用探针杂交法检测鸡毒支原体和滑液囊支原体

根据鸡毒支原体(MG)和滑液囊支原体(MS)的16SrRNA基因序列,设计并合成了探针MG和MS共同目的基因,跨幅为580bp的一对引物。用这对引物对2个标准的MG和1个标准的MS菌株DNA模板进行聚合酶链反应(PCR),结果得到了预期大小约580bp的PCR产物。回收纯化琼脂糖电泳凝胶中的MG扩增产物克隆至T载体中,DIG随机引物法合成核酸探针,斑点杂交试验对MG和MS均呈阳性,检测灵敏度分别为2ng和3ng,其它对照菌(毒)株为阴性。

鸡毒支原体S6株基因文库的构建

用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ对鸡毒支原体ＭＧＳ６进行酶切消化，并在表达载体噬菌体λｇｔ１１中构建了ＭＧＳ６的基因文库。按照对载体ＬａｃＺ基因的插入失活作用结果，所得到的噬菌体中大约有６９％是重组子。本试验结果说明所构建的基因文库含有ＭＧＳ６的全部基因组，从而为研究ＭＧ分子生物学提供了基础。

鸡毒支原体敏感药物的筛选

用泰乐菌素、强力霉素、罗红霉素、红霉素、丁胺卡那霉素、庆大霉素、环丙沙星、双氟沙星、呋喃唑酮、呋喃他酮、泰妙菌素等药物对 3株鸡毒支原体进行体外抑菌试验。结果证明 ,它们对鸡毒支原体均有抑菌作用 ,但以泰乐菌素、泰妙菌素、环丙沙星和双氟沙星抑菌效果最好 ,达到 1 0 8g/L。

鸡毒支原体F弱毒疫苗株细胞免疫特性研究

为了解鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)F弱毒疫苗株的细胞免疫特性,分别以活菌浓度为109(A组)、106(B组)ccu/mL的MG F株及生理盐水(C组)点眼接种SPF鸡,采用流式细胞技术及T淋巴细胞增殖试验对免疫前后淋巴细胞亚类Th/T、Tc/T、Th/Tc及刺激指数(SI)的动态变化规律进行研究。结果显示免疫后A、B组的Th/T、Tc/T、SI明显升高,其中Th/T于d5、d7,Tc/T、SI于d7、d14,A组显著高于B组(P<0.05)。研究结果表明,免疫MG F株可较好的提高鸡的细胞免疫,且MG F株活菌浓度与接种鸡外周血Th/T、Tc/T、SI呈正相关。

鸡毒霉形体人工感染肉用仔鸡后呼吸系统的病理形态学观察

７日龄健康肉用仔鸡气囊接种鸡毒霉形体（ＭＧ）ＨＳ２心株，３～５ｄ后出现典型的ＭＧ感染症状，其呼吸系统（主要为气管、肺及气囊）发生一系列病理组织学变化。采集感染鸡及对照鸡的气管经固定、脱水、临界点干燥、镀金后置于扫描电镜下观察，可见感染鸡气管粘膜明显水肿，纤毛部分或全部脱落等，而对照组鸡气管则无任何病变；光镜下可见感染鸡的气管粘膜水肿增厚１～２倍，粘膜下层单核白细胞聚集，其间有数量不等的淋巴细胞集团，粘液细胞减少或消失；气囊粘膜水肿增厚，有淋巴细胞增生而形成的串珠样结构；肺组织中有淋巴细胞增生形成的结节病灶，而对照鸡呼吸系统的组织切片在光镜下无任何异常变化。

鸡毒霉形体感染的PCR检测方法的建立及应用

用多聚酶链反应检测了鸡毒霉形体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｇａｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍ，ＭＧ）种内菌株的特异性ＤＮＡ片段，并用该法对人工感染鸡及野外鸡群进行了ＭＧ感染的分子流行病学调查。结果表明，通过基因扩增及电泳，仅ＭＧ出现特异性扩增条带，最低能检出１８ｐｇＭＧＤＮＡ，说明该方法具有很高的特异性和敏感性。人工感染６０只鸡，３ｄ后即可用ＰＣＲ查出ＭＧ阳性，６ｄ后１００％为阳性，对照鸡全部为阴性。与分离培养的结果完全一致。ＰＣＲ对野外鸡群的ＭＧ检出率为１０．５％～３５％，平均为２０％（１６／７９），与血清学检查结果基本一致；从ＰＣＲ阳性鸡中，有６１．５％（６／１３）能分离到ＭＧ。这说明ＰＣＲ在ＭＧ感染的分子流行病学调查中有重要的应用价值。

四株鸡毒霉形体菌株对SPF鸡胚的致病作用

将MG不同菌株的培养物，经卵黄囊接种SPF鸡胚，结果各菌株均能使鸡胚发生死亡，总死亡率在接种后3～13d内达82％，死胚经病变检查，菌检和分离物的血清学鉴定，证实系感染MG所致。测定了MGIc1菌株的不同接种量对鸡胚死亡的影响，发现它们之间没有很密切关系。在SPF源鸡体上致病力低下的二株MG菌株的鸡胚致死率为60％～90％，反映出同一菌株对鸡体和鸡胚的致病力有差异。从部分死胚的卵黄、卵黄囊、绒毛尿囊膜和尿囊液中分离到MG，并测定了这些部位MG的含量。根据实验结果，认为SPF鸡胚人工感染MG，具有比SPF源鸡体更敏感、所需试验条件简单、恒定、因果关系明确的优点，可以作为测试MG菌株某些性质的一种模型。

几种动物病原菌对替米考星耐药性的体外诱导

在测定替米考星对鸡毒支原体、多杀巴氏杆菌和猪胸膜肺炎放线杆菌的最小抑菌浓度基础上，采用药物浓度递增法体外诱导3种病原菌对替米考星的耐药性。结果鸡毒支原体经9次传代对替米考星产生了高水平耐药，多杀巴氏杆菌经7～9次传代对替米考星产生了高水平耐药，猪胸膜肺炎放线杆菌经14次传代对替米考星的耐受浓度未发生明显变化；鸡毒支原体和多杀巴氏杆菌替米考星诱导耐药株对红霉素、阿奇霉素、泰乐菌素、吉他霉素和林可霉素表现交叉耐药。研究结果提示，替米考星较易诱导鸡毒支原体和多杀巴氏杆菌产生耐药性，兽医临床应合理应用。

禽副粘病毒2型(PMV-2)致病性的研究

7日龄SPF鸡经滴鼻、点眼感染PMV-2,可引起轻微的呼吸道症状,病理组织学观察可见气管粘液分泌亢进和少量的淋巴细胞浸润。PMV-2与传染性支气管炎（IBV）或鸡毒支原体（MG）协同感染比单纯感染这三种病原的任何一种均呈现更严重的呼吸道症状,病理组织学变化呈气管纤毛部分或全部脱落,气管粘膜上皮细胞不同程度的变性、脱落。固有层和粘膜下层严重水肿,有大量淋巴细胞、巨噬细胞和异嗜细胞浸润。SPF雏鸡感染PMV-2后的不同时间检查病毒在鸡体内的分布规律,结果表明,PMV-2在法氏囊中大量分布;气管、肺、胸腺中有较多病毒;大脑、脾和肾脏只有少量病毒存在。上述实验结果揭示PMV-2感染SPF雏鸡致病性较弱,PMV-2在鸡呼吸道综合征中起一定作用。

福建白羽肉鸡鸡毒支原体的分离鉴定及最小抑菌浓度测定

为了解福建白羽肉鸡中鸡毒支原体(MG)对临床常用药物的敏感性,本研究从2个商品代白羽肉鸡养殖场采集了疑似患慢性呼吸道病(CRD)的鸡喉拭子40份,接种于适宜的支原体培养基上进行纯化。通过对菌株生物学特性分析、细菌形态学观察、PCR测序及动物回归试验进行鉴定,并利用最低抑菌浓度(MIC)测定了分离株对临床常用抗菌药的敏感性。结果显示,本试验成功获得2株MG,命名为MX和HY。将分离株接种于含有酚红的支原体液体培养基中能分解葡萄糖产酸使培养基颜色由红变黄;固体培养基于低倍镜下观察到典型的“荷包蛋”状菌落;分离株经过Dienes染色后的菌落中心呈致密深蓝色,边缘淡蓝,且30 min后不褪色,并具有较强吸附红细胞的能力,呈现典型MG培养特征;动物回归试验和分离株pvpA基因测序结果显示,2株MG分离株均具有较强致病性,证实其与R株的亲缘关系最近;药敏试验结果显示,MX和HY对泰妙菌素、氟苯尼考和泰乐霉素表现出了高度敏感性,其次是盐酸恩诺沙星、盐酸大观霉素,而对具有与泰乐霉素类似分子结构和抗菌谱的畜禽专用抗生素替米考星敏感性较差,此差异可能与临床上长期应用该药有关。研究结果表明,福建地区商品代白羽肉鸡中存在致病性MG流行,泰妙菌素可以作为临床防治MG的首选药物。