黄条鰤(Seriola aureovittata)MyHC基因克隆及其在早期发育阶段表达研究

为解析肌球蛋白重链(MyHC)基因在黄条鰤(Seriola aureovittata)生长发育过程中作用机制,本研究采用RACE技术,克隆了黄条鰤MyHC基因全长cDNA序列,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)方法对MyHC在黄条鰤不同组织、胚胎发育过程以及仔稚幼鱼发育过程中的表达特征进行了研究。结果表明:黄条鰤MyHC基因全长为6143bp,开放阅读框为5811bp,编码了1936个氨基酸,由3个保守结构域组成即MYSc-classⅡ、Myosin taill和SH3;系统进化树分析显示黄条鰤MyHC与高体鰤进化关系最近。qRT-PCR分析发现黄条鰤MyHC在各组织中均有表达,但在肌肉中表达量最高(P<0.05);随着黄条鰤胚胎发育的进行,MyHC在16细胞期之前表达量较高,在胚体下包2/3时期表达量显著升高,且在孵化期达到峰值(P<0.05:);在仔稚幼鱼发育阶段,MyHC在孵化后20d后表达量显著升高,30d表达水平达到峰值(P<0.05),随后的35d到40d表达水平略有下降但仍保持较高表达趋势,黄条鰤MyHC表达具有发育阶段表达的特异性。MyHC表达特征揭示其参与了调控黄条鰤的早期生长发育。

叉头转录因子1(FoxO1)与肌球蛋白重链基因(MyHC)的相关性及其对肉品质的影响

肉品质作为一个综合性状,从本质上,基因水平的遗传调控对肉质产生关键影响。随着肉品质研究的深入,多种肉质标记基因被不断发掘,基因之间的相互调控作用为进一步研究提供新的视野。FoxO1作为FoxO(叉头框转录因子)家族的重要成员,是多种细胞通路中关键的信号分子,参与骨骼肌的生长发育、脂肪沉积,并与多种肉质基因具有密切相关性。肌球蛋白重链(MyHC)基因,通过基因表达对肌纤维类型产生直接调控,对肉质产生重要影响;文中对FoxO1、MyHC基因的功能及其对肉品质的影响进行介绍,同时综述了FoxO1对MyHC的调控作用与肉质的相关性,并对其调控机理进行了探讨。

FoxO1抑制猪骨骼肌MyHC Ⅰ的表达

为研究FoxO1与骨骼肌纤维类型之间的关系,本试验以大白猪为实验材料,利用RT-PCR和Western印迹技术,检测了FoxO1与肌纤维类型标志基因MyHCⅠ、MyHCⅡa、MyHCⅡb和MyHCⅡx在特定骨骼肌中的表达规律,以及调控肌纤维类型关键基因Mef2c和NFAT的表达,并用Wortmannin处理原代培养的猪骨骼肌成肌细胞,检测了FoxO1与肌纤维类型相关基因的表达.结果显示,FoxO1在不同骨骼肌类型中mRNA表达差异不显著(P>0.05),其蛋白表达与MyHC各亚型显著相关.Wortmannin处理结果显示,在处理的第3和5d,FoxO1蛋白与MyHCⅡb,MyHCⅡx和NFAT表达显著正相关,而与MyHCⅠ,MyHCⅡa和Mef2c表达显著负相关.结果表明,FoxO1通过抑制MyHCⅠ的表达调控肌纤维类型.

巴美肉羊MyHC荧光定量检测方法的优化

通过相对荧光定量的方法,以18S rRNA做管家基因,探索MyHC基因家族是否可用于巴美肉羊的研究,并确定最佳退火温度。研究发现引物可用于巴美肉羊MyHC基因表达量的研究;当退火温度为57℃时各基因的峰值单一,Ct值最稳定,且扩增效率好。此方法确定的实验条件可以用于测定巴美肉羊MyHC mRNA表达量的分析。

瘤背石磺肌球蛋白重链(MyHC)基因的克隆与表达分析

肌球蛋白是动物体内重要的功能性马达蛋白,调控机体的信号传导、肌肉收缩和细胞器运动,为探究肌肉在瘤背石磺(Onchidium struma)由海洋向陆地进化过程中发挥作用的分子机制,实验以石磺科4种贝类转录组数据为基础,采用RACE方法从瘤背石磺肌肉中首次克隆到肌球蛋白重链(Myosin heavy chain,MyHC)基因cDNA的全长并进行组织表达分析。研究结果显示,瘤背石磺MyHC基因cDNA全长为7566 bp,包括5895 bp的开放阅读框,228 bp的5'端非翻译区,1443 bp的3'端非翻译区,共编码1964个氨基酸。预测该基因编码的蛋白质由31713个原子组成,分子式为C_(9765)H_(15897)N_(2849)O_(3150)S_(52),分子量约为225.28 kDa,理论等电点为5.56,N端信号肽具有29个氨基酸长度。瘤背石磺MyHC具有2个保守结构域MYSc_class_Ⅱ和Myosin_tail_l,且亲水性氨基酸集中在Myosin_tail_l区。系统进化树分析显示,瘤背石磺MyHC与光滑双脐螺(Biomphalaria glabrata)MyHC的亲缘关系最近。RT-PCR结果显示,MyHC基因在各个组织中均有表达,腹足和背部皮肤表达量最高,腹部皮肤、口球、肺囊中高表达,肝胰腺、蛋白腺、两性腺中微量表达(P<0.05)。MyHC基因在瘤背石磺的主要运动器官腹足中高表达,说明肌肉运动对瘤背石磺湿地环境的两栖适应性具有至关重要的作用。实验结果为今后进一步研究瘤背石磺肌球蛋白重链基因进行原核表达及多克隆抗体的制备奠定了良好基础,更为深入探讨海洋无脊椎动物从海洋向陆地进化的研究提供有参考意义的分子依据。

不同月龄乌珠穆沁羊MyHC基因与脂肪及共轭亚油酸含量的相关性

不同品种羊肉中的共轭亚油酸与肉品质关系密切,能够影响羊肉的滋味、气味及营养价值等品质指标。基于肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MyHC)相关基因在动物体骨骼肌中的表达及肌纤维与MyHC相关基因的特异性,采用实时荧光定量聚合酶链式反应技术测定乌珠穆沁羊MyHC基因的相对表达量,测定脂肪含量,用气相色谱法测定共轭亚油酸总含量。结果表明:MyHCⅠ基因与MyHCⅡa基因的相对表达量与脂肪含量及共轭亚油酸总含量的变化趋势相对一致;MyHCⅡb和MyHCIⅡx基因的表达量均在12月龄时达到最大值;脂肪含量6~12月龄最高,共轭亚油酸总含量在6月龄达到最高值,然后下降且变化显著(P<0.05);乌珠穆沁羊6月龄时肉质相对其他月龄较佳。

相对饲养水平对绵羊肌肉组织结构及肌纤维组成相关基因的影响

【目的】提高肉品质是现代肉羊生产的主要目标之一,研究不同饲养水平对阿勒泰羊背最长肌肌肉组织结构及肌纤维组成相关基因的影响,为通过饲养水平调控肉脂型绵羊肉品质,提高生产效益提供参考。【方法】选择出生日龄接近((3.0±0.5)月龄)、体况良好、体重相近((19.16±0.54)kg)、臀型一致的阿勒泰羊30只,随机分为3组,自由采食60 d后,分别按照50%(0.25 MJ/W^(0.75)×d^(-1))(NL组)、100%(0.5 MJ/W^(0.75)×d^(-1))(NM组)、150%(0.75 MJ/W^(0.75)×d^(-1))(NH组)的维持代谢能饲喂30 d后屠宰,取背最长肌分别进行苏木精-伊红(H.E.)染色和2%醋酸铀-枸橼酸铅双染色法染色,光学显微镜和透射电镜观察肌肉组织结构,并通过免疫组化法测定肌球蛋白重链I(myosin heavy chain,MyHC I)和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(preoxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)蛋白表达量。【结果】(1)阿勒泰羊摄入50%、100%和150%的维持代谢能时,三组试验羊的平均日增重分别为-90.67 kg、13.33 kg和203.00 kg,差异显著(P<0.05);背最长肌肌纤维直径NH组、NM组显著大于NL组(P<0.05);肌内膜厚度NH组显著小于NL组(P<0.05);肌束肌纤维数量、肌束纤维面积、肌束膜厚度以及肌纤维面积、肌纤维密度差异不显著(P>0.05)。(2)饲养水平对肌质网终池面积、脂滴面积以及肌质网终池、肌原纤维、肌质的面积比都有影响,肌质网终池面积和面积比NH组显著大于NM和NL组(P<0.05),脂滴面积NH组显著大于NL组(P<0.05);肌质面积比NM组显著大于NH和NL组(P<0.05);线粒体、糖原三组之间无显著差异(P<0.05)。(3)饲养水平对肌纤维组成相关基因蛋白的表达有影响,PPARγ的蛋白表达强度、阳性面积和阳性率NL和NM组显著低于NH组(P<0.05);MyHCⅠ蛋白表达强度随能量摄入水平的增加而增大,但是三组间差异不显著(P>0.05)。【结论】不同饲养水平对阿勒泰羊背最长肌肌肉组织结构和肌纤维类型相关基因蛋白的表达具有显著的影响,在育肥期可通过饲养水平控制肌肉组织结构和肌纤维类型组成,从而按照生产需要调控肉品质。

猪背最长肌肌纤维类型的发育性变化及品种与营养影响特点

选用荣昌（RC）猪和杜×长×大（DLY）杂交猪为试验动物，采用相对定量RTPCR测定10～120kg体质量时背最长肌中I、2a、2x和2b4种MyHC的基因表达，以探讨猪背最长肌肌纤维类型的发育性变化，并分析品种及营养对它的影响特点。结果表明：（1）10～20始，2个品种的背最长肌肌纤维类型的百分组成发生显著改变，MyHCI和2x型纤维比例显著降低，而2b型纤维比例显著提高；（2）20～120kg，背最长肌肌纤维的变化规律因品种和纤维类型而异，除MyHC2b外，2个品种的MyHCI、2a和2x型肌纤维的发育规律存在一定差异；（3）背最长肌肌纤维类型的百分组成在10～50kg阶段未见品种间显著差异，但在80kg，RC猪的MyHC2b型纤维比例显著低于DLY猪，而2a型纤维比例则正好相反；（4）饲粮营养水平对2个品种猪背最长肌肌纤维类型的百分组成均无显著影响。以上结果提示，2个品种的背最长肌肌纤维类型的发育性规律及组成存在差异，且纤维组成差异主要表现在80kg，RC猪的MyHC2b型纤维比例显著低于DLY猪，可能与其优良肉质相关。

猪CFL2b基因在成肌细胞中的表达及对肌球蛋白重链基因表达的影响

猪CFL2b基因主要在骨骼肌中表达,对肌肉的发育和肌纤维的形成具有一定作用。为了解猪CFL2b基因与肌纤维性状的相关性,利用定向克隆和基因转染技术获得能稳定表达猪CFL2b基因的成肌细胞株,荧光显微镜观察及Western Blotting检测CFL2b基因在成肌细胞中的表达;应用实时定量PCR技术对细胞内肌球蛋白重链基因(MyHC)的表达变化进行检测。结果显示:CFL2b基因对MyHC的表达有明显影响,其中MyHC2x基因和MyHC2b基因的表达明显上调,MyHC1/slow的表达变化不明显。表明CFL2b基因与猪的肌纤维性状密切相关,推测猪CFL2b基因的高表达可能导致猪的不良肉质性状,可以考虑将CFL2b基因作为猪肉质性状的候选基因。

早期和后期限饲对肉鸡腓肠肌肌纤维类型和生长轴相关基因表达的影响

1日龄三黄雏鸡随机分为自由采食对照组(C)、1-14日龄隔日饲喂的早期限饲组(ER)和50-63日龄隔日饲喂的后期限饲组(LR)。63日龄采腓肠肌外侧头,ATPase染色法及相对定量RT-PCR法检测不同类型肌纤维含量及生长轴相关基因(GHR、IGF-I、IGF-IR)表达。结果表明:E组慢肌纤维含量降低,快肌纤维含量增加,L组无变化。E组慢肌肌球蛋白重链基因表达低于对照组(P<0·05),并伴随生长激素受体(GHR)和胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-ⅠR)mRNA表达的上调(P<0·05),L组无显著变化。提示:早期限饲可对肉鸡生长和肌纤维类型产生长期而且显著的影响,并且涉及肌肉中生长相关基因表达的改变,而后期限饲对肉鸡影响较小,说明早期和后期限饲通过截然不同的机制影响肉鸡肌肉生长。

不同饲养方式对苏尼特羊背最长肌肌纤维类型组成的影响

以12月龄不同饲养条件下(放牧和圈养)苏尼特羊背最长肌作为实验材料,用ATP酶染色法和实时定量聚合酶链式反应技术研究不同饲养方式下肌纤维类型组成。结果表明:放牧苏尼特羊背最长肌Ⅰ型和ⅡB型肌纤维直径和横截面积均显著小于圈养(P<0.05);同时,放牧苏尼特羊背最长肌Ⅰ型和ⅡA型肌纤维数量比例和面积比例、MyHCⅠ和MyHCⅡa基因的mRNA表达量均显著大于圈养(P<0.05),ⅡB型肌纤维数量比例和MyHCⅡb型基因mRNA表达量则呈现相反趋势。

莱芜猪和杜洛克猪背最长肌肌球蛋白重链组成

【目的】比较莱芜猪和杜洛克猪背最长肌肌球蛋白重链(MyHC)Ⅰ、Ⅱa、Ⅱx、Ⅱb的组成差异,探讨莱芜猪肉质优良的机理。【方法】选择体重100kg的莱芜猪10头和杜洛克猪7头,测定肉质性状,并用实时荧光定量RT-PCR方法检测背最长肌4种MyHC亚型mRNA的表达量,分析品种间差异。【结果】莱芜猪肌肉大理石纹评分和肌内脂肪含量显著高于杜洛克猪,肌肉失水率、剪切值和肌纤维直径显著低于杜洛克猪(P<0.01);莱芜猪背最长肌MyHCⅡa、ⅡxmRNA表达量显著高于杜洛克猪,MyHCⅡbmRNA表达量则显著低于杜洛克猪,而MyHCⅠmRNA表达量无明显变化。【结论】莱芜猪背最长肌氧化型肌纤维比例高于杜洛克猪,酵解型肌纤维比例低于杜洛克猪。表明莱芜猪背最长肌利用脂肪转化为能量的能力较高,即莱芜猪背最长肌氧化代谢功能高于杜洛克猪,这可能与其肌内脂肪含量较高、肉质细嫩多汁相关,这一结果可为通过肌纤维类型的选育提高肉品质的研究工作提供思路。

重组脂联素对小鼠骨骼肌生长及肌纤维类型的影响

研究重组脂联素(rAdp)对小鼠骨骼肌生长及肌纤维类型的影响。选择21日龄小鼠40只,随机分为2组,雌雄各半。试验组以10μg/(kg.d)腹腔注射rAdp,对照组注射相同剂量的PBS。测定小鼠生长和血糖、血脂水平,实时荧光定量PCR检测腓肠肌脂联素(Adp)、脂联素受体1(AdpR1)、脂联素受体2(AdpR2)和肌球蛋白重链(MyHC)4种亚型MyHC1、MyHC2a、MyHC2x、MyHC2b的mRNA水平。结果显示:(1)rAdp对小鼠体重、腓肠肌重无显著影响;(2)rAdp显著降低小鼠血清甘油三酯含量(P<0.05),但对血糖、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇均无显著影响;(3)rAdp极显著提高Adp和AdpR2基因表达(P<0.01),而对AdpR1基因表达量无显著影响;(4)rAdp显著抑制MyHC2x、MyHC2b的基因表达(P<0.05),而对MyHC1、MyHC2a的基因表达量无显著影响。结果表明:一定剂量的rAdp能影响小鼠血脂水平、骨骼肌中Adp、AdpR和MyHC mRNA表达。Adp可能是通过其与受体结合,影响骨骼肌脂肪酸代谢,从而改变肌纤维组成,影响其肌肉品质。

初生和成年黑藏羊肉品质与肌纤维特性差异分析

旨在比较放牧条件下不同年龄间黑藏羊肉品质与肌纤维组织学特性的差异。本研究选择青海自然放牧条件下体况良好的初生黑藏羊(平均体重(2.31±0.49)kg)和12月龄黑藏羊(平均体重(36.58±1.26)kg)各5只,依据年龄分为2组,即羔羊组(lamb)和成年羊组(adult)。通过三磷酸腺苷酶(ATPase)染色、酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法以及实时荧光定量PCR(real-time qPCR)技术分析羔羊和成年羊背最长肌营养成分、抗氧化能力、肌纤维类型及其肌球蛋白重链(myosin heavy chains,MyHCs)基因表达的变化情况。结果显示:1)2组间背最长肌水分、粗蛋白、粗脂肪和粗灰分等营养指标差异不显著(P>0.05);同时,过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平差异均不显著(P>0.05)。2)羔羊Ⅰ型、ⅡA型、ⅡB型肌纤维直径与横截面积均显著小于成年羊(P<0.05),而肌纤维密度则相反(P<0.05);羔羊Ⅰ型肌纤维数量比例和Ⅰ型、ⅡA型肌纤维面积比例均显著高于成年羊(P<0.05)。3)羔羊MyHCⅠ和MyHCⅡA基因的mRNA表达量显著低于成年羊(P<0.05),而MyHCⅡB型mRNA表达量则相反(P<0.05)。结果提示,随着年龄的增长,黑藏羊背最长肌营养成分与抗氧化能力没发生显著变化,但肌纤维类型由氧化型向酵解型转化,在一定程度上影响机体生长发育。

日粮添加乳酸菌对苏尼特羊肌纤维类型及肉品质的影响

以6月龄苏尼特羊为研究对象,利用ATP酶(ATPase)组织化学染色法和实时荧光定量技术,对苏尼特羊背最长肌的肌纤维特性、肌球蛋白重链(myosin heavy chains,MyHCs)的基因表达量、代谢酶活性及肉品质进行了研究,并分析了肌纤维特性、MyHCs基因表达量与肉品质间的相关关系,探究日粮添加乳酸菌对苏尼特羊肌纤维类型及肉品质的影响。结果表明,日粮添加乳酸菌使Ⅰ型肌纤维的数量比例,MyHCⅠ、MyHCⅡa和MyHCⅡx的基因表达量显著升高(P<0.05),乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)活性、肌肉pH、L*值和剪切力显著降低(P<0.05),a*值显著升高(P<0.05)。相关性结果显示,苏尼特羊背最长肌的pH0与MyaHCⅡx基因表达量成极显著负相关(P<0.01),pH24与Ⅰ型肌纤维的数量比例和面积比例成显著负相关(P<0.05)。L*值与MyHCⅠ基因表达量成显著负相关(P<0.05),a*值与Ⅰ型肌纤维的数量比例、MyHCⅡx基因表达量成显著正相关(P<0.05)。综上所述,日粮添加乳酸菌可以通过提高氧化型肌纤维的比例改善肌肉色泽,提高肌肉嫩度,从而提高羊肉品质。

青岛文昌鱼肌球蛋白重链基因片段的重组表达

将青岛文昌鱼(Branchiostoma belcheri tsingtauense)肌球蛋白重链基因片段亚克隆到pET-30a质粒,构建出重组表达载体并转化入大肠杆菌Escherichia coliBL21中。经SDS-PAGE和Western杂交检测表明,在IPTG诱导下含有重组载体的菌株可表达分子质量约30 ku的融合蛋白。诱导条件优化实验结果显示,该菌株经0.2 mmol/L IPTG诱导1 h就可大量表达此蛋白。可溶性实验确认该重组蛋白是可溶性蛋白。本研究为文昌鱼肌球蛋白重链特异性抗体的制备奠定了基础。

不同NFC/NDF饲粮对青海藏羊育成母羊肌肉抗氧化功能、肌纤维类型组成及其相关基因表达的影响

【目的】研究不同非纤维性碳水化合物(NFC)/中性洗涤纤维(NDF)饲粮对育成期藏羊(♀)背最长肌的肌纤维特性、肌球蛋白重链基因表达量及其抗氧化能力的影响。【方法】选用体况良好、体重(26.65±0.72)kg相近的4月龄青海藏羊母羔15只,随机分为3组,进行预试期15 d和正试期90 d的饲养试验。正试期3个组饲粮NFC/NDF水平分别为0.92(L组)、1.39(M组)、2.20(H组)。以藏羊左侧胴体第12~13肋骨间背最长肌作为试验材料,利用酶联免疫吸附法(ELISA)、三磷酸腺苷酶(ATPase)染色和实时荧光定量PCR(real-time qPCR)方法进行测定。【结果】①M组Ⅰ型肌纤维直径小于H组(P<0.05)与L组(P>0.05);M组Ⅰ型肌纤维横截面积低于L组(P<0.05)与H组(P>0.05);M组Ⅰ型肌纤维密度高于H组(P<0.05)和L组(P>0.05);L组Ⅰ型肌纤维数量和面积显著小于M组(P<0.05),而Ⅱb型肌纤维数量和面积则相反(P<0.05)。②M组MyHCⅠ基因的表达量显著高于L组(P<0.05),而L组MyHCⅡa基因的表达量显著高于H组(P<0.05),同时L组MyHCⅡb和MyHCⅡx的基因的表达量显著高于M组(P<0.05)。③M组过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性大于L组(P<0.05)与H组(P>0.05);M组谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性大于H组(P<0.05)与L组(P>0.05)。【结论】不同NFC/NDF饲粮能够影响育成藏母羊肌肉抗氧化能力、肌纤维类型组成及其相关基因的表达量,其中以NFC/NDF为1.39的饲粮效果较佳。

黑藏羊不同部位肌纤维组织学特征的差异分析

【目的】分析不同部位肌肉的肌纤维特性,为充分挖掘青海黑藏羊(♂)的肉用潜质提供参考。【方法】利用ATP酶(ATPase)组织化学染色法和实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time qPCR)测定黑藏羊背最长肌(longissimus dorsi,LD)、臂三头肌(biceps femoris muscle,BF)和股二头肌(Triceps femoris muscle,TF)3个部位肌肉的肌纤维组织学特征以及与其相关的肌球蛋白重链(Myosin heavy chains,MyHCs)基因的表达量。【结果】(1)背最长肌与臂三头肌ⅡA型、ⅡB型肌纤维直径显著低于股二头肌(P<0.05);而股二头肌Ⅰ型、ⅡA型和ⅡB型肌纤维横截面积显著高于背最长肌(P<0.05);Ⅰ型、ⅡA型和ⅡB型肌纤维密度均表现为背最长肌>臂三头肌>股二头肌(P>0.05)。(2)背最长肌ⅡA型肌纤维数量比例高于臂三头肌和股二头肌,其中背最长肌与股二头肌差异显著(P<0.05);背最长肌Ⅰ型肌纤维面积比例高于臂三头肌(P>0.05)和股二头肌(P<0.05)。(3)背最长肌MyHCⅡA基因的表达量显著高于股二头肌(P<0.05),较臂三头肌差异不显著(P>0.05),各部位间MyHCⅠ、MyHCⅡB和MyHCⅡX基因的表达量差异均不显著(P>0.05)。【结论】揭示了黑藏羊不同部位肌肉的肌纤维特性差异,为今后黑藏羊的分档加工提供了理论参考。

阿勒泰羊肌肉组织的免疫组化分析

[目的]比较阿勒泰羊肌肉组织肌球蛋白重链(Myosin heavy chain,My HC)I型肌纤维含量。[方法]收集8月龄阿勒泰羊、Texel羊和F1代肉羊肌肉组织,应用免疫组化方法分析阿勒泰羊My HC I型肌纤维含量,并与Texel和F1代肉羊进行了比较。[结果]阿勒泰羊My HC I型肌纤维含量与Texel肉羊、F1代肉羊差异显著(P<0.05)。[结论]研究结果可为肉羊品种选育和肌肉品质鉴定提供理论依据。

不同发育阶段大通牦牛骨骼肌肌纤维类型及MyHC基因表达

为了阐明不同发育阶段大通牦牛骨骼肌纤维类型变化特点及其低氧适应机制,本试验从青海省大通县(海拔3200 m)选取健康的1,30,180日龄和成年的大通牦牛作为研究对象,选择湖北省襄阳市(海拔约100 m)相同发育阶段的平原黄牛作为对照,采用免疫组织化学染色的方法观测骨骼肌中快肌和慢肌的含量及比例的变化;采用实时荧光定量PCR检测不同海拔牦牛骨骼肌肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MYHC)基因各亚型mRNA表达的变化。结果表明:随年龄增长,大通牦牛骨骼肌快肌数量逐渐增多,慢肌数量比逐渐减少(P<0.05);在同一发育阶段,大通牦牛骨骼肌快慢肌数量比均高于平原黄牛,且差异显著(P<0.05);随着年龄的增长,大通牦牛快慢肌面积比呈现逐渐减少的趋势;在相同发育阶段时,除30日龄外,大通牦牛快肌面积比在其余3个年龄段均低于平原黄牛,而慢肌面积比则高于平原黄牛;大通牦牛骨骼肌中MyHCⅠmRNA含量逐渐升高,MyHCⅡa mRNA含量先升高后降低,MyHCⅡx和MyHCⅡb mRNA含量逐渐降低,且呈现随年龄增长快肌向慢肌转化的特点。以上结果说明了大通牦牛骨骼肌MyHCⅠ、Ⅱa、Ⅱx、Ⅱb基因在不同年龄段的表达情况,同时证明MyHC 4种亚型的mRNA表达量可能与低氧环境有一定联系,大通牦牛为适应高原低氧环境,其骨骼肌肌纤维类型呈现快肌向慢肌转化的发育性模式,为深入研究大通牦牛的低氧适应机制提供了基础数据。