种鸡场鸡毒支原体不同免疫程序抗体消长规律的研究

鸡毒支原体病(MG)是养殖场的常发病之一,随着种鸡规模化养殖的迅速发展、饲养密度增大,导致该病的感染率、发病率呈逐年上升趋势,目前该病成为影响鸡苗产品质量的重要疾病。疫苗免疫是肉种鸡场防控MG的较为普遍而且有效的方法。规模化养殖场常采用MG活苗和灭活疫苗结合的免疫程序,本研究跟踪评估某父母代种鸡群F-36株活苗+MG油苗、6/85株活苗+MG油苗、TS-11株活苗+MG油苗、TS-11株活苗四种不同免疫方式的抗体滴度,建立无MG野毒感染鸡群的正常抗体基线。

生殖支原体MG 427原核表达载体的构建和鉴定

目的构建生殖支原体MG 427基因原核表达载体并进行鉴定。方法以生殖支原体标准株G 37 DNA为模板进行PCR扩增mg 427基因,克隆入原核表达载体p GEX-6 p-1。定点诱导该基因中第289-291位核苷酸TGA密码子突变成TGG,构建p GEX-6 p-1/MG 427的原核表达载体。结果成功扩增出大约426 bp的基因片段,定点诱导突变后,经酶切及测序鉴定证明mg 427中的TGA被成功突变为TGG,与目的基因相符。结论成功构建生殖支原体渗透压诱导蛋白MG 427原核表达载体p GEX-6 p-1/MG 427。

沈阳地区鸡慢性呼吸道病的流行病学调查

采用玻片凝集试验结合现场观察 ,对沈阳地区15个鸡场不同品种和日龄的未免疫鸡进行了鸡慢性呼吸道病(CRD)流行病学调查。共检测了300份鸡血清 ,平均阳性率33 %。被调查的15个鸡场中的12个鸡场显示有CRD血清抗体阳性鸡 ,表明沈阳地区一些鸡场鸡群已被鸡败血霉形体(MG )感染 ,有的鸡场还相当严重。

用探针杂交法检测鸡毒支原体和滑液囊支原体

根据鸡毒支原体(MG)和滑液囊支原体(MS)的16SrRNA基因序列,设计并合成了探针MG和MS共同目的基因,跨幅为580bp的一对引物。用这对引物对2个标准的MG和1个标准的MS菌株DNA模板进行聚合酶链反应(PCR),结果得到了预期大小约580bp的PCR产物。回收纯化琼脂糖电泳凝胶中的MG扩增产物克隆至T载体中,DIG随机引物法合成核酸探针,斑点杂交试验对MG和MS均呈阳性,检测灵敏度分别为2ng和3ng,其它对照菌(毒)株为阴性。

生殖道支原体感染诊治专家共识

生殖道支原体感染是临床关注的热点问题,涉及多个学科。中国性学会性医学专业委员会生殖道感染学组组织多学科讨论,对临床支原体相关问题形成了共识。泌尿生殖道支原体存在无症状携带,以解脲支原体(U.urealyticum,Uu)为主,解脲支原体可分为微小脲原体和解脲支原体两种亚型,其中微小脲原体特别容易见于无症状携带。Uu和生殖支原体(M.genitalium,Mg)是导致尿道炎的重要致病微生物,Mg还是宫颈炎、盆腔炎的重要致病微生物。采用核酸分析的方法进行支原体检测更有利于支原体的诊治。如果男女双方均无泌尿生殖道感染的相关症状,仅Uu阳性,考虑为携带者,不必治疗。男性为Uu性尿道炎,建议同时治疗性伴。孕期下生殖道检出Uu的患者不需要进行干预和治疗。男性精液质量异常且有生育需求时,男女双方建议同时治疗一疗程。男女双方生殖道Uu培养阳性对IVF无明显影响。

鸡毒支原体S6株基因文库的构建

用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ对鸡毒支原体ＭＧＳ６进行酶切消化，并在表达载体噬菌体λｇｔ１１中构建了ＭＧＳ６的基因文库。按照对载体ＬａｃＺ基因的插入失活作用结果，所得到的噬菌体中大约有６９％是重组子。本试验结果说明所构建的基因文库含有ＭＧＳ６的全部基因组，从而为研究ＭＧ分子生物学提供了基础。

不孕女性的宫颈常见性传播病原体感染及性伴情况调查

目的:了解不孕女性宫颈常见性传播病原体感染情况、其性伴感染情况及双方感染一致性。方法:选取在北京大学第一医院妇产科就诊的100名有性经验妇女,分为体检组、不孕组,填写调查问卷,做妇科检查,取宫颈分泌物并留取其性伴的尿液行沙眼衣原体(CT)、淋病奈瑟菌(NG)、生殖支原体(Mg)检测,结果:两组共检测出沙眼衣原体阳性11例,淋病奈瑟菌阳性0例,生殖支原体阳性8例,女方阳性时,男方沙眼衣原体的感染一致率为25%,生殖支原体的感染一致率为33.3%。不孕症组宫颈常见性传播感染及性伴感染比例明显高于体检组。结论:不孕的女性当中,宫颈常见性传播病原体感染的发生率高于普通妇女,并与性伴有一定的一致性。

鸡毒支原体敏感药物的筛选

用泰乐菌素、强力霉素、罗红霉素、红霉素、丁胺卡那霉素、庆大霉素、环丙沙星、双氟沙星、呋喃唑酮、呋喃他酮、泰妙菌素等药物对 3株鸡毒支原体进行体外抑菌试验。结果证明 ,它们对鸡毒支原体均有抑菌作用 ,但以泰乐菌素、泰妙菌素、环丙沙星和双氟沙星抑菌效果最好 ,达到 1 0 8g/L。

鸡毒霉形体感染的PCR检测方法的建立及应用

用多聚酶链反应检测了鸡毒霉形体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｇａｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍ，ＭＧ）种内菌株的特异性ＤＮＡ片段，并用该法对人工感染鸡及野外鸡群进行了ＭＧ感染的分子流行病学调查。结果表明，通过基因扩增及电泳，仅ＭＧ出现特异性扩增条带，最低能检出１８ｐｇＭＧＤＮＡ，说明该方法具有很高的特异性和敏感性。人工感染６０只鸡，３ｄ后即可用ＰＣＲ查出ＭＧ阳性，６ｄ后１００％为阳性，对照鸡全部为阴性。与分离培养的结果完全一致。ＰＣＲ对野外鸡群的ＭＧ检出率为１０．５％～３５％，平均为２０％（１６／７９），与血清学检查结果基本一致；从ＰＣＲ阳性鸡中，有６１．５％（６／１３）能分离到ＭＧ。这说明ＰＣＲ在ＭＧ感染的分子流行病学调查中有重要的应用价值。

鸡毒支原体F弱毒疫苗株细胞免疫特性研究

为了解鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)F弱毒疫苗株的细胞免疫特性,分别以活菌浓度为109(A组)、106(B组)ccu/mL的MG F株及生理盐水(C组)点眼接种SPF鸡,采用流式细胞技术及T淋巴细胞增殖试验对免疫前后淋巴细胞亚类Th/T、Tc/T、Th/Tc及刺激指数(SI)的动态变化规律进行研究。结果显示免疫后A、B组的Th/T、Tc/T、SI明显升高,其中Th/T于d5、d7,Tc/T、SI于d7、d14,A组显著高于B组(P<0.05)。研究结果表明,免疫MG F株可较好的提高鸡的细胞免疫,且MG F株活菌浓度与接种鸡外周血Th/T、Tc/T、SI呈正相关。

鸡毒霉形体人工感染肉用仔鸡后呼吸系统的病理形态学观察

７日龄健康肉用仔鸡气囊接种鸡毒霉形体（ＭＧ）ＨＳ２心株，３～５ｄ后出现典型的ＭＧ感染症状，其呼吸系统（主要为气管、肺及气囊）发生一系列病理组织学变化。采集感染鸡及对照鸡的气管经固定、脱水、临界点干燥、镀金后置于扫描电镜下观察，可见感染鸡气管粘膜明显水肿，纤毛部分或全部脱落等，而对照组鸡气管则无任何病变；光镜下可见感染鸡的气管粘膜水肿增厚１～２倍，粘膜下层单核白细胞聚集，其间有数量不等的淋巴细胞集团，粘液细胞减少或消失；气囊粘膜水肿增厚，有淋巴细胞增生而形成的串珠样结构；肺组织中有淋巴细胞增生形成的结节病灶，而对照鸡呼吸系统的组织切片在光镜下无任何异常变化。

延胡索酸泰妙菌素对支原体和大肠杆菌混合感染的治疗试验

以人工诱发鸡毒支原体和大肠杆菌混合感染为模型 ,以酒石酸泰乐菌素为对照药物 ,评价了延胡索酸泰妙菌素的疗效。按每 1L水中分别加入 31 2 .5、468、62 5mg延胡索酸泰妙菌素及 5 0 0mg酒石酸泰乐菌素的用量给病鸡饮水给药 ,连用 5d。试验表明 ,用药组的成活率、日增重、料肉比、气囊损伤度与感染对照组比较差异极显著 (P <0 .0 1 ) ;延胡索酸泰妙菌素大剂量组日增重与小剂量组比较差异显著 (P <0 .0 5 ) ,与其他各用药组比较差异极显著 (P <0 .0 1 ) ,料肉比与其他各用药组比较差异极显著 (P <0 .0 1 ) ;酒石酸泰乐菌素组的料肉比与延胡索酸泰妙菌素小剂量组比较差异不显著 (P >0 .0 5 ) ;而与其他各组比较差异极显著 (P <0 .0 1 )。数据分析表明 ,延胡索酸泰妙菌素大剂量组能有效地降低气囊损伤度 。

四株鸡毒霉形体菌株对SPF鸡胚的致病作用

将MG不同菌株的培养物，经卵黄囊接种SPF鸡胚，结果各菌株均能使鸡胚发生死亡，总死亡率在接种后3～13d内达82％，死胚经病变检查，菌检和分离物的血清学鉴定，证实系感染MG所致。测定了MGIc1菌株的不同接种量对鸡胚死亡的影响，发现它们之间没有很密切关系。在SPF源鸡体上致病力低下的二株MG菌株的鸡胚致死率为60％～90％，反映出同一菌株对鸡体和鸡胚的致病力有差异。从部分死胚的卵黄、卵黄囊、绒毛尿囊膜和尿囊液中分离到MG，并测定了这些部位MG的含量。根据实验结果，认为SPF鸡胚人工感染MG，具有比SPF源鸡体更敏感、所需试验条件简单、恒定、因果关系明确的优点，可以作为测试MG菌株某些性质的一种模型。

几种动物病原菌对替米考星耐药性的体外诱导

在测定替米考星对鸡毒支原体、多杀巴氏杆菌和猪胸膜肺炎放线杆菌的最小抑菌浓度基础上，采用药物浓度递增法体外诱导3种病原菌对替米考星的耐药性。结果鸡毒支原体经9次传代对替米考星产生了高水平耐药，多杀巴氏杆菌经7～9次传代对替米考星产生了高水平耐药，猪胸膜肺炎放线杆菌经14次传代对替米考星的耐受浓度未发生明显变化；鸡毒支原体和多杀巴氏杆菌替米考星诱导耐药株对红霉素、阿奇霉素、泰乐菌素、吉他霉素和林可霉素表现交叉耐药。研究结果提示，替米考星较易诱导鸡毒支原体和多杀巴氏杆菌产生耐药性，兽医临床应合理应用。

禽副粘病毒2型(PMV-2)致病性的研究

7日龄SPF鸡经滴鼻、点眼感染PMV-2,可引起轻微的呼吸道症状,病理组织学观察可见气管粘液分泌亢进和少量的淋巴细胞浸润。PMV-2与传染性支气管炎（IBV）或鸡毒支原体（MG）协同感染比单纯感染这三种病原的任何一种均呈现更严重的呼吸道症状,病理组织学变化呈气管纤毛部分或全部脱落,气管粘膜上皮细胞不同程度的变性、脱落。固有层和粘膜下层严重水肿,有大量淋巴细胞、巨噬细胞和异嗜细胞浸润。SPF雏鸡感染PMV-2后的不同时间检查病毒在鸡体内的分布规律,结果表明,PMV-2在法氏囊中大量分布;气管、肺、胸腺中有较多病毒;大脑、脾和肾脏只有少量病毒存在。上述实验结果揭示PMV-2感染SPF雏鸡致病性较弱,PMV-2在鸡呼吸道综合征中起一定作用。

生殖支原体感染与输卵管妊娠及输卵管病理关系的研究

目的 :探讨生殖支原体 (Mg)与输卵管妊娠及输卵管病理形态变化之间的关系。方法 :用PCR技术检测输卵管妊娠患者的输卵管组织及同期行绝育术或附件切除术的外观正常输卵管标本各 3 0例 ,同时抽取静脉血检测其感染情况 ,病理检测其形态的变化。结果 :研究组输卵管组织中Mg检出率 4 6.7%高于对照组的 2 6.7% ,研究组静脉血感染率 2 6.7%高于对照组的 6.7% ,经统计检验 ,Mg感染与输卵管妊娠呈正相关联。Mg感染的输卵管管壁及粘膜可见大量淋巴细胞、浆细胞、嗜酸性白细胞、中性白细胞浸润 ,以及可出现管管壁纤维化改变。结论

天津医科大学总医院性病门诊患者生殖支原体的检测

目的:建立聚合酶链反应技术(PCR)检测天津医科大学总医院性病门诊患者的分泌物标本中的Mg-DNA,以了解生殖支原体感染在此性病门诊患者中的发病情况。方法:采用PCR法对泌尿生殖道分泌物标本进行检测,并同时采用了两对不同的引物同时进行检测。结果:共有8例患者生殖支原体阳性,其阳性率为3.57%。结论:天津医科大学性病门诊患者中存在生殖支原体的感染,但阳性率较低。

123例健康女性泌尿生殖道生殖支原体感染的检测

目的:了解健康女性生殖道生殖支原体感染状况。方法:以公布的生殖支原体140Kda的黏附蛋白基因为模板合成引物。用PCR法检测123份健康女性宫颈分泌物。结果:健康女性生殖道中可检出生殖支原体,检出阳性率为0.7%。结论:生殖支原体是条件致病微生物。

原子力显微镜在生殖支原体研究中的应用

为了确定生殖支原体在活性条件下的结构形貌，并在较高的分辨水平上观察其三维形貌结构，本研究采用原子力显微镜在常温常压下对生殖支原体标准株及分离株进行形态学的初步观察。将标本固定于云母上，在ｔａｐｐｉｎｇ模式下扫描成像。结果显示：生殖支原体多呈烧瓶状或鸭梨状，有突出的颈部及膨大的头端，与电镜观察结果类似，其大小亦与电镜测量结果类似。

福建白羽肉鸡鸡毒支原体的分离鉴定及最小抑菌浓度测定

为了解福建白羽肉鸡中鸡毒支原体(MG)对临床常用药物的敏感性,本研究从2个商品代白羽肉鸡养殖场采集了疑似患慢性呼吸道病(CRD)的鸡喉拭子40份,接种于适宜的支原体培养基上进行纯化。通过对菌株生物学特性分析、细菌形态学观察、PCR测序及动物回归试验进行鉴定,并利用最低抑菌浓度(MIC)测定了分离株对临床常用抗菌药的敏感性。结果显示,本试验成功获得2株MG,命名为MX和HY。将分离株接种于含有酚红的支原体液体培养基中能分解葡萄糖产酸使培养基颜色由红变黄;固体培养基于低倍镜下观察到典型的“荷包蛋”状菌落;分离株经过Dienes染色后的菌落中心呈致密深蓝色,边缘淡蓝,且30 min后不褪色,并具有较强吸附红细胞的能力,呈现典型MG培养特征;动物回归试验和分离株pvpA基因测序结果显示,2株MG分离株均具有较强致病性,证实其与R株的亲缘关系最近;药敏试验结果显示,MX和HY对泰妙菌素、氟苯尼考和泰乐霉素表现出了高度敏感性,其次是盐酸恩诺沙星、盐酸大观霉素,而对具有与泰乐霉素类似分子结构和抗菌谱的畜禽专用抗生素替米考星敏感性较差,此差异可能与临床上长期应用该药有关。研究结果表明,福建地区商品代白羽肉鸡中存在致病性MG流行,泰妙菌素可以作为临床防治MG的首选药物。