PCR荧光探针技术对结核分枝杆菌复合群及利福平耐药性检测性能的评价

目的:评价PCR荧光探针技术检测痰液样本中结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex,MTBC)和利福平耐药性效果,为进一步开展“结核分枝杆菌复合群及利福平耐药核酸检测试剂盒”多中心临床试验提供可行性研究数据。方法:采用前瞻性研究方法,参照入组标准收集2021年12月至2022年8月上海市3家结核病定点医院肺科门诊就诊的205例初诊疑似肺结核患者的3份痰液样本(即时痰、夜间痰、晨痰),分别进行痰涂片、BACTEC MGIT 960(MGIT 960)、GeneXpert MTB/RIF(Xpert)和PCR荧光探针法检测,评价PCR荧光探针法对痰液样本中MTBC及利福平耐药性的检测效能。另对随机选取同期上海市疾病预防控制中心结核病实验室菌株库中保存的96株MTBC临床菌株(包括利福平表型耐药菌株47株和利福平表型敏感菌株49株)分别进行PCR荧光探针法和Xpert检测利福平耐药性,分析两种检测方法对利福平耐药相关基因突变的检出情况。结果:205例疑似肺结核患者中,PCR荧光探针法对MTBC的检出率为22.44%(46/205),与MGIT 960[21.95%(45/205)]、Xpert[20.98%(43/205)]和痰涂片[16.10%(33/205)]的差异均无统计学意义(χ^(2)=0.014,P=0.904;χ^(2)=0.129,P=0.719;χ^(2)=2.650,P=0.104)。以临床诊断为参照标准,PCR荧光探针法、Xpert、MGIT 960和痰涂片检测MTBC的敏感度(95%CI)分别为48.10%(36.93%~59.56%)、48.10%(36.93%~59.56%)、50.63%(39.23%~61.97%)和40.51%(29.79%~52.15%),特异度(95%CI)分别为93.65%(87.47%~97.12%)、96.03%(90.52%~98.53%)、96.03%(90.52%~98.53%)和99.21%(95.01%~99.96%),一致率分别为76.10%(156/205)、77.56%(159/205)、78.54%(161/205)和76.59%(157/205),Kappa值分别为0.453、0.482、0.507和0.446。PCR荧光探针法检测痰液样本中MTBC的涂阴和极低级别阳性样本的检出率[10.73%(19/177)]与Xpert检测结果[8.47%(15/177)]的差异无统计学意义(χ^(2)=0.793,P=0.373)。PCR荧光探针法在检出MTBC的46份样本中同时检出6份样本发生利福平耐药基因突变,突变率为13.04%(6/46);而Xpert在检出MTBC的43份样本中仅同时检出1份样本发生利福平耐药基因突变,突变率为2.33%(1/43)。在96株临床菌株中,两种分子检测方法均检测到56株菌株发生利福平耐药基因突变,除2株探针突变类型不一致外,其他探针突变类型均一致,且多发生在probe E(529~533)和FAM通道(531/533突变)。结论:以临床诊断为参照标准,PCR荧光探针法检测MTBC的效能与MGIT 960、Xpert和痰涂片基本相当,且与Xpert检测MTBC临床菌株的利福平耐药性效果一致,认为PCR荧光探针法不仅是一种等同于Xpert检测功能的新技术,还具有操作简单、价格低于Xpert、真正实现一体化和全封闭等优势。建议在临床推广过程中进一步优化PCR荧光探针法以提高MTBC检出率,并开展多中心临床试验验证研究。

黄芩苷对结核分枝杆菌抑菌作用的初步研究

目的:通过体外抑菌试验探讨黄芩苷对结核分枝杆菌的体外抑菌活性。方法:采用改良罗氏培养基绝对浓度法检测黄芩苷对37株结核分枝杆菌的抑菌作用。结果:黄芩苷对37株结核分枝杆菌临床分离株的最低抑菌浓度(MIC)最低为1.5g/L,最高>48g/L,MIC90为12g/L,MIC75和MIC50均为6g/L。全敏感菌株在MIC为6g/L时数量比例最大,随着MIC值向两侧递减;异烟肼(INH)低耐菌株的数量与MIC值无明显关联,乙胺丁醇(EMB)低耐菌株数量随着MIC由低到高的变化而显著增多;利福平(RFP)低耐菌株数量随着MIC由低到高的变化而逐步减少。结论:黄芩苷在体外对结核分枝杆菌具有一定的抑菌作用。

MTBDR plus方法快速检测北京地区临床结核分枝杆菌分离株利福平和异烟肼耐药性效果评价

目的评估MTBDR plus试剂盒在北京地区快速检测利福平和异烟肼的耐药性的效果。方法筛选169例临床结核分枝杆菌分离株,以国际标准的比例法作为对照,探讨该试剂盒在临床上应用的敏感性和特异性以及突变分布频率。结果在北京地区使用MTBDR plus检测利福平和异烟肼的敏感性和特异性分别为96.9%、85.3%和93.2%、98.1%。rpoB基因频率最高的突变位点是S531L(55.2%),其次是D516V(8.3%)、H526Y(7.3%)和H526D(3.1%)。katG基因频率最高的突变位点是S315T1(62.9%),而inhA是C15T位点(21.6%)。结论 MTBDR plus是一个敏感、特异和快速的诊断利福平、异烟肼耐药性和MDR的有效方法。

结核分枝杆菌对异烟肼和利福平的耐药水平与其耐药基因突变的相关性研究

目的探讨Mtb耐药相关基因katG、inhA、oxyR-ahpC突变与对INH的耐药水平及rpoB突变与对RFP的耐药水平的关系。方法采用微孔板Alamar blue显色法分别检测59株耐INH的Mtb临床分离株对INH和30株耐RFP菌株对RFP的最低抑菌浓度(the minimum inhibitory concentration,MIC),同时用直接测序法检测对INH耐药菌株katG、inhA、oxyR-ahpC和对RFP耐药菌株rpoB的突变情况。结果 INH MIC为0.2500～1.0000μg/ml(低水平耐药菌株)和MIC≥2.0000μg/ml(高水平耐药菌株)的INH耐药株,inhA启动子突变率前者高于后者[53.8%(7/13),4.3%(2/46)],katG315突变率前者低于后者[15.4%(2/13),76.1%(35/46)],χ2值分别为15.57和13.48,P值均为0.000。RFP MIC为0.5000～16.0000μg/ml和MIC≥32.0000μg/ml的RFP耐药株,rpoB531和526位总突变率前者低于后者[62.5%(5/8),95.5%(21/22)],P确切概率=0.048。结论 INH耐药菌株inhA启动子突变与INH低水平耐药有关,katG315突变与INH高水平耐药有关;rpoB531和526位突变与RFP高水平耐药有关。

应用基因芯片直接检测结核病患者各类标本中利福平和异烟肼耐药的价值

目的研究结核分枝杆菌(MTB)耐药基因芯片直接检测结核病患者临床标本中利福平和异烟肼耐药相关基因的临床价值。方法回顾性分析125例通过硝基苯甲酸(PNB)和噻吩-2-羧酸肼(TCH)鉴别培养为MTB的临床标本,其中痰标本90例、支气管灌洗液12例、脓液12例、胸腔积液6例、组织标本3例、腹腔积液和尿液标本各1例,应用绝对浓度法同时进行利福平(RFP)和异烟肼(INH)药物敏感性试验(简称“绝对浓度法药敏试验”),并用基因芯片直接检测临床标本中MTBrpoB、katG和inhA基因型。以绝对浓度法药敏试验为标准,评价基因芯片检测RFP、INH耐药和耐多药(MDR)的敏感度和特异度,并且比较两种检测结果的一致性。结果在125例结核病患者临床标本中,绝对浓度法药敏试验显示对RFP、INH的耐药率和MDR发生率分别为20.0%(25/125)[其中高耐占88.0%(22/25)、低耐占12.0%(3/25)]、17.6%(22/125)[其中高耐占18.2%(4/22)、低耐占81.8%(18/22)]、16.8%(21/125)。初治和复治结核病患者临床标本中MDR-MTB的检出率分别为7.6%(7/92)和39.4%(13/33)。以绝对浓度法药敏试验为标准,应用基因芯片直接检测临床标本中MTBrpoB、katG和inhA基因型,预示对RFP、INH耐药和MDR的敏感度分别为72.0%(18/25)、63.6%(14/22)和61.9%(13/21),特异度分别为91.0%(91/100)、86.4%(89/103)和89.4%(93/104),两种方法的一致率分别为87.2%(109/125)、82.4%(103/125)和84.8%(106/125)。结论应用耐药基因芯片直接检测结核病患者临床标本中MTB对RFP和INH耐药的相关基因突变具有中等的敏感度和较高的特异度,可快速检出对RFP、INH耐药和MDR-TB患者,为临床早期开展有效化疗提供实验依据。

结核分枝杆菌中利福平和异烟肼耐药相关基因突变与耐药水平的相关性研究

目的探究结核分枝杆菌中利福平和异烟肼耐药基因突变谱的分布,为研发更为精准的耐药分子诊断技术和临床决策提供依据。方法收集国家耐药监测点新疆维吾尔自治区柯坪县、岳普湖县和疏勒县193株和湖南省怀化市、永顺县、祁东县、桃江县和耒阳市592株结核分枝杆菌。采用微孔板法测定菌株的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。根据药物敏感性试验(简称"药敏试验")结果选取利福平和异烟肼耐药菌株,经CTAB/NaCl法提取核酸后进行全基因组测序(whole genome sequencing,WGS),将所得基因组原始序列过滤后上传至TBprofiler分析工具以确定耐药基因型。结果785株结核分枝杆菌中,124株(15.80%)为利福平和(或)异烟肼耐药,包括利福平耐药74株,异烟肼耐药111株,耐多药61株(7.77%)。97.22%(70/72)利福平耐药菌株检测出rpoB基因位点突变,其中98.57%(69/70)的突变位于利福平耐药决定区(RRDR),1株检测出RRDR区以外的与利福平耐药相关的罕见突变I491F。利福平耐药突变主要位于rpoB450、rpoB445及rpoB435密码子,占81.43%(57/70),其中rpoB S450L突变出现的频率最高(45.71%,32/70),rpoB450位点突变对应高浓度利福平耐药(MIC≥16μg/ml),rpoB 452位点突变主要对应低浓度利福平耐药(MIC=2μg/ml)。93.58%(102/109)的异烟肼耐药菌株存在耐药相关基因突变,85.29%(87/102)的异烟肼突变位于katG315及fabG1启动子区,katG S315T为最常见的耐药突变(57.84%,59/102),主要对应高浓度异烟肼耐药(MIC≥2μg/ml),其次为fabG1(C15T)(16.67%,17/102),主要对应低浓度异烟肼耐药(MIC=0.25~1.00μg/ml)。结论不同耐药基因突变导致的结核分枝杆菌耐药水平不同。对于利福平,rpoB452位点突变对应低浓度耐药,rpoB445和450位点突变对应高浓度耐药;对于异烟肼,发病fabG1-15突变对应低浓度耐药,katG 315突变对应高浓度耐药。

利福平和异烟肼结核分枝杆菌药敏表型和基因型的关系

目的对利福平(RFP)和异烟肼(INH)进行药敏检测,分析相应的结核分枝杆菌药敏表型与基因型的关系。方法对2009年至2012年深圳市第三人民医院结核病门诊和住院的137例结核病患者晨痰标本进行结核分枝杆菌培养,利用膜基因芯片法检测结核分枝杆菌耐药基因的突变情况(基因型检测),同时以绝对浓度法进行异烟肼和利福平药敏试验(表型检测),计算两种方法检测结果间的符合率,验证膜基因芯片方法的准确性,用Kappa检验分析两种方法的一致性。结果137株结核分枝杆菌标本,表型检测利福平和异烟肼耐药率分别为27.01%(37/137)和22.63%(31/137);基因型检测利福平和异烟肼耐药率分别为26.28%(36/137)和23.36%(32/137);以绝对浓度法药敏结果为金标准,膜基因芯片检测利福平耐药的敏感度为83.78%(31/37),特异度为94.06%(95/101),符合率为91.97%(126/137),Kappa值为0.79,P<0.05;异烟肼耐药的敏感度为80.65%(25/31),特异度为94.29%(99/105),符合率为90.51%(124/137),Kappa值为0.73,P<0.05;两种药物药敏结果总符合率为91.24%(250/274)。结论结核分枝杆菌耐药性基因型检测和表型检测结果高度一致,且基因型的检测方法能快速准确地检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性,有望在临床治疗中广泛应用。

197例临床结核杆菌分离株的快速耐药性检测报告

目的评估线性探针MTBDR-Plus检测临床分离株对利福平(RFP)和异烟肼(INH)药物敏感性的效能。方法应用病例对照研究方法选取197例临床结核菌分离株,进行传统比例法药物敏感性试验和MTBDR-Plus检测,分析MTBDR-Plus方法的敏感性和特异性。结果MTBDR-Plus方法检测RFP和INH耐药的敏感性分别为88.6%和79.3%,特异性分别为98.8%和98.8%。结论MTBDR-Plus方法灵敏度和特异性高,具有较好的应用前景。

结核分枝杆菌耐利福平基因变异株的体外最小抑菌浓度研究

目的研究结核分枝杆菌(MTB)耐利福平临床分离株基因突变对其体外最小抑菌浓度(MIC)测定结果的影响。方法用基因芯片对临床分离的对利福平耐药的175株MTB及对利福平敏感的48株MTB进行耐药基因检测;并对所有标本进行利福平的MIC测定,比较不同变异株的MIC测定结果。结果对利福平耐药的MTB临床分离株基因突变以531、526、516、533位点单突变为主;531位点单突变的利福平耐药变异株MIC高于526位点单突变的耐药变异株,差异有统计学意义(t′=2.2237,t′α=2.0449,P<0.05);526位点单突变的利福平耐药变异株MIC高于516位点单突变的耐药变异株,差异有统计学意义(t=2.2056,P=0.0329,P<0.05)。双突变者均有较高的MIC测定值。结论合理的基因芯片设计能检出95.0%以上的对利福平耐药MTB变异株;对利福平耐药的MTB变异株有不同的基因突变模式,且不同突变模式的MTB耐药程度不同,可以为临床用药提供参考。

二代线性探针技术在结核分枝杆菌耐药性检测中的价值

目的评价二代线性探针技术(GenoType MTBDRplus VER 2.0,简称“GenoType 2.0”)快速检测结核分枝杆菌(MTB)临床分离株对异烟肼与利福平耐药性的临床应用价值。方法收集2017年4月至2019年4月天津市结核病控制中心参比实验室中疑似肺结核患者的痰标本共6315份,纳入涂阳、培阳且经菌群鉴定为MTB的349株菌株为研究对象,分别采用表型药物敏感性试验(简称“比例法药敏试验”)和GenoType 2.0检测菌株对利福平、异烟肼的耐药性;并以比例法药敏试验结果为参考标准,评价GenoType 2.0的检测效能。结果GenoType 2.0、比例法药敏试验和GenoType 2.0+比例法药敏试验检测349株MTB菌株对利福平敏感、单耐、耐利福平+异烟肼菌株的检出率分别为86.53%(302/349)、87.97%(307/349)、86.25%(301/349),2.58%(9/349)、2.29%(8/349)、2.29%(8/349),10.89%(38/349)、9.74%(34/349)、11.46%(40/349),前者与后两者及后两者对敏感、单耐、耐利福平+异烟肼菌株检出率差异均无统计学意义(χ^2=0.322,P=0.851;χ^2=0.112,P=0.946;χ^2=0.546,P=0.761);对异烟肼敏感、单耐、耐利福平+异烟肼菌株的检出率分别为79.94%(279/349)、80.23%(280/349)、79.65%(278/349),9.17%(32/349)、9.46%(33/349)、9.46%(33/349),10.89%(38/349)、10.32%(36/349)、10.89%(38/349),前者与后两者及后两者对敏感、单耐、耐利福平+异烟肼菌株检出率差异均无统计学意义(χ^2=0.071,P=0.965;χ^2=0.017,P=0.991;χ^2=0.061,P=0.970)。以比例法药敏试验为参考标准,GenoType 2.0对利福平和异烟肼耐药性检测的敏感度、特异度、符合率、Kappa值分别为91.67%(44/48)和95.89%(70/73)、99.00%(298/301)和100.00%(276/276)、97.99%(342/349)和99.14%(346/349)、0.91和0.97。结论GenoType 2.0对于利福平和异烟肼的耐药性检测具有较高的敏感度和特异度,加上其检测周期较短,可以满足临床对结核病早期诊断和及时治疗的需求。

Mtb耐异烟肼基因变异株的体外最小抑菌浓度研究

目的研究Mtb耐INH临床分离株katG基因、inhA基因、ahpC基因突变对其体外最小抑菌浓度(MIC)的影响。方法对临床分离的耐INH的160株Mtb及对INH敏感的40株Mtb进行耐药基因芯片检测;并对所有标本进行INH MIC测定,比较不同变异株的MIC结果,其数据采用t检验进行比较,以P<0.05为差异有统计学意义。结果Mtb耐INH株katG315基因变异占68.8%(110/160),katG315基因变异株的MIC为(20.20±19.46μg/ml),高于inhA变异株(0.73±0.82μg/ml)(t′=10.9171,t′α=1.9807,P<0.05);低于katG315+inhA变异株(69.33±32.45μg/ml),(t′=7.164,t′α=2.0627,P<0.05)。结论 Mtb耐INH基因有不同的突变模式,各模式存在不同的耐药程度,此可以给临床用药进一步提供参考。

不同方法检测利福平耐药结核病及MTB rpoB基因突变的对比分析

目的探讨不同方法检测利福平耐药结核病的效能,并分析利福平耐药MTB菌株ropB基因突变情况.方法搜集2017年福建省泉州市下属10个县(市、区)结核病定点医院登记的同时经固体比例法药物敏感性试验(简称“比例法药敏试验”)、核酸反向线性探针杂交技术(属于GenoType MTBDRplus方法,简称“MTBDRplus")与利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpertMTB/RIF,简称“Xpert技术”)等3种方法检测的511例确诊肺结核患者对利福平的耐药情况,并对3种方法检测结果不相同但至少1种结果为利福平耐药的66株MTB菌株行ropB基因测序,分析55株获得rpoB基因序列菌株的ropB基因突变情况.结果511例检测患者中,比例法药敏试验、MTBDRplus和Xpert检测到利福平的耐药率分别为38.16%(195/511)、40.51%(207/511)和45.99%(235/511),MTBDRplus技术检测的利福平耐药率与比例法差异无统计学意义(X^2=0.590,P=0.442),而Xpert技术检测利福平耐药率明显高于比例法(X^2=6.424,P=0.011).以比例法药敏试验检测结果为标准,Xpert技术和MTBDRplus检测MTB菌株对利福平耐药的敏感度、特异度、一致率分别为93.85%(183/195)和95.38%(186/195)、83.54%(264/316)和93.35%(295/316)、87.48%(447/511)和94.13%(481/511).获得rpoB基因序列的55株菌株中,47株(85.46%)ropB基因在371~566位点间的17个位置发生了36种类型的突变;其中13株(23.64%)发生碱基缺失或插入,7株(12.73%)发生点突变,27株(49.09%)发生联合突变.45株(81.82%,45/55)为比例法检测利福平敏感而分子药敏试验检测耐药[包括14株(25.45%,14/55)MTBDRplus与Xpert检测对利福平均耐药的菌株、30株(54.55%,30/55)MTBDRplus检测对利福平敏感而Xpert检测为耐药、1株(1.82%,1/55)MTBDRplus检测对利福平耐药而Xpert检测为敏感的菌株],8株(14.55%,8/55)比例法药敏试验对利福平耐药而MTBDRplus与Xpert检测均敏感的菌株.MTBDRplus与Xpert检测对利福平耐药结果相同的菌株有22株,两者检测结果均耐药的14株菌株均发生ropB基因突变;而两者检测结果均敏感的8株菌株中,有6株菌株ropB基因发生突变.MTBDRplus与Xpert检测对利福平耐药结果不同的菌株有33株,其中31株为MTBDRplus检测敏感而Xpert检测为耐药.结论分子药敏试验检测MTB利福平耐药性的敏感度较比例法药敏试验高.对利福平耐药菌株的ropB基因突变率较高,无论哪一种技术检测结果为利福平耐药,均应考虑该MTB对利福平耐药,应尽快应用其他检测方法进行验证.

88株耐异烟肼分支杆菌耐药模式分析

目的为了探讨近年来耐异烟肼分支杆菌同时耐其他几种抗结核药物的耐药模式提供防治结核病参考。方法采用绝对浓度法对临床分离的181株分支杆菌进行10种药物敏感性试验。结果初始耐药率为19.3%,获得性耐药为55.8%,耐异烟肼及其以上分支杆菌占耐药菌株的37.6%。88株耐异烟肼分支杆菌中耐3种及其以上药物的分支杆菌占85.2%。结论耐异烟肼分支杆菌多数是多重耐菌株,在结核病防治工作中应高度重视,以控制或降低初始和获得性耐药的高耐率。

GeneXpert MTB/RIF对涂阴疑似肺结核及利福平耐药性检测的价值

目的评价GeneXpertMTB/RIF(简称“GeneXpert”)在涂阴疑似肺结核及利福平耐药快速检测中的临床应用价值.方法查阅2018年龙岩市各县区结核病定点医院及市疾病预防控制中心(简称“CDC")实验室检测结果登记本[包括痰涂片镜检、痰结核分枝杆菌固体培养、GeneXpert系统检测,以及比例法药物敏感性试验(简称“药敏试验”)和菌种鉴定检测结果],并与《结核病管理信息系统》中患者实验室相关信息进行比对后,排除结果不一致及肺外结核的患者,共收集659例涂阴疑似肺结核患者实验室信息,其中307例行GeneXpert检测,519例行固体痰培养及菌种鉴定,228例同时行GeneXpert检测和固体痰培养检测,最终622例经临床综合诊断为涂阴肺结核.以临床诊断和痰培养为标准分别评价GeneXpert检测MTB的敏感度、特异度、一致性.另纳入97例同时开展GeneXpert与比例法药敏试验的肺结核患者,评价GeneXpert检测利福平耐药的效能.采用SPSS24.0软件对数据进行统计学处理,不同方法结核分枝杆菌检出率的比较采用X^2检验,以P<0.05为差异有统计学意义.结果在622例最终诊断为涂阴肺结核患者中,GeneXpert对MTB的阳性检出率(29.97%,92/307)明显高于痰培养的检出率(7.13%,37/519)(X^2=76.30,P<0.05);以临床诊断为标准,GeneXpert检测MTB的特异度(100.00%,14/14)与痰培养(100.00%,23/23)一致,敏感度(31.40%,92/293)高于痰培养(7.46%,37/496),两种方法的检测结果与临床诊断结果的一致性均较差(Kappa=0.037,0.007).以痰培养为金标准,GeneXpert检出MTB的敏感度(90.32%,28/31)与阴性预测值(98.09%,154/157)均较高,但特异度(77.00%,154/200)与阳性预测值(37.84%,28/74)较低,两种方法的检测结果呈中度一致(Kappa=0.420).97例同时开展GeneXpert与比例法药敏试验检测的患者中,GeneXpert检出利福平耐药率(9.28%,7/97)与比例法药敏试验(6.18%,6/97)差异无统计学意义(X^2=0.00,P>0.05).结论GeneXpert检测对涂阴疑似肺结核患者及利福平耐药均具有较高的检出率和敏感度,可推荐作为基层结核病定点医院临床快速确诊涂阴疑似肺结核及利福平耐药肺结核的检测手段.

噬菌体生物扩增法测定痰标本结核分枝杆菌利福平耐药性

目的建立快速测定痰标本中结核分枝杆菌利福平(RFP)耐药性的噬菌体生物扩增法,探讨其在临床应用的可行性。方法噬菌体生物扩增法测定362份涂阳痰标本结核分枝杆菌对RFP的耐药性,并与罗氏绝对浓度法结果进行比较,对不符合的样本,用基因芯片的方法分析rpoB基因的突变情况。结果362份涂阳痰标本,培养阳性360份,菌种初步鉴定有17份样本为非结核分枝杆菌,噬菌体生物扩增法RFP耐药为123份,敏感的196份,两法结果一致的为88.6,如以绝对浓度法药敏结果为标准,则噬菌体生物扩增法测定利福平耐药的敏感性为93.3,特异性为87.9,阴性预测值为96.4,阳性预测值为78.9,准确性为89.7,涂阳等级(1+～3+)与实验的有效性相关。结论噬菌体生物扩增法测定痰标本利福平的耐药性只需2d,可作为快速筛选方法应用于临床。

GeneXpert MTB/RIF技术诊断肺结核及利福平耐药性的价值

目的探讨GeneXpert MTB/RIF检测在诊断肺结核及其耐药性方面的临床价值。方法搜集苏州大学附属传染病医院(苏州市第五人民医院)结核病科2017年8月至2018年11月间收治住院的981例患者为研究对象,最终临床确诊肺结核患者862例,非结核患者119例。分析患者痰及肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)标本涂片抗酸染色镜检(简称"涂片法")、GeneXpert MTB/RIF(简称"GeneXpert法")、BACTEC MGIT 960培养(简称"MGIT 960法")及固体药敏比例法(简称"药敏试验")的检测结果,评价3种检测方法的诊断效能。结果以临床诊断为参考标准,涂片、GeneXpert法、MGIT 960法检测肺结核患者痰标本的敏感度分别为32.02%(276/862)、53.02%(457/862)、53.25%(459/862);检测肺结核患者BALF标本的敏感度分别为31.32%(270/862)、72.97%(629/862)、69.37%(598/862)。在MGIT 960和GeneXpert法检测均阳性的527例肺结核患者中,固体比例法药敏试验检测对利福平耐药的28例患者中,GeneXpert法检测也为耐药者26例,其余2例提示敏感。药敏试验检测结果对利福平敏感者共有499例,而GeneXpert法检测为敏感者497例,其余2例提示为对利福平耐药;对两种方法的检测结果进行Kappa检验,Kappa=0.612,P<0.001;说明两种方法检测结果具有较好的一致性。以罗氏固体比例法药敏试验为金标准,GeneXpert法检测对利福平耐药的敏感度为92.86%(26/28),特异度为99.60%(497/499)。结论 GeneXpert法诊断肺结核的敏感度高、特异度强,同时可检测是否耐利福平,在肺结核早期诊断及耐药性检测方面具有较好的应用前景。GeneXpert法检测患者BALF的敏感度显著高于痰标本,故应早期积极行电子气管镜检查。

结核分枝杆菌异烟肼依赖株与耐受株的耐药性调查

目的调查结核分枝杆菌异烟肼的依赖株和耐受株对临床常用抗结核药物的抗药性差异,探讨其原因与意义。方法采用双向匡氏琼脂培养基分离痰结核菌并作耐药性和依赖性测定。结果依赖组菌株对8种药物的耐药率均高于耐受组菌株;依赖组中耐多药(Multidrug-Resistant,MDR)株和广泛耐药(Extensively Drug-Resistant,XDR)株的比例分别为94.4%和13.9%,均高于耐受组。结论结核分枝杆菌异烟肼依赖株94.4%为MDR株,对一线和二线抗结核药物耐药率高,容易发展为XDR株,应予高度警惕和关注。

GeneXpert MTB/RIF技术对结核病及对利福平耐药性检测的价值

目的分析基层结核病防治所采用GeneXpert MTB/RIF(简称"GeneXpert")技术对结核病及其对利福平耐药性检测的可行性。方法回顾性分析2019年1月1日至12月31日就诊于北京市昌平区结核病防治所的全部肺结核可疑症状者,共计1719例。对1719例肺结核可疑症状者开展痰涂片、罗氏固体培养、GeneXpert检查,其中经临床和实验室检测结果证实为其他疾病的患者587例,非活动性肺结核患者550例,共确诊582例活动性肺结核患者。582例活动性肺结核患者中,237例患者有实验室病原学依据(同一例患者同一份痰标本同时经过罗氏固体培养后采用结核分枝杆菌MPB64抗原进行菌种鉴定,以及采用GeneXpert检测系统进行检测),诊断为病原学阳性患者,其余345例患者为临床诊断患者。对237例患者的痰标本分别进行阳性检出率的比较,以及采用罗氏固体比例法和GeneXpert技术对利福平耐药性进行检测。采用χ^2检验对计数资料进行比较;当理论频数小于5时,采用Fisher精确概率法进行比较,以P<0.05为差异有统计学意义。结果237例病原学阳性患者中,痰涂片阳性检出率为25.3%(60/237),罗氏固体培养为79.7%(189/237),GeneXpert技术为96.2%(228/237);GeneXpert的阳性检出率明显高于罗氏固体培养和痰涂片检查,差异均有统计学意义(χ^2=249.742,P<0.001;χ^2=30.332,P<0.001)。以罗氏固体比例法利福平耐药性检测结果为参考标准,GeneXpert技术对利福平耐药的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、一致率分别为99.6%(232/233)、100.0%(4/4)、100.0%(232/232)、80.0%(4/5)、99.6%(236/237)。结论GeneXpert技术对病原学阳性患者的检出率和对利福平耐药性检出率均较高,对基层开展结核病检测及耐利福平结核病检测具有较高的价值。

荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌复合群对利福平和异烟肼耐药性的价值

目的评价荧光PCR探针熔解曲线法(简称“探针熔解曲线法”)检测结核分枝杆菌复合群对利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药性的价值。方法从2015年1月至2018年7月山东省菏泽市传染病医院收治的883例肺结核和耐多药结核病(MDR-TB)患者中,选择萋-尼染色结果为阳性的结核病患者的痰标本共215份(例)进行分离培养,对鉴定为结核分枝杆菌复合群(MTBC)的200株(例)菌株同时使用比例法药物敏感性试验(DST)和探针熔解曲线法检测对RFP和INH的耐药性。以DST检测结果为金标准,分析探针熔解曲线法检测RFP和INH的敏感度、特异度、符合率和一致性(Kappa检验)。结果 200株(例)MTBC分离株中,以DST检测结果为标准,探针熔解曲线法检测RFP耐药性的敏感度、特异度和符合率分别为96.4%(106/110;95%CI:90.7%~98.9%)、80.0%(72/90;95%CI:70.5%~87.1%)和89.0%(178/200);对INH耐药性检测的敏感度、特异度和符合率分别为85.4%(123/144;95%CI:78.6%~90.7%)、96.4%(54/56;95%CI:87.7%~99.6%)和88.5%(177/200)。探针熔解曲线法与DST检测MTBC对RFP耐药性的Kappa值为0.78,对INH耐药性的Kappa值为0.74。结论探针熔解曲线法检测MTBC对RFP和INH的耐药性均有较高的敏感度和特异度,且探针熔解曲线法与DST检测MTBC对RFP和INH耐药性的一致性较高,有助于对耐药结核病患者的及早发现和治疗。

197例临床结核分枝杆菌分离株的快速耐药性检测报告

目的评估线性探针MTBDR—Plus检测临床分离株对利福平（RFP）和异烟肼（INH）药物敏感性的效能。方法应用病例对照研究方法选取197例临床结核菌分离株，进行传统比例法药物敏感性试验和MTBDR—Plus检测，分析MTBDR—Plus方法的敏感性和特异性。结果MTBDR-Plus方法检测RFP和INH耐药的敏感性分别为88．6％和79.3％，特异性分别为98．8％和98．8％。结论MTBD-Plus方法灵敏度和特异性高，具有较好的应用前景。