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Molecular Identification of Mycobacterium Strains Responsible of Bovine Tuberculosis Cases in Bobo-Dioulasso Slaughterhouse, Burkina Faso
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作者 Mariétou Konate Aminata Fofana# +2 位作者 Yacouba Kouadima Aboubacar Sidiki Ouattara Adama Sanou 《Advances in Microbiology》 CAS 2024年第2期105-114,共10页
Bovine tuberculosis (bTB) is an endemic zoonosis significantly affects animal health in Burkina Faso. The primary causative agent is Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) complex, mainly M. bovis. Cattle are co... Bovine tuberculosis (bTB) is an endemic zoonosis significantly affects animal health in Burkina Faso. The primary causative agent is Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) complex, mainly M. bovis. Cattle are considered as natural reservoir of M. bovis. However, in Burkina Faso, the circulation of these strains remains poorly understood and documented. This study aimed to identify and characterize Mycobacterium strains from suspected carcasses during routine meat inspection at Bobo-Dioulasso refrigerated slaughterhouse. A prospective cross-sectional study was conducted from January 2021 to December 2022 on cases of seizures linked to suspected bovine tuberculosis. Microbiological and molecular analyzes were used for mycobacterial strain isolation and characterization. Out of 50 samples, 24% tested positive by microscopy and 12% by culture. Molecular analysis identified 6 strains of Mycobacteria, exclusively Mycobacterium bovis specifically the subspecies bovis (Mycobacterium bovis subsp bovis). In conclusion, M. bovis subsp bovis is the primary agent responsible for bovine tuberculosis in Bobo-Dioulasso. Continuous monitoring of mycobacterial strains is therefore necessary for the effective control of this pathology in the local cattle population. 展开更多
关键词 bovine Tuberculosis mycobacterium bovis Molecular Identification Cattle Population Burkina Faso
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Disseminated infection due to Mycobacterium bovis after intravesical BCG instillation
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作者 Sara Marquez-Batalla Esther Fraile-Villarejo +2 位作者 Moncef Belhassen-García Nieves Gutierrez-Zubiaurre Miguel Cordero-Sánchez 《World Journal of Clinical Cases》 SCIE 2014年第7期301-303,共3页
Intravesical bacillus Calmette-Guerin(BCG) instillation has been adopted for the treatment of patients with superficial bladder cancer. Severe adverse events due to local instillation of BCG are uncommon, with an over... Intravesical bacillus Calmette-Guerin(BCG) instillation has been adopted for the treatment of patients with superficial bladder cancer. Severe adverse events due to local instillation of BCG are uncommon, with an overall rate of serious complications of less than 5%. We report the case of an immunocompetent adult patient with multi-system effects, namely pneumonitis, granulomatous hepatitis and meningitis, who responded well to standard treatment for Mycobacterium bovis. This case highlights the importance of a thorough assessment of this type of patient. 展开更多
关键词 Tuberculosis mycobacterium bovis BLADDER cancer Bacillus CALMETTE-GUERIN
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Repeated inoculations of Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Guérin (BCG) are needed to induce a strong humoral immune response against antigens expressed by the bacteria
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作者 Monique C. da Silva Elena B. Lasunskaia Wilmar Dias da Silva 《Open Journal of Immunology》 2013年第3期71-81,共11页
The cellular immune response elicited by Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Guérin (BCG) has been carefully investigated, but the humoral immune response has been partially neglected. BALB/c mice were immunized... The cellular immune response elicited by Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Guérin (BCG) has been carefully investigated, but the humoral immune response has been partially neglected. BALB/c mice were immunized with BCG strain used to immunize humans. Anti-BCG antibodies, as assayed by ELISA, began to appear in the sera after the third week of immunization and plateaued three weeks after the 8th immunization. The total immunoglobulins (Igs) were purified by caprylic acid method from pooled serum collected after the 8th immunization. Anti-BCG antigen antibodies were detected in the total Igs preparation as well as in IgG, IgM, IgA, IgG1, IgG2a, and IgG2b, but not in the IgG3. Distinct BCG proteins were recognized the IgGs in Western blot analysis. Opsonization of BCG bacilli by the purified Igs potentiated internalization of the bacteria by murine Raw 264.7 macrophages. The intracellular BCG elimination coincided with the induction of NO production, which was more pronounced in cells infected with opsonized BCG compared to those infected with the non-opsonized bacteria. Coincidently, the production of NO was also higher in macrophages infected with opsonized BCG (maximal NO production at 48 h of incubation). The obtained results demonstrate that repeated inoculations of BCG effectively activate the humoral immune response, justifying the use of BCG as a live recombinant vaccine vector to insert genes encoding virulence factors controlled by antibodies. 展开更多
关键词 mycobacterium bovis Bacille Calmette-Guérin BCG Antibodies OPSONIZATION Bacterial KILLING
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牛结核病荧光定量PCR引物探针的组合筛选比较
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作者 毛迎雪 亓菲 +9 位作者 张皓博 曲瑶 南文龙 刘蒙达 苏华彬 姜志强 刘建柱 孙淑芳 胡莉萍 樊晓旭 《中国动物检疫》 CAS 2024年第8期105-111,共7页
为比较牛结核病荧光定量PCR(qPCR)不同引物探针组合的特异性和敏感性,验证其临床检测效果,选取国际、国家、行业、地方标准及文献报道的11组qPCR鉴定引物探针组合,采用牛分枝杆菌基因组DNA国家二级标准物质、参考菌株核酸和临床奶样对... 为比较牛结核病荧光定量PCR(qPCR)不同引物探针组合的特异性和敏感性,验证其临床检测效果,选取国际、国家、行业、地方标准及文献报道的11组qPCR鉴定引物探针组合,采用牛分枝杆菌基因组DNA国家二级标准物质、参考菌株核酸和临床奶样对其进行比较、验证。结果显示:11组引物探针均无非特异性扩增,表现出良好的特异性;国标IS1081引物检测灵敏度最高,最低检测限可达1.4×10^(-1);除国标Mtb(结核分枝杆菌)引物外,其他引物探针组合重复性良好(CV<10%);30份临床样品中国标IS1081引物阳性样品检出率明显高于其他引物。结果表明,国标IS1081引物探针组合特异、灵敏、临床检测效果更优,推荐用于实验室qPCR检测牛结核病。 展开更多
关键词 牛结核病 结核分枝杆菌复合群 牛分枝杆菌 荧光定量PCR 引物探针
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牛结核病诊断与防控的研究进展 被引量:1
5
作者 关佳宁 《现代畜牧兽医》 2024年第2期83-87,共5页
牛结核病(bovine tuberculosis)是由结核分枝杆菌引起的人畜共患传染病,在全球范围内造成了严重的经济损失,危害公共卫生安全。对于牛结核病的防控,除了要加强饲养管理之外,还应及时地诊断并隔离患病动物,并为易感动物接种疫苗。文章就... 牛结核病(bovine tuberculosis)是由结核分枝杆菌引起的人畜共患传染病,在全球范围内造成了严重的经济损失,危害公共卫生安全。对于牛结核病的防控,除了要加强饲养管理之外,还应及时地诊断并隔离患病动物,并为易感动物接种疫苗。文章就牛结核病的诊断技术和防治措施进行了综述,以期为牛结核病的诊断与防控提供参考。 展开更多
关键词 牛结核病 结核分枝杆菌 分子生物学诊断 免疫学诊断
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牛分支杆菌抗体荧光微球免疫层析试纸条检测方法的建立
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作者 苏华彬 亓菲 +8 位作者 南文龙 刘蒙达 孙明军 焉鑫 毛迎雪 曲瑶 孙淑芳 李桂梅 樊晓旭 《动物医学进展》 北大核心 2024年第11期1-8,共8页
为了建立一种便捷、高效、采用荧光微球免疫试纸条技术的牛分支杆菌检测方法,首先表达、纯化MPB70和MPB83蛋白,并用荧光微球进行标记,组装荧光微球免疫试纸条并进行条件优化、特异性试验、重复性试验以及灵敏性试验,建立一种检测牛分支... 为了建立一种便捷、高效、采用荧光微球免疫试纸条技术的牛分支杆菌检测方法,首先表达、纯化MPB70和MPB83蛋白,并用荧光微球进行标记,组装荧光微球免疫试纸条并进行条件优化、特异性试验、重复性试验以及灵敏性试验,建立一种检测牛分支杆菌的荧光微球免疫试纸条方法。试验表明,试纸条检测时间仅需15 min;试纸条仅对牛分支杆菌抗体阳性血清发生反应,特异性好;变异系数在3.51%~9.23%之间,重复性好;灵敏度与美国爱德士牛分支杆菌抗体检测试剂盒相当,且总符合率高达90.5%。说明建立的牛分支杆菌抗体荧光微球免疫层析试纸条检测方法具有良好的特异性、灵敏性与重复性,可为牛分支杆菌检测提供新技术支持。 展开更多
关键词 荧光微球 牛分支杆菌 试纸条
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牛分枝杆菌Ag85B的生物信息学分析及多表位候选抗原的构建
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作者 董希望 张岩 +4 位作者 魏稚彤 李文欣 刘思宇 梁栋 赵海涛 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第15期62-65,72,118,119,共7页
为了构建基于牛分枝杆菌Ag85B蛋白的多表位候选抗原,试验采用生物信息学方法对Ag85B蛋白的理化性质、亲/疏水性、二级结构等进行分析,预测其T、B淋巴细胞抗原表位,并构建以pET-28a(+)为载体的多表位候选抗原,分析预测多表位候选抗原的... 为了构建基于牛分枝杆菌Ag85B蛋白的多表位候选抗原,试验采用生物信息学方法对Ag85B蛋白的理化性质、亲/疏水性、二级结构等进行分析,预测其T、B淋巴细胞抗原表位,并构建以pET-28a(+)为载体的多表位候选抗原,分析预测多表位候选抗原的理化性质、抗原性并进行免疫模拟。结果表明:Ag85B蛋白有325个氨基酸残基,相对分子量为34.58085,理论等电点为5.62,脂肪系数为72.18,亚细胞定位于线粒体、细胞质和高尔基体中,具有亲水性、信号肽和跨膜结构域,属于分泌型蛋白,其无规则卷曲和β-转角结构的占比分别28.15%和8.62%,含有3个T淋巴细胞优势表位和8个B淋巴细胞优势表位。构建的Ag85B多表位候选抗原为亲水性蛋白和非致敏原,两次预测免疫原性参数分别为0.893和1.524,可诱导特异性的体液和细胞免疫应答。说明试验成功构建出基于牛分枝杆菌Ag85B蛋白的多表位候选抗原,且该多表位候选抗原可能诱导机体产生T、B淋巴细胞免疫应答。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌 抗原表位 AG85B 生物信息学 多表位候选抗原
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注射母牛分枝杆菌联合3HLZE/4HL方案对肺结核患者T淋巴细胞亚群及肺功能的影响
8
作者 刘霞 施露露 《四川解剖学杂志》 2024年第4期52-54,共3页
目的:探讨注射用母牛分枝杆菌联合3HLZE/4HL方案对肺结核患者T淋巴细胞亚群及肺功能的作用.方法:选取2021年2月至2023年3月期间本院诊治的90例肺结核患者为研究对象,按照是否联合用药,将其分为研究组(n=45,接受注射用母牛分枝杆菌联合3H... 目的:探讨注射用母牛分枝杆菌联合3HLZE/4HL方案对肺结核患者T淋巴细胞亚群及肺功能的作用.方法:选取2021年2月至2023年3月期间本院诊治的90例肺结核患者为研究对象,按照是否联合用药,将其分为研究组(n=45,接受注射用母牛分枝杆菌联合3HLZE/4HL抗结核方案治疗)和对照组(n=45,接受常规3HLZE/4HL抗结核方案治疗).比较两组患者治疗前后T淋巴细胞亚群指标[CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)]及肺功能[用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼气容积(FEV1)及最大呼气峰流速(PEF)]水平.结果:治疗结束时,研究组患者CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)均高于对照组,CD8^(+)低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);FVC、FEV1、PEF水平均较对照组高,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:注射用母牛分枝杆菌联合3HLZE/4HL方案对肺结核患者T淋巴细胞亚群水平失衡的改善效果更好,更利于增强患者免疫力,促进患者肺功能更好的改善. 展开更多
关键词 肺结核 3HLZE/4HL 母牛分枝杆菌 T淋巴细胞亚群 肺功能
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4种牛分枝杆菌特异性基因PCR检测方法的比较与评价
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作者 辛凌翔 王豪杰 +6 位作者 刘燕 姚文生 胡云皓 张一帜 赵浩然 鑫婷 朱良全 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第12期55-61,共7页
牛分枝杆菌是严重危害养牛业的重要人兽共患病原微生物,PCR是检测该病原的有效手段之一。本研究通过筛选最佳的PCR检测方法,以期为临床监测牛分枝杆菌感染提供技术参考。针对牛分枝杆菌4种常见的特异性基因(16S rRNA、IS6110、IS1081和M... 牛分枝杆菌是严重危害养牛业的重要人兽共患病原微生物,PCR是检测该病原的有效手段之一。本研究通过筛选最佳的PCR检测方法,以期为临床监测牛分枝杆菌感染提供技术参考。针对牛分枝杆菌4种常见的特异性基因(16S rRNA、IS6110、IS1081和Mpb64)分别设计引物,通过温度梯度PCR法确定最适退火温度;采用牛分枝杆菌参考株核酸确定PCR最小检测限,同时运用牛分枝杆菌国内参考株、牛分枝杆菌国际参考株、禽分枝杆菌、胞内分枝杆菌、副结核分枝杆菌、羊种布鲁菌以及牛种布鲁菌进行特异性比较试验;最后运用人工模拟牛分枝杆菌感染组织样本(肺脏、淋巴结、奶样)比较不同PCR方法检测效果。4对引物以60℃为退火温度时均能检测分枝杆菌,其中IS6110、IS1081和Mpb64基因引物可以特异性检测牛分枝杆菌。IS6110和IS1081基因引物对牛分枝杆菌基因组的检测灵敏度最高,可达10^(-10) ng/μL;IS6110基因引物在肺脏和淋巴结中牛分枝杆菌检测灵敏度可达10~6 CFU/mL以上,而Mpb64基因引物对奶样中牛分枝杆菌的检测灵敏度可达10~2 CFU/mL。本研究筛选出相对适宜的牛分枝杆菌PCR检测方法,为牛结核病病原学检测和临床应用提供技术支持。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌 病原 PCR 灵敏度 特异性
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荷斯坦育成母牛结核性脑膜脑炎的病理学观察和病原鉴定
10
作者 王金玲 董玉慧 +4 位作者 李彦军 刘永宏 丁玉林 刘淑英 周向梅 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第1期120-124,共5页
为了探究1例荷斯坦育成母牛结核性脑膜脑炎病例的病理变化并鉴定病原,本试验对1头24月龄病死荷斯坦育成母牛进行临床症状观察、尸体剖检和组织病理学观察,随后进行细菌分离培养,并通过抗酸染色和多位点PCR方法进行菌种鉴定。结果显示:... 为了探究1例荷斯坦育成母牛结核性脑膜脑炎病例的病理变化并鉴定病原,本试验对1头24月龄病死荷斯坦育成母牛进行临床症状观察、尸体剖检和组织病理学观察,随后进行细菌分离培养,并通过抗酸染色和多位点PCR方法进行菌种鉴定。结果显示:发病牛临床表现共济失调、转圈、四肢及全身肌肉抽搐、眼球球结膜外突和角弓反张,病程数月;尸检可见脑底部表面、脑室内表面、肺脏、肾脏及后纵膈淋巴结表面和切面散在或密布大小不等的粟粒状黄白色结节;组织病理学观察结果显示,大脑、小脑、脑干、侧脑室和第四脑室的蛛网膜下腔内和局部脑实质内,以及肺脏、肾脏和后纵膈淋巴结内均有大小不等的典型结核性肉芽肿;将分离和纯培养的结核杆菌菌落制备涂片进行抗酸染色,可观察到散在或成簇红染的细长的分枝状小杆菌;分离菌株经结核分枝杆菌复合群(MtbC)的特异性多位点PCR鉴定为牛分枝杆菌。本试验在国内首次描述了由牛分枝杆菌引起荷斯坦育成母牛结核性脑膜脑炎病例的病理变化,为牛结核病的诊断和研究提供参考。 展开更多
关键词 荷斯坦育成母牛 结核性脑膜脑炎 抗酸染色 多位点PCR 牛分枝杆菌
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二甲双胍基于PPARγ/p38MAPK通路抑制结核分枝杆菌感染巨噬细胞的炎症反应 被引量:2
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作者 黄欢 韩晓群 +5 位作者 邓琴 朱奕静 杨婧 吴快英 赵剑秋 赵冰 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期493-499,共7页
目的基于PPARγ/p38MAPK通路探讨二甲双胍对结核分枝杆菌感染巨噬细胞炎症反应的影响。方法以牛型结核分枝杆菌减毒株(M.bovis)诱导THP-1源性巨噬细胞建立感染模型。实验分4组,即对照组、M.bovis组、M.bovis+二甲双胍(metformin,Met)组... 目的基于PPARγ/p38MAPK通路探讨二甲双胍对结核分枝杆菌感染巨噬细胞炎症反应的影响。方法以牛型结核分枝杆菌减毒株(M.bovis)诱导THP-1源性巨噬细胞建立感染模型。实验分4组,即对照组、M.bovis组、M.bovis+二甲双胍(metformin,Met)组、M.bovis+Met+GW9662(PPARγ抑制剂)组。分别采用RT-PCR和Western blot检测PPARγ、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)基因及蛋白表达;酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组巨噬细胞TNF-α、IL-6及IL-10水平;检测各组巨噬细胞荷菌量。结果M.bovis感染巨噬细胞中PPARγ表达较对照组细胞显著升高(P<0.05),同时M.bovis感染显著增加巨噬细胞p-p38MAPK表达及TNF-α、IL-6、IL-10水平(P<0.05);二甲双胍具有激活PPARγ的功能,与单纯M.bovis组相比,二甲双胍处理后,进一步升高了PPARγ表达,但显著抑制了M.bovis感染所致的p-p38MAPK表达,降低了TNF-α、IL-6水平,升高IL-10水平(P<0.05);特异性PPARγ拮抗剂GW9662阻断PPARγ通路后,二甲双胍的上述作用被逆转;相关性分析结果显示,二甲双胍处理后,PPARγ表达与TNF-α、IL-6呈负相关,与IL-10呈正相关(P<0.05),而p-p38MAPK表达则与TNF-α、IL-6呈正相关,与IL-10呈负相关(P<0.05)。与M.bovis组相比,M.bovis+Met及M.bovis+Met+GW9662组细菌负荷量均明显降低(P<0.05),而M.bovis+Met组和M.bovis+Met+GW9662组细菌负荷量差异无统计学意义(P>0.05)。结论二甲双胍能抑制结核分枝杆菌感染巨噬细胞炎症反应,其部分机制可能与其激活PPARγ通路,进而抑制p38MAPK活化有关。 展开更多
关键词 PPARΓ 结核分枝杆菌 二甲双胍 炎症反应
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新疆某牛场结核病的筛查和病原分离鉴定
12
作者 亓菲 张皓博 +4 位作者 樊晓旭 温建新 李岩 孙淑芳 范伟兴 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第5期65-69,共5页
为了对新疆某牛场结核病进行筛查,并确定有病变的结核阳性牛以分离培养牛分枝杆菌,本试验采用比较皮内变态反应试验、牛结核菌素点眼试验、γ-干扰素试验和牛分枝杆菌抗体ELISA试验对新疆某牛场的1 185头牛进行检测,锁定疑似结核阳性牛... 为了对新疆某牛场结核病进行筛查,并确定有病变的结核阳性牛以分离培养牛分枝杆菌,本试验采用比较皮内变态反应试验、牛结核菌素点眼试验、γ-干扰素试验和牛分枝杆菌抗体ELISA试验对新疆某牛场的1 185头牛进行检测,锁定疑似结核阳性牛并进行剖检,将结核疑似病料分离菌株并鉴定。结果显示:选取的3头4种检测方法皆为阳性的牛在淋巴结、胸壁或脾脏有明显病理学变化,综合PCR检测结果和全基因组测序结果,鉴定为牛分枝杆菌。结果表明,使用针对不同感染阶段的多种检测方法可以更准确地找到结核阳性病变牛,肺外结核仍普遍存在于新疆某牛场中。 展开更多
关键词 新疆牛场 牛分枝杆菌 检测 分离和鉴定
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牛分枝杆菌脂多糖在动物结核病血清学诊断中的应用价值
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作者 王元智 龙美贞 +1 位作者 刘一朵 周向梅 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2023年第4期401-405,共5页
目的:评价牛分枝杆菌脂多糖在动物结核病血清学诊断中的临床应用价值。方法:从灭活的牛分枝杆菌中提取具有生物活性的脂多糖,用提取的脂多糖进行酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),检测阴性牛血清和结核病、... 目的:评价牛分枝杆菌脂多糖在动物结核病血清学诊断中的临床应用价值。方法:从灭活的牛分枝杆菌中提取具有生物活性的脂多糖,用提取的脂多糖进行酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),检测阴性牛血清和结核病、副结核病、布鲁氏菌病、口蹄疫、衣原体病和新孢子虫病阳性牛血清,判断脂多糖用于动物结核病诊断的特异性。同时,收集牛血清样本245份[结核菌素皮肤试验(tuberculin skin test,TST)阳性177份,TST阴性68份],梅花鹿血清样本29份(TST阳性10份,TST阴性19份),獐子血清样本14份(TST阳性14份),通过ELISA方法检测血清中的抗体水平,以TST结果为参照,评估脂多糖在动物结核病血清学诊断中的临床应用价值。结果:除结核病阳性牛血清外,其余阳性病牛血清的检测结果与阴性牛血清差异无统计学意义(P>0.05),且均低于Cut off值。基于脂多糖建立的ELISA抗体检测方法与TST结果的总符合率为88.54%(255/288),总敏感度为87.56%(176/201),总特异度为90.80%(79/87)。结论:牛分枝杆菌脂多糖可作为动物结核病血清学诊断的特异性抗原之一,有助于提高现有诊断方法的特异性和检出率,具有较好的应用价值。 展开更多
关键词 分枝杆菌 脂多糖类 结核 血清学试验
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牛分枝杆菌肉芽肿形成机理的研究进展
14
作者 于有利 黎玉琼 薛峰 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第8期119-125,共7页
牛结核病(bovine tuberculosis, bTB)是由牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)引起的一种人兽共患的慢性传染病。bTB的发展和转归是宿主的免疫系统和牛分枝杆菌相互斗争的结果,这种斗争最基本和最主要的病理特征之一是形成肉芽肿。因此,阐... 牛结核病(bovine tuberculosis, bTB)是由牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)引起的一种人兽共患的慢性传染病。bTB的发展和转归是宿主的免疫系统和牛分枝杆菌相互斗争的结果,这种斗争最基本和最主要的病理特征之一是形成肉芽肿。因此,阐明肉芽肿的形态特点及参与肉芽肿形成的因素,揭示肉芽肿形成的动态过程,对于了解结核病的发生发展规律,以及研发新的抗结核药物具有重大意义。本文对牛结核肉芽肿的特点、功能以及参与牛结核肉芽肿形成的各种因素进行了综述。 展开更多
关键词 牛结核病 牛分枝杆菌 肉芽肿
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牛分枝杆菌Mb0869c抑制外源性细胞凋亡的研究
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作者 梁秋韵 孟祥苗 +3 位作者 杨可 黄蓓 宋厚辉 杨杨 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期729-736,共8页
为探究与人受体相互作用蛋白激酶1 (RIPK1)存在互作的牛分枝杆菌(M.bovis) Mb0869c蛋白对细胞凋亡的作用机制,本研究通过PCR从M.bovis DNA中扩增Mb0869c基因片段后构建重组质粒p MN437-Mb0869c并经PCR和测序鉴定正确后,利用电转化法将... 为探究与人受体相互作用蛋白激酶1 (RIPK1)存在互作的牛分枝杆菌(M.bovis) Mb0869c蛋白对细胞凋亡的作用机制,本研究通过PCR从M.bovis DNA中扩增Mb0869c基因片段后构建重组质粒p MN437-Mb0869c并经PCR和测序鉴定正确后,利用电转化法将重组质粒电转入耻垢分枝杆菌(MS)中,并经western blot鉴定Mb0869c蛋白的表达情况。结果显示,重组菌株中出现约55 ku的特异性条带,表明获得了表达Mb0869c的重组菌MS_Mb0869c。将MS_Mb0869c株和对照菌株MS_Vec分别感染人单核巨噬细胞(THP-1),通过PI和AnnexinⅤ/FITC染色,经流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,结果显示,MS_Mb0869c感染细胞的凋亡率显著低于MS_Vec感染组,这表明Mb0869c可以抑制MS诱导的细胞凋亡。将上述获得的Mb0869c基因片段克隆于p LVX-IRES-Puro-3×Flag中,构建的重组质粒经测序鉴定正确后,转染HEK293T细胞中,利用嘌呤霉素筛选表达Mb0869c的细胞并经western blot鉴定。结果显示,构建的HEK293T细胞中出现约55 ku的特异性条带,且随着细胞传代次数的增加,蛋白表达量未减少,这表明稳定表达Mb0869c的细胞系HEK293T/Mb0869c正确构建。利用不同浓度的肿瘤坏死因子α (TNF-α)和IAP抑制剂(SM164)作用于HEK293T细胞,通过检测细胞内ATP的含量确定细胞凋亡发生情况。结果显示,100 ng/mL TNF-α和25 nmol/L SM164在作用细胞24 h后,诱导细胞凋亡的效果最佳。以该浓度分别作用于HEK293T/Mb0869c和对照组HEK293T/Con细胞24 h后,统计细胞的存活率。结果显示前者的存活率极显著高于后者(P<0.01),表明Mb0869c能够抑制细胞凋亡。通过PCR扩增人RIPK1的3个结构域片段,并分别克隆至p CMV-Myc中构建真核表达重组质粒并经菌落PCR和测序鉴定正确后分别转染HEK293T/Mb0869c细胞,通过免疫共沉淀法(Co-IP)检测RIPK1结构域与Mb0869c的互作。结果显示Mb0869c和RIPK1的激酶结构域(KD)和中间结构域(ID)存在相互作用。上述结果表明,Mb0869c蛋白在M.bovis抑制细胞凋亡中具有重要的作用,且这种抑制作用是通过RIPK1实现的。本研究为M.bovis蛋白通过RIPK1调节细胞凋亡作用机制的研究提供实验依据。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌 细胞凋亡 Mb0869c 受体相互作用蛋白激酶1
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重组耻垢分枝杆菌MS_PE16的构建及其生物学特性研究
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作者 毕斯琪 杨可 +1 位作者 徐阿慧 宋厚辉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1158-1164,共7页
为探究牛分枝杆菌(M.bovis)PE/PPE家族成员PE16蛋白的生物学功能,本研究以M.bovis基因组DNA为模板扩增PE16基因片段并克隆至pMN437载体中,构建原核表达质粒pMN437-PE16,经PCR和测序鉴定正确后将该重组质粒及对照质粒PMS2电转入耻垢分枝... 为探究牛分枝杆菌(M.bovis)PE/PPE家族成员PE16蛋白的生物学功能,本研究以M.bovis基因组DNA为模板扩增PE16基因片段并克隆至pMN437载体中,构建原核表达质粒pMN437-PE16,经PCR和测序鉴定正确后将该重组质粒及对照质粒PMS2电转入耻垢分枝杆菌中构建重组耻垢分枝杆菌MS_PE16及对照重组耻垢分枝杆菌MS_Vec。经western blot鉴定结果显示,重组耻垢分枝杆菌中PE16在55 ku左右正确表达,而MS_Vec则无该特异性条带。对MS_PE16及MS_Vec进行生长曲线测定,并利用倒置显微镜观察MS_PE16及MS_Vec的菌落形态;将培养至对数生长期的MS_PE16及MS_Vec分别以MOI 10感染人白血病单核细胞(THP-1细胞),感染后0(感染4 h后经庆大霉素处理2 h,此时计为0)、24 h、48 h时采用平板计数法检测胞内菌数量;细菌感染后24 h和48 h时收集各组细胞培养上清,利用ELISA试剂盒检测各组细胞IL-6、TNF-α、IL-1β、IFN-β的表达分泌水平。生长曲线测定结果显示,PE16对分枝杆菌的生长无显著影响;菌落形态观察结果显示,MS_PE16与MS_Vec的菌落形态无明显区别;胞内活菌数量检测结果显示,细菌感染后0和24 h,MS_PE16在THP-1细胞中的数量极显著低于MS_Vec(P<0.01),但在感染后48 h,MS_PE16在THP-1细胞中的存活率极显著高于MS_Vec组在THP-1细胞中的存活率(P<0.001);细胞因子检测结果显示,MS_PE16感染组细胞中IFN-β的分泌水平极显著高于MS_Vec组(P<0.01)。上述结果表明PE16对分枝杆菌的生长和菌落形态均无显著影响,但其可提高分枝杆菌在巨噬细胞内的存活率,且可促进巨噬细胞中IFN-β的分泌水平。本研究初步揭示了分枝杆菌PE16蛋白的功能,为M.bovis感染机制的进一步研究提供了实验数据。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌 PE16 胞内菌 免疫反应
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牛分枝杆菌CVCC68002全基因组测序与功能分析
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作者 王霞 马伟超 +2 位作者 雒林通 裴芳 王廷璞 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2023年第5期11-24,共14页
【目的】为进一步深入研究牛分枝杆菌CVCC68002基因组特征,致病性和遗传进化关系,为牛分支杆菌感染疾病的预防和深入研究提供参考。【方法】利用Illumina和Pacbio测序技术平台对CVCC68002菌株进行全基因组测序建库,采用生物信息学和系... 【目的】为进一步深入研究牛分枝杆菌CVCC68002基因组特征,致病性和遗传进化关系,为牛分支杆菌感染疾病的预防和深入研究提供参考。【方法】利用Illumina和Pacbio测序技术平台对CVCC68002菌株进行全基因组测序建库,采用生物信息学和系统进化树等方法,对该菌株基因组功能注释、致病性和遗传进化关系进行了分析。【结果】通过分析发现该菌株基因组全长4357100 bp,GC含量为65.64%,编码基因达4145个;在GO、KEGG、COG、NR数据库基因组特征显示其具有高氨基酸和碳水化合物代谢能力。通过PHI,VFDB,ARDC和CARD数据库对其致病性进行相关分析,得到456个毒力基因注释,主要涉及细菌黏附与定殖、细菌逃避宿主免疫防御系统、分泌系统蛋白和转录因子等。并找到相关包括万古霉素,青霉素,多胺类抗生素、异烟肼、吡嗪酰胺、氟喹诺酮等的抗药性基因,另外,外排泵的抗性蛋白注释量显著,推测牛分枝杆菌通过外排抗性蛋白从而达到抗药自我保护的目的。【结论】获得牛分枝杆菌CVCC68002株完整基因组信息,完善系统进化信息,明确了其毒力因子和有效地靶标抗药基因,为后续对该菌株分子生物学特征、致病性和耐药基因筛选研究奠定了理论基础。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌 基因组测序 致病性分析 毒力因子 耐药性分析
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结核分枝杆菌和卡介苗菌株中喹啉酸磷酸核糖转移酶(QPRT)的原核表达及酶活性测定
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作者 葛赛 孙曼銮 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2023年第21期31-36,共6页
为了在原核表达系统E.coli中表达并纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tuberculosis)H37Ra和卡介苗菌株(Mycobacterium bovis bacilli-Calmette-Guerin,BCG)str.Pasteur 1173P2的喹啉酸磷酸核糖转移酶(quinolinic acid pho... 为了在原核表达系统E.coli中表达并纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tuberculosis)H37Ra和卡介苗菌株(Mycobacterium bovis bacilli-Calmette-Guerin,BCG)str.Pasteur 1173P2的喹啉酸磷酸核糖转移酶(quinolinic acid phosphoribosyl transferase,QPRT),探索不同来源QPRT蛋白结构,并测定其酶活性,试验采用PCR方法分别对M.tuberculosis和BCG中QPRT的编码基因nadC进行扩增,与pET-28a载体连接构建重组载体并在E.coli中完成原核蛋白的表达,在体外进行目的蛋白的纯化,利用高效液相色谱法检测不同来源的QPRT蛋白酶活性,使用PyMOL v2.3.2软件分析其氨基酸残基结构。结果表明:在体外成功克隆了M.tuberculosis和BCG中的大小为858 bp的编码基因nadC,并成功构建出重组载体pET-28a-nadC-MTB和pET-28a-nadC-BCG,在E.coli中进行QPRT蛋白的表达与体外纯化后获得分子量为34 ku的QPRT蛋白;两种不同菌株来源的QPRT蛋白以喹啉酸(quinolinic acid,QA)为底物时酶活性无差异;不同来源的QPRT蛋白中存在1个差异氨基酸残基位点,但酶活性并无明显差异。说明QA的结构类似物吡嗪酸(pyrazinoic acid,POA)不是QPRT的底物,为抗结核药物靶点的探索提供了潜在价值。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 卡介苗 喹啉酸磷酸核糖转移酶 蛋白表达 酶活性测定
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Molecular Characterization and Drug Susceptibility of Mycobacterium Bovis Isolated from Cattle in Xinjiang,China
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作者 Xi-Chao Ou Fang Xu +4 位作者 Yang Zhou Li-Li Tian Qiao-Ying Zeng Wei-Xing Fan Yan-Lin Zhao 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2018年第24期3017-3019,共3页
To the Editor:Bovine tuberculosis (TB)is a zoonotic disease caused by Mycobacterium bovis.It not only seriously influences the raising of livestock but also threatens the health of human beings and other economically ... To the Editor:Bovine tuberculosis (TB)is a zoonotic disease caused by Mycobacterium bovis.It not only seriously influences the raising of livestock but also threatens the health of human beings and other economically important animals.Therefore, the prevention and control of M.boris has great significance for public and animal health.Spoligotyping is the most widely used method for genotyping of M.boris and investigates transmission across different geographical regions.However,its discriminatory power varies widely among countries.Variable number of tandem repeats (VNTR)analysis has emerged as an alternative method for genotyping of bacterial species isolates. 展开更多
关键词 Molecular Characterization Drug Susceptibility mycobacterium bovis ISOLATED
原文传递
结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的二重PCR快速检测 被引量:15
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作者 谢芝勋 谢志勤 +5 位作者 雷剑明 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢丽基 温娟 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1141-1144,共4页
目的建立一种鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的二重PCR快速检测方法。方法根据已发表的结核分枝杆菌23SrRNA和牛分枝杆菌特殊基因序列,设计并合成了两对可扩增结核分枝杆菌和牛分枝杆菌特异性基因片段的引物,建立二重PCR快速检测结核分... 目的建立一种鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的二重PCR快速检测方法。方法根据已发表的结核分枝杆菌23SrRNA和牛分枝杆菌特殊基因序列,设计并合成了两对可扩增结核分枝杆菌和牛分枝杆菌特异性基因片段的引物,建立二重PCR快速检测结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的方法,测定其特异性和敏感性,并对238份牛临床样品的DNA分别进行了检测。结果该方法对牛分枝杆菌能扩增出838bp和631bp的特异性基因片段,结核分枝杆菌只扩增出838bp基因片段而扩增不出631bp的特异性基因片段,对参试的其它牛菌株的DNA扩增结果均为阴性。敏感度检测可达到50pg的DNA含量。临床样品检测结核分枝杆菌阳性有21份,牛分枝杆菌阳性有1份,其它临床样品扩增结果全部为阴性。结论本方法可作为牛分枝杆菌的快速检测和流行病学调查的工具。 展开更多
关键词 检测 结核分枝杆菌 牛分枝杆菌 二重PCR
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