绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体双重PCR检测方法的建立及应用

为建立绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的双重PCR检测方法,本试验分别设计了绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的特异性引物,优化反应条件后对其特异性和敏感性进行评价,并对40份鼻拭子进行了检测。结果显示,该方法能同时扩增出绵羊肺炎支原体545bp和精氨酸支原体806bp的特异性片段,而对其他病原的DNA扩增均为阴性。该双重PCR方法对绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的最低检测限分别为100和10pg/μL。40份鼻拭子检测结果显示,双重PCR检测方法与分离培养法符合率高达92.5%,均能鉴定出绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体。结果表明,本研究建立的双重PCR方法可用于绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的临床快速诊断。

精氨酸霉形体和莱氏无（需）胆甾醇霉形体在鸡胚细胞内增殖的比较观察

将精氨酸霉形体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａａｒｇｉｎｉｎｉ，简称ＭＡ）和莱氏无（需）胆甾醇霉形体（Ａｃｈｏｌｅｐｌａｓｍａｌａｉｄｅａｗｉｉ，简称ＡＬ），分别接种于鸡胚细胞，电镜下观察结果如下：（１）此２种霉形体在形态、细胞内分布、增殖形式和吞噬功能以及对培养细胞的选择性等方面是相同的；（２）此２种霉形体引起培养细胞的病理学过程不同。接种ＭＡ的鸡胚细胞，早期即出现髓膜样结构和脂质体等退行性变化，晚期在细胞质内才能见到空泡出现；而接种ＡＬ的鸡胚细胞，早期即可出现细胞质内的空泡化现象，晚期细胞质内才可见到髓膜样结构和脂质体。

山羊源精氨酸支原体的分离鉴定与药感试验

本实验的目的是从患有呼吸道疾病的山羊中分离支原体。采集13个病羊鼻腔棉拭子,接种于支原体液体培养基中,37℃、5%CO2培养6d,采用16Sr RNA通用引物检测支原体属PCR方法进行检测,阳性样本转移固体培养基分离鉴定并进行药敏试验。结果显示,从13份液体培养基中检测出5株支原体,经16Sr DNA序列分析证实为精氨酸支原体,遗传进化分析表明,5株精氨酸支原体独立的聚为1支。在固体培养基上分离得到2株支原体,药敏试验结果显示对红霉素、盐酸土霉素、酒石酸泰乐菌素、氧氟沙星、硫酸头孢喹诺、恩诺沙星、林可霉素、硫酸庆大霉素、头孢噻呋、硫酸链霉素10种抗生素敏感,对氟苯尼考耐药。本实验从患呼吸道病的山羊中成功分离出精氨酸支原体,鉴于该菌是人的致病菌,其公共卫生学意义值得进一步关注。

精氨酸支原体榆林株的分离鉴定

无菌采集榆林某湖羊场发生肺炎的羔羊肺组织,经抹片革兰氏染色镜检,PCR检测后进行分离培养、菌体形态和菌落形态等鉴定,并通过PCR检测及测序等对分离物进行菌株鉴定。结果表明,分离物革兰氏染色阴性,菌体呈多形性,在PPLO固体培养基上形成具有“中心脐”的典型煎蛋样菌落;PCR种属鉴定结果显示支原体目和精氨酸支原体引物扩增产物与预期一致,且精氨酸支原体引物扩增产物测序结果与Genebank中精氨酸支原体的序列相似性为100%。研究结果明确了精氨酸支原体能够引起绵羊支原体肺炎,其将为该病的防治和研究提供病原学基础。

绵羊肺炎支原体、丝状支原体山羊亚种和精氨酸支原体多重PCR检测方法的建立及应用

根据GenBank登陆的绵羊肺炎支原体(MO)、丝状支原体山羊亚种(MmC)和精氨酸支原体(M.arg)的相关基因序列,分别设计了扩增MO hsp70基因、MmC hsp70基因和M.arg ADI基因片段的特异性引物,通过对反应条件和反应体系的优化,建立了MO、MmC和M.arg的多重PCR检测方法。特异性试验结果显示:该方法能同时扩增出MO 703bp、MmC 385bp和M.arg223bp的特异性目的片段,而对其他病原的DNA扩增为阴性。敏感性试验结果显示:该方法对这3种支原体的最低核酸检出量均为10pg。55份临床样品检测结果表明:三重PCR检测结果与分离培养诊断方法一致,均能检测出样品中的病原菌。本试验建立的多重PCR方法能为MO、MmC和M.arg的感染提供正确快速诊断方法。