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Disseminated infection due to Mycobacterium bovis after intravesical BCG instillation 被引量:1
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作者 Sara Marquez-Batalla Esther Fraile-Villarejo +2 位作者 Moncef Belhassen-García Nieves Gutierrez-Zubiaurre Miguel Cordero-Sánchez 《World Journal of Clinical Cases》 SCIE 2014年第7期301-303,共3页
Intravesical bacillus Calmette-Guerin(BCG) instillation has been adopted for the treatment of patients with superficial bladder cancer. Severe adverse events due to local instillation of BCG are uncommon, with an over... Intravesical bacillus Calmette-Guerin(BCG) instillation has been adopted for the treatment of patients with superficial bladder cancer. Severe adverse events due to local instillation of BCG are uncommon, with an overall rate of serious complications of less than 5%. We report the case of an immunocompetent adult patient with multi-system effects, namely pneumonitis, granulomatous hepatitis and meningitis, who responded well to standard treatment for Mycobacterium bovis. This case highlights the importance of a thorough assessment of this type of patient. 展开更多
关键词 Tuberculosis mycobacterium boviS BLADDER cancer Bacillus CALMETTE-GUERIN
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Repeated inoculations of Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Guérin (BCG) are needed to induce a strong humoral immune response against antigens expressed by the bacteria
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作者 Monique C. da Silva Elena B. Lasunskaia Wilmar Dias da Silva 《Open Journal of Immunology》 2013年第3期71-81,共11页
The cellular immune response elicited by Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Guérin (BCG) has been carefully investigated, but the humoral immune response has been partially neglected. BALB/c mice were immunized... The cellular immune response elicited by Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Guérin (BCG) has been carefully investigated, but the humoral immune response has been partially neglected. BALB/c mice were immunized with BCG strain used to immunize humans. Anti-BCG antibodies, as assayed by ELISA, began to appear in the sera after the third week of immunization and plateaued three weeks after the 8th immunization. The total immunoglobulins (Igs) were purified by caprylic acid method from pooled serum collected after the 8th immunization. Anti-BCG antigen antibodies were detected in the total Igs preparation as well as in IgG, IgM, IgA, IgG1, IgG2a, and IgG2b, but not in the IgG3. Distinct BCG proteins were recognized the IgGs in Western blot analysis. Opsonization of BCG bacilli by the purified Igs potentiated internalization of the bacteria by murine Raw 264.7 macrophages. The intracellular BCG elimination coincided with the induction of NO production, which was more pronounced in cells infected with opsonized BCG compared to those infected with the non-opsonized bacteria. Coincidently, the production of NO was also higher in macrophages infected with opsonized BCG (maximal NO production at 48 h of incubation). The obtained results demonstrate that repeated inoculations of BCG effectively activate the humoral immune response, justifying the use of BCG as a live recombinant vaccine vector to insert genes encoding virulence factors controlled by antibodies. 展开更多
关键词 mycobacterium boviS Bacille Calmette-Guérin BCG Antibodies OPSONIZATION Bacterial KILLING
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Molecular Identification of Mycobacterium Strains Responsible of Bovine Tuberculosis Cases in Bobo-Dioulasso Slaughterhouse, Burkina Faso
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作者 Mariétou Konate Aminata Fofana# +2 位作者 Yacouba Kouadima Aboubacar Sidiki Ouattara Adama Sanou 《Advances in Microbiology》 CAS 2024年第2期105-114,共10页
Bovine tuberculosis (bTB) is an endemic zoonosis significantly affects animal health in Burkina Faso. The primary causative agent is Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) complex, mainly M. bovis. Cattle are co... Bovine tuberculosis (bTB) is an endemic zoonosis significantly affects animal health in Burkina Faso. The primary causative agent is Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) complex, mainly M. bovis. Cattle are considered as natural reservoir of M. bovis. However, in Burkina Faso, the circulation of these strains remains poorly understood and documented. This study aimed to identify and characterize Mycobacterium strains from suspected carcasses during routine meat inspection at Bobo-Dioulasso refrigerated slaughterhouse. A prospective cross-sectional study was conducted from January 2021 to December 2022 on cases of seizures linked to suspected bovine tuberculosis. Microbiological and molecular analyzes were used for mycobacterial strain isolation and characterization. Out of 50 samples, 24% tested positive by microscopy and 12% by culture. Molecular analysis identified 6 strains of Mycobacteria, exclusively Mycobacterium bovis specifically the subspecies bovis (Mycobacterium bovis subsp bovis). In conclusion, M. bovis subsp bovis is the primary agent responsible for bovine tuberculosis in Bobo-Dioulasso. Continuous monitoring of mycobacterial strains is therefore necessary for the effective control of this pathology in the local cattle population. 展开更多
关键词 bovine Tuberculosis mycobacterium bovis Molecular Identification Cattle Population Burkina Faso
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牛结核病荧光定量PCR引物探针的组合筛选比较
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作者 毛迎雪 亓菲 +9 位作者 张皓博 曲瑶 南文龙 刘蒙达 苏华彬 姜志强 刘建柱 孙淑芳 胡莉萍 樊晓旭 《中国动物检疫》 CAS 2024年第8期105-111,共7页
为比较牛结核病荧光定量PCR(qPCR)不同引物探针组合的特异性和敏感性,验证其临床检测效果,选取国际、国家、行业、地方标准及文献报道的11组qPCR鉴定引物探针组合,采用牛分枝杆菌基因组DNA国家二级标准物质、参考菌株核酸和临床奶样对... 为比较牛结核病荧光定量PCR(qPCR)不同引物探针组合的特异性和敏感性,验证其临床检测效果,选取国际、国家、行业、地方标准及文献报道的11组qPCR鉴定引物探针组合,采用牛分枝杆菌基因组DNA国家二级标准物质、参考菌株核酸和临床奶样对其进行比较、验证。结果显示:11组引物探针均无非特异性扩增,表现出良好的特异性;国标IS1081引物检测灵敏度最高,最低检测限可达1.4×10^(-1);除国标Mtb(结核分枝杆菌)引物外,其他引物探针组合重复性良好(CV<10%);30份临床样品中国标IS1081引物阳性样品检出率明显高于其他引物。结果表明,国标IS1081引物探针组合特异、灵敏、临床检测效果更优,推荐用于实验室qPCR检测牛结核病。 展开更多
关键词 牛结核病 结核分枝杆菌复合群 牛分枝杆菌 荧光定量PCR 引物探针
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牛结核病诊断与防控的研究进展 被引量:2
5
作者 关佳宁 《现代畜牧兽医》 2024年第2期83-87,共5页
牛结核病(bovine tuberculosis)是由结核分枝杆菌引起的人畜共患传染病,在全球范围内造成了严重的经济损失,危害公共卫生安全。对于牛结核病的防控,除了要加强饲养管理之外,还应及时地诊断并隔离患病动物,并为易感动物接种疫苗。文章就... 牛结核病(bovine tuberculosis)是由结核分枝杆菌引起的人畜共患传染病,在全球范围内造成了严重的经济损失,危害公共卫生安全。对于牛结核病的防控,除了要加强饲养管理之外,还应及时地诊断并隔离患病动物,并为易感动物接种疫苗。文章就牛结核病的诊断技术和防治措施进行了综述,以期为牛结核病的诊断与防控提供参考。 展开更多
关键词 牛结核病 结核分枝杆菌 分子生物学诊断 免疫学诊断
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稳定表达牛分枝杆菌PPE13的THP-1细胞株的建立
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作者 刘卓彤 毕斯琪 +3 位作者 孟祥苗 胡燕萍 宋厚辉 杨杨 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第5期179-184,共6页
为了深入研究牛分枝杆菌PPE13在病原-宿主相互作用中的具体机制,本研究利用慢病毒表达系统构建了PPE13稳定表达的THP-1细胞系。首先,采用分子克隆技术,以牛分枝杆菌基因组DNA为模板扩增出ppe13目的片段,构建含有ppe13片段的重组慢病毒... 为了深入研究牛分枝杆菌PPE13在病原-宿主相互作用中的具体机制,本研究利用慢病毒表达系统构建了PPE13稳定表达的THP-1细胞系。首先,采用分子克隆技术,以牛分枝杆菌基因组DNA为模板扩增出ppe13目的片段,构建含有ppe13片段的重组慢病毒表达质粒,将该质粒和慢病毒包装质粒转染至239T细胞中,72 h后收集病毒。然后,将获得的病毒感染THP-1细胞中,经1μg/mL嘌呤霉素筛选获得稳定表达PPE13的细胞株THP-1/PPE13。最后,使用ELISA方法检测稳定表达细胞系中TNF-α、IL-1β和IL-6分泌的情况,以验证细胞系中PPE13的生物学活性。结果显示,相较于对照细胞THP-1/Con,THP-1/PPE13中TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌水平均显著升高。该细胞系的建立为深入研究PPE13调控细胞信号通路的功能提供了实验基础。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌 PPE13 慢病毒包装 稳定表达
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牛分支杆菌抗体荧光微球免疫层析试纸条检测方法的建立
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作者 苏华彬 亓菲 +8 位作者 南文龙 刘蒙达 孙明军 焉鑫 毛迎雪 曲瑶 孙淑芳 李桂梅 樊晓旭 《动物医学进展》 北大核心 2024年第11期1-8,共8页
为了建立一种便捷、高效、采用荧光微球免疫试纸条技术的牛分支杆菌检测方法,首先表达、纯化MPB70和MPB83蛋白,并用荧光微球进行标记,组装荧光微球免疫试纸条并进行条件优化、特异性试验、重复性试验以及灵敏性试验,建立一种检测牛分支... 为了建立一种便捷、高效、采用荧光微球免疫试纸条技术的牛分支杆菌检测方法,首先表达、纯化MPB70和MPB83蛋白,并用荧光微球进行标记,组装荧光微球免疫试纸条并进行条件优化、特异性试验、重复性试验以及灵敏性试验,建立一种检测牛分支杆菌的荧光微球免疫试纸条方法。试验表明,试纸条检测时间仅需15 min;试纸条仅对牛分支杆菌抗体阳性血清发生反应,特异性好;变异系数在3.51%~9.23%之间,重复性好;灵敏度与美国爱德士牛分支杆菌抗体检测试剂盒相当,且总符合率高达90.5%。说明建立的牛分支杆菌抗体荧光微球免疫层析试纸条检测方法具有良好的特异性、灵敏性与重复性,可为牛分支杆菌检测提供新技术支持。 展开更多
关键词 荧光微球 牛分支杆菌 试纸条
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牛分枝杆菌Ag85B的生物信息学分析及多表位候选抗原的构建
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作者 董希望 张岩 +4 位作者 魏稚彤 李文欣 刘思宇 梁栋 赵海涛 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第15期62-65,72,118,119,共7页
为了构建基于牛分枝杆菌Ag85B蛋白的多表位候选抗原,试验采用生物信息学方法对Ag85B蛋白的理化性质、亲/疏水性、二级结构等进行分析,预测其T、B淋巴细胞抗原表位,并构建以pET-28a(+)为载体的多表位候选抗原,分析预测多表位候选抗原的... 为了构建基于牛分枝杆菌Ag85B蛋白的多表位候选抗原,试验采用生物信息学方法对Ag85B蛋白的理化性质、亲/疏水性、二级结构等进行分析,预测其T、B淋巴细胞抗原表位,并构建以pET-28a(+)为载体的多表位候选抗原,分析预测多表位候选抗原的理化性质、抗原性并进行免疫模拟。结果表明:Ag85B蛋白有325个氨基酸残基,相对分子量为34.58085,理论等电点为5.62,脂肪系数为72.18,亚细胞定位于线粒体、细胞质和高尔基体中,具有亲水性、信号肽和跨膜结构域,属于分泌型蛋白,其无规则卷曲和β-转角结构的占比分别28.15%和8.62%,含有3个T淋巴细胞优势表位和8个B淋巴细胞优势表位。构建的Ag85B多表位候选抗原为亲水性蛋白和非致敏原,两次预测免疫原性参数分别为0.893和1.524,可诱导特异性的体液和细胞免疫应答。说明试验成功构建出基于牛分枝杆菌Ag85B蛋白的多表位候选抗原,且该多表位候选抗原可能诱导机体产生T、B淋巴细胞免疫应答。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌 抗原表位 AG85B 生物信息学 多表位候选抗原
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注射母牛分枝杆菌联合3HLZE/4HL方案对肺结核患者T淋巴细胞亚群及肺功能的影响
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作者 刘霞 施露露 《四川解剖学杂志》 2024年第4期52-54,共3页
目的:探讨注射用母牛分枝杆菌联合3HLZE/4HL方案对肺结核患者T淋巴细胞亚群及肺功能的作用.方法:选取2021年2月至2023年3月期间本院诊治的90例肺结核患者为研究对象,按照是否联合用药,将其分为研究组(n=45,接受注射用母牛分枝杆菌联合3H... 目的:探讨注射用母牛分枝杆菌联合3HLZE/4HL方案对肺结核患者T淋巴细胞亚群及肺功能的作用.方法:选取2021年2月至2023年3月期间本院诊治的90例肺结核患者为研究对象,按照是否联合用药,将其分为研究组(n=45,接受注射用母牛分枝杆菌联合3HLZE/4HL抗结核方案治疗)和对照组(n=45,接受常规3HLZE/4HL抗结核方案治疗).比较两组患者治疗前后T淋巴细胞亚群指标[CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)]及肺功能[用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼气容积(FEV1)及最大呼气峰流速(PEF)]水平.结果:治疗结束时,研究组患者CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)均高于对照组,CD8^(+)低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);FVC、FEV1、PEF水平均较对照组高,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:注射用母牛分枝杆菌联合3HLZE/4HL方案对肺结核患者T淋巴细胞亚群水平失衡的改善效果更好,更利于增强患者免疫力,促进患者肺功能更好的改善. 展开更多
关键词 肺结核 3HLZE/4HL 母牛分枝杆菌 T淋巴细胞亚群 肺功能
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结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的二重PCR快速检测 被引量:15
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作者 谢芝勋 谢志勤 +5 位作者 雷剑明 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢丽基 温娟 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1141-1144,共4页
目的建立一种鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的二重PCR快速检测方法。方法根据已发表的结核分枝杆菌23SrRNA和牛分枝杆菌特殊基因序列,设计并合成了两对可扩增结核分枝杆菌和牛分枝杆菌特异性基因片段的引物,建立二重PCR快速检测结核分... 目的建立一种鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的二重PCR快速检测方法。方法根据已发表的结核分枝杆菌23SrRNA和牛分枝杆菌特殊基因序列,设计并合成了两对可扩增结核分枝杆菌和牛分枝杆菌特异性基因片段的引物,建立二重PCR快速检测结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的方法,测定其特异性和敏感性,并对238份牛临床样品的DNA分别进行了检测。结果该方法对牛分枝杆菌能扩增出838bp和631bp的特异性基因片段,结核分枝杆菌只扩增出838bp基因片段而扩增不出631bp的特异性基因片段,对参试的其它牛菌株的DNA扩增结果均为阴性。敏感度检测可达到50pg的DNA含量。临床样品检测结核分枝杆菌阳性有21份,牛分枝杆菌阳性有1份,其它临床样品扩增结果全部为阴性。结论本方法可作为牛分枝杆菌的快速检测和流行病学调查的工具。 展开更多
关键词 检测 结核分枝杆菌 牛分枝杆菌 二重PCR
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穴位注射卡介菌多糖核酸治疗266例哮喘的临床研究 被引量:15
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作者 倪伟 于素霞 +3 位作者 王宏长 陈凤鸣 林琳 李培成 《中国针灸》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期647-648,共2页
目的 :观察穴位注射卡介菌多糖核酸改善哮喘患者气道变应性炎症的作用。方法 :轻、中度支气管哮喘缓解期患者 2 6 6例采用穴位注射卡介菌多糖核酸 ,147例肌肉注射者作为对照 (自然形成 ) ,分别于治疗前后检测血清IL 5和ECP含量。结果 :... 目的 :观察穴位注射卡介菌多糖核酸改善哮喘患者气道变应性炎症的作用。方法 :轻、中度支气管哮喘缓解期患者 2 6 6例采用穴位注射卡介菌多糖核酸 ,147例肌肉注射者作为对照 (自然形成 ) ,分别于治疗前后检测血清IL 5和ECP含量。结果 :治疗后 ,两组患者血清IL 5和ECP含量降低 (P <0 0 1,P <0 0 5 ) ,具有统计学意义 ,且穴注组优于肌注组 (P <0 0 5 )。结论 :卡介菌多糖核酸穴位注射疗法具有较为明显地改善气道炎症的作用。 展开更多
关键词 哮喘 穴位疗法 水针 卡价菌多糖核酸
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四种重要致病性分枝杆菌DHPLC检测鉴别方法的建立 被引量:8
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作者 陈茹 毕英佐 +6 位作者 刘志玲 刘志辉 马静云 曾碧健 吴晓薇 周科 林志雄 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期41-45,52,共6页
目的运用多重核酸扩增(PCR)联合变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)分析技术原理,针对结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、禽分枝杆菌以及副结核分枝杆菌建立多重PCR-DHPLC快速检测方法,实现同时... 目的运用多重核酸扩增(PCR)联合变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)分析技术原理,针对结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、禽分枝杆菌以及副结核分枝杆菌建立多重PCR-DHPLC快速检测方法,实现同时检测鉴别四种重要致病性分枝杆菌。方法根据四种分枝杆菌特异基因序列分别设计菌种特异核酸扩增引物,通过筛选优化试验建立四重核酸扩增体系,对核酸扩增产物采用DHPLC设备进行检测分析,每一菌种的核酸扩增产物分别形成DHPLC特征峰图。对结核分枝杆菌等51株分枝杆菌标准株和分离株样品以及沙门氏菌等22株常见微生物样品进行特异性检测试验 对四种分枝杆菌特异的核酸扩增产物分别制备克隆质粒,通过对梯度稀释的阳性质粒的检测试验,进行多重PCR-DHPLC灵敏度测试 对疑似病人痰液样品和疑似发病牛的组织样品进行检测,并与细菌分离培养法进行比较以验证临床检测效果。结果该方法能快速检测鉴别上述四种分枝杆菌,检测灵敏度达到102~103基因拷贝,从131份疑似病人临床样品中检出91份结核分枝杆菌阳性,从40份来自疑似发病牛群的临床样品中检出31份牛分枝杆菌阳性,检出率均高于细菌分离培养法。结论研究表明所建立的多重PCR-DHPLC方法能快速检测鉴别四种重要致病性分枝杆菌,为人畜结核、副结核病诊断提供一种新型分子生物学技术手段。 展开更多
关键词 变性高效液相色谱 结核分枝杆菌 牛分枝杆菌 禽分枝杆菌 副结核分枝杆菌 多重PCR
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牛分支杆菌热休克蛋白65基因的分子克隆和表达 被引量:8
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作者 刘思国 王春来 +2 位作者 彭永刚 宫强 王牟平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期336-339,共4页
以牛型分枝杆菌Vallee菌株基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增热休克蛋白65(Hsp6S)基因,PER产物经纯化与EcoR Ⅰ/Sal Ⅰ双酶切后与经同样处理的原核表达载体pGEX-6P-1进行连接,转化感受态细胞BL21中,筛选和构建了原核重组表达质粒pGEX-H65... 以牛型分枝杆菌Vallee菌株基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增热休克蛋白65(Hsp6S)基因,PER产物经纯化与EcoR Ⅰ/Sal Ⅰ双酶切后与经同样处理的原核表达载体pGEX-6P-1进行连接,转化感受态细胞BL21中,筛选和构建了原核重组表达质粒pGEX-H65,核苷酸序列测定验证其正确性。以1 Mol/LIPTG诱导,进行SDS-PAGE电泳。结果表明,Hsp65基因表达的融合蛋白GST-H65裂解为两部分;即64kD和22kD,两个蛋白分子量相加与预测的86kD(HsP60 kD+GST26 kD)相符。牛分支杆菌热休克蛋白HSP65的成功表达为其功能的研究打下基础。 展开更多
关键词 牛分杆杆菌 HSP65基因 分子克隆 原核表达
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卡介菌CpG DNA复合佐剂-02系统(BC-C02)有效性与安全性评价 被引量:12
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作者 赵爱华 李凤祥 +11 位作者 寇丽杰 李长贵 乔来艳 王鹏 陈保文 徐苗 都伟欣 沈小兵 苏城 卢锦标 杨蕾 王国治 《中国防痨杂志》 CAS 2012年第3期161-167,共7页
目的对卡介菌(BCG)CpG DNA复合佐剂-02系统(BC-C02)的有效性及安全性进行评价,为其应用提供研究基础。方法以流式细胞法检测经CpG DNA与细胞体外共培养后B细胞内TLR-9,巨噬细胞内IL-12、TLR-9表达,以酶联免疫斑点法检测人外周血单个核细... 目的对卡介菌(BCG)CpG DNA复合佐剂-02系统(BC-C02)的有效性及安全性进行评价,为其应用提供研究基础。方法以流式细胞法检测经CpG DNA与细胞体外共培养后B细胞内TLR-9,巨噬细胞内IL-12、TLR-9表达,以酶联免疫斑点法检测人外周血单个核细胞(PBMC)经CpG DNA刺激后IL-12的分泌。单纯H1N1抗原低、中、高三个剂量组及三个剂量抗原添加CpG DNA后免疫小鼠,每组20只动物,免疫后测定其抗体效价及H1N1病毒感染后死亡率。经Mtb感染后豚鼠,以Ag85B+BC-C02疫苗低、中、高组与BC-C02及生理盐水(NS)进行免疫治疗,每组10只豚鼠,观察动物脏器结核病变指数。同时分别检测CpG DNA注射小鼠后IgE产生和复合佐剂BC-C02注射豚鼠后全身过敏毒性。结果BC-C02中的生物佐剂可刺激B细胞增殖[佐剂组CD19+%为41%,培养基对照组(NCS)组为27%;t=-4.40,P<0.05];促进B细胞内TLR-9表达(佐剂组CD19+TLR-9+%为2.8%,NCS组为1.1%;t=-5.92,P<0.05);上调巨噬细胞表面MHC-Ⅱ类分子表达(佐剂组F4/80+I-A/I-E+%为82%,NCS组为31%;t=-4.32,P<0.05);可促进巨噬细胞内TLR-9和IL-12的分泌(佐剂组F4/80+I-A/I-E+TLR-9+IL-12+%为2.1%,NCS组为0.1%;t=4.80 P<0.05)。BC-C02中的生物佐剂作为H1N1疫苗佐剂,在检测时间内(5、7、14、28d),PBS组4个时间点血凝抑制(HI)抗体滴度均<10;H1N1低剂量组滴度<中剂量组滴度<高剂量组滴度,抗原复合CpG组均高于单纯抗原组,且佐剂可促进抗原特异性IgG2a的提高。H1N1保护力实验中,PBS组、H1N1低剂量组、H1N1低剂量+CpG DNA组、H1N1高剂量组、H1N1高剂量+CpG DNA组存活率分别为30%、50%、90%、100%、100%,显示佐剂可提高40%动物存活率。Mtb潜伏感染动物经疫苗治疗后,对照组动物100%病变,疫苗组完全转阴的动物达到30%,而且病变指数<30的动物达到60%~70%。佐剂注射小鼠后IgE抗体与NS无区别,豚鼠过敏毒性试验显示佐剂不会引起动物全身过敏反应。结论BC-C02既能诱导细胞免疫反应,也能诱导体液免疫反应,并能提高疫苗保护效力,可作为一种新型疫苗用佐剂的候选佐剂。 展开更多
关键词 分枝杆菌 DNA 细菌 佐剂 免疫 可重复性 结果
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间接ELISA检测牛分枝杆菌抗体方法的建立及初步应用 被引量:8
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作者 张桂荣 万学济 +7 位作者 陈颖钰 吴波 晁彦杰 吕文 钦博 郭爱珍 陈焕春 谭亚娣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期555-560,568,共7页
针对现行牛结核病检疫方法结核菌素皮内变态反应(TST)的不足,本研究选用牛分枝杆菌特异性抗原MPB83、MPB70及CFP10与ESAT-6融合蛋白(CFP10-ESAT-6)分别建立了检测牛分枝杆菌特异抗体的间接酶联免疫吸附方法(ELISA)。上述3种抗原中一种... 针对现行牛结核病检疫方法结核菌素皮内变态反应(TST)的不足,本研究选用牛分枝杆菌特异性抗原MPB83、MPB70及CFP10与ESAT-6融合蛋白(CFP10-ESAT-6)分别建立了检测牛分枝杆菌特异抗体的间接酶联免疫吸附方法(ELISA)。上述3种抗原中一种以上抗原的特异性抗体为阳性时,即可判断为结核检测阳性。以TST为标准,判断ELISA方法的敏感性与特异性。结果证明,ELISA方法具有较好的敏感性(71.4%)。对ELISA检测为强阳性的奶牛进行细菌分离,并对5头结核菌分离阳性奶牛进行TST检测,结果有3头为TST阳性,2头可疑,显示出ELISA方法对严重感染牛的检测较TST具有更高的敏感性。由于TST与ELISA分别以细胞免疫与体液免疫为基础,两种检测方法结合应用可进一步提高牛结核病的检出率。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌 ELISA CFP10-ESAT-6 MPB83 MPB70 结核 检疫
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牛结核病病原体研究进展 被引量:9
16
作者 王志梅 贾广乐 +3 位作者 王建波 林祥梅 韩雪清 张映 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第3期207-210,共4页
牛结核病是一种人畜共患传染病,人畜结核病的交叉传播是造成结核病广泛流行的重要原因之一。本病的传播流行直接影响着畜收业的发展,而且还会通过各种途径传染给人,给人类的健康也带来很大威胁。作者对结核病病原体的特点及分类进行了概... 牛结核病是一种人畜共患传染病,人畜结核病的交叉传播是造成结核病广泛流行的重要原因之一。本病的传播流行直接影响着畜收业的发展,而且还会通过各种途径传染给人,给人类的健康也带来很大威胁。作者对结核病病原体的特点及分类进行了概述,并主要对牛分枝杆菌和结核分枝杆菌进行了基因组比较以及它们之间的区分和鉴定进行了综述。 展开更多
关键词 结核病 牛结核病 牛分枝杆菌 结核分枝杆菌
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牛分枝杆菌mpb64基因的克隆、鉴定及其表达 被引量:3
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作者 张秀华 刘思国 +6 位作者 宫强 王春来 王牟平 彭永刚 沈国顺 郭洋 郭设平 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期43-46,共4页
以牛型分枝杆菌基因组DNA为模板,PCR方法扩增mpb64基因,纯化PCR产物并与 pDM18-T载体连接、转化,经酶切及核苷酸序列鉴定为正确后,酶切产物亚克隆到原核表达载体 pET30a(+)的KpnI/EcoRI位点,构建重组表达质粒pET30a+-mpb64,转化到大肠... 以牛型分枝杆菌基因组DNA为模板,PCR方法扩增mpb64基因,纯化PCR产物并与 pDM18-T载体连接、转化,经酶切及核苷酸序列鉴定为正确后,酶切产物亚克隆到原核表达载体 pET30a(+)的KpnI/EcoRI位点,构建重组表达质粒pET30a+-mpb64,转化到大肠杆菌DE3内,以 IPTG进行诱导,终浓度为1mmol/L,诱导产物进行SDS-PAGE电泳。结果表明,PCR方法成功扩增 出mpb64基因,核苷酸序列测定验证了其正确性,重组表达质粒表达的pET30a+-mpb64融合蛋白 相对分子量为30.4kDa,与实测相符。牛分枝杆菌pET30a+-mpb64的成功表达为牛结核病的诊断 及新型疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 分枝杆菌 鉴定 SDS-PAGE电泳 重组表达质粒 核苷酸序列测定 PCR方法 基因组DNA 原核表达载体 PCR产物 相对分子量 大肠杆菌 IPTG 融合蛋白 新型疫苗 牛结核病 T载体 亚克隆 正确性 转化 酶切 诱导
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应用TaqMan荧光定量PCR检测牛分枝杆菌 被引量:6
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作者 王春雨 王振国 +4 位作者 刘金华 宋战昀 周亮 高宏伟 王全凯 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期133-136,共4页
为建立快速检测牛分枝杆菌(M.bovis)的TaqMan荧光定量PCR方法,本研究以GenBank登录的M.bovis特有229 bp基因为研究对象,设计并合成引物及探针。该方法具有较好的特异性,与标准质控菌株呈阳性反应,与其他微生物样品呈阴性反应;灵敏性最... 为建立快速检测牛分枝杆菌(M.bovis)的TaqMan荧光定量PCR方法,本研究以GenBank登录的M.bovis特有229 bp基因为研究对象,设计并合成引物及探针。该方法具有较好的特异性,与标准质控菌株呈阳性反应,与其他微生物样品呈阴性反应;灵敏性最低检测值可达1 pg/mL;对20阳性临床样品进行荧光定量PCR检测,均为阳性;而对培养为阴性的20份临床样品进行检测,6份为阳性。该研究结果表明,建立的方法特异性强,敏感性高,稳定性好,能够用于M.bovis的鉴别检测,对牛分枝杆菌病的快速检测和早期诊断具有重要意义。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌病 鉴别检测 牛型结核杆菌 荧光定量PCR
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牛分枝杆菌MPB51基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量:6
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作者 姜秀云 王春凤 +1 位作者 王春芳 何昭阳 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期298-300,共3页
以牛分枝杆菌Vallee111染色体DNA为模板 ,以MPB5 1成熟蛋白基因特异性引物进行PCR扩增 ,获得约80 0bp的DNA片段。通过T- A克隆技术 ,将PCR产物克隆至pGEM TVector中 ,成功地构建出克隆质粒pGEM T -5 1。以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pGEM T- ... 以牛分枝杆菌Vallee111染色体DNA为模板 ,以MPB5 1成熟蛋白基因特异性引物进行PCR扩增 ,获得约80 0bp的DNA片段。通过T- A克隆技术 ,将PCR产物克隆至pGEM TVector中 ,成功地构建出克隆质粒pGEM T -5 1。以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pGEM T- 5 1和pET2 8a(+) ,并将纯化的MPB5 1基因亚克隆至pET2 8a (+)中 ,构建出原核表达质粒pET2 8a- 5 1。将pET2 8a- 5 1转化至感受态E .coliBL2 1(DE3)中 ,经IPTG诱导和SDS PAGE分析 ,可见约30kD外源蛋白带。Westernblot分析发现 ,该蛋白具有牛分枝杆菌抗原性 ,从而为进一步研究MPB5 1的亚单位疫苗及DNA疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌 MPB51基因 克隆 原核表达
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牛分枝杆菌MPB70基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量:6
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作者 姜秀云 王春凤 +1 位作者 王春芳 何昭阳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期486-489,共4页
本研究以牛分枝杆菌Vallee111染色体DNA为模板,以MPB70成熟蛋白基因特异性引物进行PCR扩增,获得约500 bp的DNA片段。通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pGEM-T Vector中,成功地构建出克隆载体pGEM-T-70。以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pGEM-T-70... 本研究以牛分枝杆菌Vallee111染色体DNA为模板,以MPB70成熟蛋白基因特异性引物进行PCR扩增,获得约500 bp的DNA片段。通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pGEM-T Vector中,成功地构建出克隆载体pGEM-T-70。以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pGEM-T-70和pET28a(+),并将纯化的MPB70基因亚克隆至pET28a(+)中,构建出原核表达载体pET28a-70。将pET28a-70转化至感受态E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约25 Ku外源蛋白带。Western blot分析发现,该蛋白具有牛分枝杆菌抗原性,从而为进一步研究MPB70的亚单位疫苗及DNA疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌 MPBTO基因 克隆 原核表达
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