Essential Gene(s) Targeted by Peptide Nucleic Acids Kills <i>Mycobacterium smegmatis</i>in Culture and in Infected Macrophages

Background: Antisense peptide nucleic acids (PNAs) exhibit growth inhibitory effects on bacteria by inhibiting the expression of essential genes and could be promising therapeutic agents for treating bacterial infections. A study was carried out to determine the efficacy of several antisense PNAs in inhibiting extracellular and intracellular growth of Mycobacterium smegmatis. Methods: Six PNAs obtained from a commercial supplier were tested to evaluate the inhibitory effect on bacterial growth by inhibiting the expression of the following essential genes: inhA (a fatty acid elongase), rpsL (ribosomal S12 protein), gyrA (DNA gyrase), pncA (pyrazinamidase), polA (DNA polymerase I) and rpoC (RNA polymerase β subunit) of M. smegmatis. Each PNA was tested at 20 μM, 10 μM, 5 μM and 2.5 μM concentrations to determine whether they caused a dose dependent killing of M. smegmatis cultured in Middlebrook 7H9 broth or in a J774A.1 murine macrophage cell line. Results: In Middlebrook broth, the strong growth inhibitory effect against M. smegmatis was observed by PNAs targeting the inhA and rpsL genes at all four concentrations. The PNAs targeting the pncA, polA and rpoC genes were found to exhibit strong growth inhibition against M. smegmatis but only at 20 μM concentration. No growth inhibition of M. smegmatis was seen in pure culture when treated with PNAs targeting gyrA and a mismatch PNA targeting dnaG (DNA primase). All six PNAs showed killing of M. smegmatis in J774A.1 macrophage cell line that were statistically significant (p < 0.05). Conclusion: It may be concluded from this study that PNAs could be potential therapeutics for mycobacterial infections.

结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测对菌阴空洞肺结核的诊断效能分析

目的探讨结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增(Xpert)检测对菌阴空洞肺结核的诊断效能。方法选取河北省胸科医院2021年4月至2022年10月期间行手术治疗的124例肺部空洞疾病患者相关病历资料,其中菌阴空洞肺结核86例(观察组),非结核肺部空洞疾病38例(对照组)。收集患者手术标本Xpert检测和外周血结核感染T细胞斑点(T-SPOT)试验结果,分析二者对菌阴空洞肺结核的诊断效能。结果Xpert检测和T-SPOT试验诊断菌阴空洞肺结核的敏感度为68.6%、75.6%,特异度为97.4%、68.4%。Xpert检测的敏感度低于T-SPOT试验(χ^(2)=5.832,P<0.001),特异度高于T-SPOT试验(χ^(2)=21.469,P<0.001)。2种方法在观察组中的阳性检出率均高于对照组[Xpert检测:68.6%(59/86)比2.6%(1/38);T-SPOT试验:75.6%(65/86)比31.6%(12/38)](均P<0.001)。受试者工作特征曲线分析结果显示,Xpert检测诊断菌阴空洞肺结核的曲线下面积为0.830,T-SPOT试验的曲线下面积为0.729,Xpert检测的准确度高于T-SPOT试验(P<0.001)。结论Xpert检测对菌阴空洞肺结核有比较可靠的诊断效能。

环介导等温扩增技术在病原微生物临床检测中的应用

病原微生物是威胁人类健康的重要因素之一,快速、准确的检测方法对于感染性疾病的诊断具有重要意义。环介导等温扩增(LAMP)是一种恒温扩增方法,具有反应时间短、操作简便、灵敏度高、特异度高、检测成本低等优点,因此被广泛应用于感染性疾病的快速诊断。基于这种情况,该文主要阐述了LAMP的原理、特点及其在临床常见病原微生物检测方面的应用与研究进展。LAMP技术现在已经被应用于病原微生物的检测,且具有较高的灵敏度及特异度,但该技术仍有易产生假阳性、引物设计复杂等不足之处。该文综述了近年来LAMP技术在病原微生物感染中的应用与进展,并对其未来的发展前景进行了展望,以期在资源有限的环境中为病原微生物感染的快速诊断提供合理的研究方向。

联合应用Xpert MTB/RIF、SAT-TB及MTB/NTM PCR方法检测支气管肺泡灌洗液对痰涂阴性肺结核的快速诊断价值

目的评估联合应用多色巢式荧光定量PCR(Xpert mycobacterium tuberculosis and rifampicin sensitivity test,Xpert MTB/RIF)、RNA恒温扩增实时荧光检测(simultaneous amplification and testing of tuberculosis,SAT‐TB)、荧光探针分枝杆菌核酸检测(mycobacterium tuberculosis/non-mycobacterium tuberculosis polymerase chain reaction,MTB/NTM PCR)3种方法检测疑诊肺结核患者的支气管肺泡灌洗液标本对痰涂阴性肺结核的快速诊断价值。方法采集2019年10月至2021年9月杭州市红十字会医院收治的痰涂片至少3次阴性的疑诊肺结核的898例患者支气管肺泡灌洗液,以MIGT960液体培养阳性为金标准,评估Xpert MTB/RIF、SAT-TB及TB/NTM PCR在检出MTB感染、耐药结核感染以及NTM感染中的快速诊断价值。结果在对MTB的检出效能方面,Xpert MTB/RIF、SAT-TB及TB/NTM PCR对MTB的检出率分别为87.24%、80.73%、88.02%,3者均达到80%以上,其中SAT-TB的检出率最低,其余两者相当,差异有统计学意义(P<0.001)。而3者组合的平行试验对MTB的检出率最高达97.14%,差异有统计学意义(P<0.001)。在对耐药结核的检出效能方面,MIGT960液体培养及Xpert MTB/RIF分别检出8.59%及10.94%的耐药结核,虽Xpert较高,但差异无统计学意义(P=0.122);而两者组合的平行试验可以检出12.24%的耐药结核,显著高于单用Xpert的效能(P=0.019)。在对NTM的检出方面,MIGT960液体培养(14.03%)高于NTM-DNA(8.24%),差异有统计学意义(P<0.001),两者组合的平行试验的检出率更高(14.48%)。结论与传统细菌学检测方法相比,联合使用Xpert MTB/RIF、SAT-TB及MTB/NTM PCR可以快速、敏感地检测出痰涂阴性疑诊肺结核患者支气管肺泡灌洗液标本中的结核核酸,同步检出耐药,还同时可以鉴别MTB与NTM,缩短了确诊时间,给疑诊肺结核患者的早期快速诊断提供了有效的实验室方案,值得临床推广应用。

两种结核分枝杆菌氟喹诺酮类药物耐药性检测方法比较及不一致原因初探

目的:评估荧光PCR熔解曲线法(简称“熔解曲线法”)对结核分枝杆菌氟喹诺酮类药物(FQs)耐药性的诊断价值,分析其与表型药物敏感性(简称“药敏”)试验结果不一致的原因。方法:采用简单随机抽样的方法,随机选取2019年1月至2020年6月期间来自重庆市39个区(县)经菌种鉴定和比例法药敏试验确定为耐多药结核病的126例患者的临床分离株,分别采用微量肉汤稀释法和熔解曲线法对左氧氟沙星(Lfx)和莫西沙星(Mfx)进行表型药敏及分子药敏试验。以表型药敏试验结果为标准,评价熔解曲线法对FQs耐药的检测效能,并采用全基因组测序(WGS)对表型药敏和分子药敏试验不一致的结果进行分析。结果:以表型药敏试验结果为标准,熔解曲线法对FQs耐药检测的敏感度和特异度分别为94.5%(86/91;95%CI:87.1%~98.0%)和100.0%(35/35;95%CI:87.7%~100.0%)。两种方法结果不一致者有12株,不一致率为9.5%(12/126)。表型药敏试验耐药而熔解曲线法敏感者5株,WGS显示2株未见gyrA耐药基因相关突变,2株存在gyrB基因突变(该4株菌的最低抑菌浓度值,Lfx为1~2μg/ml,Mfx均为0.5μg/ml),1株发现gyrA基因Asp94Ala突变,突变频率为15.3%。表型药敏试验敏感而熔解曲线法耐药7株,其中5株发现gyrA基因Ala90Val突变,1株发现gyrA基因Asp94Ala突变,1株发现gyrA基因Asp94Asn突变,该7株菌对Lfx和Mfx的最低抑菌浓度范围分别为1~2μg/ml和0.25~0.5μg/ml。结论:熔解曲线法对FQs耐药的检测效能较好,FQs异质性耐药菌的比例及低水平耐药相关突变是影响FQs熔解曲线法检测效能及导致其与表型药敏试验结果不一致的主要原因。

结核分枝杆菌RNA恒温扩增实时荧光检测技术检测肺泡灌洗液诊断肺结核的价值

收集陕西省结核病防治院2021年10月至2022年7月疑似肺结核住院患者的肺泡灌洗液,同时进行涂片抗酸杆菌染色、分枝杆菌BACTEC MGIT 960液体培养(简称“培养”)及菌种鉴定、GeneXpert MTB/RIF、结核分枝杆菌RNA恒温扩增实时荧光检测技术(simultaneous amplification and testing for Mycobacterium tuberculosis,SAT-TB),并对结果进行分析。以培养法(菌种鉴定结果为结核分枝杆菌复合群)为参考标准,SAT-TB诊断肺结核的敏感度为80.61%(399/495),特异度为87.74%(1259/1435),阳性预测值为69.39%(399/575),阴性预测值为92.92%(1259/1355),约登指数为0.68。SAT-TB技术具有敏感度和特异度较高的特点,对临床快速诊断活动性结核病具有一定的价值。

交叉引物恒温扩增技术快速检测结核分枝杆菌复合群和非结核分枝杆菌系统的建立

目的:建立一种快速检测结核分枝杆菌复合群(MTBC)和非结核分枝杆菌(NTM)的分子交叉引物恒温扩增技术(CPA)检测系统。方法:针对分枝杆菌高度保守的16S rRNA基因序列设计6套CPA引物和3个探针。以含16S rRNA基因序列质粒(浓度为1000拷贝/μl)为阳性模板,筛选确立最佳引物探针组合,并对建立的最佳反应体系进行敏感度、特异度和包容性分析。收集福建省龙岩市第二医院2022年2月8日至2023年3月14日具有肺结核症状或体征的125例疑似肺结核患者的标本,采用分枝杆菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)和建立的CPA法对收集到的标本进行检测,并对两种方法间的检测结果一致性进行统计分析,采用Kappa值评估。Kappa值≥0.75,说明一致性好。结果:筛选出MTBC/NTM-16S-6引物和MTBC/NTM-16S-LR-FAM-3为分枝杆菌检测系统最佳引物探针组合,检测体系最低检测限为100拷贝/μl,检测时间为40 min,能检出MTBC和临床常见NTM,且与常见呼吸道细菌无交叉反应。与实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测方法相比,阳性预测值为95.65%(66/69),阴性预测值为85.71%(48/56),符合率为91.20%(114/125),Kappa值为0.82。结论:成功建立了一种基于CPA技术的快速检测MTBC和NTM的检测系统,能够为基层医院结核病疫情防控提供一种新的检测方法。

核酸基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术在结核病和非结核分枝杆菌病诊断中的临床应用专家共识

核酸基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)技术在结核病与非结核分枝杆菌病病原学和耐药性诊断中的应用越来越多,为早期诊断、鉴别诊断和耐药鉴定提供了快速、准确的依据。然而,在实际应用中,临床医生对标本的选择、留取、送检时机及注意事项、报告结果的解读等的理解和掌握参差不齐,尚需规范化。本共识总结了核酸MALDI-TOF MS检测技术应用于结核病和非结核分枝杆菌病诊断的临床适应证和标本采集注意事项,介绍了如何正确解读核酸MALDI-TOF MS技术鉴定分枝杆菌菌种和耐药性的报告结果,以进一步规范核酸MALDI-TOF MS技术在结核病和非结核分枝杆菌病诊断中的临床应用,提高临床诊断水平,指导临床开展早期精准有效的治疗。

DNA实时荧光恒温扩增法联合检测对结核性胸膜炎的早期诊断价值

目的:分析DNA实时荧光恒温扩增法(简称“恒温扩增法”)联合腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)、外周血结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)检测对结核性胸膜炎患者早期诊断的价值。方法:采用回顾性研究方法,选取2020年1月至2021年12月西安市胸科医院收治的不明原因胸腔积液患者427例作为研究对象。所有研究对象均进行胸腔积液恒温扩增法、胸腔积液ADA、胸腔积液结核分枝杆菌培养和外周血T-SPOT.TB检测。以临床综合诊断作为参考标准,评价恒温扩增法联合ADA、外周血T-SPOT.TB对结核性胸膜炎的早期诊断价值。结果:427例研究对象中,279例(65.3%)确诊为结核性胸膜炎(结核性胸膜炎组),148例确诊为非结核性胸膜炎(非结核性胸膜炎组)。ADA的最佳诊断界值为19.5 U/L。单一检测方法中,恒温扩增法的特异度为100.00%,敏感度为31.54%,与结核分枝杆菌培养类似(分别为100.00%和30.11%)。胸腔积液ADA和外周血T-SPOT.TB检测的敏感度分别为74.91%和84.95%,特异度分别为87.16%和74.91%。ADA+T-SPOT.TB并联、串联检测可以分别得到较高的敏感度(94.27%)和特异度(99.32%)。恒温扩增法、ADA、T-SPOT.TB 3种早期检测指标并联的检测效能与3种方法加结核分枝杆菌培养法并联检测一致。联合检测方法中ADA+T-SPOT.TB检测串联性价比最高,成本与效果的比值(C/E)为669.23。结论:胸腔积液结核分枝杆菌DNA恒温扩增法与胸腔积液ADA、外周血T-SPOT.TB等检测方法联合可以为结核性胸膜炎患者早期诊断和治疗提供有力证据。

结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测及结核感染T细胞检测在肺结核诊断中的应用价值

目的探讨不同检测方法在肺结核诊断中的应用价值。方法回顾性选取2022年1月至12月简阳市人民医院收治的呼吸系统疾病患者272例,依据最终临床诊断分为肺结核组145例,非结核肺病组127例。所有患者均采集痰液、肺泡灌洗液、全血样本,进行涂片抗酸染色、结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测(Xpert MTB/RIF)、外周全血γ-干扰素释放试验检测(TB-IGRA),比较3种方法的诊断价值。结果272例患者中,痰涂片阳性37例(13.6%),Xpert MTB/RIF阳性122例(44.8%),TB-IGRA阳性158例(58.1%)。痰涂片、Xpert MTB/RIF、TB-IGRA检测的敏感度分别是25.5%、82.1%、77.2%;特异度分别是100%,97.6%,63.8%;Kappa系数分别为0.242、0.788、0.413。Xpert MTB/RIF检测中利福平耐药基因突变结果显示,有6例患者利福平耐药,rpoB基因突变主要是ProbeE突变和ProbeA、B联合突变。结论在3种检测方法中,Xpert MTB/RIF检测在诊断肺结核中诊断价值最高,可以为临床提供较好的参考价值。

核酸适配体荧光探针法和液基夹层杯法检测结核分枝杆菌临床应用价值比较

目的 比较核酸适配体荧光探针法和液基夹层杯法检测结核分枝杆菌(MTB)的临床应用价值。方法 采集175例肺结核患者和80名健康体检者的痰液样本,分别采用液体培养法、固体培养法、抗酸染色镜检法、液基夹层杯法、核酸适配体荧光探针法检测MTB。以液体培养法结果为标准,评价核酸适配体荧光探针法、液基夹层杯法与液体培养法结果的一致性。结果 与液体培养法结果比较,液基夹层杯法的敏感性为78.08%、特异性为98.04%;核酸适配体荧光探针法的敏感性为54.79%、特异性为50.98%。结论 液基夹层杯法与液体培养法一致性较好,具有较好的临床诊断价值;核酸适配体荧光探针法性能尚需优化。

快速核酸提取环介导等温扩增检测技术在肺结核诊断中的应用评价

目的评估快速核酸提取环介导等温扩增检测（PURE-LAMP）技术在肺结核临床诊断中的应用价值。方法选取2012年4月至2013年1月在河南省新乡市结核病防治所和获嘉县疾病预防控制中心就诊的初诊肺结核可疑症状者作为研究对象，共1378例。每例患者留取3份痰标本，分别进行痰涂片镜检、固体培养和PURE-LAMP检测。以临床诊断结果为标准，比较痰涂片镜检、固体培养和PUREI．AMP法检测MTB的效能；以固体培养试验结果为标准，评估PURKLAMP检测MTB的效能。结果以临床诊断结果为标准，痰涂片镜检、固体培养和PURE-LAMP检测MTB的敏感度分别为23．40％（168／718）、58．91％（423／718）和49．44％（355／718）。PURE-LAMP检测敏感度高于痰涂片镜检（X2=185．02，P=0．000），但低于固体培养试验（X2=46．24，P=0．000）。以固体培养试验结果为标准。PURE-I。AMP检测MTB的敏感度和特异度分别为90．24％（333／369）和96．86％（924／954），涂阴患者中检测敏感度和特异度分别为82．52％（170／206）和97．06％（924／952）。结论PUREIrAMP检测操作简单，敏感度和特异度较高，在我国县（区）级结核病防治机构具有一定的应用前景。

结核分枝杆菌核酸检测在矽肺结核患者中的应用价值

目的评价核酸检测法在矽肺结核患者中的临床应用价值。方法选取2015年112月在北京京煤集团总医院尘肺与结核病科住院的165例诊断为矽肺结核患者作为病例组；以同时期住院的90例矽肺患者作为对照组。留取研究对象痰标本用于检测。分别应用痰涂片显微镜检法、固体培养法和核酸检测法对研究对象的痰液标本进行检测，并对检测结果进行比较。结果以固体培养检测结果作为标准，核酸检测法检测病例组的敏感度为94．7％（36／38），特异度为81．1％（103／127），阳性预测值为60．0％（36／60），阴性预测值为98．1％（103／105）；以痰涂片法为标准，核酸检测法检测病例组的阳性预测值为55．0％（33／60），阴性预测值为i00．0Voo（105／105），敏感度为100．0％（33／33），特异度为79．5％（105／132）。与固体培养法和痰涂片法为标准，核酸检测法检测对照组的特异度均为96．7％（87／90）。病例组中，核酸检测法检测阳性率为36．4％（60／165），高于固体培养法的23．O％（38／165）和痰涂片法的20．O％（33／165），差异有统计学意义（X2=12．85，P〈0．05）；对照组中，核酸检测法检测阳性率为3．3％（3／90），其他方法检测阳性率为0．0％。结论在矽肺结核患者中，核酸检测对Mtb有较高的敏感度和特异度，对Mtb快速检测及辅助诊断具有较高的临床应用价值。

环介导等温扩增法检测临床标本中结核分枝杆菌的系统评价

目的采用Meta分析的方法评价环介导等温扩增法（LAMP）检测临床标本中结核分枝杆菌的准确性。方法通过检索PubMed、Embase、WebofScience、CochraneLibrary、CNKI、万方、维普数据库广泛收集文献，根据QUADAS质量评价标准评价纳入文献的质量，最终纳入16篇相关文献，共计18项研究。应用Meta—Disc软件对环介导等温扩增法检测临床标本中结核分枝杆菌的敏感度、特异度、诊断比值比进行合并分析，对纳入的研究绘制受试者工作特征曲线。对纳入的研究进行异质性检验，采用Meta回归分析异质性的来源。Meta回归会生成相对诊断比值比（relativediagnosticoddsratios，RDOR）。当RDOR〉1．0，表明某个研究特征比没有这个特征的诊断准确性要高。结果最终纳入16篇文献，共计18项研究综合分析所有数据，合并敏感度为0．91（95％CI：0．90～0．93）；合并特异度为0．97（95％CI：0．96～0．97）；合并诊断比值比为283．02（95％CI：157．37～509．00）；受试者工作曲线曲线下面积为0．9829。研究间异质性来源与结果判断相关，紫外灯判读试验的精确性比肉眼判读试验的精确性高5．66倍（RDOR--5．66，95％CI：1.32-24．22，P=0．0225）。结论对纳入的研究分析证实，环介导等温扩增法检测临床标本中的结核分枝杆菌的敏感度和特异度很高，表明该方法在结核病的快速诊断方面具有优势。

交叉引物扩增法对初诊肺结核患者检测效能的多中心研究

目的 评估交叉引物扩增法（cross priming amplication,CPA）对初诊疑似肺结核患者的检测效能及推广价值.方法 选取2015年2-12月于首都医科大学附属北京胸科医院、北京市昌平区结核病防治所、天津市海河医院等21家医疗机构门诊就诊的初诊疑似肺结核患者作为研究对象,共1020例.收集研究对象3份痰标本,由实验室人员按要求对痰标本进行痰涂片和痰培养[17家单位使用罗氏固体培养检测819例患者,4家单位只使用BACTEC MGIT 960培养（检测151例）或其他液体培养（检测50例）]和CPA检测,评估CPA检测效能,并于试验结束后对实验室操作人员进行CPA检测技术可接受度问卷调查.结果 现场共纳入肺结核可疑症状的初诊患者1020例,涂阳患者334例,涂阴患者685例,1例无涂片结果.痰培养阳性率为45.3％（462/1020）,CPA检测阳性率为47.6％（485/1019）.以培养法作为参照,CPA检测结核分枝杆菌的敏感度为89.8％（415/462）,特异度为87.4％（487/557）;在涂阳患者中,CPA检测结核分枝杆菌的敏感度为93.8％（289/308）,特异度为34.6％（9/26）;在涂阴患者中,CPA检测结核分枝杆菌的敏感度为81.8％（126/154）,特异度为90.0％（478/531）.CPA检测法与固体（液体）培养法一致性较好（Kappa=0.769）.通过可接受度问卷调查,81.8％（18/22）的操作人员认为CPA检测操作比较容易和便捷;相比培养法,所有操作人员均认为CPA检测对实验室人员的感染风险较小.结论 CPA检测方法具有较高的敏感度和特异度,并且与培养法一致性较好,有助于早期、快速发现结核病患者,在我国结核病诊断发现中具有推广应用的前景.

结核/非结核分枝杆菌核酸快速检测方法临床应用价值

目的评价结核/非结核分枝杆菌核酸快速检测方法的临床应用价值。方法应用实时荧光PCR技术对420例标本进行临床试验研究,并与抗酸杆菌涂片和分枝杆菌培养方法对照比较。结果结核分枝杆菌核酸检测灵敏度为48.5%(其中菌阳标本灵敏度为95.8%,菌阴标本灵敏度为14.5%),特异度99.3%,阳性预测值为99.1%,阴性预测值为55.5%;临床试验388例痰标本中检测出1例非结核分枝杆菌核酸阳性,经测序确认,准确率100%;同时对32例非结核分枝杆菌临床分离株进行核酸检测,并经测序确认,准确率100%。结论应用实时荧光PCR技术,能实现在1支管内同时进行结核分枝杆菌/非结核分枝杆菌的核酸检测。该方法具有简单快速、特异性好污染性少的特点。可作为实验室辅助检测结核/非结核分枝杆菌核酸方法之一。

GeneXpert MTB／RIF技术在结核病早诊断中的应用

目的评估GeneXpertMTB／RIF技术（简称XpertMTB／RIF）检测结核分枝杆菌（MTB）及其利福平耐药的可行性。方法选取2015年1—6月上海市松江区结核病定点医院结核科门诊连续纳入、初次就诊的疑似结核病患者，共556例。收集患者痰液标本，分别进行涂片抗酸染色镜检法（简称“涂片法”）、液体分枝杆菌培养管（MGIT）培养法（简称“液体培养法”）、传统比例法药物敏感性试验（简称“药敏试验”）和XpertMTB／RIF检测，比较XpertMTB／RIF法和传统方法检测痰标本中MTB及其耐药性的效能。结果537例患者经涂片法、液体培养法和XpertMTB／RIF检测，阳性率分别为17．32％（93／537）、28．31％（152／537）和28．12％（151／537）。以液体培养为金标准，XpertMTB／RIF检测的敏感度和特异度分别为90．60％（135／149）和95．84％（369／385），且敏感度高于涂片法[涂片法的敏感度为60．53％（92／152）]，差异有统计学意义（χ2=36．71，P％0．01）；XpertMTB／RIF检测涂阳标本的敏感度为96．63％（86／89），明显高于检测涂阴标本的敏感度ES1．67％（49／60）]，差异有统计学意义（χ2=9．43，P〈0．01）。以比例法药敏试验结果为金标准，XpertMTB／RIF检测利福平耐药的敏感度为90．00％（9／10），特异度为99．07％（106／107），一致率为98．29％（115／117）。结论XpertMTB／RIF技术操作简便、快速、安全，敏感度和特异度较高，对基层实验室早期检测MTB及判定利福平耐药具有重要价值。

环介导等温扩增技术检测痰样结核分枝杆菌临床价值评价

目的 评价环介导等温扩增技术（LAMP）检测痰标本中结核分枝杆菌的效果和临床价值。 方法 收集深圳市慢性病防治中心2013年4—9月350例结核病专科门诊就诊者的痰标本，其中肺结核患者216例（初诊患者93例，其中涂阳患者41例，涂阴患者52例；随访治疗患者123例），非结核病患者134例（含非结核分枝杆菌感染11例）。用涂片法、罗氏培养法、实时PCR法和LAMP法检测样本中的结核分枝杆菌，以临床诊断为标准，用SPSS 17.0软件进行统计学分析，计算LAMP对初诊患者的检出率和检测敏感度和特异度。不同方法之间检测效率的比较采用χ2检验，P〈0.05为差异有统计学意义。LAMP与实时PCR法检测的一致性评价采用Kappa检验。 结果 上述4种方法检测初诊肺结核患者痰样的敏感度分别为44.1%（41/93）、52.7%（49/93）、48.4%（45/93）、48.4%（45/93），LAMP检测敏感度与实时PCR一致；高于涂片法，低于罗氏培养法，但差异均无统计学意义（χ^2=0.75，P〉0.05；χ^2=0.75，P〉0.05）。LAMP对初诊涂阳患者的总检出率为90.2%（37/41），对初诊涂阴患者的检出率为15.4%（8/52），诊断肺结核的特异度为100.0%（134/134）。对123例治疗随访的患者，涂片、培养、实时PCR 和LAMP 4种方法单次检测的阳性率分别为26.0%（32/123）、14.6%（18/123）、31.7%（39/123）和30.9%（38/123）。LAMP和实时PCR检测总体一致率为96.9%（339/350），Kappa值为0.91。 结论 LAMP检测痰样本结核分枝杆菌用于结核病诊断具有良好的特异度，总体检测效能和实时PCR具有很高一致性，具有临床应用价值。

卡介菌多糖核酸免疫治疗结核病小鼠的实验研究

目的观察卡介菌多糖核酸(BCGPSN)对结核分枝杆菌感染小鼠的免疫保护作用及其免疫学机制。方法将BALB/c小鼠48只随机分成BCGPSN免疫治疗组和结核菌感染对照组,每组24只。两组小鼠制成结核分枝杆菌感染模型。感染后1周,每天分别腹腔内注射BCGPSN(10mg/kg)或生理盐水(10mL/kg),连续7d。感染后3周和4周每组处死12只小鼠,检测小鼠体重以及肺、脾脏湿重,观察肺脏病理改变,取肺、脾组织进行结核菌培养和菌落计数,用real-timePCR法测定肺、脾组织IFNγmRNA、IL10mRNA和IL4mRNA的表达。结果感染后4周,治疗组小鼠体重和脾脏重量高于对照组,肺脏重量低于对照组,且肺部病变较轻。感染后3周和4周,治疗组小鼠肺、脾组织结核菌落均低于对照组,小鼠肺组织IFNγmRNA表达与对照组无差别,IL10mRNA和IL4mRNA的表达低于对照组。感染后3周,治疗组小鼠脾组织IFNγmRNA表达与对照组相似;感染后4周,脾组织治疗组脾组织IFNγmRNA的表达高于对照组。感染后3周和4周,IL10mRNA和IL4mRNA的表达低于对照组。结论BCGPSN可减轻结核病小鼠体重下降,减少结核病小鼠肺和脾脏结核菌数量,并增强Th1型免疫反应。

环介导等温扩增法快速检测结核分枝杆菌的初步观察

目的建立1种用于结核分枝杆菌快速检测的LAMP技术平台,用于结核分枝杆菌的鉴定。方法使用了11株标准菌株,建立了一套用于结核分枝杆菌快速检测的平台,对灵敏度和特异性进行优化,随后使用47株临床分离株,和13株食源性致病菌对建立的方法进行了验证。结果经过标准菌株建立并优化检测平台,经过优化的LAMP反应体系检出限为1pg的模板DNA,在使用47株临床分离株,和13株食源性致病菌对方法进行验证,发现LAMP特异性为97.4%。结论通过这项研究发现LAMP应用于结核分枝杆菌的快速检测,具有检出浓度低、特异性强和检测周期短的优点。