菌体总蛋白的26.6%。Q sephroseFF层析柱分离纯化的重组草鱼Mx蛋白纯度达95.6%。

PBMC中抗病毒Mx1基因表达在病毒性脑炎早期诊断中的作用

分析外周血单个核细胞(PBMC)中抗病毒蛋白Mx1基因表达在临床进行病毒性脑炎早期诊断中的应用价值。方法:选取80例自2020年1月~2021年10月在我院进行诊治的疑似病毒性脑炎患者,检测患者PBMC)抗病毒蛋白Mx1基因水平、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)及S100钙结合蛋白B(S100β)蛋白水平及IgM抗体水平,分析PBMC中抗病毒蛋白Mx1基因表达与PCT、CRP及S100β、IgM抗体相关性。结果:病毒性脑炎患者PBMC中Mx1蛋白水平显著高于非病毒性脑炎患者且差异有统计学意义(P<0.05)。病毒性脑炎组患者PCT、CRP及S100β蛋白水平均高于非病毒性脑炎组且差异有统计学意义(P<0.05)。病毒性脑炎组IgM阳性率明显高于非病毒性脑炎组且差异有统计学意义(P<0.05)。PBMC中Mx1蛋白表达与PCT、CRP及S100β蛋白、脑脊液病毒抗体均呈正相关(P<0.05)。结论:病毒性脑炎患者PBMC中抗病毒蛋白Mx1基因表达存在上调现象,能够为临床进行病情早期诊断提供一定的参考。