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Molecular isolation and identification of Mycobacterium avium subsp.hominissuis in Didelphis virginiana from Hidalgo,Mexico
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作者 Nallely Rivero-Perez Juan Ocampo-López +7 位作者 Benjamín Valladares-Carranza Fabián R.Gómez de Anda Francisco J.Pena Jiménez Victor M.Martínez Juárez Armando Peláez Acero Jose I.Olave Leyva Deyanira Ojeda-Ramírez Adrian Zaragoza-Bastida 《Asian Pacific Journal of Tropical Medicine》 SCIE CAS 2020年第3期131-136,共6页
Objective:To isolate and identify the exact species of the genus Mycobacterium from Didelphis(D.)virginiana,and the direct implications of this bacterium to public health and veterinary medicine.Methods:Thirty-one D.v... Objective:To isolate and identify the exact species of the genus Mycobacterium from Didelphis(D.)virginiana,and the direct implications of this bacterium to public health and veterinary medicine.Methods:Thirty-one D.virginiana were captured and necropsied in Hidalgo,Mexico.Tissue samples were collected to culture mycobacteria present and examine individual specimens’histopathology.Mycobacterium identification was obtained through the application of amplification and sequencing of 16S rDNA techniques.Results:Three strains were isolated and identified as Mycobacterium(M.)avium subsp.hominissuis by utilizing M.avium complexspecific primers.Granulomatous lesions were observed in the subpleural zone(granuloma gradeⅡ)and bronchial(granuloma gradeⅠ)of the lungs of D.virginiana with positive isolation.Conclusions:Three strains of M.avium subsp.hominissuis,from lung tissue samples of D.virginiana were identified.This subspecies of M.avium has important implications in public health and veterinary medicine. 展开更多
关键词 Didelphis virginiana mycobacterium avium complex mycobacterium avium subsp.hominissuis Public health
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绵羊副结核病的病原学检测与分析 被引量:10
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作者 吴建勇 吴星星 +5 位作者 杨学云 李建军 王登峰 金映红 王光雷 王治才 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1562-1568,共7页
【目的】确诊一例疑似绵羊副结核分枝杆菌感染的病原学特征。【方法】将送检病料(肠系膜淋巴结)涂片、抗酸染色后进行显微镜观察;同时,提取肠系膜淋巴结组织DNA,采用PCR扩增副结核分支杆菌的IS900基因及亚型分型基因,并进行序列测定与... 【目的】确诊一例疑似绵羊副结核分枝杆菌感染的病原学特征。【方法】将送检病料(肠系膜淋巴结)涂片、抗酸染色后进行显微镜观察;同时,提取肠系膜淋巴结组织DNA,采用PCR扩增副结核分支杆菌的IS900基因及亚型分型基因,并进行序列测定与分析。【结果】组织涂片染色镜检后可见抗酸染色阳性菌株;IS900基因及亚型分型基因的检测和序列分析结果表明,目标菌株为Ⅱ型(牛型)副结核分支杆菌。【结论】采用镜检及分子检测等手段确定从所送检绵羊肠系膜淋巴结组织为Ⅱ型(牛型)副结核分支杆菌感染样本。 展开更多
关键词 副结核分支杆菌 绵羊 病原检测 序列分析
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牛副结核分枝杆菌LAMP快速检测方法的建立 被引量:12
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作者 王建峰 黄素文 +6 位作者 刘思国 倪建波 王春 张吉红 于纪棉 朱堂明 黄绍棠 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期555-557,共3页
为建立牛副结核分枝杆菌(MAP)的快速检测方法,本研究采用环介导等温扩增(LAMP)技术,以MAP的IS900基因序列为靶基因设计特异性引物,建立了MAP特异性的LAMP快速检测方法。经反应条件优化,检测结果显示,建立的LAMP检测方法具有良好的特异性... 为建立牛副结核分枝杆菌(MAP)的快速检测方法,本研究采用环介导等温扩增(LAMP)技术,以MAP的IS900基因序列为靶基因设计特异性引物,建立了MAP特异性的LAMP快速检测方法。经反应条件优化,检测结果显示,建立的LAMP检测方法具有良好的特异性,最低见测量为0.53 pg;与其他病原菌无任何交叉反应。临床样品检测与行业标准的符合率为100%。该LAMP检测方法可以用于MAP的常规检疫。 展开更多
关键词 牛副结核分枝杆菌 环介导等温扩增 检测
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基于PCR检测和基因测序分析的鹿源副结核分枝杆菌鉴定及亚型分型 被引量:4
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作者 王娜 朱广艺 +4 位作者 艾克拜尔.热合曼 崔鑫 胡建军 张莹钰 张婉琪 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期85-90,共6页
目的快捷、准确地鉴定马鹿副结核分枝杆菌基因型和亚型,为马鹿副结核病防控工作提供理论依据。方法从疑似感染副结核病马鹿的病料样品中提取其DNA,参照副结核分枝杆菌插入序列IS900鉴定引物、亚型分型引物,PCR扩增、测序及GenBank中BLAS... 目的快捷、准确地鉴定马鹿副结核分枝杆菌基因型和亚型,为马鹿副结核病防控工作提供理论依据。方法从疑似感染副结核病马鹿的病料样品中提取其DNA,参照副结核分枝杆菌插入序列IS900鉴定引物、亚型分型引物,PCR扩增、测序及GenBank中BLAST比对。结果所测2份病例与副结核分枝杆菌核苷酸同源性均在99%以上,属于副结核分枝杆菌,采用亚型分型鉴定,属于Ⅱ型(牛型)副结核分枝杆菌。结论结合发病马鹿的临床症状、病理变化、抗酸性染色,证实该马鹿感染牛型副结核病。 展开更多
关键词 马鹿 副结核病 副结核分枝杆菌 亚型分型
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禽分枝杆菌副结核亚种map0862基因与map2154c基因的串联重组表达 被引量:4
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作者 迟磊 刘思国 +7 位作者 王春来 宫强 赵昆 刘建东 王勇 云孟克 刘慧芳 赵福广 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期856-859,共4页
以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18的基因组DNA为模板,扩增出了map0862基因和map2154c基因。采用重叠延伸剪接PCR技术(PCR-SOE)获得了融合基因map0862-2154c。将融合基因与原核表达载体pET32a(+)连接,构建了重组质粒pET0862-2154c。将重... 以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18的基因组DNA为模板,扩增出了map0862基因和map2154c基因。采用重叠延伸剪接PCR技术(PCR-SOE)获得了融合基因map0862-2154c。将融合基因与原核表达载体pET32a(+)连接,构建了重组质粒pET0862-2154c。将重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,以IPTG(终浓度1 mmol/L)诱导后对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western-blot检测。结果表明,表达的重组蛋白map0862-2154c的分子质量为76 ku,可用于建立诊断副结核病的ELISA。 展开更多
关键词 禽分枝杆菌副结核亚种 map0862基因 map2154c基因 重叠延伸剪接技术 重组表达
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副结核分枝杆菌MAP0862、MAP1345基因的串联表达及其在间接ELISA中的初步应用 被引量:6
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作者 张振 张阁 +5 位作者 彭永 彭小薇 孙翠丽 常维山 朱良全 丁家波 《中国兽药杂志》 北大核心 2016年第6期16-21,共6页
为探索副结核特异性蛋白MAP0862与MAP1345在牛副结核病血清学诊断中的作用,将通过串联表达获得的融合蛋白MAP0862-1345纯化定量后包被酶标板,经过对反应条件的优化,初步建立了基于融合蛋白MAP0862-1345的间接ELISA诊断方法。使用建立的E... 为探索副结核特异性蛋白MAP0862与MAP1345在牛副结核病血清学诊断中的作用,将通过串联表达获得的融合蛋白MAP0862-1345纯化定量后包被酶标板,经过对反应条件的优化,初步建立了基于融合蛋白MAP0862-1345的间接ELISA诊断方法。使用建立的ELISA方法对牛副结核病阳性血清、牛结核病阳性血清、牛布病阳性血清、卡介苗免疫牛血清、健康牛血清检测的结果表明其具有较好的特异性;使用该方法与IDEXX副结核病抗体检测试剂盒共同对300份临床血清样本检测,总符合率为92.7%。 展开更多
关键词 副结核分枝杆菌 串联表达 间接ELISA
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禽分枝杆菌副结核亚种重组蛋白r22-ag85B的表达及纯化 被引量:2
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作者 杨金国 王聃 +10 位作者 刘慧芳 杜艳芬 司微 赵海玲 林靖凯 王春来 倪红波 赫明雷 彭玮 赵福广 刘思国 《中国动物传染病学报》 CAS 2009年第2期59-62,共4页
为表达并纯化禽分枝杆菌副结核亚种主要抗原基因的串联重组蛋白r22-ag85B,期望研制出一种新型副结核病疫苗,以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18的基因组DNA为模板,扩增了22KD基因和ag85B基因。采用重叠延伸剪接PCR技术(SOE-PCR)获得了融... 为表达并纯化禽分枝杆菌副结核亚种主要抗原基因的串联重组蛋白r22-ag85B,期望研制出一种新型副结核病疫苗,以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18的基因组DNA为模板,扩增了22KD基因和ag85B基因。采用重叠延伸剪接PCR技术(SOE-PCR)获得了融合基因22-ag85B,将基因连接于表达载体pET32a(+),构建了重组质粒pET22-ag85B。将其转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,以IPTG(终浓度1mmol/L)诱导后对表达产物进行Western blot检测。检测结果显示,成功表达并纯化了重组蛋白r22-ag85B,其分子质量约为65ku。Western blot检测表明此蛋白具有良好的免疫学活性。禽分枝杆菌副结核亚种22-ag85B重组蛋白的成功表达及纯化为副结核病疫苗的研究工作奠定了基础。 展开更多
关键词 禽分枝杆菌副结核亚种 22KD基因 ag85B基因 重叠延伸剪接技术 重组表达
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鸟分支杆菌鸟亚种泛酸激酶原核表达及纯化
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作者 陈鸿军 王伟 +2 位作者 刘佩红 王水明 丁铲 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第1期13-16,共4页
为了寻找分支杆菌耐药菌的新药靶点,根据GenBank的相应序列,利用特异性引物经PCR扩增获得了鸟分支杆菌鸟亚种的泛酸激酶基因,将该基因亚克隆入pET32a(+)载体中,经IPTG诱导和SDS-PAGE检测。结果表明,该基因成功获得表达,并以可溶性蛋白... 为了寻找分支杆菌耐药菌的新药靶点,根据GenBank的相应序列,利用特异性引物经PCR扩增获得了鸟分支杆菌鸟亚种的泛酸激酶基因,将该基因亚克隆入pET32a(+)载体中,经IPTG诱导和SDS-PAGE检测。结果表明,该基因成功获得表达,并以可溶性蛋白形式存在,利用His纯化试剂盒获得了纯化产物,为下一步进行酶活性测定、酶活性位点的突变及合成酶类似物等研究奠定了基础。 展开更多
关键词 鸟分支杆菌鸟亚种 泛酸激酶 可溶性表达
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副结核分支杆菌MAP0862蛋白的表达及临床应用 被引量:2
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作者 解晓莉 孙阳阳 +5 位作者 程凯慧 楚会萌 张亮 王基隆 杨美 杨宏军 《山东农业科学》 2019年第2期111-116,共6页
本研究以腹泻牛粪便基因组DNA为模板,扩增MAP0862基因,构建重组表达载体pET-30a(+)-MAP0862和pEGX-6P-1-MAP0862,通过原核表达系统表达His-MAP0862和GST-MAP0862蛋白,经纯化后制备兔源高免血清,建立ELISA特异性检测方法,最后将纯化蛋白... 本研究以腹泻牛粪便基因组DNA为模板,扩增MAP0862基因,构建重组表达载体pET-30a(+)-MAP0862和pEGX-6P-1-MAP0862,通过原核表达系统表达His-MAP0862和GST-MAP0862蛋白,经纯化后制备兔源高免血清,建立ELISA特异性检测方法,最后将纯化蛋白和ELISA方法用于牛副结核病临床样品检测,并对检测数据进行分析。结果表明,以MAP0862蛋白为检测原建立的ELISA检测方法在临床样品检测中具有较高的特异性和敏感性,说明MAP0862蛋白适用于副结核病抗体检测。本研究建立的ELISA检测方法可有效检测临床样品中副结核病的感染。 展开更多
关键词 副结核病 MAP0862蛋白 ELISA 副结核分枝杆菌
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Sero-Prevalence of Paratuberculosis (Johne's Disease) in Cattle Population of South-Western Bangalore Using ELISA Kit
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作者 Anvita Gupta Sobha M. Rani +1 位作者 Pushpa Agrawal Praveen Kumar Gupta 《Open Journal of Veterinary Medicine》 2012年第4期196-200,共5页
Johne's disease or paratuberculosis is a chronic mycobacterial infection that affects cattle, sheep, goats and other ruminants, adversely, leading to huge economic losses throughout the world. The estimation of se... Johne's disease or paratuberculosis is a chronic mycobacterial infection that affects cattle, sheep, goats and other ruminants, adversely, leading to huge economic losses throughout the world. The estimation of sero-prevalence of this disease in the cattle population of south-western Bangalore, Karnataka, using an immunological assay and statistical analyses, was the objective of this study. One of the diagnostic tools used to detect an antigen or an antibody in animal serum or milk is the Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay, which has been widely used in the research and diagnosis of animal and human diseases as its accuracy is of nanogram-picogram/milliltre level. In the present study, indirect-ELISA was used to diagnose and estimate the sero-prevalence of paratuberculosis in cattle showing diarrhoea and/or anaemia, at 5 local dairy farms in south-west Bangalore, India. Out of 350 bovine serum samples, 53 (15.14%) were positive, 55 milk samples out of 300 were found positive (18.33%) for antibody against Johne's disease by indirect ELISA. The positive samples were then confirmed by direct smear examination of dung by Ziehl-Neelsen staining. Statistical analyses were carried out to indicate the seroprevalence of Johne's disease in the cattle population of this region to be 15 ± 10%, taking a confidence interval of 95%. The results emphasize the need to prevent the further spread of infection to other susceptible animals and humans as the causative organism, Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis is implicated in Crohn's disease, an irritable bowel syndrome in humans. 展开更多
关键词 Johne's Disease mycobacterium avium subsp. PARATUBERCULOSIS ELISA
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副结核分枝杆菌感染的免疫应答与检测方法研究进展 被引量:4
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作者 张振 常维山 丁家波 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1530-1536,共7页
副结核分枝杆菌常引起感染牛的产奶量下降、持续性消瘦、顽固性下痢甚至死亡,给畜牧业带来了巨大的经济损失。牛通常在幼年期经口感染该菌并具有一个较长的亚临床期,后期才表现出临床症状,感染前期以细胞免疫为主并伴随着间歇排菌,经过... 副结核分枝杆菌常引起感染牛的产奶量下降、持续性消瘦、顽固性下痢甚至死亡,给畜牧业带来了巨大的经济损失。牛通常在幼年期经口感染该菌并具有一个较长的亚临床期,后期才表现出临床症状,感染前期以细胞免疫为主并伴随着间歇排菌,经过一个2到5年的亚临床期后体液免疫应答增强,同时排菌量明显增加。目前对牛副结核病常用的检测方法有病原学检测方法,基于细胞免疫反应和基于体液免疫反应的检测方法。由于不同方法的反应原理不同,加之副结核分枝杆菌感染动物的特定免疫应答规律,在某一时间内各方法之间敏感性差异较大。本文简要阐述了牛副结核分枝杆菌的传播途径以及牛感染后的免疫应答特点,对牛副结核病的常见诊断方法进行了综述。 展开更多
关键词 副结核分枝杆菌 牛副结核病 免疫应答 检测方法
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Bfra-loaded nanoparticles confer protection against paratuberculosis infection
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作者 Yiduo Liu Yulan Chen +6 位作者 Zhengmin Liang Lijia Luo Yuanzhi Wang Haoran Wang Xin Ge Srinand Sreevatsan Xiangmei Zhou 《One Health Advances》 2023年第1期162-174,共13页
Paratuberculosis is a chronic wasting disease of granulomatous enteritis in ruminants caused by Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis(M.paratuberculosis,MAP)resulting in heavy economic losses to dairy industries ... Paratuberculosis is a chronic wasting disease of granulomatous enteritis in ruminants caused by Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis(M.paratuberculosis,MAP)resulting in heavy economic losses to dairy industries worldwide.Currently,commercial vaccines were not effective in preventing pathogen shedding and were reported with serious side effects.To develop a novel and smarter paratuberculosis vaccine,we utilized PLGA nanoparticles encapsulating the Bfra antigen(Bfra-PLGA NPs).We observed that mice vaccinated with Bfra-PLGA NPs exhibited an enhanced secretory IFN-γ,CD4+T cells response and antibody IgG against MAP infection.In addition,secretions of the inflammatory cytokine TNF-αand IL-10 were increased following treatment with Bfra-PLGA NPs.A significant reduction in bacterial load was observed in the livers and spleens of animals vaccinated with Bfra-PLGA NPs.Furthermore,Bfra-PLGA NPs were effective to alleviate the pathological lesions of livers in mice.Overall,our approach provides a rational basis for employing PLGA nanoparticles to develop improved vaccines that induced protective immunity against paratuberculosis. 展开更多
关键词 mycobacterium avium subsp.paratuberculosis PLGA nanoparticles Bfra Immune responses Novel vaccine
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