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Understanding the metabolism of Mycoplasma mycoides subsp. capri in vitro by a transcriptomic analysis 被引量:2
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作者 WANG Xiao-hui WANG Yan-fang +7 位作者 HUANG Hai-bi BAI Fan SHI Xiao-na MA Chang-jiao GAO Yuan ZHANG Jian-hua ZHANG Wen-guang HAO Yong-qing 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2018年第2期428-435,共8页
It is generally known that the culture for mycoplasma is time-consuming and a variety of nutrients are needed in the culture medium. This brings a lot of difficulties to mycoplasma research and application, including ... It is generally known that the culture for mycoplasma is time-consuming and a variety of nutrients are needed in the culture medium. This brings a lot of difficulties to mycoplasma research and application, including Mycoplasma mycoides subsp. capri(Mmc). Furthermore, little research on the characteristics of Mmc metabolism has been reported. In this study, Mmc PG3 strain cultures were investigated for dynamic gene expression. Culture samples were harvested during logarithmic phase(PG3-1), stationary phase(PG3-2), decline phase(PG3-3) and late decline phase(PG3-4). Twelve RNA samples(three replicates for each of the four growth stages considered) from these cultures were collected and sequenced. Paired comparison between consecutive growth phases in the four growth stages showed 45 significant differentially expressed genes(P〈0.01) were linked to PG3 metabolism. The enzymes these genes coded were mainly involved in ATP synthase, pyrimidine metabolism, nicotinate and nicotinamide metabolism, arginine and proline metabolism. Among these, cytidylate kinase, fructose 1,6-bisphosphate aldolases Class II, nicotinate-nucleotide adenylyltransferase and dihydrolipoamide dehydrogenase play a key role in Mmc metabolism. These results provide a baseline to build our understanding of the metabolic pathway of Mmc. 展开更多
关键词 metabolism mycoplasma mycoides subsp.capri transcriptomic
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Mycoplasma mycoides subsp.mycoides Ben-1株一个新的膜蛋白的特性研究
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作者 周玉梅 汪洋 +5 位作者 李媛 邹晓辉 刘素丽 白帆 吴金迪 辛九庆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期354-358,共5页
为研究Mycoplasma mycoides subsp.mycoides(Mmm)Ben-1弱毒疫苗传代致弱的机制,本研究通过比较Mmm Ben-1株和其兔体内传代致弱毒株Ben-470的全基因组序列,发现在Ben-470株中缺失了一个编码165个氨基酸(分子量约19 ku)的495 bp的假定蛋... 为研究Mycoplasma mycoides subsp.mycoides(Mmm)Ben-1弱毒疫苗传代致弱的机制,本研究通过比较Mmm Ben-1株和其兔体内传代致弱毒株Ben-470的全基因组序列,发现在Ben-470株中缺失了一个编码165个氨基酸(分子量约19 ku)的495 bp的假定蛋白基因,命名为p588,扩增该基因,并表达重组P588(rP588)蛋白,制备兔抗血清。经细菌膜蛋白不同组份的提取及western blot鉴定,结果显示P588是一种膜蛋白,并且rP588与CBPP国际标准血清呈阳性反应。通过激光共聚焦显微镜观察到rP588对牛肺细胞(EBL)具有明显的粘附作用,并且ELISA试验也证明该蛋白的这种粘附为特异性粘附。上述结果表明P588蛋白是Mmm Ben-1的一个粘附蛋白。 展开更多
关键词 牛传染性胸膜肺炎 基因P588 粘附
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Detection of Antibodies against Mycoplasma mycoides subsp. capri in Goats with the Complement Fixation Test
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作者 José L. Corona-Vargas Myrna A. Vicencio-Mallén +3 位作者 Frida Salmerón-Sosa Erika M. Carrillo-Casas Francisco J. Trigo-Tavera Rosa E. Miranda-Morales 《Advances in Microbiology》 2016年第13期959-964,共6页
Mycoplasma mycoides subsp. capri is the causative agent of severe and acute respiratory problems in goats, which spreads rapidly and represents high mortality. The serological profile of the goat population, from nine... Mycoplasma mycoides subsp. capri is the causative agent of severe and acute respiratory problems in goats, which spreads rapidly and represents high mortality. The serological profile of the goat population, from nine regions in seven states of Mexico, was screened by the Complement Fixation test (CF) in sera from asymptomatic goats and animals with mild respiratory symptoms. Sera and nasal swabs of 827 goats were collected for the isolation of the organism. An antiserum was prepared against a previously isolated field strain of Mycoplasma mycoides subsp. capri. CF Antibody titers were associated with the results of the isolates to determine the cutoff point. The CF was considered as positive if its result was ≥1/16. The CF registered 251 positive goats (30.35%) and 576 (69.65%) negative;the test showed high sensitivity (93.33%) and specificity (72.27%). In the specific case of diagnosis for mycoplasmosis associated with respiratory problems in goats, the CF proved to be a good diagnosis test, this study determined that 30% of the goat population showed antibody titers against Mycoplasma mycoides subsp. capri and revealed those animals who have had contact with this microorganism during their lives regardless of the presence or absence of respiratory symptoms. 展开更多
关键词 Complement Fixation Indirect Agglutination MYCOPLASMOSIS mycoplasma mycoides mycoplasma mycoides subsp. capri
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丝状支原体丝状亚种SC生物型PCR检测方法的建议 被引量:3
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作者 辛九庆 高玉龙 +1 位作者 杨婉容 王砚范 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期453-455,共3页
建立了一个可以识别丝状支原体丝状亚种SC生物型 (MmmSC)的PCR方法。根据丝状支原体丝状亚种SC生物型(MmmSC)相关核苷酸序列 ,设计合成了MC1、MC2和SC1、SC2两对引物。MC1、MC2是一对簇特异性引物 ,用于鉴别丝状支原体族 6个成员 ,对Mm... 建立了一个可以识别丝状支原体丝状亚种SC生物型 (MmmSC)的PCR方法。根据丝状支原体丝状亚种SC生物型(MmmSC)相关核苷酸序列 ,设计合成了MC1、MC2和SC1、SC2两对引物。MC1、MC2是一对簇特异性引物 ,用于鉴别丝状支原体族 6个成员 ,对MmmSC、MmmLC扩增出与预期结果相符的 4 6 2bp片段 ;而SC1、SC2是针对MmmSC的一对特异性引物 ,只能对MmmSC扩增出 2 77bp的片段 ,经过VspI、Bsp14 3I和Dral三种限制性内切酶鉴定与预期结果相符 ,而不能扩增出MmmLC型Y_goat代表株 ,说明具有非常好的特异性。对MmmSC进行的敏感性试验显示SC1、SC2引物能够检测到 10 0个CFU ,具有非常高的敏感性。 展开更多
关键词 丝状支原体丝状亚种sc生物型 PCR检测方法 传染性胸膜肺炎 病原 鉴别诊断
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丝状支原体丝状亚种SC型LppQ N-端基因表达与免疫原性 被引量:2
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作者 辛九庆 高玉龙 +2 位作者 李媛 王砚范 钱爱东 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期278-281,共4页
目的构建丝状支原体丝状亚种SC型LppQN端基因表达载体,并进行表达产物的纯化及免疫原性检测。方法利用PCR方法在体外定点突变丝状支原体丝状亚种SC型HVRIX株编码色氨酸的基因(TGA突变为TGG),构建表达载体,使其能在大肠杆菌中大量表达,... 目的构建丝状支原体丝状亚种SC型LppQN端基因表达载体,并进行表达产物的纯化及免疫原性检测。方法利用PCR方法在体外定点突变丝状支原体丝状亚种SC型HVRIX株编码色氨酸的基因(TGA突变为TGG),构建表达载体,使其能在大肠杆菌中大量表达,并对表达产物进行纯化和免疫原性检测。结果表达产物约占菌体总蛋白的53.7%,经Westernblot和ELISA检测,表达蛋白具有良好的免疫原性。结论已成功表达了具有免疫原性的LppQ重组表达蛋白,可以作为诊断抗原用于血清学检测。 展开更多
关键词 丝状支原体丝状亚种sc 脂蛋白 免疫原性
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丝状支原体丝状亚种SC型中国不同地区分离株脂蛋白Q基因的分子特征 被引量:2
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作者 高玉龙 辛九庆 +1 位作者 李媛 王砚范 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期142-146,共5页
根据已发表的丝状支原体丝状亚种SC型(MmmSC)脂蛋白Q(LppQ)基因序列设计并合成一对引物,利用PCR扩增方法,从我国不同省区的MmmSC分离株HVRI-Ⅹ、BenⅠ、QingⅠ、MuⅠ和模式株PG1中获得了LppQ基因1303bp的片段,将该片段克隆到PMD18-T载体... 根据已发表的丝状支原体丝状亚种SC型(MmmSC)脂蛋白Q(LppQ)基因序列设计并合成一对引物,利用PCR扩增方法,从我国不同省区的MmmSC分离株HVRI-Ⅹ、BenⅠ、QingⅠ、MuⅠ和模式株PG1中获得了LppQ基因1303bp的片段,将该片段克隆到PMD18-T载体上,通过对所得到的重组质粒进行酶切分析、PCR鉴定,证明得到了含有目的基因片段的阳性重组质粒。采用Sanger's双脱氧末端终止法对插入片段进行核苷酸序列测定,获得了HVRI-Ⅹ、BenⅠ、QingⅠ、MuⅠ株和模式株PG1LppQ基因核苷酸序列。核苷酸序列比较结果显示,国内4个MmmSC分离株与GenBank公布的LppQ基因核苷酸序列同源性均在99.7%以上,氨基酸序列同源性均在99%以上;与模式株PG1的核苷酸序列同源性在99.7%以上,氨基酸序列同源性均在99.3%以上。国内4个MmmSC分离株之间的核苷酸序列同源性均在99.7%以上,氨基酸序列同源性均在99.3%以上。对HVRIⅩ株LppQ基因氨基酸亲水性和蛋白表面可能性进行了分析,证实LppQN末端富含亲水氨基酸,比C末端更有可能定位在蛋白表面。 展开更多
关键词 牛传染性胸膜肺炎 丝状史原体丝状亚种sc 脂蛋白 LppQ 分子特征
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丝状支原体丝状亚种SC型LppB基因的克隆与表达纯化 被引量:1
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作者 李媛 辛九庆 +1 位作者 高玉龙 王砚范 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期373-375,共3页
目的克隆丝状支原体丝状亚种SC型(MmmSC)LppB蛋白基因,并进行表达及纯化。方法通过PCR,扩增MmmSC标准株PG1的LppB全基因,克隆至pMD18-T载体上,并测序鉴定。同时选LppB基因中两个TGA之间903bp片段,与pET30a载体构建重组质粒,进行诱导表达... 目的克隆丝状支原体丝状亚种SC型(MmmSC)LppB蛋白基因,并进行表达及纯化。方法通过PCR,扩增MmmSC标准株PG1的LppB全基因,克隆至pMD18-T载体上,并测序鉴定。同时选LppB基因中两个TGA之间903bp片段,与pET30a载体构建重组质粒,进行诱导表达,表达产物经Ni-NTA-His系统纯化。结果PCR扩增的LppB基因长度片段约1869bp,与预期大小相符。将其与NCBI上发布的Afade株、LC型代表株Y-goat和同属的Bovine7株的LppB基因序列相比较,同源性分别为99·8%、92·8%和76·7%,氨基酸同源性分别为99·2%、90·2%和67·0%。经Ni-NTA-His系统纯化,得到纯净的单一蛋白。结论已成功克隆了PG1的LppB蛋白基因,并进行了表达及纯化。 展开更多
关键词 丝状支原体丝状亚种sc型(mmmsc) LppB基因 克隆 表达
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丝状支原体丝状亚种SC型中国分离株分子流行特征 被引量:1
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作者 辛九庆 李媛 +2 位作者 高玉龙 王砚范 钱爱东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期38-40,共3页
收集了6个来自不同地方中国历史流行的丝状支原体丝状亚种SC型(Mycoplasma mycoidessubsp.MycoidesSC,MmmSC)毒株与PG1、Y-goat进行分子特征比较。全菌体蛋白电泳与PG1完全相同,而与Y-goat不同;PCR结果显示6个中国分离株与PG1、Y-goat... 收集了6个来自不同地方中国历史流行的丝状支原体丝状亚种SC型(Mycoplasma mycoidessubsp.MycoidesSC,MmmSC)毒株与PG1、Y-goat进行分子特征比较。全菌体蛋白电泳与PG1完全相同,而与Y-goat不同;PCR结果显示6个中国分离株与PG1、Y-goat都没有缺失8.84 kb片段;LppB全基因序列比较发现与PG1同源性达99%,而与Y-goat同源性很低;多位点基因序列类型(Multilocus sequence types,MST)分析显示与非洲澳大利亚群完全相同。以上证据显示中国CBPP流行株应归属于非洲澳大利亚群。 展开更多
关键词 mmmsc PG1 特征
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丝状霉形体丝状亚种SC型脂蛋白LppQN末端基因克隆与序列分析
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作者 辛九庆 高玉龙 +1 位作者 李媛 王砚范 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期252-254,共3页
脂蛋白 L pp Q是丝状霉形体丝状亚种 SC型 (Mm m SC)非洲株、欧洲株和疫苗株所特有的。 L pp Q N末端域具有良好的免疫原性 ,在牛体内可诱导产生强大、特异、早期、持续的免疫反应。本研究根据已发表的 L pp Q基因序列设计引物 ,用 Pyro... 脂蛋白 L pp Q是丝状霉形体丝状亚种 SC型 (Mm m SC)非洲株、欧洲株和疫苗株所特有的。 L pp Q N末端域具有良好的免疫原性 ,在牛体内可诱导产生强大、特异、早期、持续的免疫反应。本研究根据已发表的 L pp Q基因序列设计引物 ,用 Pyrobest TM高保真 DNA聚合酶从 Mmm SC HVRI X株中扩增出了 L pp Q N末端基因序列 ,并进行了克隆与序列测定。核苷酸序列比较结果显示 ,HVRI X株的 L pp Q N末端基因序列与国外发表的序列同源性为 99.7% ,由其推导的氨基酸序列同源性为 99.1% ,为脂蛋白 L pp Q 展开更多
关键词 牛传染性胸膜肺炎 丝状霉形体丝状亚种sc LppQ N末端 序列分析 基因 克隆
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丝状支原体丝状亚种SC型脂蛋白QN末端基因的表达、纯化与抗原性分析
10
作者 高玉龙 辛九庆 +1 位作者 李媛 王砚范 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期788-791,共4页
为了表达丝状支原体丝状亚种SC型(MmmSC)中国分离株HVRIⅩ脂蛋白Q(LppQ)N末端基因,将该基因经PCR扩增后克隆至原核表达载体pET32a中,经酶切、PCR、测序证实获得了重组表达质粒,转化Escherichia coliBL21(DE3)菌,经IPTG诱导后获得可溶性... 为了表达丝状支原体丝状亚种SC型(MmmSC)中国分离株HVRIⅩ脂蛋白Q(LppQ)N末端基因,将该基因经PCR扩增后克隆至原核表达载体pET32a中,经酶切、PCR、测序证实获得了重组表达质粒,转化Escherichia coliBL21(DE3)菌,经IPTG诱导后获得可溶性融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的53.7%,用Ni-NTAHis.Bind纯化试剂盒纯化后,蛋白纯度达95%以上。表达蛋白经Western blot检测其抗原活性,结果表明纯化蛋白可与CBPP标准阳性血清发生强烈的反应,而与阴性血清不发生反应。 展开更多
关键词 牛传染性胸膜肺炎 丝状支原体丝状亚种sc 脂蛋白Q LppQ 表达
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丝状支原体丝状亚种SC型LppC基因的表达纯化
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作者 李媛 乔祖健 +2 位作者 王亮 张建华 辛九庆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期90-93,共4页
丝状支原体丝状亚种SC型是A类烈性传染病牛传染性胸膜肺炎的病原体。脂蛋白LppC是重要的免疫优势抗原,LppC基因是MmmSC的特异性基因。本研究通过PCR方法,扩增MmmSC标准株PG1的LppCN末端基因。将该序列克隆到pMDT-18载体上并测序,用pET32... 丝状支原体丝状亚种SC型是A类烈性传染病牛传染性胸膜肺炎的病原体。脂蛋白LppC是重要的免疫优势抗原,LppC基因是MmmSC的特异性基因。本研究通过PCR方法,扩增MmmSC标准株PG1的LppCN末端基因。将该序列克隆到pMDT-18载体上并测序,用pET32a为载体构建重组质粒进行诱导表达。LppCN末端基因长度为644bp,将其与NCBI上发布的Afade株、欧洲群代表株L2比较,它的核酸序列同源性为100%,表明LppC基因在种内高度保守。原核表达结果得到大小为45ku的目的蛋白,用Ni-NTA系统进行纯化得到高纯度的蛋白,Westernblot结果表明,重组蛋白能与牛传染性胸膜肺炎阳性血清反应,具有免疫学活性,为进一步与LppQ融合表达奠定基础。 展开更多
关键词 牛传染性胸膜肺炎(CBPP) 丝状支原体丝状亚种sc(mmmsc) LppC
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丝状支原体丝状亚种SC型脂蛋白Q的N末端定点突变及表达载体的构建
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作者 高玉龙 辛九庆 +1 位作者 李媛 王砚范 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期95-99,共5页
根据已发表的丝状支原体丝状亚种SC型(MmmSC)LppQ基因序列设计引物,从MmmSC HVRI X株中扩增出了LppQ N末端基因,并将其分别克隆到pUC18和pUC19上,利用一步重叠延伸PCR突变方法将其66位的TGA突变为TGG,经克隆与序列测定证实突变成功后,... 根据已发表的丝状支原体丝状亚种SC型(MmmSC)LppQ基因序列设计引物,从MmmSC HVRI X株中扩增出了LppQ N末端基因,并将其分别克隆到pUC18和pUC19上,利用一步重叠延伸PCR突变方法将其66位的TGA突变为TGG,经克隆与序列测定证实突变成功后,将已突变的LppQ N末端基因插入原核表达载体pET32a的多克隆位点,成功地构建了LppQ N末端基因原核表达载体pET32a-LppQ,为其下一步体外表达奠定了基础。 展开更多
关键词 牛传染性胸膜肺炎 丝状支原体丝状亚种sc 脂蛋白 LppQ 定点突变
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山羊传染性胸膜肺炎病原分离与鉴定 被引量:24
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作者 杜永凤 文心田 +2 位作者 曹三杰 肖驰 易佳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期618-621,共4页
本试验从传染性胸膜肺炎的山羊体内分离获得两株支原体Y1和Y2,通过病原分离、形态学观察、生化试验、HA、生长抑制试验和代谢抑制试验等试验,证实Y1和Y2的形态与培养特性、生化反应特性和血清学特性分别与模式株丝状支原体山羊亚种PG3... 本试验从传染性胸膜肺炎的山羊体内分离获得两株支原体Y1和Y2,通过病原分离、形态学观察、生化试验、HA、生长抑制试验和代谢抑制试验等试验,证实Y1和Y2的形态与培养特性、生化反应特性和血清学特性分别与模式株丝状支原体山羊亚种PG3和绵羊支原体Y98相接近;动物回归试验成功复制出山羊传染性胸膜肺炎的典型临床症状和病理剖解变化。结果表明Y1和Y2分别为丝状支原体山羊亚种和绵羊支原体。 展开更多
关键词 传染性胸膜肺炎 丝状支原体山羊亚种 绵羊支原体 分离 鉴定 山羊
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牛支原体双重PCR检测方法的建立 被引量:10
14
作者 刘洋 李媛 +4 位作者 董惠 张美晶 姜海芳 陈维 辛九庆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期599-602,共4页
为鉴别牛支原体(Mycoplasma bovis)与丝状支原体丝状亚种SC(M.mycoides subsp.mycoides SC),本实验通过优化M.bovis特异性引物pMB81-1/pMB81-2s和MmmSC特异性引物SC1/SC2的退火温度,建立了鉴别M.bovis和MmmSC的双重PCR检测方法。该方法... 为鉴别牛支原体(Mycoplasma bovis)与丝状支原体丝状亚种SC(M.mycoides subsp.mycoides SC),本实验通过优化M.bovis特异性引物pMB81-1/pMB81-2s和MmmSC特异性引物SC1/SC2的退火温度,建立了鉴别M.bovis和MmmSC的双重PCR检测方法。该方法能够分别由M.bovis和MmmSC扩增得到528bp和270bp片段。敏感性试验结果显示该方法检测M.bovis和MmmSC培养物的最低浓度分别为106cfu/mL和105cfu/mL。特异性试验结果显示,该方法对无乳支原体代表株PG2、丝状支原体丝状亚种LC型代表株Y-goat、山羊支原体山羊肺炎亚种Mccp、绵羊支原体Y-98、猪鼻支原体BST-7、巴氏杆菌以及结核分枝杆菌扩增结果均为阴性。应用该方法对临床病料的检测结果与培养鉴定结果的符合率为100%,表明该方法具有良好的特异性和敏感性,可以应用于临床检测。 展开更多
关键词 牛支原体 丝状支原体丝状亚种sc 双重PCR
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丝状支原体山羊亚种最佳培养基的筛选 被引量:10
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作者 赵萍 储岳峰 +2 位作者 高鹏程 贺英 逯忠新 《动物医学进展》 CSCD 2008年第1期21-23,共3页
在不同条件下对丝状支原体山羊亚种进行培养,通过PPLO精氨酸培养基、牛心汤培养基、MEM-KM2培养基以及不同种类动物血清和同一动物不同浓度血清,从生长滴度、生长速度、培养基来源、造价各个方面的比较试验,结果显示,加100 mL/L马血清的... 在不同条件下对丝状支原体山羊亚种进行培养,通过PPLO精氨酸培养基、牛心汤培养基、MEM-KM2培养基以及不同种类动物血清和同一动物不同浓度血清,从生长滴度、生长速度、培养基来源、造价各个方面的比较试验,结果显示,加100 mL/L马血清的MEM-KM2培养基更适合于丝状支原体山羊亚种的培养,它的生长滴度可达109,所需时间只为5 d,并且配置方便,价格合理。这一结果为丝状支原体山羊亚种抗原的大批量生产奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 丝状支原体山羊亚种 生长条件 培养基
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绵羊肺炎支原体Y98和丝状支原体丝状亚种PG3抗原的分析 被引量:6
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作者 裴艳涛 孙继国 +1 位作者 蒋瑞萍 赵宝华 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期133-136,共4页
用SDS-PAGE和双向电泳方法,对绵羊肺炎支原体标准株Y98和丝状支原体丝状亚种标准株PG3的全菌可溶性抗原进行分析。结果表明,用SDS-PAGE分析Y98有9条蛋白带,PG3有11条蛋白带,其中有2条相同蛋白带;用双向电泳分析Y98全菌可溶性抗原多肽斑... 用SDS-PAGE和双向电泳方法,对绵羊肺炎支原体标准株Y98和丝状支原体丝状亚种标准株PG3的全菌可溶性抗原进行分析。结果表明,用SDS-PAGE分析Y98有9条蛋白带,PG3有11条蛋白带,其中有2条相同蛋白带;用双向电泳分析Y98全菌可溶性抗原多肽斑点有288±9,主多肽斑点有47个,相对分子质量范围在27 000~120000;pI范围为4.436~7.164,PG3全菌可溶性抗原多肽斑点有243±11个,主多肽斑点有36个,相对分子质量范围在27 000~120 000,而pI范围为4.213~7.987,二者有21个相同多肽点,但其多肽含量略有差异。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 丝状支原体丝状亚种 双向电泳 抗原
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应用双重PCR方法检测羊支原体肺炎病原 被引量:12
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作者 储岳峰 高鹏程 +4 位作者 赵萍 贺英 郭晗 逯忠新 赵海燕 《畜牧与兽医》 北大核心 2009年第12期23-26,共4页
通过对丝状支原体山羊亚种(M.mycoides subsp.capri,Mmc)特异性引物MmcF/MmcR和绵羊肺炎支原体(M.ovipneumontiae,Mo)特异性引物LmF/LmR退火温度、引物浓度比例等条件的选择,建立了一个可以同时检测Mmc和Mo的双重PCR方法。该方法可同时... 通过对丝状支原体山羊亚种(M.mycoides subsp.capri,Mmc)特异性引物MmcF/MmcR和绵羊肺炎支原体(M.ovipneumontiae,Mo)特异性引物LmF/LmR退火温度、引物浓度比例等条件的选择,建立了一个可以同时检测Mmc和Mo的双重PCR方法。该方法可同时扩增出Mmc 195 bp和Mo 361 bp目的片段,但对其他病原菌不能扩增出任何条带,具有良好的特异性。敏感性试验表明,该方法能够分别检测出0.1ng的Mmc DNA和0.01 ng的Mo DNA,或同时检测出1ng Mmc和1ng Mo混合的DNA。用该双重PCR方法可对实验室保存的4株绵羊肺炎支原体和2株丝状支原体山羊亚种进行准确鉴定,并可从临床病料中检测出相应支原体,表明建立的双重PCR方法可用于Mmc和Mo的快速鉴定、实验室诊断和病原学调查。 展开更多
关键词 丝状支原体山羊亚种 绵羊肺炎支原体 双重PCR 检测
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丝状霉形体山羊亚种血清抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量:4
18
作者 赵萍 逯忠新 +3 位作者 储岳峰 高鹏程 贺英 石琴 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期859-862,共4页
利用丝状霉形体山羊亚种标准株PG3制备抗原,经纯化后作为包被抗原建立了间接ELISA方法,用于检测丝状霉形体山羊亚种血清抗体。经方阵滴定确定最佳抗原包被浓度为1.09μg/mL,血清样品最佳稀释度为1∶64,兔抗羊IgG辣根过氧化物酶结合物的... 利用丝状霉形体山羊亚种标准株PG3制备抗原,经纯化后作为包被抗原建立了间接ELISA方法,用于检测丝状霉形体山羊亚种血清抗体。经方阵滴定确定最佳抗原包被浓度为1.09μg/mL,血清样品最佳稀释度为1∶64,兔抗羊IgG辣根过氧化物酶结合物的最佳稀释度为1∶40 000,抗原抗体最佳结合时间为1 h。判定标准为样品D490 nm值与标准阴性血清D490 nm值之比(P/N)≥3为阳性,≤2.5为阴性,介于二者之间的为可疑。重复性和稳定性试验证明,建立的间接ELISA的稳定性和重复性良好,与间接血凝试验相比,其敏感性较高。 展开更多
关键词 间接ELISA 丝状霉形体山羊亚种 血清抗体
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丝状霉形体山羊亚种巢式PCR检测方法的建立 被引量:4
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作者 储岳峰 逯忠新 +2 位作者 赵萍 高鹏程 贺英 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期940-943,共4页
根据已发表的丝状霉形体簇各成员核苷酸序列,设计合成了2对引物McF、McR和MmcF、MmcR,建立了可以鉴别丝状霉形体山羊亚种(Mycoplasma mycoidessubsp.capri,Mmc)的巢式PCR方法。特异性和敏感性试验结果显示,该方法只能对Mmc扩增出195 bp... 根据已发表的丝状霉形体簇各成员核苷酸序列,设计合成了2对引物McF、McR和MmcF、MmcR,建立了可以鉴别丝状霉形体山羊亚种(Mycoplasma mycoidessubsp.capri,Mmc)的巢式PCR方法。特异性和敏感性试验结果显示,该方法只能对Mmc扩增出195 bp的片段,而对其他病原菌不能扩增出任何条带,它最低能够检测出10 pg的Mmc DNA,说明该方法具有良好的特异性和很高的敏感性。田间试验结果显示,对4株霉形体分离株及其病料均可扩增出Mmc特异性片段,表明,该巢式PCR方法可用于Mmc快速鉴定和流行病学调查。 展开更多
关键词 丝状霉形体山羊亚种 巢式PCR 山羊传染性胸膜肺炎
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丝状支原体山羊亚种FJ-GT株的分离和鉴定 被引量:6
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作者 江锦秀 林裕胜 +2 位作者 游伟 江斌 胡奇林 《中国农学通报》 2016年第29期11-16,共6页
为明确福建省某羊场发生的疑似山羊传染性胸膜肺炎病例的病原,对肺组织的病原进行分离培养和纯化,通过生化试验和特异性PCR方法进行鉴定,用16S r RNA通用引物对分离株进行克隆测序。将分离菌株命名为FJ-GT。结果显示菌落呈典型的油煎蛋... 为明确福建省某羊场发生的疑似山羊传染性胸膜肺炎病例的病原,对肺组织的病原进行分离培养和纯化,通过生化试验和特异性PCR方法进行鉴定,用16S r RNA通用引物对分离株进行克隆测序。将分离菌株命名为FJ-GT。结果显示菌落呈典型的油煎蛋状,中心有棕褐色突起;分离株能发酵葡萄糖,不能水解精氨酸,不分解尿素,血细胞吸附试验呈阴性,胆固醇需要试验、美兰还原反应和氯化四氮唑还原反应均呈阳性,溶血试验为β溶血;PCR结果扩增出丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri,Mmc)特异大小为394 bp的目的片段;菌株16S r RNA序列与丝状支原体山羊亚种标准株PG3的序列比较,同源性为99.5%。鉴定结果表明本次分离到的支原体为丝状支原体山羊亚种。本研究首次从病原学角度证明了福建省存在由丝状支原体山羊亚种引起的羊支原体性肺炎,对福建省羊支原体性肺炎的诊断和有效防控具有重要的指导意义。 展开更多
关键词 丝状支原体山羊亚种 分离 鉴定 羊支原体性肺炎 福建
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