MYD88过表达对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制

目的探讨MYD88基因过表达对人弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法采用质粒转染法将过表达MYD88 L265P基因的pEGFP-C2-MYD88转染DLBCL细胞;实验分为空白对照组、阴性对照组和MYD88 L265P过表达组。倒置荧光显微镜下观察MYD88 L265P过表达后荧光表达;运用RT-PCR、Western blot法检测MYD88 L265P过表达前后DLBCL细胞的MYD88 L265P、IRAK4、NF-κB和BCL2的mRNA及蛋白表达水平;应用CCK-8法检测DLBCL细胞增殖;采用Hoechst染色法检测DLBCL细胞凋亡情况。结果MYD88 L265P过表达后,与空白对照组(0.6704±0.0175)和阴性对照组(0.7153±0.0196)相比,MYD88 L265P过表达组(1.1572±0.0102)的增殖率显著增高,均有统计学意义(P均<0.05)。MYD88 L265P过表达后,与空白对照组(0.69±0.04)和阴性对照组(0.81±0.07)相比,MYD88 L265P过表达组(0.48±0.05)的凋亡率明显降低,均有统计学意义(P均<0.05)。MYD88 L265P过表达后,与空白对照组(mRNA:1.0158±0.0115、0.9873±0.0102、1.0076±0.0153;蛋白:0.1834±0.0589、0.0968±0.0157、0.1475±0.0418)和阴性对照组(mRNA:0.9132±0.0098、1.0032±0.0156、0.9327±0.0112;蛋白:0.1879±0.0423、0.0889±0.0513、0.1348±0.0501)相比,MYD88 L265P过表达组IRAK4、NF-κB和抗凋亡蛋白BCL2的mRNA(3.2432±0.0136、2.9766±0.0213、1.5859±0.0198)及蛋白表达(0.4527±0.0524、0.2189±0.0475、0.3014±0.0598)明显增高,均有统计意义(P均<0.05)。结论MYD88 L265P过表达后,DLBCL细胞的凋亡率下降,细胞增殖率上升,其机制可能与MYD88 L265P基因突变激活和放大了NF-κB通路,促进抗凋亡蛋白BCL2的过表达有关。

弥漫大B细胞淋巴瘤MYD88、A20基因突变的表达及临床意义

目的分析弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)MYD88、A20基因突变的表达及临床意义。方法收集2015年1月至2022年1月徐州市中心医院收治的DLBCL患者213例,治疗前应用二代测序技术检测患者MYD88、A20基因突变情况,治疗后3个月患者采用PET-CT进行疗效评估,统计不同临床特征、不同治疗效果患者MYD88、A20基因突变的情况。结果213例患者中MYD88基因突变35.21%,其中72.00%突变点位为L265P;A20基因突变22.54%,均为3号外显子的错义突变。MYD88、A20基因双突变者5.63%。MYD88基因突变者Ki-67高表达、Bcl-2阳性、c-MYC/Bcl-2阳性、疾病类型为ABC-DLBCL型占比明显高于MYD88基因未突变者,差异有统计学意义(P<0.05)。A20基因突变者疾病类型为ABC-DLBCL型、PgP阳性中占比高于A20基因未突变者,差异有统计学意义(P<0.05)。MYD88/A20基因双突变者疾病类型为ABC-DLBCL者高于MYD88/A20基因均未突变者,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗有效组172例(CR 96例,PR 76例),无效组41例(SD 14例,PD 27例),无效组MYD88、A20、MYD88/A20基因突变者占比高于有效组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论部分DLBCL患者存在MYD88、A20基因突变及双突变现象,以ABC-DLBCL患者多见,MYD88、A20基因突变或影响DLBCL的发生发展和化疗效果。

MyD88和TICAM1基因多态性及其交互作用与儿童社区获得性肺炎的关联研究

目的探讨髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)和Toll样受体衔接分子1(Toll-like receptor adaptor molecule 1,TICAM1)基因的单核苷酸多态性及其交互作用与儿童社区获得性肺炎(community-acquired pneumonia,CAP)的相关性。方法前瞻性采用改良多重高温连接酶检测反应技术对2015年8月—2017年9月在延安大学医学院第二附属医院儿科就诊的375例CAP患儿和306例健康体检儿童的MyD88和TICAM1基因的9个标签位点进行分型,并采用logistic回归分析评价各位点基因型及其交互作用与儿童CAP的关联。结果TICAM1基因rs11466711T/C位点多态性与儿童CAP易感性密切相关(P<0.05);rs35747610G/A位点AA基因型可显著降低CAP患儿并发脓毒症的风险(P<0.05);rs6510826G/A位点AA基因型与CAP患儿急性期C反应蛋白水平的增高显著关联(P<0.05)。MyD88基因rs7744A/G位点GG基因型能显著增加患儿发生呼吸衰竭和循环衰竭的风险(均P<0.05)。MyD88基因rs7744A/G位点与TICAM1基因的rs11466711T/C、rs2292151G/A、rs35299700C/T和rs35747610G/A位点之间存在多个与儿童CAP易感性、严重程度及并发脓毒症风险显著关联的相乘交互作用模式(均P<0.05)。结论MyD88和TICAM1基因多态性及其交互作用与儿童CAP密切相关,对儿童CAP的发生及病情发展具有协同作用。

狂犬病病毒脑内感染MyD88^(-/-)小鼠对肺脏病理变化的影响

【目的】明确狂犬病病毒(RABV)脑内感染MyD88基因敲除(MyD88^(-/-))小鼠对肺脏病理变化的影响,探索MyD88基因缺失对狂犬病发病进程的延迟作用,为进一步揭示RABV的致病机理打下基础。【方法】以RABV的弱毒株rRC-HL和标准强毒株CVS-24分别脑内感染MyD88^(-/-)和野生型(MyD88^(+/+))小鼠,攻毒剂量1000 FFU/只,以相同方式和剂量接种DMEM作为对照。观察脑内感染后小鼠的临床症状及体质量变化,采集脑内感染后第4和7 d的脑组织和肺脏,通过实时荧光定量PCR检测小鼠脑组织及肺脏内病毒基因和细胞因子的表达情况,并制作肺脏组织切片观察其病理变化。【结果】MyD88^(+/+)和MyD88^(-/-)小鼠脑内感染弱毒株rRC-HL后出现轻微的临床症状,而标准强毒株CVS-24对MyD88^(+/+)和MyD88^(-/-)小鼠均具有致死性。与MyD88^(+/+)小鼠相比,MyD88^(-/-)小鼠的发病时间和死亡时间均延迟1~2 d,弱毒株rRC-HL脑内感染2种小鼠均从第10 d开始恢复体质量,且临床症状逐渐消失,但MyD88^(-/-)小鼠较MyD88^(+/+)小鼠恢复得更快。脑内感染RABV后,小鼠脑组织相关细胞因子(IFN-α、IFN-γ、IL-1β、MCP-1和TNF-α)的表达发生明显变化,而在肺脏中的表达差异倍数只有少部分超过2.00倍,且随感染时间的推移其变化呈现不规律性。濒死期小鼠肺脏组织切片观察发现,MyD88^(+/+)小鼠肺脏组织切片的细胞核染着色深,肺泡壁稍微增厚,有轻微炎症变化,有巨噬细胞出现;MyD88^(-/-)小鼠肺脏组织切片的细胞核着色浅,肺泡壁增厚不明显,炎症变化较轻,有少量巨噬细胞浸润。【结论】脑内感染后第7 d是RABV在小鼠脑组织中复制能力最强的时段,且脑组织相关细胞因子的表达差异倍数随病程的推移发生明显变化;肺脏组织切片并未发现典型的特征性病理变化,但RABV感染对MyD88^(-/-)小鼠肺脏病理的影响小于MyD88^(+/+)小鼠,即MyD88基因缺失有利于小鼠对抗RABV感染,抑制炎症产生及延迟机体发病。

中华倒刺鲃MYD88基因的克隆及表达载体构建

髓样分化因子88(Myeloid-Differentiation Primary Response Protein 88,MYD88)作为Toll样受体的关键接头蛋白,在先天性免疫中发挥重要作用。利用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)的技术克隆出了中华倒刺鲃(Spinibarbus Sinensis)MYD88基因的c DNA全长序列(GenBank编号:OQ079619),生物信息学分析表明:该序列全长1303 bp,其中开放阅读框855 bp,共编码284个氨基酸;MYD88蛋白具有死亡域和Toll/白介素1受体结构域;邻接法构建的系统进化树显示,中华倒刺鲃的MYD88和其他已报道的鱼类的MYD88聚为一支。先用PCR方法扩增MYD88基因的编码区片段,继而将其克隆到pcDNA3.1-MCS-3xflag载体中构建表达载体,随后对获得的表达载体做双酶切检测及测序检测,结果表明,表达载体构建成功。为进一步探讨MYD88基因在中华倒刺鲃先天性免疫中的作用提供了一定的依据。

欧洲鳗鲡MyD88基因的克隆及其免疫功能分析

髓样分化因子（myeloid differentiation factor88，MyD88）是TLR（toll-like receptor）信号通路的关键接头蛋白，在先天性免疫中发挥重要作用。实验首次克隆了欧洲鳗鲡MyD88基因cDNA全长序列，命名为AaMyD88，其全长为1539bp，开放阅读框为846bp，编码282个氨基酸。该蛋白三维丝带空间结构图与人类的MyD88十分相似，具有MyD88家族典型的死亡结构域和TIR（toll-1ike／IL-1receptor）结构域，其中TIR结构域中含有3个序列高度保守的boxl、box2和box3。同源性分析显示，欧洲鳗鲡MyD88氨基酸序列与斑点叉尾鲴相似性最高，为76．3％，与其他鱼类相似性为67．5％～73．2％，与哺乳动物相似性较低，为61．6％～62．6％。欧洲鳗鲡MyD88在系统进化树中与其他鱼类MyD88聚为一支，哺乳类以及两栖类MyD88分别聚为一支。实时荧光定量PCR检测发现，AaMyD88基因在欧洲鳗鲡各组织器官中均有表达，其中在肝脏中的表达量最高，心脏、肠、脾脏以及肾脏中也有较高的表达，而肌肉和鳃中的表达水平较低；欧洲鳗鲡经山羊IgG肌肉注射后，肾脏AaMyD88基因在第7天表达量有显著性提高，14d后恢复至正常水平，而脾脏AaMyD88基因表达水平从第7～21天持续显著上调，于第7天达到峰值，其表达量为肾脏的1．7倍；欧洲鳗鲡鳍细胞系经polyI：C处理后，AaMyD88基因表达水平在3h显著降低，6-48h均有显著升高，于12h达到峰值。LPS处理后的欧洲鳗鲡鳍细胞系AaMyD88基因表达水平在3h显著降低，6和12h显著升高，于12h达到峰值，24h后恢复至正常水平。polyI：C处理组MyD88基因表达水平在12～48h均显著高于LPS处理组。研究表明，MyD88在欧洲鳗鲡抵御外源微生物的免疫应答反应中发挥重要作用。

赤眼鳟MyD88基因cDNA克隆与表达特性研究

实验使用RACE-PCR技术获得了赤眼鳟(Squaliobarbus curriculus)髓样分化因子88(Myeloid differentiation factor 88,MyD88)的c DNA全长,命名为Sc My D88。ScMy D88的cDNA全长为1779 bp,其中开放阅读框855 bp,共编码284个氨基酸残基,推导的蛋白质分子量为33.053 k D,理论等电点为5.66。赤眼鳟My D88具有典型的MyD88结构特征,包括死亡结构域和TIR结构域(Toll-IL-1 receptor domain,TIR),其氨基酸序列和鲤科鱼类具有高度保守性,相似性达到了90%以上,特别是和武昌鱼相比,相似性达到了98%。在检测的9个赤眼鳟组织和器官中均有MyD88表达,其中肝脏、头肾和体肾中表达水平最高,在脑中表达量最低。在草鱼呼肠弧病毒(Grass carp reovirus,GCRV)感染初期(12h内),My D88在赤眼鳟免疫组织中表达水平急剧上升,特别是在脾脏和体肾中尤为明显,随后恢复正常水平。研究表明,MyD88在赤眼鳟抵抗GCRV入侵的免疫应答反应初期发挥了重要作用。

厚壳贻贝MyD88-4基因的生物学特性及其对沙氏弧菌的免疫应答

为理解髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)基因的生物学特性以及对细菌胁迫的响应,本研究克隆了厚壳贻贝MyD88基因(命名为McMyD88-4)cDNA全长序列,其全长3 930 bp,开放阅读框2 607 bp,编码868个氨基酸。其中,13~109位的氨基酸序列为死亡结构域(death domain,DD),347~481位的氨基酸序列为TIR(toll/interleukin-1 receptor)结构域,TIR结构域包含3个高度保守的区域Box1、Box2和Box3;McMyD88-4蛋白的空间结构包含6个α螺旋(α-helix)和4个β折叠(β-sheet)。同源性分析显示,McMyD88-4蛋白序列与长牡蛎MyD88最相似,其一致性和相似性分别为60%和77%;其次,与虾夷扇贝、海湾扇贝和菲律宾蛤仔相似度较高,其一致性和相似性分别为40%~51%和58%~67%。系统进化树结果显示,McMyD88-4先与长牡蛎和扇贝聚为一支,然后与黑腹果蝇聚为一支,脊椎动物单独聚为一支。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测发现,McMyD88-4基因在厚壳贻贝各组织和器官中均有表达,其中在外套膜和鳃中的表达量最高,而血细胞中表达量最低。厚壳贻贝经沙氏弧菌感染后,McMyD88-4基因表达量在免疫相关组织中急剧上升,分别在感染后3和6 h达到峰值,且在消化腺中的上调水平显著高于鳃和外套膜。研究表明,McMyD88-4在厚壳贻贝抵御外界病原体侵染过程中,尤其是弧菌感染方面发挥重要作用。

miR-155及其靶基因MyD88基因多态性与弥漫大B细胞淋巴瘤临床病理特征的关系

目的:探讨分析miR-155及其靶基因MyD88基因多态性与弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)临床病理特征的关系。方法:选择2015年3月-2017年8月本院收治的DLBCL患者135例,另外选择淋巴结反应性增生标本90例作为对照组。检测2组受试者miR-155相对表达量及MyD88基因多态性,并分析miR-155及MyD88基因多态性与DLBCL临床病理特征的关系。结果:DLBCL患者miR-155相对表达量显著高于对照组(P <0.05)。DLBCL组患者MyD88 L265P位点突变率显著高于对照组(P <0.05)。MyD88 L265P位点突变型DLBCL患者miR-155相对表达量显著高于野生型患者(P <0.05)。DLBCL患者miR-155相对表达量、MyD88 L265P位点基因多态性与患者病变部位、分期、BCL-2蛋白表达以及MyD88蛋白表达有关(t=7.461、8.804、6.487、10.812;χ^(2)=10.681、8.599、7.251、23.008;P <0.05)。miR-155低表达DLBCL患者生存情况显著优于miR-155高表达患者(P <0.05)。MyD88 L265P位点野生型DLBCL患者生存情况显著优于突变型患者(P <0.05)。miR-155相对表达量与MyD88蛋白表达呈显著正相关(r=0.428,P=0.000)。结论:DLBCL患者表现为miR-155表达异常升高以及MyD88基因突变率升高,且miR-155表达与MyD88基因突变影响患者疾病进展及预后,可能成为DLBCL诊断、治疗及预后判断的潜在生物学指标。

猪MyD88基因干扰重组慢病毒载体的构建、病毒包装及效果评价

髓性分化因子88(MyD88)作为TLRs/IL-1R信号通路中重要的接头蛋白,在免疫应答和疾病防御中起重要作用,作者拟通过慢病毒介导的RNA干扰技术获得MyD88基因沉默的猪小肠上皮细胞,为致病菌引起肠道疾病机制研究提供有效模型。共构建4个靶向猪MyD88基因的shRNA表达载体和1个MyD88基因高表达载体,通过实时荧光定量PCR方法鉴定瞬时共转染293细胞中MyD88基因转录水平,筛选获得干扰猪MyD88基因效率最高的shRNA表达载体,将其包装成慢病毒载体,用于建立MyD88基因稳定沉默的猪小肠上皮细胞。最终成功获得MyD88基因沉默效率达到69.3%的小肠上皮细胞,达到基因功能分析的要求。MyD88基因稳定沉默猪肠上皮细胞的获得,为猪肠道病原微生物所引起的TLRs/IL-1R信号通路作用机制的研究提供了宝贵材料。

睾丸弥漫大B细胞淋巴瘤中MyD88及CD79B基因突变及意义

目的探讨睾丸原发性弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)中MyD88及CD79B基因突变及意义。方法回顾性分析15例睾丸原发性DLBCL的临床病理学特点,采用免疫组化及Sanger测序法检测原发性DLBCL中MyD88及CD79 B基因突变,分析MyD88及CD79B基因突变与肿瘤临床病理学特点、NF-κB蛋白在细胞核表达之间的关系。结果免疫组化显示15例DLBCL均为非生发中心B(non germinal center B,non-GCB)细胞型,4例存在CD79B基因Y196位点突变(26.7%),7例存在MyD88基因L265位点突变(46.7%),3例同时存在CD79B及MyD88基因突变(20%)。8例患者获得随访,未发现CD79B及MyD88基因突变与预后的相关性。结论中国人睾丸原发性DLBCL中存在较高的CD79B基因Y196位点和(或)MyD88基因L265位点突变,为针对这些突变基因的分子靶向治疗提供依据。

MyD88缺去突变基因转染降低病原菌感染的人呼吸道上皮细胞IL-8的分泌

白细胞介素-8(1L-8)是呼吸道炎症反应的重要介质。本实验通过构建突变M yD 88真核表达质粒(M yD 88 DN),转染人呼吸道上皮细胞株A 549及SPC-A-1,探讨其对病原菌感染上皮细胞IL-8表达的影响。结果显示:M yD 88 DN转染可降低结核杆菌、绿脓杆菌培养上清诱导的IL-8释放;对肺炎克雷伯杆菌和绿脓杆菌活菌侵袭细胞所刺激的IL-8分泌也有明显的阻断作用。提示突变M yD 88能够阻断细菌感染引起的呼吸道上皮细胞IL-8表达,可能成为呼吸道严重炎症反应基因治疗的新靶基因。

中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞中TLR4介导的MyD88依赖性途径的影响

试验旨在探讨不同剂量中药复方多糖在不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞中对TLR4及下游MyD88依赖性信号转导通路主要元件的影响。采用PCR-SSCP方法将500羽京红1号蛋鸡按MHC B-LβⅡ基因型分组,采集不同MHC B-LβⅡ基因型鸡外周血淋巴细胞,分别加入终浓度为100、75、50、0μg/mL(高、中、低剂量组和对照组)中药复方多糖共培养16、24、32、48h收集细胞,应用实时荧光定量PCR方法检测不同MHC B-LβⅡ基因型鸡TLR4、MyD88、TNAF-6基因的表达。结果显示,与对照组相比,中药复方多糖能显著增强不同MHC B-LβⅡ基因型鸡TLR4、MyD88、TNAF-6mRNA的表达量(P<0.05);中、低剂量组AA基因型鸡TLR4、MyD88、TNAF-6基因的表达量高于高剂量组(培养16h时TLR4基因除外),高剂量组BB基因型TLR4、MyD88、TNAF-6基因的表达量高于其他剂量组(培养32和48h时TLR4基因除外)),低剂量组BC基因型TLR4、MyD88、TNAF-6基因的表达量高于其他剂量组(培养16h时TLR4基因除外)。结果表明,中药复方多糖发挥机体免疫调节作用的机制是通过与淋巴细胞表面TLR4结合,激活下游MyD88依赖性信号转导通路,调控细胞免疫,且不同MH-C B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞最适中药复方多糖免疫调节剂量不同。

利用RNA干扰技术研究长牡蛎TLR2-2基因对MyD88-2基因表达的影响

为研究长牡蛎(Crassostrea gigas)免疫基因TLR2-2对MyD88-2基因表达的调控作用,将体外合成的dsRNA注射进入成体长牡蛎体内,72 h后检测TLR2-2基因和MyD88-2基因的表达量。结果表明,成功地对TLR2-2基因和MyD88-2基因进行了干扰,而在TLR2-2基因被干扰后,MyD88-2基因的表达量显著下降,但在MyD88基因被干扰的长牡蛎中TLR2-2基因表达量没有明显变化。

MYD88^L265P及CXCR4^WHIM基因突变在华氏巨球蛋白血症中的意义

华氏巨球蛋白血症是一种以分泌单克隆免疫球蛋白M为特征的淋巴浆细胞淋巴瘤。MYD88^(L265P)和CXCR4^(WHIM)两种体细胞突变在华氏巨球蛋白血症患者中存在较高的突变率,且突变情况与靶向药物的疗效相关。本文主要综述MYD88^(L265P)及CXCR4^(WHIM)基因突变在华氏巨球蛋白血症诊断和治疗中的意义。

巨噬细胞与三株念珠菌作用后MyD88和CARD9基因表达的研究

目的:通过检测三株不同白色念珠菌作用下,巨噬细胞激活的关键下游信号传导分子CARD9、MyD88基因表达水平以及所产生的活性氧ROS差异,探讨巨噬细胞对三株白色念珠菌杀伤能力产生差异的可能原因。方法:将骨髓来源小鼠巨噬细胞分别与三株念珠菌以1∶10的比例共培养,30min、1h、2h和4h收集巨噬细胞,荧光定量PCR检测MyD88、CARD9基因的表达差异,采用流式细胞术检测所产生的ROS量。结果:RT-PCR结果显示,巨噬细胞与三株白色念珠菌共培养早期MyD88基因表达水平,3683组最高;CARD9基因表达水平,3630组最高;随着时间的增长,不同组别的MyD88基因相对表达无明显变化,而CARD9基因共培养2h相对表达量SC5314组高于3630组及3683组(P<0.01);4h,3683组相对表达量高于3630组、SC5314组(P<0.01)。流式细胞检测结果显示ROS荧光强度3630组>3683组>SC5314组(P<0.05)。结论:CARD9是白色念珠菌PAMPs与PRRs识别及产生抗念珠菌感染关键分子ROS信号通路的关键分子,其表达水平的差异有可能是导致巨噬细胞对不同念珠菌杀伤能力产生差异的机制之一。

弥漫性大B细胞淋巴瘤中MYD88基因突变及其临床病理相关性分析

背景与目的:MYD88基因在弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)中有一定突变率,但其临床病理相关性目前研究报道甚少。该研究旨在分析DLBCL中MYD88基因突变的发生率及与临床病理参数的相关性。方法:收集121例DLBCL患者的临床病理资料,采用免疫组织化学法分析其免疫表型,采用PCR扩增及直接测序法检测MYD88 L265P位点突变情况,采用统计学方法分析MYD88突变与各临床病理参数的相关性。结果:121例DLBCL患者中,38例(31.4%)检测到MYD88 L265P突变。其中男性50例,女性71例,患者性别与该基因突变没有相关性(P=0.609)。年龄≥60岁组MYD88突变率为40.3%(25/62),显著高于<60岁组(13/59,22.0%)(P=0.030)。MYD88突变主要发生在结外部位,其中最常见的是乳腺(12/13,92.3%)、男性生殖系统(10/11,90.9%)、女性生殖系统(5/6,83.3%)及中枢神经系统(4/6,66.7%);结外DLBCL中的MYD88突变率(35/98,35.7%)显著高于结内者(2/20,10%)(P=0.024)。NonGCB型DLBCL中MYD88突变率为39.7%(25/63),显著高于GCB亚型(10/55,18.2%)(P=0.010);结外DLBCL组中MYD88突变与免疫分型的相关性更加显著(P=0.003),而结内组中两者无相关性(P=0.776)。Bcl-2蛋白阳性组(30/77,39.0%)及MYC/Bcl-2蛋白双表达组(19/46,41.3%)中MYD88突变率分别高于Bcl-2阴性组(5/40,12.5%)及非双表达组(16/70,22.9%)(P=0.003和0.034)。Ki-67增殖活性与MYD88基因突变显著相关[高增殖活性组为38.8%(33/85),低增殖活性组为6.3%(2/32)](P<0.001)。该基因突变与MYC蛋白及CD5表达均无相关性(P=0.581和0.759)。结论:MYD88 L265P突变好发于年龄≥60岁、non-GCB起源及特殊结外部位(如乳腺、中枢神经系统及生殖系统等)的DLBCL中,且具有较高增殖指数及MYC/Bcl-2蛋白双表达率;其预后相关性有待积累更多病例进一步分析。MYD88基因突变有望为揭示DLBCL发病机制及靶向治疗提供新的理论依据。

鸡SPOP和MyD88基因分子特征及其组织表达特性分析

【目的】掌握SPOP和MyD88基因分子特征及其在鸡不同组织发育过程中的表达特征,为后续研究其调控鸡组织生长发育机理及开展抗病育种提供参考依据。【方法】通过RT-PCR克隆鸡SPOP和MyD88基因编码区(CDS)序列,运用ExPASy、SOPMA、SWISS-MODEL及PSORT II Prediction等在线软件进行生物信息学分析,并以实时荧光定量PCR检测这2个基因在鸡胚14胚龄(E14 d)及出壳后1 d(H1 d)、7 d(H7 d)和14 d(H14 d)各组织中的表达情况。【结果】鸡SPOP、MyD88基因CDS序列长为1125和900 bp,分别编码374和299个氨基酸残基。SPOP蛋白分子式为C_(1866)H_(2926)N_(496)O_(559)S_(28),相对分子量为42 kD,理论等电点(pI)为5.58,为相对不稳定蛋白;MyD88蛋白分子式为C_(1502)H_(2394)N_(410)O_(438)S_(18),相对分子量为33 kD,pI为5.93,为相对不稳定蛋白。鸡SPOP和MyD88蛋白二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,主要定位于细胞质(占60.9%)。与人类和哺乳动物相比,鸡SPOP蛋白的3个功能结构域(MATH、BTB-POZ和BACK)较保守,而MyD88蛋白的2个功能结构域(Death和TIR)存在多处氨基酸位点变异。SPOP和MyD88基因在鸡不同发育阶段各组织中均有表达,但以肺脏中的相对表达量最高,且二者间的表达差异极显著(P<0.01,下同)。从E14 d发育至H14 d,SPOP基因在眼球和肺脏中的表达整体上呈上升趋势,且至H14 d时肺脏中的表达趋于稳定,在脑组织、心脏和肌胃中的表达呈先上升后下降的变化趋势,在肝脏中的表达呈先下降后上升再下降的变化趋势;MyD88基因在眼球、肝脏和肺脏中的表达均呈先上升后下降再上升的变化趋势,在肌胃和胸肌中的表达呈下降趋势,至H14 d时降至最低值。【结论】SPOP和MyD88基因在鸡胚不同发育阶段肺脏、眼球和肌胃中的表达相对较高,SPOP基因的表达水平均极显著高于MyD88基因,且二者的相对表达量呈负相关,即SPOP基因负调控MyD88基因的表达。

MyD88基因真核表达载体的构建及表达

目的:构建人髓样分化因子88(MyD88)基因编码区序列(cDNA)的真核表达载体,观察其在GES-1细胞中的表达.方法:从健康人外周血单个核细胞中提取总RNA,应用RT-PCR方法扩增MyD88基因cDNA全长序列,经NheI和KpnI酶切位点,插入到pcDNA3.1/myc-His(-)A质粒中,构建成MyD88基因的真核表达载体;用脂质体Lipo-fectamine2000将其转染入人胃黏膜细胞株GES-1细胞中,Western Blot检测其在GES-1细胞中的表达.结果:重组载体经酶切鉴定和测序证实目的基因正确无误;Western Blot结果显示MyD88基因在GES-1细胞具有良好的表达.结论:成功构建了pcDNA3.1/myc-His(-)A-MyD88真核表达载体,并在GES-1细胞中进行了表达,为进一步研究MyD88的结构和功能奠定了基础.

84例弥漫大B细胞淋巴瘤组织中MYD88基因突变及其临床意义

目的探讨人弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)中MYD88基因突变及其与临床病理特征、预后的关系。方法采用Sanger测序法检测DLBCL中MYD88 L265P基因突变情况;采用免疫组化法检测MYD88、p53、c-MYC、BCL-2、BCL-6、Ki-67、CD5的表达;分析MYD88 L265P基因突变和蛋白表达与各临床病理特征及预后的相关性。结果DLBCL中MYD88 L265P基因突变率为26.19%(22/84),与Hans分型、MYD88、p53、BCL-2蛋白表达密切相关(P<0.05),且与MYD88蛋白表达呈正相关(P<0.006);MYD88蛋白阳性率为39.29%(33/84),与Hans分型、MYD88 L265P基因突变、BCL-2蛋白表达密切相关(P<0.05);DLBCL患者生存率与患者年龄、血清LDH水平、MYD88 L265P基因突变及MYD88、c-MYC、BCL-2蛋白表达有关(P<0.05);Logistic回归分析显示:患者年龄、Hans分型、MYD88 L265P基因突变及MYD88、BCL-2蛋白表达与DLBCL患者的预后相关(P<0.05)。结论MYD88 L265P突变与其蛋白表达呈正相关,其与患者生存率和预后显著相关,可作为DLBCL治疗和预后的有效参考指标。