基于TLR-4/MyD88/NF-κB对健脾化滞丸治疗溃疡性结肠炎的机制进行拆方研究

目的:通过建立脾虚湿蕴型溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型,探讨健脾化滞丸及其不同拆方对TLR-4/MyD88/NF-κB通路的影响。方法:64只Wistar大鼠随机分为正常对照组8只、模型组56只,采用中医证候联合乙醇-2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠法复制UC大鼠模型,造模成功后,将模型大鼠随机分为模型组(M)、美沙拉嗪组(A)、健脾化滞丸全方组(B)、健脾清化方组(C)、健脾清化活血方组(D)、健脾清化导滞方组(E)、清化导滞活血方组(F),每组8只,给予相应药物灌胃4周,疗程结束后处死所有大鼠并取材,观察大鼠体质量变化、疾病活动度及结肠病理改变,ELISA及免疫组化检测大鼠结肠组织TNF-α表达;RT-PCR及Western blot检测大鼠结肠组织TLR-4、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达。结果:健脾化滞丸全方、健脾清化方、健脾清化活血方组及健脾清化导滞方组大鼠体质量明显高于模型组(P<0.01),各治疗组均能明显改善UC模型大鼠结肠组织病理损伤及疾病活动指数,其中健脾化滞丸全方组及健脾清化活血方组作用最好。各治疗组均可抑制结肠组织TLR-4、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达(P<0.001),其中美沙拉嗪组、健脾化滞丸全方组、健脾清化导滞方组及清化导滞活血方组在降低NF-κB mRNA及蛋白表达上明显优于健脾清化方组及健脾清化活血方组(P<0.05)。各组均能降低结肠组织TNF-α表达(P<0.001),组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:健脾化滞丸及各拆方均可能通过TLR-4/MyD88/NF-κB通路发挥作用,其中黄连、煨木香、凤尾草、炮姜可能为本方核心药物,对临床具有一定指导意义。

麦粒灸对坐骨神经损伤大鼠脊髓组织TLR4/MyD88/NF-κB信号通路表达的影响

目的观察麦粒灸“环跳”对坐骨神经损伤(SNI)大鼠坐骨神经功能、坐骨神经干病理形态及脊髓组织TLR4/MyD88/NF-κB表达的影响,探究麦粒灸治疗SNI的可能机制。方法24只雄性SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组和麦粒灸组,每组6只。模型组、麦粒灸组采用坐骨神经钳夹制备SNI大鼠模型,造模后第7日起麦粒灸组取患侧“环跳”麦粒灸干预,每次6壮,1次/d,连续10 d。观察造模后第7日及干预结束后大鼠坐骨神经功能指数(SFI)、纤维丝测痛仪测量大鼠机械痛阈值(MWT),ELISA检测脊髓组织一氧化氮(NO)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)含量,HE染色观察坐骨神经干形态,Western blot检测脊髓组织Toll样受体4(TLR4)、核因子(NF)-κBp65、p-NF-κBp65、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、p-IκBα蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠SFI、MWT显著降低(P<0.01),坐骨神经干神经纤维排列紊乱,施万细胞数量明显增多,有大量空泡变性,脊髓组织NO、iNOS含量及TLR4、p-NF-κBp65、MyD88、p-IκBα蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,麦粒灸组大鼠SFI、MWT显著升高(P<0.01),坐骨神经干损伤减轻,细胞排列较整齐,施万细胞数量减少,轴突脱髓鞘及细胞空泡变性减少,脊髓组织NO、iNOS含量及TLR4、p-NF-κBp65、MyD88、p-IκBα蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论麦粒灸“环跳”可下调SNI大鼠脊髓组织TLR4、p-NF-κBp65、MyD88、p-IκBα蛋白表达,抑制NO、iNOS分泌,从而缓解疼痛、减轻受损神经组织炎症反应。

羊肺炎支原体感染对贵州不同品种羊TLRs MyD88通路因子转录水平的影响

羊肺炎支原体(Mo)可引起山羊、绵羊发生支原体肺炎。本研究旨在分析Mo感染对贵州不同品种羊Toll样受体(TLRs)MyD88通路因子基因转录水平的影响,进而分析不同品种羊对Mo感染的差异性。本研究以Mo人工感染贵州5个主要品种羊,应用TaqMan RT-qPCR方法对不同品种试验羊肺脏和血液样本TLRs MyD88通路因子基因转录水平进行定量检测与分析。结果显示,不同品种羊感染Mo后,MyD88、TRAF6、NF-κB、FOS、JUN基因mRNA相对表达量均显著上调(P<0.01)。同时发现,感染死亡的贵州黑山羊、贵州白山羊血液和肺脏样本中MyD88、FOS基因转录水平上调倍数均显著高于感染未死亡的波尔山羊、湖羊(P<0.05);感染未死亡的波尔山羊血液中NF-κB基因转录水平上调倍数均极显著高于其余四种羊(P<0.01),这种差异表达出现的原因可能是Mo对不同品种羊的致病机理不同。以上研究结果表明,贵州不同品种羊对Mo的易感程度与TLRs MyD88通路因子转录水平有关,为研究Mo对于不同品种羊的致病机制提供基础研究资料。

中医药干预TLRs/MyD88信号通路治疗痛风性关节炎的研究进展

痛风性关节炎(gouty arthritis, GA)作为一种炎症反应性疾病,其发病的关键是尿酸钠盐(monosodium urate, MSU)结晶沉积在关节及其周围组织,而引起的一系列炎症阶连反应。研究表明,TLRs是决定MSU结晶沉积导致GA的主要因素,TLRs/MyD88信号通路在GA的炎症反应过程中发挥着至关重要的作用,是GA最重要的信号转导通路之一,越来越多学者集中于对该通路的研究。中医药治疗充分发挥其“多途径、多环节、多靶点”的优势,近年来在GA的机制研究上取得显著成果。该文通过概述了TLRs/MyD88信号通路的结构和功能,对近5年来中医药基于TLRs/MyD88信号通路治疗GA的作用机制进行总结和分析,以期揭示现代中医药作用的靶点和调控机理,为中医药靶向防治GA及中医药现代化研究开拓思路。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨复方银翘合剂缓解哮喘小鼠炎症反应的作用研究

目的:研究复方银翘合剂对哮喘小鼠的作用,并探讨其可能的作用机制。方法:将72只小鼠随机分为6组,正常组、模型组、复方银翘合剂低、中、高剂量组和阳性药物组,每组12只。采用卵清蛋白诱导小鼠哮喘模型,观察小鼠一般症状并检测IgE浓度。收集小鼠肺泡灌洗液并染色计数,HE染色观察小鼠肺组织病理变化。ELISA检测小鼠肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-13的水平。Western blot法检测肺组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)和核转录因子κB(NF-κB)蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠肺泡灌洗液中总细胞数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、中性粒细胞均显著增多(P<0.05),巨噬细胞显著减少(P<0.05),肺组织中支气管管壁增厚,炎性细胞浸润,TNF-α、IL-4、IL-5、IL-13的水平均显著提高(P<0.05),TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。与模型组比较,复方银翘合剂中、高剂量组小鼠肺泡灌洗液中总细胞数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、中性粒细胞均显著减少(P<0.05),巨噬细胞显著增多(P<0.05),TNF-α、IL-4、IL-5、IL-13的水平均显著降低(P<0.05),TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。复方银翘合剂各剂量组比较结果显示,高剂量组的上述变化最明显。结论:复方银翘合剂可缓解哮喘小鼠症状,减轻肺组织病理变化和炎症水平,其作用机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

多发性硬化中TLRs/MyD88/NF-κB信号通路的作用及机制

背景:多发性硬化是以T细胞介导的中枢神经系统慢性炎性脱髓鞘疾病,Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)/髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)/核转录因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路在疾病发生发展过程中有重要作用,探究出信号通路的具体作用机制对进一步治疗该疾病,改善患者的预后至关重要。目的:综述TLRs/MyD88/NF-κB信号通路及其在多发性硬化/实验性自身免疫性脑脊髓炎模型中的作用,并就抑制该信号通路为多发性硬化的治疗提供新的思路和策略。方法:检索中国知网、万方及PubMed数据库在2002年1月至2022年12月与文章主题相关的文献,最终纳入61篇文献进行分析。结果与结论:①TLRs/MyD88/NF-κB信号通路是介导炎性免疫反应的重要信号通路;②TLRs/MyD88/NF-κB信号通路通过调节树突状细胞的抗原提呈、破坏血脑屏障的完整性、促进T细胞、B细胞和小胶质细胞的激活等途径,在多发性硬化的发展中发挥了重要的作用;③通过靶向作用于TLRs、MyD88和NF-κB分子,抑制TLRs、MyD88和NF-κB的激活或信号传导,减少促炎因子的分泌可以达到治疗多发性硬化的目的;④动物实验研究表明,中药的活性成分如黄酮类和苷类、中药复方如补阳还五汤也可通过影响TLRs/MyD88/NF-κB信号通路治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎,这为寻找靶向TLRs/MyD88/NF-κB信号通路治疗多发性硬化的药物指明方向。

复方佛耳草合剂对慢性阻塞性肺疾病大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨复方佛耳草合剂对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响。方法 大鼠随机分为空白组(10只)和造模组(50只),造模组连续12周采用香烟烟雾联合气管注射LPS建立COPD大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、地塞米松组(0.5 mg/kg)和复方佛耳草合剂低、中、高剂量组(6.8、13.6、27.2 g/kg),每组10只。给药干预24周后,采用动物肺功能仪检测大鼠肺功能,HE染色法观察肺组织病理变化,ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平及SOD活性,RT-qPCR法检测肺组织TLR4、MyD88、NF-κB及caspase-3 mRNA表达,Western blot法检测肺组织TLR4、MyD88、NF-κB及TNF-α蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠存在肺通气功能障碍,肺组织和支气管受损明显,SOD活性降低(P<0.01),血清TNF-α、IL-1β、IL-6及MDA水平升高(P<0.01),肺组织TLR4、MyD88、NF-κB、caspase-3 mRNA表达和TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α蛋白表达均升高(P<0.01);与模型组比较,复方佛耳草合剂各剂量组均能够改善肺功能指标,修复受损肺组织,降低血清TNF-α、IL-1β、IL-6及MDA水平(P<0.05,P<0.01),降低肺组织TLR4、MyD88、NF-κB、caspase-3 mRNA表达和TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α蛋白表达(P<0.05,P<0.01),且复方佛耳草合剂的作用呈剂量依赖性。结论 复方佛耳草合剂可改善慢性阻塞性肺疾病大鼠的肺功能障碍与病理损伤,其机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关。

益气活血方对冠心病气虚血瘀证大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的探讨益气活血方对冠心病气虚血瘀证大鼠的影响。方法48只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、益气活血方组、单硝酸异山梨酯组。除假手术组外,所有大鼠行冠状动脉结扎术。术后7 d,除假手术组外,其余大鼠强迫游泳14 d,并控制大鼠的食量,同时益气活血方组和单硝酸异山梨酯组大鼠予灌胃给药28 d。心脏超声检测大鼠心功能;全血黏度检测大鼠的瘀血程度;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色检测大鼠心脏病理形态改变;Masson染色检测大鼠心肌纤维化水平;荧光定量PCR和免疫组化检测大鼠心肌组织Toll样受体(toll-like receptor,TLR)4、髓样分化因子(myeloid differentiationfactor,MyD)88和核因子(nuclear-factor,NF)-κB p65的mRNA和蛋白表达量;ELISA检测大鼠血清中白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α的含量。结果与假手术组比较,模型组大鼠心功能下降(P<0.01),全血黏度升高(P<0.01),心肌组织排列紊乱,心肌损伤范围较大,心肌纤维化严重(P<0.01),心肌中TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达水平上调(P<0.01),血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量升高(P<0.01);与模型组比较,药物干预后,大鼠心功能改善(P<0.05),全血黏度下降(P<0.01),心肌组织排列较整齐,心肌损伤范围缩小,心肌纤维化缓解(P<0.01),TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达水平下调(P<0.05),血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量减少(P<0.05)。结论益气活血方能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB p65信号通路介导的炎症反应发挥对冠心病气虚血瘀证大鼠的治疗作用。

通平脂肝方对非酒精性脂肪肝小鼠肝组织炎症及TLR4/MyD88/NF-κB通路的影响

目的:基于TOLL样受体4(TLR4)介导的髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)通路探讨通平脂肝方对高脂饲料诱导的非酒精性脂肪肝(non-alcoholicfattyliverdisease, NAFLD)模型小鼠的肝脏保护作用及抑制炎症的相关机制。方法:选用C57BL/6J雄性小鼠60只,随机分为正常、模型、盐酸吡格列酮和通平脂肝方低、中、高剂量组,各10只。给药8 w后取材。结果:与正常组相比,模型组体质量、血脂、肝功能、IL-6、TNF-α及TLR4、MyD88、Ikkβ、NF-κB蛋白和TLR4、MyD88、Ikkβ的mRNA表达水平均上升(P<0.05),通平脂肝方中、高剂量组显著改善上述指标(P<0.05)。模型组肝细胞大量脂肪蓄积,气球样变性,细胞质受到球形脂滴占位性挤压以及炎症细胞浸润,各用药组肝组织病理形态得到改善,球形脂滴及炎性细胞浸润减少。结论:通平脂肝方可调节高脂饮食诱导的NAFLD小鼠的血脂水平,改善肝功能,减少肝脏脂质堆积,减轻脂肪肝及肝损伤,减轻炎症反应。其抗炎机制可能与其激活TLR4介导的MyD88/NF-κB信号通路,抑制脂质合成及炎症因子的表达有关。

大黄鱼DIGIRR通过抑制MyD88-NF-κB的激活参与免疫调控

为研究大黄鱼双免疫球蛋白白细胞介素1受体相关分子(double immunoglobulin interleukin-1 receptor-related molecule,DIGIRR)在免疫反应中的作用,本实验克隆了大黄鱼digirr(Lcdigirr)的编码区序列;采用荧光定量PCR(qPCR)对大黄鱼各组织及免疫刺激后的脾脏、头肾等组织及大黄鱼肾细胞系(LCK)中的Lcdigirr表达情况进行了检测;构建了重组表达质粒pTurboGFP-DIGIRR及pcDNA3.1-DIGIRR,分别以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因及双荧光素酶报告系统,研究了LcDIGIRR的亚细胞定位及过表达后对NF-κB启动子活性的调控。结果显示,Lcdigirr的开放读码框(ORF)包含1575 bp核苷酸,编码524个氨基酸,理论分子量为59.4 ku、等电点(pI)为5.76,N端包含2个免疫球蛋白(Ig)结构域、1个跨膜区及1个Toll/白细胞介素-1受体(TIR)结构域,属于保守的硬骨鱼类DIGIRR家族;qPCR结果显示,Lcdigirr在大黄鱼多组织均有表达,其中在肠道中表达量最高;采用变形假单胞菌及脂多糖(LPS)、鞭毛蛋白、多聚肌-胞苷酸[poly(I:C)]等分别进行体内与体外刺激,均可诱导其表达量显著增加;亚细胞定位结果显示,LcDIGIRR主要存在于细胞的膜质区;过表达LcDIGIRR能够显著抑制nf-κb及MyD88介导的nf-κb的转录激活。综上表明,Lcdigirr可能通过抑制nf-κb的转录激活,在大黄鱼的免疫反应中发挥负调控作用。对于深入理解大黄鱼的免疫反应机制具有重要意义。

MyD88L265P及CD79B基因突变对原发性中枢神经系统淋巴瘤预后的影响

目的探究MyD88L265P及CD79B基因突变对原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)患者预后的影响。方法收集2018年8月-2020年11月于兰州大学第二医院经开颅手术或立体定位活检术确诊的18例免疫功能正常(无HIV感染及免疫抑制药服用病史)的PCNSL患者临床资料进行回顾性分析。分别采用实时荧光定量PCR和一代基因测序技术检测18例PCNSL患者肿瘤组织中MyD88L265P和CD79B基因突变情况。针对可能与PCNSL首次无疾病进展生存期(PFS)和总生存期相关的指标行单因素分析,并采用Cox回归进行多因素分析。结果18例PCNSL肿瘤组织MyD88L265P突变率为38.9%,CD79B突变率为33.3%,MyD88L265P/CD79B共突变率为27.8%。单因素分析结果显示,病灶多发、病灶深部受累、肿瘤组织CD79B突变患者的PFS时间更短(P<0.05);多因素分析结果显示,病灶深部受累(HR=0.135,95%CI 0.023~0.799,P<0.05)、肿瘤组织CD79B突变(HR=0.149,95%CI 0.028~0.800,P<0.05)是PCNSL患者预后不良的独立危险因素。结论本组PCNSL患者肿瘤组织MyD88L265P、CD79B突变频率较高,这两种基因突变尤其是CD79B突变可能与PCNSL不良预后相关。

基于TLR2/MyD88/NF-κB信号通路探讨加味少腹逐瘀汤对寒湿瘀结证子宫内膜异位症痛经小鼠腹腔炎症微环境干预作用

目的探讨加味少腹逐瘀汤对寒湿瘀结证子宫内膜异位症痛经小鼠腹腔炎症微环境的干预机制。方法构建动物模型后随机分组。以自主活动次数、粪便含水率、热痛潜伏期评价证候;以子宫及异位病灶大小评价疗效;HE染色比较病理变化;免疫组化检测异位组织中NF-κB的表达及其入核情况;qPCR法和Western blot测定病灶中TLR2、MyD88、NF-κB的mRNA和蛋白表达;ELISA检测TNF-α、IL-6、PGE2、E2、P。结果与假手术组对比,模型小鼠自主活动减少,热痛潜伏期缩短,粪便含水率增加;子宫体积增大,腹腔可见明显异位灶且HE染色显示炎症浸润;免疫组化显示NF-κB表达增加;异位组织TLR2、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达增加,外周血TNF-α、IL-6、PGE2、E2增高,P下降。与模型组相比,各治疗组子宫体积减小、异位灶重量减轻、疼痛潜伏期延长;中药高剂量组小鼠自主活动次数增加、粪便含水率减少;药物干预后炎症反应改善、NF-κB表达下降;TLR2、MyD88、NF-κB的mRNA及蛋白表达降低;且外周血TNF-α、IL-6、PGE2、E2降低、P升高。结论加味少腹逐瘀汤可以降低寒湿瘀结证子宫内膜异位症小鼠血清炎症因子,这可能与抑制TLR2/MyD88/NF-κB信号通路改善腹腔炎症微环境有关。

补虚化瘀方及其拆方对脂多糖诱导的人肝内胆管上皮细胞TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的 观察补虚化瘀方及其拆方对脂多糖(LPS)诱导的人肝内胆管上皮细胞(HIBEC)细胞外基质及TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响,探讨其改善原发性胆汁性胆管炎(PBC)炎症病变的相关机制。方法 将48只SD大鼠随机分为空白组、补虚组、化瘀组、补虚化瘀方组,每组12只。补虚组、化瘀组、补虚化瘀方组分别灌以相应中药水煎液,空白组灌以等量的生理盐水,每日1次,连续灌胃2周,灌胃结束后取血制备含药血清;将不同处理因素的HIBEC分为正常组、模型组(5μg/mL脂多糖)、补虚组、化瘀组、补虚化瘀方组;CCK8法筛选最佳干预浓度,检测各组细胞活力;免疫荧光检测各组NF-κB激活-核转运状态;Western blot检测各组TLR4、MyD88、NF-κB p65、P-NF-κB p65目的蛋白的表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定各组细胞培养上清液中IL-6、IL-8、MCP-1、CXCL10的含量。结果 (1) CCK8结果显示,15%含药血清为最佳干预浓度;与正常组及模型组相比,化瘀组细胞活力增加(P<0.05),补虚化瘀方组细胞活力增加明显(P<0.01);(2)免疫荧光检测显示,与正常组比较,模型组NF-κB亚基从细胞浆大量转运到细胞核内,光密度明显增强(P<0.01);与模型组、补虚组、化瘀组相比,补虚化瘀方含药血清组转运到细胞核内的NF-κB亚基明显减少,光密度减弱(P<0.01);(3) Western blot结果显示,与正常组比较,模型组TLR4、MyD88、NF-κB p65、P-NF-κB p65蛋白表达增加(P<0.01);与模型组比较,补虚组NF-κB p65、P-NF-κB p65蛋白表达减少(P<0.01),化瘀组P-NF-κB p65蛋白表达减少(P<0.01),补虚化瘀方组TLR4、MyD88、NF-κB p65、P-NF-κB p65蛋白表达明显减少(P<0.01);(4) ELISA检测显示,与正常组比较,模型组IL-6、IL-8、MCP-1、CXCL10分泌增多(P<0.01);与模型组比较,补虚组、化瘀组IL-6、MCP-1、CXCL10分泌减少(P<0.01),补虚化瘀方组IL-6、IL-8、MCP-1、CXCL10分泌明显减少(P<0.05,P<0.01)。结论 相对于模型组、补虚组、化瘀组,补虚化瘀方全方组能增加HIBEC的细胞活力,显著抑制脂多糖诱导的HIBEC中IL-6、IL-8、MCP-1、CXCL10的分泌,方中补虚、化瘀两组药物存在协同作用,全方可发挥最大疗效,其机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的激活密切相关。

miR-223-3p调节TLR4/MyD88/NF-κB通路影响脂多糖诱导的肺癌A549细胞炎症反应

目的:探讨miR-223-3p对脂多糖诱导的肺癌A549细胞炎症反应的影响。方法:实验分成2部分,每个部分分为2组,共4组:miRNA阴性对照(mimic NC)+LPS组,miR-223-3p模拟物(miR-223-3p mimic)+LPS组;miR-223-3p mimic+BAY11-7082+LPS组,miR-223-3p mimic+等量溶剂(vehicle)+LPS组。随后利用Western blot实验检测每组TLR4/MyD88/NF-κB表达水平,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测促炎细胞因子水平,CCK-8法检测细胞活力。结果:与mimic NC+LPS组相比,miR-223-3p mimic+LPS组的TLR4/MyD88/NF-κB蛋白表达水平低,促炎细胞因子分泌少以及细胞活力高。与miR-223-3p mimic+BAY11-7082+LPS组相比,miR-223-3p mimic+vehicle+LPS组的TLR4/MyD88/NF-κB蛋白表达水平低,促炎细胞因子分泌少以及细胞活力高。结论:miR-223-3p可以通过抑制TLR4/My D88/NF-κB促进A549细胞增殖、抑制促炎细胞因子的分泌,从而抑制肺癌中炎症的发生,本研究为今后临床上肺癌的治疗及药物开发提供了新策略。

基于TLR4/MyD88/MAPK信号通路探讨脉络舒通丸抗血栓性浅静脉炎的作用机制研究

[目的]探讨脉络舒通丸抗血栓性浅静脉炎(STP)的作用机制。[方法]将36只日本大耳白兔随机分为正常组、模型组、脉络舒通丸低、中、高剂量组、地奥司明组(阳性药对照),每组6只。除正常组外,其余各组均采用耳缘静脉注射20%甘露醇建立STP兔模型。造模同时各给药组连续灌胃给药14 d。苏木精-伊红(HE)染色法检测各组兔耳组织病理变化;酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的水平;测定凝血4项;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测耳组织Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和c-氨基酸末端激酶(JNK)蛋白表达及相关磷酸化水平。[结果]与正常组比较,模型组病理损伤评分显著增加(P<0.01);血清中IL-1β、TNF-α和IL-6的表达水平明显升高(P<0.05);活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)缩短,纤维蛋白原(FIB)含量升高(P<0.05);TLR4、MyD88、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK,包括p38MAPK、ERK1/2和JNK)蛋白及相关磷酸化水平均显著上调(P<0.01)。与模型组比较,脉络舒通丸低、中、高剂量组、地奥司明组兔耳组织病理损伤显著改善,病理损伤评分明显降低(P<0.05或P<0.01);血清中IL-1β、TNF-α和IL-6的表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01);APTT、PT、TT明显延长,FIB含量明显降低(P<0.05或P<0.01);TLR4、MyD88、MAPK(p38MAPK、ERK1/2和JNK)蛋白及相关磷酸化水平均显著下调(P<0.05或P<0.01)。[结论]脉络舒通丸可能通过抑制TLR4/MyD88/MAPK信号通路,减轻炎症反应,改善凝血功能,从而发挥抗血栓性浅静脉炎作用。

MYD88过表达对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制

目的探讨MYD88基因过表达对人弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法采用质粒转染法将过表达MYD88 L265P基因的pEGFP-C2-MYD88转染DLBCL细胞;实验分为空白对照组、阴性对照组和MYD88 L265P过表达组。倒置荧光显微镜下观察MYD88 L265P过表达后荧光表达;运用RT-PCR、Western blot法检测MYD88 L265P过表达前后DLBCL细胞的MYD88 L265P、IRAK4、NF-κB和BCL2的mRNA及蛋白表达水平;应用CCK-8法检测DLBCL细胞增殖;采用Hoechst染色法检测DLBCL细胞凋亡情况。结果MYD88 L265P过表达后,与空白对照组(0.6704±0.0175)和阴性对照组(0.7153±0.0196)相比,MYD88 L265P过表达组(1.1572±0.0102)的增殖率显著增高,均有统计学意义(P均<0.05)。MYD88 L265P过表达后,与空白对照组(0.69±0.04)和阴性对照组(0.81±0.07)相比,MYD88 L265P过表达组(0.48±0.05)的凋亡率明显降低,均有统计学意义(P均<0.05)。MYD88 L265P过表达后,与空白对照组(mRNA:1.0158±0.0115、0.9873±0.0102、1.0076±0.0153;蛋白:0.1834±0.0589、0.0968±0.0157、0.1475±0.0418)和阴性对照组(mRNA:0.9132±0.0098、1.0032±0.0156、0.9327±0.0112;蛋白:0.1879±0.0423、0.0889±0.0513、0.1348±0.0501)相比,MYD88 L265P过表达组IRAK4、NF-κB和抗凋亡蛋白BCL2的mRNA(3.2432±0.0136、2.9766±0.0213、1.5859±0.0198)及蛋白表达(0.4527±0.0524、0.2189±0.0475、0.3014±0.0598)明显增高,均有统计意义(P均<0.05)。结论MYD88 L265P过表达后,DLBCL细胞的凋亡率下降,细胞增殖率上升,其机制可能与MYD88 L265P基因突变激活和放大了NF-κB通路,促进抗凋亡蛋白BCL2的过表达有关。

Liu-Jun-Zi decoction alleviates chemotherapy-induced anorexia by regulating gut microbiota and TLR4/MyD88/NF-κB p65 signaling pathway

Background:Liu-Jun-Zi decoction(LJZD),a classical nourishing formula in China,has been proven to be effective in treating chemotherapy-induced anorexia.In this study,the mechanism of LJZD in alleviating chemotherapy-induced anorexia was discussed from the aspects of regulating gut microbiota,repairing intestinal barrier injury and inhibiting inflammatory pathways.Methods:A rat model of chemotherapy-induced anorexia was established using cisplatin.The study evaluated the therapeutic effects of LJZD by observing the weight,food intake,and intestinal pathology of rats.The impact of LJZD on gut microbiota and metabolites,specifically short-chain fatty acids,was investigated through gut microbiota analysis and targeted metabolomics.The anti-inflammatory and intestinal protective effects of LJZD were assessed by examining the expression of intestinal tight junction proteins associated with the inflammatory pathway.Results:LJZD alleviated cisplatin-induced inflammation and intestinal barrier disruption,as evidenced by upregulated expression of tight junction protein 1(TJ-1)and occludin,along with reduced serum levels of interleukin 6(IL-6),interleukin-1β(IL-1β),tumor necrosis factor-α(TNF-α),and lipopolysaccharide.Additionally,LJZD alleviated microbiota imbalance and regulated the levels of short-chain fatty acids,especially increased the relative abundance of Coriobacteriales Incertae Sedis,Lactabacillus johnsonii F19785,Parasutterella,and reduced the Tyzzerella.In the hypothalamus,LJZD exerts suppressive effects on the toll-like receptor 4(TLR4)/myeloid differentiation factor 88(MyD88)/nuclear factor-κB(NF-κB)p65 signaling pathway,leading to a downregulation in the transcriptional activity of IL-6 and IL-1β,as well as Interleukin 6 receptors(IL-6R)and Interleukin-1βreceptors(IL-1R1)mRNA expression levels.Conclusion:In summary,LJZD alleviate chemotherapy-induced anorexia by modulating the gut microbiota,repairing the intestinal mechanical barriers,and suppressing the TLR4/MyD88/NF-κB p65 signaling pathway.

美沙拉嗪对小鼠溃疡性结肠炎模型中Let-7i-5p/TLR4/MyD88依赖性通路的调控机制

目的:本研究旨在探讨美沙拉嗪(MSLZ)对小鼠2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)模型中Let-7i-5p和TLR4/MyD88依赖通路的调控机制。方法:采用TNBS/乙醇结肠法建立溃疡性结肠炎(UC)模型。将44只雄性小鼠随机分为对照组、模型组、MSLZ组和Let-7i-5p抑制剂组,每组11只。小鼠灌胃或腹腔注射相应的药物或生理盐水,连续14d。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测小鼠结肠组织中和血清中Let-7i-5p的表达水平。在显微镜下,用苏木精和伊红(HE)染色观察结肠组织的病理病变。分别采用qRT-PCR,Western blot和免疫组化方法检测小鼠结肠组织中TLR4/MyD88依赖通路相关基因的mRNA和蛋白水平。通过ELISA检测小鼠血清中TNF-α和IL-1β的表达水平。结果:根据疾病活跃指数(DAI)、结肠损伤和病理病变的评分,成功构建了小鼠UC模型。模型组小鼠结肠组织中和血清中Let-7i-5p的表达水平显著高于对照组(P<0.0001)。与模型组相比,MSLZ和Let-7i-5p抑制剂处理均能显著抑制Let-7i-5p的表达(P<0.0001)。与对照组相比,模型组小鼠结肠组织中TLR4/MyD88依赖通路相关基因(包括TLR4、MyD88、TRAF-6和NF-κB)的mRNA和蛋白水平显著上调。MSLZ和Let-7i-5p抑制剂处理均能显著抑制这些基因的表达,且MSLZ的抑制作用略强于Let-7i-5p抑制剂。与对照组相比,模型组小鼠结肠组织中IL-1β和TNF-α的mRNA水平和血清中的蛋白水平显著上调,MSLZ和Let-7i-5p抑制剂处理均能抑制IL-1β和TNF-α的表达水平。结论:在TNBS/乙醇诱导的UC小鼠模型中,MSLZ可以抑制结肠组织中和血清中Let-7i-5p的表达。此外,MSLZ还通过抑制UC小鼠的TLR4/MyD88依赖性通路来抑制炎症因子的释放。

脑蛋白水解物联合长春西汀通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路治疗重症高血压性脑出血的疗效及机制

目的 探究脑蛋白水解物联合长春西汀通过Toll样受体(TLR)4/髓样分化因子(MyD)88/核因子(NF)-κB信号通路治疗重症高血压性脑出血的疗效及机制。方法 选择102例重症高血压性脑出血患者随机分为两组各51例,对照组给予复方丹参液治疗,实验组给予脑蛋白水解物联合长春西汀治疗。于治疗前后分别检测患者临床指标变化、神经功能评分;检测血清氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)变化;检测血清内皮功能指标人内皮素(ET)-1,血管内皮生长因子(VEGF)、神经生长因子(NGF)变化;检测TLR4/MyD88信号通路、TLR4、MyD88和核因子(NF)-κB水平。结果 治疗前两组临床指标、神经功能评分、血清SOD、GSH-Px、MDA、ET-1、VEGF、NGF、TLR4、MyD88、NF-κB水平无显著差异(P>0.05);治疗后,与对照组相比,实验组临床相关指标、美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分降低,格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分和Barthel指数评分升高,SOD和GSH-Px水平升高,MDA、ET-1水平降低,VEGF和NGF水平升高,TLR4、MyD88、NF-κB水平降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 脑蛋白水解物联合长春西汀可改善重症高血压性脑出血患者神经功能,其机制与降低氧化损伤和TLR4/MyD88/核因子(NF)-κB信号通路的调控有关。

EGCG调节TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对特应性皮炎大鼠Th1/Th2平衡的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对特应性皮炎(AD)大鼠的保护作用及潜在机制。方法 将SPF级SD大鼠分为对照(Control)组、AD模型(AD)组、AD+EGCG治疗(EGCG)组、AD+地塞米松阳性对照(DXM)组、AD+EGCG+TLR4激动剂(TLR4)组,每组18只。根据临床损伤严重程度计算皮肤损伤评分;ELISA检测炎症因子的表达;HE染色观察组织学变化;流式细胞仪分析Th1和Th2阳性细胞比例;Western blot检测TLR4/MyD88/NF-κB通路相关蛋白水平。结果 与Control组比较,AD组大鼠背部皮肤损伤程度较重,病理学损伤评分增加(P<0.05),白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)水平及Th1细胞百分比降低,白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-13(IL-13)水平及Th2细胞百分比升高(P<0.05),TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白水平升高(均P<0.05)。与AD组比较,EGCG组和DXM组大鼠皮肤损伤评分及皮肤损伤病理学评分降低,Th_1细胞百分比、IL-2、IFN-γ水平升高,IL-4、IL-13水平、Th_(2)阳性百分比、TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白水平下降(均P<0.05)。与EGCG组比较,DXM组大鼠皮肤损伤评分及皮肤损伤病理学评分、Th_1、Th_(2)细胞百分比、TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白水平差异无统计学意义(均P>0.05),TLR4组大鼠皮损评分及皮肤损伤病理学评分升高,皮损组织中Th_1细胞百分比降低,Th_(2)阳性百分比及TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白水平上调(均P<0.05)。结论 EGCG可以通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,维持Th1/Th2平衡来抑制炎症反应,进而降低AD的严重程度。