马西利亚分枝杆菌临床分离株的多位点序列鉴定和药物敏感性试验分析

目的对单基因比对不能区分的马西利亚分枝杆菌（M．massiliense）临床分离株进行菌种鉴定，补充其药物敏感谱，为临床诊治提供依据。方法2013年中国疾病预防控制中心传染病预防控制所结核病室共收集了47例疑似非结核分枝杆菌（NTM）感染的临床样本，用对硝基苯甲酸、噻吩-2-羧酸肼培养基和多位点PCR方法区分鉴别得到的分枝杆菌，采用基因序列比对进行NTM菌种鉴定，其中未能准确鉴定菌种的6株临床分离株进一步通过多位点序列分析（ML-SA）方法进行定种鉴定。采用微孔板阿尔玛蓝测定法（MABA）对马西利亚分枝杆菌菌株开展36种药物的药物敏感性试验（简称“药敏试验“）。结果47例临床样本中鉴定出34株NTM，其中6株临床分离株综合5个管家基因（16SrRNA、hsp65、rpoB、sodA和recA）的单基因比对结果仍不能鉴定菌种，因此本研究采用MLSA方法构建邻位相加法进化树确认6株均为马西利亚分枝杆菌。药敏试验结果显示M．massiliense对阿米卡星为敏感（16μg／ml）或中度敏感（32μg／ml），对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、环丙沙星、乙硫异烟胺、卷曲霉素、对氨基水杨酸、氧氟沙星、卡那霉素、环丝氨酸、美罗培南、米诺环素12种药物耐药。结论MLSA方法能有效鉴定马西利亚分枝杆菌；马西利亚分枝杆菌耐药程度较高。

鲍氏志贺菌临床分离株的毒力基因检测及分子分型

目的：了解鲍氏志贺菌临床分离株毒力基因分布、耐药性、分子分型及菌株间流行病学相关性。方法从我院2015年6月—10月间门诊就诊腹泻病患者的粪便中分离收集9株鲍氏志贺菌。采用K-B纸片扩散法行抗生素药敏试验，聚合酶链反应技术检测毒力基因，脉冲场凝胶电泳技术及多位点序列分型确定分子分型，分析菌株间流行病学相关性。结果9株鲍氏志贺菌共分为3个血清亚型：Ⅰ型1株，Ⅱ型3株，Ⅳ型5株。9株菌均为多重耐药菌：对氨苄西林耐药率为9/9，对头孢他啶、链霉素、庆大霉素、复方新诺明、头孢噻肟、头孢曲松、四环素、诺氟沙星和左氧氟沙星的耐药率分别为1/9、4/9、4/9、4/9、5/9、5/9、6/9、6/9、6/9，未发现阿米卡星、头孢哌酮-舒巴坦和亚胺培南耐药株；ipaH的检出率为100%，sen、set1A、set1B、ial、virA、icsA、sigA的检出率均为0，pic、sepA、sat的检出率分别为4/9、5/9、7/9；9株鲍氏志贺菌通过脉冲场凝胶电泳共分为8种谱型，相似性在63.21%-100%。多位点序列分析结果显示6株为ST648，2株为ST131、1株为ST10。结论本院分离的9株鲍氏志贺菌共分3个血清亚型，多重耐药情况严重，菌株间亲缘关系相对较远，属非暴发病例。

我国2009至2016年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌流行状况分析

目的调查我国2009至2016年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的药物敏感性及分子流行状况。方法挑选2009至2016年中国细菌耐药监测研究项目收集的肺炎克雷伯菌中厄他培南耐药菌株为碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP),采用美国临床实验室标准协会(CLSI)推荐的平皿二倍稀释法检测14种抗菌药物对其最低抑菌浓度(MIC)。改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)和EDTA改良碳青霉烯灭活试验(eCIM)法检测CRKP中碳青霉烯酶;PCR扩增检测碳青霉烯酶基因。多位点序列分析(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)检测不同菌株的同源性。结果在2502株肺炎克雷伯细菌中筛选出193株CRKP。193株CRKP除对多黏菌素E(4.0%)、替加环素(7.3%)、磷霉素(25.4%)、阿米卡星(38.3%)和米诺环素(38.9%)的耐药率低于40%,对其余9种抗菌药物耐药率均高于65%。其中143株(74.1%)检测出碳青霉烯基因,最多的分别是blaKPC-288株(45.6%)和blaNDM-140株(20.7%)。126株产KPC-2和NDM-1型碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌株包含33个ST型,以ST11(59.5%)为主。所有ST11菌株均产KPC-2型碳青霉烯酶。受检菌株经PFGE指纹图谱分析共得到111种克隆,其中12种含有2株或以上同克隆菌株。结论2009至2016年肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类的耐药率不断上升,临床医护人员应采取合理措施加强对CRKP的耐药性监测,控制其在全国范围内的传播。

内蒙古地区皮肤化脓性感染部位分离的金黄色葡萄球菌耐药及毒力特征研究

目的分析皮肤化脓性感染部位分离的金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)耐药、毒力及分子流行病学特征,为临床抗感染用药提供实验依据。方法收集内蒙古医科大学附属医院2020年5-12月皮肤科住院患者皮肤化脓性感染部位及鼻腔分泌物样本进行细菌分离培养。采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定疑似金葡菌菌落,用微量肉汤稀释法进行药物敏感性试验,PCR扩增金葡菌毒力基因,实时荧光定量PCR检测tsst-1、pvl、hla、clfA 4种毒力基因在不同来源金葡菌菌株中的相对表达量。对金葡菌菌株进行多位点序列分型(MLST)。耐药率及毒力基因检出率比较采用χ2检验或Fisher确切概率法,计量资料组间比较采用t检验或曼-惠特尼U非参数检验。结果在210例住院患者中,共分离金葡菌85株,包括皮肤化脓性感染部位54株(病例组),鼻腔部位31株(对照组)。药敏试验结果显示,85株金葡菌中14株为耐甲氧西林金葡菌(MRSA)。85株菌对青霉素耐药率[90.59%(77/85)]最高;对克林霉素和红霉素耐药率分别为60.00%(51/85)、61.18%(52/85),未发现对利福平、万古霉素和利奈唑胺耐药菌株。PCR显示,病例组菌株pvl基因检出率(33.33%,18/54)高于对照组(12.90%,4/31,χ2=4.28,P=0.038)。实时荧光定量PCR显示,对照组菌株clfA相对表达量[3.87(2.30,5.94)]高于病例组[1.63(0.95,2.62),P=0.007]。85株金葡菌分型共得到17个ST型别,其中主要优势型别为ST398-甲氧西林敏感金葡菌(20/71)和ST22-MRSA(9/14)。ST22-MRSA菌株毒力基因pvl检出率(14/14)明显高于非ST22型MRSA(0,P<0.001)。结论皮肤化脓性感染部位分离的金葡菌对青霉素、克林霉素和红霉素耐药率较高,这些抗生素不应作为临床经验治疗的首选药;皮肤金葡菌感染性疾病发病可能与毒力基因pvl有关;金葡菌鼻腔定植可能与clfA基因有关。