美沙拉嗪对小鼠溃疡性结肠炎模型中Let-7i-5p/TLR4/MyD88依赖性通路的调控机制

目的:本研究旨在探讨美沙拉嗪(MSLZ)对小鼠2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)模型中Let-7i-5p和TLR4/MyD88依赖通路的调控机制。方法:采用TNBS/乙醇结肠法建立溃疡性结肠炎(UC)模型。将44只雄性小鼠随机分为对照组、模型组、MSLZ组和Let-7i-5p抑制剂组,每组11只。小鼠灌胃或腹腔注射相应的药物或生理盐水,连续14d。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测小鼠结肠组织中和血清中Let-7i-5p的表达水平。在显微镜下,用苏木精和伊红(HE)染色观察结肠组织的病理病变。分别采用qRT-PCR,Western blot和免疫组化方法检测小鼠结肠组织中TLR4/MyD88依赖通路相关基因的mRNA和蛋白水平。通过ELISA检测小鼠血清中TNF-α和IL-1β的表达水平。结果:根据疾病活跃指数(DAI)、结肠损伤和病理病变的评分,成功构建了小鼠UC模型。模型组小鼠结肠组织中和血清中Let-7i-5p的表达水平显著高于对照组(P<0.0001)。与模型组相比,MSLZ和Let-7i-5p抑制剂处理均能显著抑制Let-7i-5p的表达(P<0.0001)。与对照组相比,模型组小鼠结肠组织中TLR4/MyD88依赖通路相关基因(包括TLR4、MyD88、TRAF-6和NF-κB)的mRNA和蛋白水平显著上调。MSLZ和Let-7i-5p抑制剂处理均能显著抑制这些基因的表达,且MSLZ的抑制作用略强于Let-7i-5p抑制剂。与对照组相比,模型组小鼠结肠组织中IL-1β和TNF-α的mRNA水平和血清中的蛋白水平显著上调,MSLZ和Let-7i-5p抑制剂处理均能抑制IL-1β和TNF-α的表达水平。结论:在TNBS/乙醇诱导的UC小鼠模型中,MSLZ可以抑制结肠组织中和血清中Let-7i-5p的表达。此外,MSLZ还通过抑制UC小鼠的TLR4/MyD88依赖性通路来抑制炎症因子的释放。

不同剂量天麻素对甲基苯丙胺依赖CPP大鼠海马中TLR4/MyD88/NF-κB炎症信号通路的影响

目的探讨不同剂量的天麻素(Gastrodin,Gas)对甲基苯丙胺(Methamphetamine,Meth)依赖条件性位置偏爱(Conditioned place preference,CPP)大鼠海马中TLR4/MyD88/NF-κB通路的作用。方法建立Meth(10 mg/kg,ip,14 d)依赖大鼠CPP模型,采用低中高剂量的天麻素(10、30、100 mg/kg)干预14 d后,采用Western blotting和RT-qPCR方法检测TLR4/MyD88/NF-κB信号通路中关键因子的蛋白和mRNA在海马中的表达水平。结果天麻素干预后TLR4、MyD88、NF-κB p65、TRAF6的蛋白和mRNA表达呈剂量依赖性降低(P<0.001、P<0.01或P<0.05)、p-NF-κB p65的蛋白表达呈剂量依赖性降低(P<0.01或P<0.05)、IκB-α的蛋白和mRNA表达呈剂量依赖性升高(P<0.01或P<0.05),天麻素干预后p-IκB-α的蛋白表达降低(P<0.01)。结论天麻素干预对甲基苯丙胺依赖CPP大鼠海马的神经炎症具有保护作用,且与TLR4/MyD88/NF-κB信号通路密切相关。

TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对甲基苯丙胺依赖CPP大鼠海马的影响

目的 研究TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对甲基苯丙胺(methamphetamine,MA)依赖的条件性位置偏好(conditioned place preference,CPP)大鼠海马的影响,同时采用特异性抑制剂TAK-242抑制Toll样4受体(Toll-like receptor 4,TLR4),减轻MA依赖诱导的海马神经炎症。方法 建立MA(10 mg/kg,ip,14 d)依赖大鼠CPP模型,分别为生理盐水组、MA组、TAK-242组、MA+TAK-242组。TAK-242组和MA+TAK-242组先分别腹腔注射抑制剂TAK-242(3 mg/kg),1h后MA+TAK-242组再腹腔注射MA(10 mg/kg)。采用Western Blot实验和采用荧光定量PCR实验检测MA依赖CPP大鼠海马中TLR4、MyD88、TRAF6、IκB-α、p-IκB-α、NF-κBp65、p-NF-κBp65蛋白的表达和mRNA表达。结果 与生理盐水组相比,MA组TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κBp65的蛋白和mRNA表达均升高(P <0.001或P <0.01),IκB-α的蛋白和mRNA表达下降(P <0.01),p-IκB-α、p-NF-κBp65的表达升高(P <0.01或P <0.05);与MA组相比,MA+TAK-242组TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κBp65的蛋白和mRNA表达均下降(P <0.001、P<0.01或P <0.05),IκB-α的蛋白和mRNA表达升高(P <0.01),p-IκB-α、p-NF-κBp65表达下降(P <0.01或P <0.05)。结论 MA依赖可通过激活TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,诱导CPP大鼠海马神经炎症的发生,采用特异性TLR4抑制剂可以减轻MA诱导的神经炎症。

经筋微创松解疗法联合嘎日迪-15味丸对膝骨性关节炎患者TLR4/MyD88/NF-κB信号转导通路及TGF-β_1水平的影响

目的:探讨经筋微创松解疗法联合嘎日迪-15味丸对膝骨性关节炎(KOA)患者TLR4/MyD88/NF-κB信号转导通路及转化生长因子β_1(TGF-β)1水平的影响。方法:将KOA患者98例(98膝)随机分为2组各49例,对照组给予嘎日迪-15味丸治疗,实验组在对照组基础上给予经筋微创松解疗法,疗程均为2个月;观察2组治疗效果,比较2组治疗前后膝关节WOMAC评分、关节液中前列腺素E_2(PGE)2、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、TGF-β_1水平、关节软骨中Toll样受体4 (TLR4)、髓样分化因子(MyD88)、核因子κB (NF-κB)蛋白表达。结果:总有效率实验组为89.90%,对照组为71.43%,2组比较,差异有统计学意义(P <0.05)。治疗后2组功能、关节疼痛、僵硬等评分均较治疗前降低(P <0.05),且实验组各项评分均低于对照组(P <0.05)。治疗后2组关节积液TGF-β_1、PGE_2、MMP-9水平均较治疗前降低(P <0.05),且实验组各项指标水平均低于对照组(P <0.05)。治疗后2组关节软骨MyD88、TLR4、NF-κB蛋白表达水平较治疗前降低,且实验组各项指标水平均低于对照组(P <0.05)。结论:经筋微创松解疗法联合嘎日迪-15味丸治疗KOA疗效显著,其作用机制可能与降低MyD88、TLR4、NF-κB蛋白表达及TGF-β_1、PGE_2、MMP-9水平有关。

中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞中TLR4介导的MyD88依赖性途径的影响

试验旨在探讨不同剂量中药复方多糖在不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞中对TLR4及下游MyD88依赖性信号转导通路主要元件的影响。采用PCR-SSCP方法将500羽京红1号蛋鸡按MHC B-LβⅡ基因型分组,采集不同MHC B-LβⅡ基因型鸡外周血淋巴细胞,分别加入终浓度为100、75、50、0μg/mL(高、中、低剂量组和对照组)中药复方多糖共培养16、24、32、48h收集细胞,应用实时荧光定量PCR方法检测不同MHC B-LβⅡ基因型鸡TLR4、MyD88、TNAF-6基因的表达。结果显示,与对照组相比,中药复方多糖能显著增强不同MHC B-LβⅡ基因型鸡TLR4、MyD88、TNAF-6mRNA的表达量(P<0.05);中、低剂量组AA基因型鸡TLR4、MyD88、TNAF-6基因的表达量高于高剂量组(培养16h时TLR4基因除外),高剂量组BB基因型TLR4、MyD88、TNAF-6基因的表达量高于其他剂量组(培养32和48h时TLR4基因除外)),低剂量组BC基因型TLR4、MyD88、TNAF-6基因的表达量高于其他剂量组(培养16h时TLR4基因除外)。结果表明,中药复方多糖发挥机体免疫调节作用的机制是通过与淋巴细胞表面TLR4结合,激活下游MyD88依赖性信号转导通路,调控细胞免疫,且不同MH-C B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞最适中药复方多糖免疫调节剂量不同。

TLR4–MyD88信号转导途径介导仙人掌多糖免疫调节的机制研究

为研究仙人掌多糖(ODPs)对Toll样受体4(TLR4)及其转导的MyD88依赖性信号途径中下游重要元件髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、IκB激酶β(IKKβ)mRNA和蛋白表达的影响,体外培养小鼠腹腔单核巨噬细胞(RAW264.7),用ODPs干预24h,收集细胞,分别采用RT-PCR法和蛋白质印迹Western blot法检测TLR4、MyD88、TRAF6、IKKβmRNA及蛋白表达。结果显示:中、高剂量(100、200μg/mL)ODPs显著增强TLR4、TRAF6及IKKβ的基因表达及TLR4、MyD88、TRAF6的蛋白表达(P<0.05),且具有良好的量效关系;ODPs也显著降低了MyD88的基因表达(P<0.05),对IKKβ的蛋白表达量增强效果不显著。说明非炎性条件下ODPs可促使TLR4高表达,同时激活TLR4胞内信号转导的MyD88依赖性途径。

经筋微创松解术治疗膝骨关节炎对TLR4/MyD88/NF-κB信号转导通路的影响

目的:探讨经筋微创松解技术治疗膝骨关节炎的作用机制。方法:选取24只清洁级健康6月龄新西兰兔,6只为空白组,其余18只统一采用1.6%木瓜蛋白酶造模,空白组予以等剂量0.9%氯化钠溶液膝关节腔内注射;6周后,将18只新西兰兔等分为3组,分别为经筋微创组、电针组、造模组,治疗4周。光镜观察各组兔软骨HE染色病理切片结果;荧光定量PCR和Western blot分别检测各组软骨TLR4、MyD88、NF-κB基因和蛋白表达变化。结果:造模组膝关节软骨表面粗糙,软骨层厚薄不均;经筋微创组膝关节软骨表面轻度破坏;电针组膝关节软骨表面欠光滑,表层轻度破坏。与造模组比较,空白组、电针组、经筋微创组软骨TLR4、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达均显著下调(P﹤0.05);与电针组比较,经筋微创组(除MyD88)mRNA及蛋白表达均显著下调(P﹤0.05)。结论:经筋微创松解疗法可能通过调控TLR4信号转导通路,抑制下游MyD88、NF-κB表达,阻断炎性细胞因子的分泌,改善关节疼痛、活动功能障碍等症状。

抑制Ⅰ型白细胞介素1受体／MyD88信号通路促进间充质干细胞启动组织再生

组织损伤和愈合反应导致Toll样受体（TLR）、Ⅰ型IL-1受体（IL-1R1）的配体等内源性危险信号的释放，从而调节免疫微环境。研究显示，TLR和IL-1R1影响多种组织的修复过程。本研究探讨了TLR和IL-1R1在骨再生过程中的作用，期望通过寻找到相关信号转导控制位点，建立可控的再生策略。本研究显示，IL-1R1／MyD88信号通路负向调节小鼠骨再生。

髓样分化因子88在消化系统肿瘤中的作用的研究进展

髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88,MYD88）是TLR信号通路中的一个关键转接分子，在TLR和IL刺激后可活化NF-κB信号转导通路。近年来研究发现，MYD88基因在淋巴造血系统肿瘤和许多实体肿瘤中存在活化性突变或异常表达，在肿瘤发生、发展过程中起到了重要作用，并可能成为重要的治疗靶点。现就MYD88与TLR信号通路的关系及其在消化系统肿瘤中的作用进行综述。

苦参碱治疗慢性萎缩性胃炎的实验研究

目的:探讨苦参碱对大鼠慢性萎缩性胃炎(CAG)的影响及其作用机制。方法:采用多因素复合法建立CAG模型,将大鼠分为正常组、模型组、阳性对照组(维酶素300 mg·kg^(-1))、苦参碱高剂量组(200 mg·kg^(-1))、苦参碱低剂量组(100 mg·kg^(-1)),每组10只。灌胃给药,连续治疗8周后,于光镜下观察胃黏膜组织病理学并进行病理程度分级;放射免疫法测定血清胃泌素(GAS)和血浆生长抑素(SS)含量;酶联免疫吸附法测定胃黏膜匀浆液中白细胞介素Iβ(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度,实时定量聚合酶链反应法测定胃黏膜Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κB(NF-κB)基因表达。结果:各给药组大鼠胃黏膜病变有显著减轻,炎性细胞浸润程度和固有腺体萎缩程度的组间差异均有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,苦参碱高、低剂量组大鼠血清GAS含量显著升高(P<0.01),血浆SS含量则出现显著降低(P<0.01);苦参碱高、低剂量组大鼠胃黏膜IL-1β、IL-6和TNF-α水平均有显著降低,与模型组相比组间差异均有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,苦参碱高剂量组大鼠胃黏膜TLR4、MyD88和NF-κB mRNA相对表达量均有显著降低(P<0.05或P<0.01),苦参碱低剂量组TLR4和NF-κB mRNA相对表达量均有显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:苦参碱可通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号转导通路的持续活化及相关炎症细胞因子的高表达,减轻CAG炎症反应,阻止炎症细胞对胃黏膜造成的损伤,发挥对胃黏膜的保护作用。