Reduction of natural regulatory T cells in thymomas accompanying myasthenia gravis and its possible association with Foxp3 and thymic stromal lymphopoietin

Objective: To investigate the expression of both thymic regulatory T cells (CD4+CD25+Foxp3+cells, Treg) and thymic stromal lymphopoietin (TSLP) in thymomas accompanying myasthenia gravis. Methods: We used immunohistochemistry and real-time reverse trancription polymerase chain reaction (real-time RT-PCR) techniques to determine Foxp3+ Treg counts and the expression levels of Foxp3 mRNA and TSLP mRNA in thymomas of 23 MG patients and thymuses of 4 healthy controls. Results: The CD4+ Foxp3+ nTreg (natural regulatory T cells) counts in thymomas were significantly lower than those in normal thymuses (P<0.01), and the expression levels of Foxp3 mRNA and TSLP mRNA were also lower in thymomas(P<0.01). Among the thymoma types, type B1 thymoma had the highest Foxp3+ nTreg count and standard values of Foxp3 mRNA and TSLP mRNA. There was a strong positive correlation between the mRNA transcriptional levels of Foxp3 and TSLP. Conclusion: The insufficient expression of Foxp3 in thymoma, which may be caused by decreased transcription of TSLP, may result in the reduction of Tregs and cause autoimmune disorders.

胸腺瘤相关重症肌无力患者瘤旁胸腺上皮细胞外泌体对Treg细胞功能的影响

目的:探讨胸腺瘤相关重症肌无力(TAMG)患者瘤旁胸腺上皮细胞外泌体对调节T细胞(Treg)叉状头转录因子P3(FOXP3)表达及分泌转化生长因子(TGF)-β1、白细胞介素(IL)-10功能的影响。方法:收集TAMG患者及先天性心脏病无胸腺疾病的患者(对照组)胸腺组织,分离培养胸腺上皮细胞,使用广谱角蛋白(p-CK)和波形蛋白(Vimentin)染色行免疫荧光鉴定;膜亲和柱法提取胸腺上皮细胞外泌体并行透射电子显微镜(TEM)、粒径分析(NTA)及western blotting检测鉴定;磁珠分选法分离胸腺上皮细胞中Treg细胞,流式细胞术检测纯度;Treg细胞与外泌体共培养,行外泌体染色示踪实验,检测FOXP3表达及培养上清液TGF-β1、IL-10水平。结果:分离细胞呈长梭形,生长良好,免疫荧光p-CK呈阳性,Vimentin呈阴性,细胞为胸腺上皮细胞。TEM、NTA、western blotting结果提示提取物为外泌体。流式细胞术检测Treg细胞纯度>90%,纯度较好。外泌体染色示踪结果提示Treg细胞可吞噬胸腺上皮细胞外泌体,与TAMG组胸腺上皮细胞外泌体共培养后Treg细胞FOXP3表达减少(P<0.01),TGF-β1、IL-10分泌减少(P<0.01)。结论:Treg细胞可吞噬TAMG瘤旁胸腺上皮细胞外泌体,导致FOXP3表达减少、分泌TGF-β1、IL-10减少,免疫抑制功能减弱,其可能参与TAMG的发病过程。

眼肌型及全身型重症肌无力患者外周血T淋巴细胞Fas的表达

目的探讨Fas介导的细胞凋亡与眼肌型(ocular myasthenia gravis,OMG)及全身型重症肌无力(generalized myasthenia gravis,GMG)发病的关系。方法采用流式细胞技术检测4例OMG、13例GMG患者及13例健康对照组外周血淋巴细胞中CD4、CD8及Fas的表达。结果 OMG、GMG组与对照组外周血T淋巴细胞表面CD4、CD8分子表达的差异无统计学意义(P>0.05)。GMG组与对照组外周血T淋巴细胞中Fas+细胞比例的差异有统计学意义(41.72%±8.73%、31.22%±13.00%,P=0.017)。GMG组与对照组Fas表达增高者比例的差异有统计学意义(61.5%、15,4%,P=0.041)。Fas表达增高的GMG患者病情较重,病程较长,胸腺瘤发生率较高。OMG与GMG组外周血T淋巴细胞中Fas+、CD4+Fas+、CD8+Fas+细胞比例差异无统计学意义(P>0.05)。结论 GMG患者外周血T淋巴细胞中Fas的表达升高,OMG与GMG患者外周血T淋巴细胞中Fas的表达无显著差异,二者可能同属一种系统性疾病。

重症肌无力患者外周血AIRE、Tfh细胞和Tfr细胞与病情严重性相关分析

目的探讨自身免疫性调节因子(AIRE)、滤泡辅助性T(Tfh)细胞和滤泡调节性T(Tfr)细胞与重症肌无力(MG)患者病情严重程度的相关性。方法收集2015-12—2016-4第四军医大学唐都医院收治的MG患者22例,根据临床表现分为全身型MG(GMG)和眼肌型MG(OMG);同期选取健康体检中心查体者10名作为健康对照。收集MG患者详细临床资料,包括美国MG协会(MGFA)分型及定量MG(QMG)评分。通过流式细胞术分析AIRE阳性细胞比例及Tfh/Tfr比值。结果 (1)AIRE表达在各组间比较差异具有统计学意义(P<0.01)。GMG组和OMG组AIRE表达均较对照组降低(P<0.01,P<0.05),而GMG组与OMG组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。(2)Tfh/Tfr比值在各组间比较差异具有统计学意义(P<0.01)。GMG组和OMG组Tfh/Tfr比值均高于对照组(P<0.01,P<0.05),且GMG组高于OMG组(P<0.05)。(3)MG患者AIRE表达与MGFA分型及QMG评分呈负相关(r=-0.517,P<0.05;r=-0.616,P<0.01),Tfh/Tfr比值与MGFA分型和QMG评分呈正相关(r=0.761,r=0.581,均P<0.01)。结论 AIRE、Tfh/Tfr比值与MG的病情严重程度有一定的相关性,并可能参与了MG的发病。

FoxP3^+CD4^+CD25^+调节性T细胞在重症肌无力发病机制中的作用

目的在细胞与分子水平检验重症肌无力(myasthenia gravis,MG)患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Tregs)的表达缺陷,探讨CD4+CD25+Tregs亚群异常与MG发病间的关系。方法流式细胞技术检测21例MG患者(11例经胸腺切除)与20名健康对照者(healthy controls,HCs)外周血CD4+ CD25+ Tregs及FoxP3+CD4+CD25+Tregs含量,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-FQ-PCR)分析MG患者与HCs外周血CD4+CD25+Tregs中FoxP3mRNA的表达。结果MG患者外周血CD4+ CD25+Tregs占CD4+T细胞含量与HCs比较无统计学差异(P>0.05)。MG患者外周血FoxP3+CD4+CD25+ Tregs含量及FoxP3mRNA表达量与HCs比较均显著性降低(P<0.05);胸腺切除的MG患者与未经胸腺切除的MG患者外周血FoxP3+CD4+CD25+Tregs含量及FoxP3 mRNA表达量无统计学差异(P>0.05)。结论MG患者外周血CD4+CD25+Tregs数量正常,但其表面分子FoxP3的表达下调,这种CD4+CD25+Tregs亚群的异常发现有助于深入阐明MG的免疫发病机制。

Foxp3基因及调节性T细胞在重症肌无力被动转移幼鼠发病中的作用机制

目的探讨Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞、Foxp3mRNA在重症肌无力被动转移模型(passive transferred myasthenia gravis,PTMG)发病中的作用机制。方法将16只幼年雌性C57BL/6小鼠随机分为2组:模型组和对照组,模型组经腹腔注射含1.0mg/kgmAb35的Ringer's液0.2ml建立PTMG模型,正常对照组注射不含mAb35的Ringer's液0.2ml。采用流式细胞技术检测小鼠脾细胞中CD4+CD25+T细胞及Foxp3+CD4+CD25+Tregs含量,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-FQ-PCR)分析2组小鼠脾细胞中Foxp3mRNA的表达,ELISA法检测2组小鼠血清白介素-2和干扰素-γ的水平。结果①模型组小鼠脾细胞中CD4+CD25+T细胞与CD4+T细胞含量的比例与对照组比较有统计学差异[(8.82±0.74)%vs(9.89±0.88)%,P<0.05];模型组Foxp3+CD4+CD25+Tregs与CD4+CD25+T细胞含量的比例与对照组比较显著降低[(6.83±1.18)%vs(8.38±0.76)%,P<0.01];脾细胞悬液中Foxp3mRNA表达量模型组低于对照组[(0.47±0.30)vs(1.53±1.19),P<0.05];模型组小鼠血清IL-2、IFN-γ水平分别为(24.41±13.83)ng/L、(142.31±6.05)ng/L,高于对照组小鼠[(12.09±2.96)ng/L、(109.36±3.64)ng/L](P<0.05)。②模型组小鼠Foxp3+CD4+CD25+Tregs数量变化与CD4+CD25+T细胞数量呈正相关(r=0.864,P<0.01),对照组小鼠Foxp3+CD4+CD25+Tregs数量变化与CD4+CD25+T细胞数量亦呈正相关(r=0.977,P<0.01)。结论Foxp3mRNA表达下调,导致Foxp3+CD4+CD25+Tregs细胞亚群表达降低,并通过上调的IL-2和IFN-γ介导了Foxp3及Tregs在重症肌无力发病机制中的作用。

Th17/Treg细胞及其细胞因子在神经系统自身免疫性疾病中的研究进展

CD4^(+)T细胞经T细胞受体介导活化后主要分为辅助性T细胞(Th细胞)1、Th2、Th17和调节性T细胞(Treg细胞)4个细胞亚群,各亚群间互相调节,参与不同类型的免疫应答,共同发挥免疫学功能,其中细胞因子和转录因子对CD4^(+)T细胞的分化、增殖和效应细胞因子产物起重要的调节作用。经典的免疫学说认为,Th1/Th2细胞免疫模式失衡是诱发自身免疫性疾病(AID)的主要机制。近年来,随着Th17和Treg细胞亚群的发现和研究的不断深入,不仅弥补了单纯由Th1/Th2细胞介导自身免疫效应机制的缺陷,丰富了传统Th1/Th2细胞免疫理论的内涵,拓展了对AID发生机制的认识,也有助于了解神经系统AID的发病机制,从而为寻找有效的治疗靶点及选择安全可靠的新药提供依据。

重症肌无力胸腺基质淋巴细胞生成素表达与CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg细胞表型的研究

目的探索重症肌无力患者胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)表达水平与CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)表型的相关性。方法 MG组(16例经胸腺切除的MG患者)及对照组(23例先天性心脏病心脏手术后患者)取外周血单个核细胞,经CD4+CD25+抗体表面染色后加入破膜剂孵育,以Foxp3+抗体行胞内染色,以流式细胞技术检测CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+T细胞比率;同时取两组患者对应的切除胸腺组织,以免疫组织化学法检测TSLP表达水平,并进行两组间比较;以Logistic回归分析方法分析TSLP阳性表达的Hassall小体计数与Treg细胞之间的相关性。结果CD4+CD25+/CD4+T细胞比率MG组〔(6.24±0.62)%〕与对照组〔(6.56±0.65)%〕无统计学差异(P>0.05),MG组CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+T细胞比率〔(3.82±0.49)%〕较对照组〔(5.73±0.56)%〕明显降低(P<0.01);与对照组比较,MG组患者胸腺TSLP阳性面积大,染色深,且TSLP阳性的Hassall小体数目(6.81±2.17)明显低于对照组(18.87±3.06)(P<0.01)。MG组TSLP阳性表达的Hassall小体计数与Treg细胞表达量之间呈线性相关(R2=0.158,F=13.42,P<0.01)。结论 MG患者TSLP表达不足与胸腺Treg细胞发育过程中CD4+CD25+Foxp3+表型的表达缺陷呈正相关。

重症肌无力自身抗体、T淋巴细胞亚群及其临床意义的探讨

目的：探讨重症肌无力（ＭＧ）抗乙酰胆碱受体抗体（ＡｃｈＲａｂ）、抗突触前膜受体抗体（ＰｓｍＲａｂ）和Ｔ淋巴细胞亚群与临床的关系。方法：应用ＥＬＩＳＡ法检测４０例重症肌无力病人血清中上述两种自身抗体，应用Ｔ淋巴细胞亚群单克隆抗体微量细胞毒法检测该组病人Ｔ淋巴细胞亚群。结果：①ＡｃｈＲａｂＩｇＧ型阳性２４例（６０％）、ＩｇＭ型阳性１５例（３７．５％），ＰｓｍＲａｂＩｇＧ型阳性２４例（６０％）、ＩｇＭ型阳性１１例（２７．５％）；②仅ＡｃｈＲａｂＩｇＧ型阳性３例（７．５％）、ＩｇＭ型阳性１例（２．５％），只有ＰｓｍＲａｂＩｇＧ型阳性２例（５％），二种抗体的ＩｇＧ型和ＩｇＭ型均阴性７例（１７．５％）；③ＡｃｈＲａｂ与ＰｓｍＲａｂ存在直线正相关；④本组病人ＣＤ＋４增高、ＣＤ＋８降低、ＣＤ＋４／ＣＤ＋８比率增高；⑤ＣＤ＋４／ＣＤ＋８比率与这两种自身抗体无相关关系；⑥年龄大于４０岁组的ＣＤ＋８低于４０岁以下组，而ＣＤ＋４／ＣＤ＋８高于４０岁以下年龄组；⑦病程大于或等于３年组的ＣＤ＋８、ＣＤ＋４／ＣＤ＋８分别低于、高于病程小于３年组。结论：ＭＧ病人存在体液免疫和细胞免疫的异常；ＭＧ可受到ＡｃｈＲａｂ和ＰｓｍＲａｂ的免疫性损害?

重症肌无力患者周围血中CD4^+T淋巴细胞亚群的研究

目的研究ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞的功能亚群在重症肌无力（ｍｙａｓｔｈｅｎｉａｇｒａｖｉｓ，ＭＧ）发病中的作用。方法采用免荧光双标记技术和流式细胞仪对３９例ＭＧ患者和１８例健康对照者周围血中ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞的两个亚群（ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ－）的百分率进行测定。结果ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋亚群的百分率在ＭＧ组和ＡＣｈＲＡｂ阳性组明显低于对照组和ＡＣｈＲＡｂ阴性组；而ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ－细胞的百分率在ＭＧ组和ＡＣｈＲＡｂ阳性组显著高于对照组和ＡＣｈＲＡｂ阴性组。结论表明ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞的两个功能不同亚群在ＭＧ患者体内发生了异常改变，与ＡＣｈＲＡｂ的产生有关。

重症肌无力患者T细胞亚群的测定

作者采用改良的微量细胞毒试验,应用OKT单克隆抗体系统,对46例重症肌无力(MG)病人和36例健康人外周血中T细胞亚群进行了检测。结果表明,MG患者的OKT_3^+、OKT_4^+、OKT_3^+细胞百分率显著低于对照组,而OKT_4/OKT_3的比值显著高于对照组(P<0.05)。患者不同性别、年龄、病情及是否用激素治疗,其结果均无显著差异(P>0.05)。

辅助性T细胞及其细胞因子在重症肌无力中的作用

目的探讨辅助性T细胞及其相关细胞因子在全身型MG患者急性期发病中的作用。方法采用流式细胞术检测33例全身型MG患者和34例健康对照组外周血中Tfh细胞亚群CXCR5^+CD4^+T、CD45RO^+CXCR5^+CD4^+T、CD45RA^+CXCR5^+CD4^+T、ICOS^+CXCR5^+CD4^+T和PD-1^+CXCR5^+CD4^+T细胞占CD4^+T细胞的比例。采用流式液相多重蛋白定量(cell based assay,CBA)技术检测MG组及对照组血清中IL-17A、IFN-γ、IL-4、IL-21的含量。应用ELISA技术检测MG组及对照组血清中IL-22的含量。根据QMGs(the quantitative myasthenia gravis score,QMGs)对纳入研究的MG患者进行评分,QMGs反映了MG患者的病情严重程度。结果 MG组外周血中的循环Tfh细胞(ICOS^+CXCR5^+CD4^+T和PD-1^+CXCR5^+CD4^+T)较对照组增高(P=0.016,P<0.001),且PD-1^+CXCR5^+CD4^+T细胞与MG患者病情严重程度正相关(r=0.405,P=0.019)。MG组血清IL-21、IL-17A、IFN-γ的含量较对照组升高,有统计学意义(P=0.007,P=0.016,P=0.007);MG组血清IL-4的含量较对照组略有增多,IL-22含量较对照组略有减少,但均无统计学意义。MG组IL-4含量QMGs呈负相关,差异具有显著性(r=-0.393,P=0.024)。结论 MG急性期ICOS^+和PD-1^+的循环Tfh细胞可能促进MG发病;IL-21、IFN-γ、IL-17A同样可能促进MG发病;IL-4可能对MG有保护作用。

免疫抑制剂对重症肌无力病人T淋巴细胞亚型的影响

目的观察重症肌无力(MG)病人细胞免疫的异常改变和免疫抑制剂对重症肌无力(MG)病人的临床疗效及对T淋巴细胞亚型的影响。方法用许氏评分法观察60例MG病人的病情严重程度和免疫抑制治疗2个月后的临床疗效;采用直接免疫荧光染色和流式细胞仪技术测定60例病人和60名志愿健康者周围血中T淋巴细胞亚型的百分率,并测定糖皮质激素或环磷酰胺免疫抑制治疗前及治疗后2个月T淋巴细胞亚型的变化。结果未治疗MG组外周血中CD8+T淋巴细胞的百分率较正常对照组显著下降(P<0.01);CD4+T淋巴细胞的百分率和CD4+/CD8+T细胞的比例较正常对照组均显著升高(P<0.01)。经激素或环磷酰胺治疗2个月后MG组随着临床症状的改善,外周血中总T细胞(CD3+)和CD8的百分率较治疗前均显著升高(P<0.01;P<0.05);CD4+T淋巴细胞的百分率和CD4+/CD8+T细胞的比例较治疗前均显著下降(P<0.01)。结论MG病人有T淋巴细胞亚型的变化,免疫抑制治疗对T淋巴细胞亚群有明显影响,提示T淋巴细胞亚型的测定可为激素、环磷酰胺等免疫疗法提供一个客观的实验室指标,为判断疾病的转归提供实验依据。

黄芪葛根汤配合温针灸治疗老年重症肌无力的疗效及对T淋巴细胞亚群的影响

目的观察黄芪葛根汤配合温针灸治疗老年重症肌无力(MG)的疗效及对T淋巴细胞亚群的影响。方法将110例按照随机数字表法分为观察组和对照组各55例,两组均给予健康教育、饮食、运动等基础干预,在此基础上对照组给予温针灸治疗,观察组在对照组基础上配合黄芪葛根汤治疗。观察两组中医证候积分、肌无力程度、临床疗效、颈内动脉(ICA)、颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)的血流速度以及T淋巴细胞亚群水平。结果治疗后两组中医证候积分显著低于治疗前(P<0.05),且观察组显著低于对照组(P<0.05);治疗后两组上睑疲乏、下肢疲劳、吞咽功能、呼吸肌功能评分显著低于治疗前(P<0.05),且观察组显著低于对照组(P<0.05);观察组总有效率为90.91%,显著高于对照组之76.36%(P<0.05);治疗后两组ICA、CCA、ECA血流速度显著高于治疗前(P<0.05),且观察组显著高于对照组(P<0.05);治疗后两组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平显著低于治疗前(P<0.05),且观察组显著低于对照组(P<0.05),两组CD8+水平显著高于治疗前(P<0.05),且观察组显著高于对照组(P<0.05)。结论黄芪葛根汤配合温针灸能够有效改善老年MG患者T淋巴细胞亚群水平,提高临床疗效。

免疫抑制剂对重症肌无力患者血清调节性T细胞的影响

目的 探讨免疫抑制剂对重症肌无力患者血清调节性T细胞的影响.方法 选择2011年8月至2014年2月在湖北医药学院附属东风医院神经内科就诊的重症肌无力患者90例,根据随机数字表法分为研究组与对照组,各45例.对照组给予泼尼松1.5 mg/（kg＆#183;d）治疗;研究组给予静脉注射丙种球蛋白治疗5d,然后给予泼尼松1.5 mg/（kg＆#183;d）治疗.治疗4周后,观察2组治疗效果以及对调节性T细胞的影响.结果 研究组的有效率为97.8％（44/45）,对照组为86.7％（39/45）,研究组的有效率明显高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）.治疗前2组的定量重症肌无力（QMG）评分对比差异无统计学意义（P＞0.05）,治疗后研究组QMG评分明显高于治疗前和对照组同时点[（8.3±1.0）分比（2.6±1.1）、（6.3±1.3）分],差异有统计学意义（P＜0.05）.治疗后研究组的CD4 CD25＋T和CD4OX40＋T值、白细胞介素2与肿瘤坏死因子α值都明显低于治疗前和对照组同时点[5.8±1.3）％比（8.7±1.3）％、（7.1±1.0）％,（8.5±3.1）％比（11.5±2.9）％、（10.4±2.8）％,（14±6）μg/L比（33±11）、（23±5）μg/L,（7.9±2.4） ng/L比（13.5±3.2）、（9.0 ±2.1）ng/L],差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 重症肌无力患者多存在免疫紊乱状况,免疫抑制剂的应用能有效提高治疗效果,可能与通过下调T细胞的刺激作用与抑制相关细胞因子表达有关.

重症肌无力胸腺瘤天然调节T细胞及其影响因素

目的研究伴重症肌无力(MG)胸腺瘤患者胸腺瘤中天然调节性T细胞(nTreg)的变化及其影响因素。方法采用免疫组化方法检测不同病理类型胸腺瘤中nTreg细胞的数量,通过实时定量反转录PCR检测不同病理类型胸腺瘤中FoxP3 mRNA及胸腺间质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)mRNA水平,并分析二者之间的关系。结果伴MG胸腺瘤中FoxP3+Treg细胞数量较正常胸腺组织减少,差异有统计学意义(P<0.01);伴MG胸腺瘤FoxP3 mRNA、TSLP mRNA转录水平较正常胸腺组织明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);在各胸腺瘤亚型中,B1型FoxP3+Treg细胞数量,FoxP3 mRNA、TSLP mRNA转录水平最高;FoxP3 mRNA、TSLP mRNA水平呈显著正相关。结论伴MG胸腺瘤中nTreg减少,与胸腺瘤中TSLP转录水平下降有关,可能导致免疫调节功能紊乱,从而引起MG发病。

补中益气汤对老年重症肌无力患者Treg细胞、淋巴细胞亚群及疗效的影响

目的:探究补中益气汤对老年重症肌无力(MG)患者Treg细胞、淋巴细胞亚群及疗效的影响。方法:选取2016年5月至2017年12月中国中医科学院广安门医院收治的老年MG患者68例作为研究对象,按照随机数字表法随机分为对照组和观察组,每组34例。对照组老年MG患者给予糖皮质激素醋酸地塞米松片进行治疗。观察组在对照组的基础上给予老年MG患者中药补中益气汤进行治疗。2组患者均治疗12周后,比较2组患者治疗前后的临床分型与定量重症肌无力评分(QMG)比较、辅助性T细胞17(Th17)频数、调节性T细胞(Tregs)水平、抗乙酰胆碱受体抗体(AchR-Ab)水平以及疗效。结果:治疗后,观察组总有效率88.23%,高于对照组(61.76%,P=0.01)。治疗后,2组老年MG患者的QMG评分、Th17细胞频数、Treg细胞及AchR-Ab水平均显著降低,且观察组低于对照组(P<0.05)。结论:补中益气汤联合激素使用,能够有效缓解老年MG患者的临床症状使QMG评分降低,调节免疫细胞,提高免疫功能,改善血清AchR-Ab水平,临床疗效显著,值得临床推广应用。

微小RNA与重症肌无力关系的研究进展

重症肌无力(MG)是一种由抗乙酰胆碱受体(AChR)抗体介导、CD4阳性T淋巴(CD4^(+)T)细胞依赖的自身免疫病。微小RNA(miRNA)是一种内源性小分子单链非编码RNA,参与转录后调节,对CD4^(+)T细胞的分化和功能具有重要作用。目前研究发现MG患者体内存在多种miRNAs的改变,其可能通过调控CD4^(+)T细胞参与MG的发生、发展,并且miRNA可能是MG潜在的治疗靶点。本文就miRNA与MG的关系进行综述,以期对进一步研究MG的发病机制和临床诊治提供新的思路。

T淋巴细胞亚群失衡与全身型重症肌无力临床症状加重及缓解的相关性研究

目的:观察全身型重症肌无力(myasthenia gravis, MG)患者血中T淋巴细胞亚群百分比的变化,分析其与患者症状加重或缓解间的关系。方法:采用流式细胞术分别检测51例全身型MG患者在病情加重及缓解的不同时期外周血中T淋巴细胞亚群百分比的变化,分析其与症状波动之间的关系,另设30名健康体检者为对照组。结果:加重期MG患者血中的CD4+CD25+CD127low/-调节性T淋巴细胞和CD4+CD45RA+原始T淋巴细胞百分比均明显低于对照组(5.54%±1.88%比7.95%±3.45%,P<0.05;11.42%±6.97%比24.98%±7.86%,P<0.05);而MG患者加重期血中的CD4^+CD45RO^+T淋巴细胞百分比高于缓解期及对照组(35.06%±8.78%比30.82%±8.43%;35.06%±8.78%比30.09%±7.53%,P均<0.05)。采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)分析淋巴细胞百分比在MG诊断中的价值,患者血中的CD4^+CD25^+CD127^(low/-)调节性T淋巴细胞和CD4+CD45RA+T淋巴细胞诊断全身型MG发病的ROC曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.713和0.900(P<0.05);CD4^+CD45RO^+T淋巴细胞诊断MG症状加重的AUC为0.675,其最佳临界值为32.06%。结论:检测调节性T淋巴细胞和CD4^+CD45RA^+T淋巴细胞百分比对全身型MG的发病具有一定诊断价值,而CD4^+CD45RO^+T淋巴细胞百分比与全身型MG患者的症状波动相关,有可能成为衡量其病情变化的标志物。

实验性自身免疫性重症肌无力大鼠T淋巴细胞IFN-γ-iNOS-NO通路的研究

目的探讨实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠T淋巴细胞干扰素-γ(IFN-γ)-诱导型一氧化氮合酶(iNOS)-一氧化氮(NO)通路的表达水平。方法将大鼠随机分为EAMG组、正常对照组、完全弗氏佐剂(CFA)对照组。EAMG组大鼠分别于足垫、腹部及背部皮下多点注射丁氏双鳍电鳐的电器官乙酰胆碱受体(AChR)蛋白乳剂共1ml,第4周再次注射上述乳剂;CFA对照组在相应时间、用相同的方法注射等量CFA;初次注射7周后,分离各组大鼠脾脏T淋巴细胞,体外培养48h后取上清液分别应用酶联免疫吸附试验和Griess试剂法,检测IFN-γ和NO水平。结果IFN-γ含量EAMG组为(81.68±10.23)pg/ml,正常对照组为(29.20±5.41)pg/ml,CFA对照组为(31.54±6.12)pg/ml;NO含量EAMG组为(23.68±7.13)μmol/L,正常对照组为(9.05±2.11)μmol/L,CFA对照组为(10.21±2.67)μmol/L;EAMG组IFN-γ和NO水平显著高于正常对照组和CFA对照组(均P<0.01);正常对照组和CFA对照组间差异无统计学意义。结论EAMG大鼠T淋巴细胞IFN-γ和NO分泌明显提高;T淋巴细胞IFN-γ-iNOS-NO通路异常可能与MG发病有关。