16S～23SrDNA间隔区序列在分枝杆菌分类鉴定中的应用研究

采用聚合酶链反应 (PCR)技术对分枝杆菌 1 6S～ 2 3SrDNA间隔区序列进行扩增 ,其产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) ,并通过计算机聚类分析 ,在基因水平上评价其对分枝杆菌分类与鉴定的意义。退火温度 45℃时 ,PCR扩增的敏感性为 50 0fg/μL ,而 50℃时的敏感性为5pg/μL。已通过对 2 2种分枝杆菌和 9种非分枝杆菌的特异性实验 ,结果表明 :扩增条带多集中在 30 0～ 60 0bp之间 ,多数受试快速生长分枝杆菌和非分枝杆菌扩增条带多且分子量较大 ,缓慢生长分枝杆菌扩增条带相对较少 ,分子量较小。PAGE和计算机聚类分析结果显示 ,分枝杆菌种间条带特异性的相似性系数均小于 70 % ,且绝大多数菌种间小于 50 %。可将被试菌株鉴定到种的水平。PAGE和聚类分析是分枝杆菌分类鉴定的一种快速、有效的方法。