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钙结合蛋白S100A4对BCG感染THP-1细胞自噬的调控作用
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作者 刘悦阳 李梦媛 +5 位作者 聂雪伊 马亚博 侯雨欣 马伯利 杨易 徐金瑞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期311-322,共12页
本研究旨在探究牛结核分枝杆菌减毒株卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)感染人单核巨噬细胞THP-1后,钙结合蛋白S100A4对细胞自噬的调控作用。以感染复数为10∶1的BCG感染THP-1细胞不同时间,用Western blot检测S100A4和LC3Ⅱ的... 本研究旨在探究牛结核分枝杆菌减毒株卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)感染人单核巨噬细胞THP-1后,钙结合蛋白S100A4对细胞自噬的调控作用。以感染复数为10∶1的BCG感染THP-1细胞不同时间,用Western blot检测S100A4和LC3Ⅱ的表达,以确定最佳感染时间,并采用透射电镜观察自噬体数量变化。在BCG单独感染或与S100A4小干扰RNA共处理THP-1细胞12 h后,采用qRT-PCR检测S100A4及自噬相关因子--微管相关蛋白轻链3II (microtubule-associated protein light chain 3Ⅱ, LC3Ⅱ)、自噬相关蛋白7(autophagy-related gene 7, Atg7)、Beclin-1在mRNA水平上的表达,采用Western blot检测S100A4、LC3Ⅱ、Atg7、Beclin-1在蛋白水平的表达。利用mRFP-GFP-LC3检测自噬流,激光共聚焦显微镜观察细胞中mRFP-LC3和mRFP-GFP-LC3点状聚集。结果显示:在BCG感染THP-1细胞不同时间后,S100A4和LC3Ⅱ在蛋白表达水平随感染时间的延长先上升后下降,在12 h时表达最高(P<0.001),且自噬体数量明显增多。在mRNA水平上,与siNC组相比,siNC+BCG感染组S100A4、LC3Ⅱ、Atg7、Beclin-1的mRNA表达水平显著上调(P<0.05),当BCG和siS100A4共处理后,S100A4、LC3Ⅱ、Atg7、Beclin-1在mRNA水平的表达显著(P<0.05)或极显著(P<0.01,P<0.001)下调;在蛋白水平上,与未感染组相比,S100A4、LC3Ⅱ、Atg7、Beclin-1的蛋白表达量显著增多(P<0.05),BCG和siS100A4共处理后,S100A4、LC3Ⅱ、Atg7、Beclin-1的蛋白表达量均极显著减少(P<0.001);与未感染组相比,BCG组自噬体的数量极显著增多(P<0.01),siS100A4+BCG组与siNC+BCG组相比,自噬体的数量显著减少(P<0.05)。S100A4对BCG感染巨噬细胞诱导的自噬具有调控作用,S100A4能够促进BCG诱导的THP-1细胞自噬。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 细胞自噬 S100A4 THP-1细胞
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miR-146a通过调节IPr1基因对结核分枝杆菌感染的AEC Ⅱ型细胞活性作用机制
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作者 许明昭 林清香 +1 位作者 寇昌伟 汪求真 《西部医学》 2024年第3期333-337,共5页
目的 探讨miR-146a通过调节IPr1基因观察对结核分枝杆菌(Mtb)感染的肺泡II型上皮细胞(AEC II)活性的作用机制。方法 采用Mtb感染AECⅡ细胞。将AECⅡ细胞分为结核组(感染Mtb)、 NC组(模型+转染miR-146a NC)、转染组(模型+转染miR-146a mi... 目的 探讨miR-146a通过调节IPr1基因观察对结核分枝杆菌(Mtb)感染的肺泡II型上皮细胞(AEC II)活性的作用机制。方法 采用Mtb感染AECⅡ细胞。将AECⅡ细胞分为结核组(感染Mtb)、 NC组(模型+转染miR-146a NC)、转染组(模型+转染miR-146a mimics)。RT-PCR检测AECⅡ细胞miR-146a、Ipr1基因表达;CCK8检测AECⅡ细胞增殖;流式细胞仪检测AECⅡ细胞凋亡;双荧光素酶报告测定Ipr1与miR-146a靶向关系。结果 DIO荧光染色的Mtb在感染人AECⅡ细胞12 h内会进入细胞质基质中,并围绕细胞核分布,表明建立的结核分枝杆菌感染模型成功;结核组与NC组AECⅡ细胞中miR-146a、Ipr1基因表达比较无差异(P>0.05),与NC组相比,转染组AECⅡ细胞中miR-146a、Ipr1基因表达水平升高(P<0.05);结核组与NC组AECⅡ细胞在不同时间点的OD值比较均无差异(P>0.05),与NC组相比,转染组AECⅡ细胞在不同时间点的OD值均升高(P<0.05);结核组AECⅡ细胞凋亡率与NC组相比无差异(P>0.05),与NC组相比,转染组AECⅡ细胞凋亡率显著降低(P<0.001)。双荧光素酶报告结果显示,转染miR-146a后野生型Mtb感染的AECⅡ细胞中Ipr1活性升高(P<0.05),突变型Mtb感染的AECⅡ细胞中Ipr1活性无明显变化(P>0.05),表明Ipr1是miR-146a的靶基因。结论 过表达的miR-146a可增加Mtb感染的AECⅡ细胞活性,降低凋亡,研究机制认为可能与通过激活Ipr1水平相关。Ipr1是miR-146a靶基因,可通过激活表达而发挥减少Mtb对AECⅡ细胞活性的损伤。 展开更多
关键词 MIR-146A 肺结核 胞内病原体抗性基因1 结核分枝杆菌 肺泡Ⅱ型上皮细胞 增殖 凋亡
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结核分枝杆菌EsxV/W融合蛋白对耻垢分枝杆菌表型及巨噬细胞功能的影响
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作者 余海燕 李玉洁 +1 位作者 任芹 杨国平 《大理大学学报》 2024年第2期32-38,共7页
目的:构建表达结核分枝杆菌EsxV/W融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌(MS),分析重组MS的表型及对巨噬细胞功能的影响。方法:原核表达获取EsxV/W融合蛋白,纯化后免疫小鼠制备多克隆抗体;电击转化法构建重组菌株MS-EsxV/W及空载菌株MS-vec,使用... 目的:构建表达结核分枝杆菌EsxV/W融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌(MS),分析重组MS的表型及对巨噬细胞功能的影响。方法:原核表达获取EsxV/W融合蛋白,纯化后免疫小鼠制备多克隆抗体;电击转化法构建重组菌株MS-EsxV/W及空载菌株MS-vec,使用制备的多克隆抗体检测融合蛋白在MS中的表达;分析表达EsxV/W融合蛋白的重组MS的菌落形态、生物膜及生长速率;菌落计数法检测重组MS在溶菌酶、孔雀绿、低pH、SDS、H2O2、NaNO2等不同环境条件下的存活能力,分析EsxV/W融合蛋白对MS表型的影响;重组MS侵染ANA-1巨噬细胞,Griess法检测ANA-1细胞NO的释放量,酶联免疫吸附实验检测ANA-1细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)的释放量,菌落计数法检测重组MS在ANA-1细胞内的存活能力。结果:成功构建能表达EsxV/W融合蛋白的重组菌株MS-EsxV/W,表达EsxV/W融合蛋白对MS的菌落形态、生物膜形成及生长速率无显著影响;表达EsxV/W融合蛋白不改变MS对溶菌酶、孔雀绿与低pH的耐受力,但可降低对SDS的耐受力,增强对H2O2与NaNO2的耐受力;侵染ANA-1细胞一定时间后,与MS-vec比较,MS-EsxV/W侵染的ANA-1细胞NO、TNF-α、IL-6释放量明显增加,且MS-EsxV/W的细胞内存活能力高于MS-vec。结论:EsxV/W融合蛋白可改变MS的表型并调控ANA-1巨噬细胞的免疫应答反应,有助于后续对esxV/W基因功能的探究。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 耻垢分枝杆菌 EsxV/W融合蛋白 ANA-1细胞
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IFN-<i>γ</i>-, IL-4-, IL-17-, PD-1-Expressing T Cells and B Cells in Peripheral Blood from Tuberculosis Patients
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作者 Xiuyun He Xiangyu Huang +7 位作者 Li Xiao Juan Hao Jing Li Hongbing Chen Yu Gao Yazhen Zhao Chuanzhi Zhu Liqi Jiang 《Advances in Microbiology》 2012年第4期426-435,共10页
Although the efficacy of tuberculosis (TB) vaccines is tightly linked to cell-mediated immunity, some functions of T and B cells in TB patients remain unclear. To address how Mycobacterium tuberculosis infection inhib... Although the efficacy of tuberculosis (TB) vaccines is tightly linked to cell-mediated immunity, some functions of T and B cells in TB patients remain unclear. To address how Mycobacterium tuberculosis infection inhibits T effector responses, we assessed the proportions of T cell subsets and B cells in peripheral blood from pulmonary TB (PTB) patients, pleural TB (PLTB) patients, and healthy subjects (HS, who showed purified protein derivative (PPD)-positive reactions) with flow cytometry. Compared to HS, PTB and PLTB patients exhibited higher proportions of B cells and Th17 cells, and lower proportions of Th2 cells and ratios of Th1 to Th17 cells and of Th2 to Th17 cells. PTB patients had higher CD4+ T cells and PD-1+ CD4+ T cells than HS. Newly diagnosed PTB patients (nPTB) had higher proportions of B cells than HS;in contrast, PTB patients subjected to effective treatments (oPTB) and HS shared similar proportions of B cells. oPTB patients had higher proportions of CD4+ T cells, Th17 cells, and PD-1+ CD4+ T cells than HS, but this difference did not occur in nPTB patients. These findings suggest that shifting ratios of Th1 to Th17 cells may be beneficial for M. tuberculosis to amplify. 展开更多
关键词 mycobacterium tuberculosis B CELLS T CELLS Th CELLS PD-1
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白细胞介素-1在巨噬细胞抗结核分枝杆菌免疫应答及代谢重编程的作用研究进展 被引量:1
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作者 闫亚如 谢建平 《结核与肺部疾病杂志》 2023年第6期511-518,共8页
结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染导致的结核病是一种主要的慢性炎性呼吸道传染病,严重危害人类健康。结核分枝杆菌的致病性取决于其调节宿主代谢的能力,而巨噬细胞代谢可塑性影响疾病的发展过程。结核分枝杆菌感染期... 结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染导致的结核病是一种主要的慢性炎性呼吸道传染病,严重危害人类健康。结核分枝杆菌的致病性取决于其调节宿主代谢的能力,而巨噬细胞代谢可塑性影响疾病的发展过程。结核分枝杆菌感染期间白细胞介素-1(IL-1)的释放对宿主层面的病原体免疫防御至关重要,并对宿主的代谢状态十分敏感。作者对结核分枝杆菌感染期间IL-1的分泌机制和对宿主抵御感染的影响、宿主巨噬细胞代谢重编程对IL-1的调控,以及IL-1与其他细胞因子之间的串扰进行综述,旨在加深对宿主抵御感染的认识及阐明IL-1重要的免疫学功能。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 白细胞介素1 巨噬细胞 代谢重编程
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基于SOCS1-TLR2信号通路探讨HIV/结核分枝杆菌合并感染的发病机制
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作者 林雪 廖艳研 +4 位作者 潘沛江 王建 钟伟月 叶力 梁浩 《广西医科大学学报》 CAS 2023年第12期1941-1948,共8页
目的:探讨巨噬细胞的细胞因子信号传导抑制因子1(SOCS1)-Toll样受体2(TLR2)信号通路在人免疫缺陷病毒(HIV)促进结核分枝杆菌(Mtb)感染中的作用机制。方法:采集HIV-1单感染者、Mtb单感染者、HIV-1/Mtb合并感染者和健康对照者的外周静脉血... 目的:探讨巨噬细胞的细胞因子信号传导抑制因子1(SOCS1)-Toll样受体2(TLR2)信号通路在人免疫缺陷病毒(HIV)促进结核分枝杆菌(Mtb)感染中的作用机制。方法:采集HIV-1单感染者、Mtb单感染者、HIV-1/Mtb合并感染者和健康对照者的外周静脉血,分离外周血单个核细胞(PBMCs),流式细胞术检测PBMCs中单核巨噬细胞的SOCS1、TLR2及下游Mtb感染相关因子表达。基于巨噬细胞—HIV—Mtb感染模型,探讨SOCS1-TLR2在HIV促进Mtb感染中的作用。结果:与健康对照组相比,HIV-1单感染组、Mtb单感染组和HIV-1/Mtb合并感染组中白细胞介素(IL)-6、IL-10蛋白表达水平升高(P<0.05);Mtb单感染组IL-1β、IL-12和干扰素(IFN)-γ蛋白表达水平升高(P<0.05)。体外细胞实验中,与对照组相比,HIV-1单感染组、Mtb单感染组和HIV-1/Mtb合并感染组中SOCS1 mRNA表达水平升高(P<0.05);与对照组相比,HIV-1单感染组和HIV-1/Mtb合并感染组TLR2 mRNA表达水平下降(P<0.05)。构建过表达SOCS1的感染组别后,与对照组相比,HIV-1单感染组和HIV-1/Mtb合并感染组中SOCS1、IL-6表达水平升高(P<0.05),加入TLR2激动剂后,HIV-1/Mtb合并感染组中SOCS1、IL-6表达水平下降(P<0.05)。过表达SOCS1的HIV/Mtb合并感染组Mtb菌落计数最高(P<0.05)。结论:HIV-1可能通过促进SOCS1-TLR2信号通路中促Mtb感染因子IL-6和IL-10的高表达,从而利于Mtb的感染。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 艾滋病 细胞因子信号传导抑制因子1 TOLL样受体2
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结核分枝杆菌ESX-1分泌系统与宿主巨噬细胞相互作用的研究进展
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作者 余海燕 杨国平 《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2023年第12期1218-1225,共8页
结核分枝杆菌(Mtb)侵入宿主细胞并在宿主细胞中持续存在是Mtb感染引起致病的重要原因。当Mtb感染宿主时,可与宿主巨噬细胞(M?)相互作用并调节M?的功能,影响机体的固有免疫和适应性免疫应答反应。ESX-1分泌系统作为Mtb的主要分泌系统,能... 结核分枝杆菌(Mtb)侵入宿主细胞并在宿主细胞中持续存在是Mtb感染引起致病的重要原因。当Mtb感染宿主时,可与宿主巨噬细胞(M?)相互作用并调节M?的功能,影响机体的固有免疫和适应性免疫应答反应。ESX-1分泌系统作为Mtb的主要分泌系统,能将Mtb分泌的蛋白质转运到宿主细胞中,发挥毒力及免疫调节作用;某些分泌蛋白具有高度免疫原性,并是强有效的T细胞抗原,可作为结核疫苗设计及结核病诊断的重要抗原。对ESX-1分泌系统与M?相互作用过程的机制研究是分析Mtb毒力因子的致病机理及疫苗研发的途径之一。因此,本文对Mtb的ESX-1分泌系统组成以及分泌蛋白对M?调控作用进行综述,分析ESX-1分泌系统因子在Mtb与宿主相互作用中发挥的作用,对于开发新的结核疫苗和药物控制结核病至关重要。 展开更多
关键词 ESX-1分泌系统 巨噬细胞 结核分枝杆菌
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结核分枝杆菌1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶抑制剂的3D-QSAR研究及优化设计
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作者 谢稳 谢双龙 +1 位作者 余娜 林治华 《重庆理工大学学报(自然科学)》 CAS 北大核心 2023年第2期357-368,共12页
结核分枝杆菌是导致结核病的病原体,1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶是结核分枝杆菌代谢的关键限速酶,因此被作为一个有潜力的抗菌靶点。收集了35个对结核分枝杆菌1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶(mtDXR)有体外抑制活性的膦胺霉素... 结核分枝杆菌是导致结核病的病原体,1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶是结核分枝杆菌代谢的关键限速酶,因此被作为一个有潜力的抗菌靶点。收集了35个对结核分枝杆菌1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶(mtDXR)有体外抑制活性的膦胺霉素衍生物,运用比较分子场分析方法和比较分子相似性指数分析方法对它们进行三维定量构效关系研究,建立了相应模型。结果表明:CoMFA模型的最佳主成分值n=7,交互检验系数q^(2)=0.601,相关系数r^(2)=0.979;CoMSIA模型的最佳主成分值n=8,交互检验系数q^(2)=0.609,相关系数r^(2)=0.983。数据显示所建模型拥有较为可靠的预测能力。同时,利用分子对接进一步考察膦胺霉素类小分子抑制剂和靶点活性部位氨基酸残基的非键作用,结合3D-QSAR等势图,明确了该类化合物分子结构上可供加工和优化的区域,进而设计出14个全新的膦胺霉素衍生物,并对它们进行活性预测,得到了拥有更高预测活性的新化合物27m,为mtDXR抑制剂的进一步开发提供了理论依据和重要参考。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶(DXR) 膦胺霉素衍生物 3D-QSAR 分子对接
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结核分枝杆菌RD-1区编码蛋白的结构和功能 被引量:8
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作者 李浩 徐俊杰 陈薇 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1260-1266,共7页
RD-1(region of difference-1)被认为在结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的致病机理中起着关键的作用.RD-1基因全长9.5kb,开放读码框从Rv3871~Rv3879c,分别编码9种不同的蛋白质.RD-1区在卡介苗(bacillusCalmette-Guerin,B... RD-1(region of difference-1)被认为在结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的致病机理中起着关键的作用.RD-1基因全长9.5kb,开放读码框从Rv3871~Rv3879c,分别编码9种不同的蛋白质.RD-1区在卡介苗(bacillusCalmette-Guerin,BCG)中是缺失的.研究结果显示,RD-1区是结核分枝杆菌的主要毒力因素之一,同时RD-1区参与了一种新的分泌系统ESX-1,这种分泌系统能够促进某些特定蛋白的分泌.ESX-1分泌的两种主要蛋白质CFP-10(culture filtrateprotein of10ku)和ESAT-6(early secreted antigenic target of6ku)能够形成牢固的1∶1的复合体,这两种蛋白质能够协同分泌而且能够引起T细胞反应,并可能作为理想的靶抗原在结核的预防和诊断中发挥作用. 展开更多
关键词 结核分枝杆菌(MTB) RD-1区 CFP-10 ESAT-6
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玉米特异启动子驱动下结核Hsp65与Esat-6融合基因表达载体的构建及鉴定 被引量:4
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作者 李君武 王珊珊 +2 位作者 宋东 刘艳 黄清华 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第3期28-31,共4页
利用转基因玉米研制新型结核口服疫苗。构建植物双元表达质粒pCAMBIA1300GHLE,并转化农杆菌LBA4404。以本实验室构建的pEGHLE为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65-Esat6基因,连接到含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上;将gl... 利用转基因玉米研制新型结核口服疫苗。构建植物双元表达质粒pCAMBIA1300GHLE,并转化农杆菌LBA4404。以本实验室构建的pEGHLE为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65-Esat6基因,连接到含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上;将globulin1-HLE联合片断切下连到含有抗除草剂基因bar的pCAMBIA1300载体中;电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中。成功构建了pC1300GHLE质粒,酶切鉴定得到3.3 kb和8.6 kb 2条带,测序分析表明克隆的Hsp65和Esat6序列与NCBI上公布序列一致;成功转化到农杆菌中,酶切从农杆菌中所提的质粒,条带大小与预期结果相符合。成功构建和转化了pC1300GHLE表达载体,为成功研制利用转基因植物生产抗结核口服疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分支杆菌 热休克蛋白65 ESAT-6 globulin-1
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Mcl-1信号通路阻断剂对H37Rv感染小鼠巨噬细胞凋亡的影响 被引量:4
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作者 张宇晴 王新敏 +8 位作者 王婵 王飞雨 王小芳 赵瑾 吴芳 吴江东 季榕 张万江 章乐 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期2059-2064,共6页
目的:探讨Mcl-1信号通路阻断剂在结核分枝杆菌H37Rv感染小鼠模型中对Mcl-1表达、巨噬细胞凋亡情况及结核分枝杆菌的影响。方法:小鼠腹腔注射H37Rv菌悬液,建立感染小鼠模型,针对Mcl-1的信号通路选用JAK/STAT信号通路阻断剂AG490、MAPK信... 目的:探讨Mcl-1信号通路阻断剂在结核分枝杆菌H37Rv感染小鼠模型中对Mcl-1表达、巨噬细胞凋亡情况及结核分枝杆菌的影响。方法:小鼠腹腔注射H37Rv菌悬液,建立感染小鼠模型,针对Mcl-1的信号通路选用JAK/STAT信号通路阻断剂AG490、MAPK信号通路阻断剂PD98059和PI3K信号通路阻断剂LY294002用腹腔注射方式作用于各组感染小鼠模型,分为H37Rv感染组、AG490处理组、PD98059处理组、LY294002处理组和对照组。通过细胞抗酸染色观察结核分枝杆菌H37Rv感染小鼠腹腔巨噬细胞的动物模型是否建立成功;通过免疫细胞化学检测结核分枝杆菌H37Rv感染巨噬细胞的Mcl-1表达情况,使用流式细胞技术检测各组巨噬细胞的凋亡率,采用结核分枝杆菌菌落计数来判断巨噬细胞凋亡对结核分枝杆菌的清除效果。结果:细胞抗酸染色结果可见感染的巨噬细胞内散在排列的红色短小抗酸结核分枝杆菌。免疫细胞化学结果显示H37Rv感染组、AG490处理组和LY294002处理组中的Mcl-1蛋白为强阳性表达,PD98059处理组中Mcl-1蛋白为弱阳性表达,对照组Mcl-1蛋白为阴性表达。流式细胞术检测发现H37Rv感染组巨噬细胞凋亡率较对照组高,PD98059处理组的凋亡率显著高于各组,差异显著(P<0.05)。结核分枝杆菌菌落计数结果显示PD98059处理组对H37Rv菌株抑菌作用最明显。结论:Mcl-1信号通路阻断剂通过抑制JAK/STAT、MAPK和PI3K信号通路增加结核分枝杆菌H37Rv感染巨噬细胞的凋亡率,抑制结核分枝杆菌生长;其中,MAPK信号通路干扰Mcl-1的作用最明显,感染的巨噬细胞凋亡率最高,抑菌作用最强。 展开更多
关键词 MCL-1 细胞凋亡 结核分枝杆菌 H37RV 巨噬细胞
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靶向沉默Mcl-1基因对感染不同毒力结核杆菌小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的影响 被引量:5
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作者 王飞雨 王新敏 +6 位作者 王婵 王小芳 张宇晴 吴江东 吴芳 张万江 章乐 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2195-2201,共7页
目的:通过RNA干扰技术特异性沉默Mcl-1基因,探讨下调Mcl-1基因对感染不同毒力结核杆菌小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的影响。方法:分别用制备好的新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株(简称强毒株)、结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv(... 目的:通过RNA干扰技术特异性沉默Mcl-1基因,探讨下调Mcl-1基因对感染不同毒力结核杆菌小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的影响。方法:分别用制备好的新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株(简称强毒株)、结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv(简称H37Rv)、结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra(简称H37Ra)和卡介苗(BCG)菌悬液感染BALB/c小鼠,再以筛选并构建好的Mcl-1-shRNA作用于感染的小鼠模型,同时设立相应对照组,于作用后1 d、3 d、5 d和7 d提取小鼠腹腔巨噬细胞,应用实时荧光定量PCR和Western blot检测各组小鼠腹腔巨噬细胞中Mcl-1 mRNA和蛋白的表达;应用流式细胞术检测各组巨噬细胞的凋亡水平。结果:小鼠被不同毒力的结核杆菌感染后其腹腔巨噬细胞中Mcl-1 mRNA和蛋白的表达水平均有不同程度的升高,其中以感染了强毒株和H37Rv的腹腔巨噬细胞升高最为明显(P<0.05);应用RNA干扰技术沉默Mcl-1基因后,Mcl-1mRNA和蛋白的表达水平明显低于对照组(P<0.05);流式细胞术分析显示,下调Mcl-1基因的表达可诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡。结论:应用Mcl-1-shRNA可有效沉默Mcl-1在感染了不同毒力结核杆菌小鼠腹腔巨噬细胞中的表达,并能上调巨噬细胞的凋亡水平。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 MCL-1基因 腹腔巨噬细胞 RNA干扰 细胞凋亡
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结核分枝杆菌P19对巨噬细胞TLR-2表达及分布的影响 被引量:5
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作者 韦莉 金齐力 +1 位作者 刘勇 夏佩莹 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1158-1161,共4页
目的探讨结核分枝杆菌19kD脂蛋白(Mtb P19)对单核巨噬细胞表面TLR-2表达的影响。方法以10μg/ml Mtb P19作用于拂波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,CO2孵箱孵育6 h。免疫细胞化学法(ICC)观察巨噬细胞TLR-2分布;对巨噬细胞TLR-2进行荧光抗体染... 目的探讨结核分枝杆菌19kD脂蛋白(Mtb P19)对单核巨噬细胞表面TLR-2表达的影响。方法以10μg/ml Mtb P19作用于拂波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,CO2孵箱孵育6 h。免疫细胞化学法(ICC)观察巨噬细胞TLR-2分布;对巨噬细胞TLR-2进行荧光抗体染色,流式细胞术分析P19作用前后TLR-2的表达变化;激光共聚焦显微镜观察其受体排列。结果ICC法观察发现TLR-2均匀分布于巨噬细胞表面。P19作用组与对照组相比平均荧光强度明显增强;在作用组细胞表面出现多个斑块状染色阳性的荧光标记区,而对照组TLR-2分子总体呈现随机动态的分布。结论Mtb P19不仅能诱导巨噬细胞TLR-2表达增加,还可以引起受体发生功能性聚集。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌P19 THP-1细胞 TLR-2
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巨噬细胞Coronin-1的表达与非Mtb源性自噬相关性的实验研究 被引量:3
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作者 李黎 陈全 +2 位作者 周芳妮 刘革力 张路渝 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期613-619,共7页
目的:研究巨噬细胞Coronin-1与非Mtb源性细胞自噬的相关性及其可能信号通路。方法:分别构建过表达Coronin-1的p EGFP-C1-Coronin-1质粒和干扰Coronin-1表达的p Genesil-1-Coronin-1质粒,通过G418加压筛选其RAW264.7细胞稳定转染株,即Cor... 目的:研究巨噬细胞Coronin-1与非Mtb源性细胞自噬的相关性及其可能信号通路。方法:分别构建过表达Coronin-1的p EGFP-C1-Coronin-1质粒和干扰Coronin-1表达的p Genesil-1-Coronin-1质粒,通过G418加压筛选其RAW264.7细胞稳定转染株,即Coronin-1高表达细胞株(RAW264.7-Cor.Plus)和Coronin-1低表达细胞株(RAW264.7-Cor.Minus)。将RAW264.7-Cor.Plus组、RAW264.7组和RAW264.7-Cor.Minus组细胞分别采取完全培养基(空白处理对照)、饥饿、雷帕霉素、环孢素A等因素处理后,通过RT-PCR法检测Beclin-1的基因转录水平,Western blot法检测Coronin-1、LC3BⅡ/LC3BⅠ及Beclin-1的蛋白表达水平。结果:Coronin-1过表达质粒和siRNA质粒均构建成功,其细胞稳定筛选株具有过表达或抑制表达Coronin-1特性。1空白处理三组细胞,Western blot法检测LC3BⅡ/LC3BⅠ的比值:RAW264.7-Cor.Minus组>RAW264.7组>RAW264.7-Cor.Plus组;Western blot法检测Beclin-1:RAW264.7-Cor.Minus组>RAW264.7组>RAW264.7-Cor.Plus组;RTPCR法检测Beclin-1转录水平,趋势同Western blot;2饥饿处理三组细胞,LC3BⅡ/LC3BⅠ的比值:RAW264.7-Cor.Minus组<RAW264.7组<RAW264.7-Cor.Plus组;3雷帕霉素处理RAW264.7细胞,其Coronin-1蛋白被显著抑制;雷帕霉素和环孢素A分别处理RAW264.7-Cor.Plus细胞,其LC3BⅡ/LC3BⅠ比值明显较空白处理组高。结论:巨噬细胞Coronin-1与非Mtb源性细胞自噬具有相关性。在营养充足状态下,Coronin-1可抑制细胞自噬;在饥饿状态下,Coronin-1可促进细胞自噬。Coronin-1对自噬的调控可能与m TOR和钙离子信号通路有关。 展开更多
关键词 巨噬细胞 Coronin-1 自噬 雷帕霉素 环孢素A 结核分枝杆菌
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MAGE-1与结核杆菌HSP70融合基因的构建及原核表达 被引量:4
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作者 陈广生 隋延仿 +2 位作者 叶菁 张秀敏 宋宏萍 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期342-344,共3页
目的 构建结核杆菌HSP70与肿瘤抗原MAGE-1的融合基因,在大肠杆菌中进行表达,并通过GST纯化系统进行分离纯化。方法 利用PCR方法扩增TBHSP70基因,经测序后连入原核表达载体pGEX-4T-1,再通过PCR方法扩增MAGE-1基因片段(289~927 bp),测序... 目的 构建结核杆菌HSP70与肿瘤抗原MAGE-1的融合基因,在大肠杆菌中进行表达,并通过GST纯化系统进行分离纯化。方法 利用PCR方法扩增TBHSP70基因,经测序后连入原核表达载体pGEX-4T-1,再通过PCR方法扩增MAGE-1基因片段(289~927 bp),测序后插入TBHSP70基因的5’端,构建NAGE-1与TBHSP70的N端融合基因原核表达质粒pGEX-MACE-1-TBHSP70,含有该质粒的大肠杆菌DH5α进行诱导表达和分离纯化。结果 成功地扩增了TBHSP70基因与MAGE-1基因片段,测序结果表明与GenBank公布的序列一致;成功地构建了pGEX-MAGE-1-TBHSP70原核表达质粒,含有该质粒的大肠杆菌DH5α经IPTC诱导后表达一M_r约为125000的蛋白,经GST融合蛋白表达系统纯化,得到了MAGE-1与TBHSP70的融合蛋白。结论 成功地获得了MAGE-1与TBHSP70的融合蛋白,为研究MACE-1-TBHSP70融合蛋白在肿瘤免疫治疗中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 结核杆菌 热休克蛋白70 黑色素相关抗原-1 融合基因 原核表达
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IL-15对人γδT细胞杀伤结核杆菌感染THP-1细胞的影响 被引量:2
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作者 金齐力 韦莉 +2 位作者 姜丽娜 姚春艳 李柏青 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期926-930,共5页
目的建立结核杆菌(Mtb)感染单核细胞THP-1细胞系模型;用流式细胞术检测人γδT细胞对Mtb感染THP-1细胞的细胞毒活性;并观察IL-15对人γδT细胞杀伤Mtb感染THP-1细胞的细胞毒活性的影响。方法 Mtb以10∶1的比例感染佛波醇酯(PMA)分化的TH... 目的建立结核杆菌(Mtb)感染单核细胞THP-1细胞系模型;用流式细胞术检测人γδT细胞对Mtb感染THP-1细胞的细胞毒活性;并观察IL-15对人γδT细胞杀伤Mtb感染THP-1细胞的细胞毒活性的影响。方法 Mtb以10∶1的比例感染佛波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,建立Mtb感染细胞模型。人外周血单个核细胞用Mtb耐热性低分子多肽类抗原刺激优势扩增γδT细胞,作为效应细胞用于细胞毒活性实验。用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记Mtb感染THP-1细胞,作为靶细胞。效应细胞和靶细胞以不同比例孵育4 h,用碘化丙啶(PI)染色后在流式细胞仪上检测,CSFE和PI双阳性细胞为被杀伤靶细胞。IL-15作用于γδT细胞24 h后,再检测γδT细胞对Mtb感染THP-1细胞的细胞毒活性。结果人γδT细胞与Mtb感染THP-1细胞以1∶1至50∶1的比例作用4 h后,人γδT细胞对结核杆菌感染的THP-1细胞的细胞毒活性从22.5%增加至80.7%;而γδT细胞与未感染Mtb的THP-1细胞的细胞毒活性为16.1%至47.2%。IL-15作用γδT细胞后的细胞毒活性(64.06%)与对照组(46.81%)相比明显增加(P<0.05)。结论人γδT细胞对Mtb感染THP-1细胞的杀伤活性明显高于对未感染Mtb的THP-1细胞的作用,杀伤活性随效靶比的增加而增加。IL-15可以增强人γδT细胞对Mtb感染巨噬细胞的细胞毒活性。 展开更多
关键词 IL-15 结核杆菌 ΓΔT细胞 THP-1细胞 细胞毒活性
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玉米特异表达启动子驱动下结核esat-6抗原基因植物表达载体的构建及鉴定 被引量:2
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作者 李君武 宋东 +3 位作者 王珊珊 胡建广 刘艳 黄清华 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期107-110,140,共5页
以本实验室构建的pEGHLE为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Esat-6基因,连接到含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上,将globulin-1-Esat6联合片断切下连到含有抗除草剂基因bar的pCAMBIA1300载体中,构建植物双元表达质粒pCAMBIA13... 以本实验室构建的pEGHLE为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Esat-6基因,连接到含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上,将globulin-1-Esat6联合片断切下连到含有抗除草剂基因bar的pCAMBIA1300载体中,构建植物双元表达质粒pCAMBIA1300GEsat-6,电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中。通过对pC1300GEsat-6质粒酶切鉴定和测序分析表明克隆的Esat-6与预期相符,酶切从农杆菌中所提的质粒,条带大小与预期结果相符合。 展开更多
关键词 结核分支杆菌 ESAT-6 Globulin-1
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青蒿琥酯通过诱导HO-1产生对结核分枝杆菌诱导的THP-1细胞TNF-α分泌的影响 被引量:2
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作者 马小华 向延根 +4 位作者 刘栋宾 潘建华 喻容 石国民 石燕 《临床和实验医学杂志》 2018年第24期2610-2613,共4页
目的探讨青蒿琥酯(ASN)诱导HO-1产生对结核分枝杆菌(Mtb)诱导的THP-1细胞分泌细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响并探讨其可能的作用机制。方法体外培养THP-1细胞,将细胞分为对照组、ASN组、Mtb组、ASN预处理组及Zn PP预处理组。ASN... 目的探讨青蒿琥酯(ASN)诱导HO-1产生对结核分枝杆菌(Mtb)诱导的THP-1细胞分泌细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响并探讨其可能的作用机制。方法体外培养THP-1细胞,将细胞分为对照组、ASN组、Mtb组、ASN预处理组及Zn PP预处理组。ASN预处理组为浓度0~20μg/ml ASN预处理THP-1细胞4 h,随后加入Mtb(感染复数MOI=10)刺激24 h。锌原卟啉(Zn PP)预处理组为10μmol/L Zn PP抑制剂与THP-1预处理4 h,随后加入Mtb(MOI=10)刺激24 h。MTT法检测ASN对细胞的活性影响。RT-q PCR检测细胞因子TNF-α、核因子E2相关因子2(Nrf2)及血红素氧合酶1(HO-1) mRNA表达; ELISA检测TNF-α蛋白分泌。结果 MTT法检测ASN浓度在0~20μg/ml范围内对细胞无毒性;与对照组相比,Mtb显著增加TNF-αmRNA及蛋白表达,而5~20μg/ml ASN组呈浓度依赖性抑制TNF-αmRNA及蛋白表达(P <0. 05)。此外,ASN能上调Nrf2及HO-1mRNA表达,HO-1竞争性抑制剂Zn PP能增加TNF-α蛋白分泌。结论 ASN通过诱导HO-1产生抑制Mtb诱导的炎症反应。 展开更多
关键词 青蒿琥酯 结核分枝杆菌 细胞因子 血红素氧合酶1
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黄芪甲苷的提取及抗结核作用研究 被引量:1
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作者 杨虹 贾月梅 《湖北农业科学》 北大核心 2013年第11期2632-2634,共3页
从黄芪(Radix Astragalus)中提取黄芪甲苷,将其作用于THP-1细胞和THP-1吞噬结核杆菌菌株H37Rv模型,考察黄芪甲苷促进THP-1吞噬结核杆菌的效果。结果表明,黄芪甲苷能强化THP-1细胞活力和其吞噬H37Rv的能力,且试验范围内黄芪甲苷浓度越高... 从黄芪(Radix Astragalus)中提取黄芪甲苷,将其作用于THP-1细胞和THP-1吞噬结核杆菌菌株H37Rv模型,考察黄芪甲苷促进THP-1吞噬结核杆菌的效果。结果表明,黄芪甲苷能强化THP-1细胞活力和其吞噬H37Rv的能力,且试验范围内黄芪甲苷浓度越高作用效果越强。 展开更多
关键词 黄芪(Radix Astragalus)甲苷 提取 THP-1 结核杆菌(mycobacterium tuberculosis)
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靶向沉默巨噬细胞中 Mcl-1基因 shRNA表达质粒的构建与鉴定 被引量:2
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作者 王婵 王新敏 +6 位作者 王飞雨 张雨晴 曹旭东 吴江东 吴芳 张万江 章乐 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期558-564,共7页
目的研究髓样细胞白血病-1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)基因在小鼠巨噬细胞Raw264.7和人巨噬细胞THP-1中的表达情况,筛选出表达含量高的细胞株作为实验用细胞,根据筛选的结果构建靶向小鼠Mcl-1基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达质粒... 目的研究髓样细胞白血病-1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)基因在小鼠巨噬细胞Raw264.7和人巨噬细胞THP-1中的表达情况,筛选出表达含量高的细胞株作为实验用细胞,根据筛选的结果构建靶向小鼠Mcl-1基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达质粒进行转染,最后筛选出沉默Mcl-1基因效果最明显的shRNA表达质粒。方法利用半定量RT-PCR和蛋白质免疫印迹(Western blotting)分别检测两种巨噬细胞中Mcl-1mRNA和蛋白表达情况。采用小分子干扰RNA(siRNA)软件设计3个针对Mcl-1基因不同位点的shRNA片段,由公司构建携带此shRNA片段的真核表达质粒(Mcl-1shRNA1-3),然后通过脂质体将真核表达质粒载体转染到小鼠巨噬细胞株Raw264.7中,24、48h后通过倒置荧光显微镜观察转染效果,并分别采用实时定量PCR和Western blot检测Mcl-1mRNA和蛋白表达情况。结果小鼠巨噬细胞Raw264.7中Mcl-1的mRNA及蛋白质的表达显著高于人巨噬细胞,差异有统计学意义(P<0.05);构建的shRNA表达载体在24、48h均能降低Raw264.7细胞内mcl-1mRNA和蛋白水平,尤其在48h沉默效果最为明显;转染48h后与正常组、脂质体组和阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);与Mcl-1shRNA1和Mcl-1shRNA2相比,Mcl-1shRNA3对Mcl-1mRNA和蛋白的沉默作用最强。结论成功筛选出了实验所用细胞Raw264.7及对小鼠巨噬细胞Raw264.7内Mcl-1具有明显沉默效果的靶向Mcl-1shRNA3真核表达质粒。 展开更多
关键词 髓细胞白血病-1基因 RAW264.7细胞 THP-1细胞 结核分枝杆菌 短发夹RNA
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