PCR-RFLP分析16s-23srDNA间区序列鉴定分枝杆菌菌种

目的探讨16S～23srDNA间区序列DNAPCR扩增和限制性酶切分析在分枝杆菌分类鉴定中的价值。方法对19种分枝杆菌标准株的16S～23SrDNA间区序列DNA进行PCR扩增并对扩增产物进行限制性内切酶HaeⅢ、MSP1消化反应，分析不同菌种扩增片段及其限制性片段长度多态性的差异。结果，PCR扩增结果显示：分枝杆菌一般扩增出1～2条带，缓慢生长分枝杆菌扩增片段在340～480bP，快速生长分枝杆菌扩增片段集中在470～575bP，单从扩增产物的琼脂糖凝胶电泳只能鉴定33．3％的受试菌种，酶切结果显示：分枝杆菌的酶切图谱彼此不同。结论16S～23SrDNA间区序列DNAPCR扩增和RFLP分析是分枝杆菌分类鉴定的一种快速、有效的方法。

分枝杆菌在北京水源环境中的分布：M.arupense国内首次报告

目的:研究北京水源中分枝杆菌的分布,应用表型鉴定方法和分子生物学方法进行分枝杆菌鉴定,并比较两种方法的准确性和优缺点。方法:采集水源环境标本,进行分枝杆菌分离培养,通过生化反应对所有分离株进行鉴定,同时从培养菌落中提取分枝杆菌DNA,用PCR扩增65ku热休克蛋白基因,扩增产物分别应用两种限制性内切酶BstEⅡ和HaeⅢ酶切,进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析和PCR产物的测序分析。结果:从30份养鱼水中分离出35株分枝杆菌。①表型鉴定结果:RunyonⅠ群1株,可疑为海分枝杆菌;RunyonⅡ群7株,确定为戈登分枝杆菌或疑似戈登分枝杆菌;RunyonⅢ群9株,未鉴定到种;RunyonⅣ群18株,其中龟-偶发分枝杆菌复合群9株,其余9株未鉴定到种。②PCR-RFLP鉴定结果:戈登分枝杆菌8株,龟-偶发分枝杆菌复合群8株(包括M.peregrinum1株),疑似日内瓦分枝杆菌10株,其余9株未鉴定到种。③PCR产物测序鉴定:戈登分枝杆菌10株,M.arupense9株,偶发分枝杆菌7株,土分枝杆菌6株,不产色分枝杆菌1株,M.peregrinum1株,脓肿分枝杆菌1株。结论:非结核分枝杆菌(NTM)广泛存在于养鱼水中,分枝杆菌采用65ku热休克蛋白基因PCR扩增配合测序鉴定较传统表型鉴定和PCR-RFLP更准确。

结核分支杆菌与非结核分支杆菌快速鉴别的实验研究

目的探讨提供一种从菌种水平快速检测和鉴别分支杆菌的方法。方法应用三对分别对应于分支杆菌(分子量65000)表面抗原、结核分支杆菌插入序列IS6110及人类β珠蛋白基因的部分序列的特异性寡核苷酸引物对受试菌种及临床标本中的DNA进行多重PCR扩增,其扩增产物分别为439bp、268bp及123bp,并对439bp进行BstEⅡ和HaeⅢ两种限制性内切酶消化,同时,将135例临床标本进行培养、涂片,和多重PCR联合限制性片段长度多态性分析(mPCRRFLP)检测。结果mPCRRFLP方法可将12种受试的标准菌种分别区分到种及亚种水平。本方法在临床实验中亦体现出较高的灵敏性及特异性。结论mPCRRFLP分析是对结核分支杆菌与非结核分支杆菌进行菌种分类鉴定的一种快速有效的方法。