大肠杆菌-分枝杆菌分泌型穿梭表达质粒pBCG-SP-HSP65的构建及人结核杆菌HSP65的表达

用PCR技术从BacillusCalmette gu啨ｒｉｎ(BCG)基因组中扩增出抗原 85B(Ag85B)的信号肽 (SP)DNA序列 ,从pCMVMTHSP65质粒中扩增出人结核杆菌HSP65全长基因。利用DNA重组技术将以上两个片段插入质粒pBCG 2 10 0的人结核杆菌HSP70启动子下游 ,构建成分泌型原核穿梭表达质粒 (pBCG SP HSP65)。酶切鉴定、PCR和测序分析结果均表明分泌型原核穿梭表达质粒pBCG SP HSP65构建成功。利用电穿孔将该质粒转入耻垢分枝杆菌(Mycobacterialsmegmatis,MS)中 ,用卡那霉素筛选出阳性重组子。经热诱导后用SDS PAGE观察到在耻垢分枝杆菌中 65kD蛋白占总蛋白的 2 0 % ,而在重组耻垢分枝杆菌表达的 65kD蛋白占菌体总蛋白的 3 4 46% ,占裂解物上清总蛋白的 68 56% ,表明重组的HSP65基因能在耻垢分枝杆菌中高效表达 ,表达的蛋白大部分以可溶状态存在。通过Western blot证实分泌的该蛋白能与结核杆菌HSP65的抗体特异性结合 ,说明该重组蛋白具有HSP65的生物学活性。

噬菌体扩增技术快速检测结核分枝杆菌的临床应用

结核病细菌学检查主要靠痰涂片和培养的方法，阳性率只有30％左右。结核菌培养则需1-2mo。结核抗体检测假阳性率、假阴性率都很高。FAST-plaqueTB噬菌体扩增技术检测结核杆菌，具有特异性和灵敏度高的优点，而且快速、简便。

RESPIRATORY SYSTEM

7.1 Upper respiratory tract disease and bronchial asthma2003306 Effects of vaccae on airway contraction and inflammation in asthmatic guinea pigs. ZHAO Xiao(赵晓燕), et al. Zhejiang Respir Drug Res Lab Med Sch, Zhejiang Univ, Hangzhou 310031. Chin J Tuberc Respir Dis 2003;26(4):218-222.Objective: To study the effects of Mycobacterium vaccae(M. vaccae)on the lung function, airway hyper-