生殖道支原体感染与不孕不育、妇科疾病的相关性

目的:分析门诊女性患者支原体感染情况以及与不孕不育、妇科疾病的相关性。方法:回顾性分析6943例门诊女性患者的支原体感染情况,并分析临床诊断为HPV感染、阴道炎及不孕、不良孕史等患者的支原体感染相关性。结果:共检测6943例女性泌尿生殖道样本,支原体阳性2507例,总阳性率为36.1%,≤20岁女性的阳性率高达56.0%。其中微小脲原体3型阳性率最高达12.5%,解脲脲原体阳性率为8.4%,人型支原体和生殖支原体的阳性率分别是7.9%和0.4%;不孕组、HPV感染组和阴道炎组的阳性率分别为44.8%、44.7%和42.9%,与对照组相比χ^(2)值分别为15.871、12.500、25.337,P<0.001,与正常组相比具有显著差异。结论:支原体感染在不同年龄段分布不同,且与不孕、HPV感染和阴道炎相关,临床应加强支原体筛查,早诊断、早治疗。

新种猪源嗜血支原体gapA基因的克隆及分子进化分析

本实验室前期的流行病学调查中发现浙江省存在新种猪源嗜血支原体(CMh)的流行。为进一步确认该新种CMh,本研究设计兼并引物获得CMh gapA基因部分片段,通过Genome walking的方法获得了全基因cmh-gapA,大小为1 008 bp。基因序列比对分析表明cmh-gapA与犬M.haemocanis的gapA基因亲缘关系最近,同源性为74.6%。核苷酸序列的系统发育分析表明CMh与犬、猫的嗜血支原体位于同一分支,与M.suis和M.parvum亲缘关系较远。本研究为CMh作为新种猪源嗜血支原体提供佐证,并为猪源嗜血支原体GADPH蛋白功能研究和血清学诊断方法的建立奠定基础。

生殖道支原体感染诊治专家共识

生殖道支原体感染是临床关注的热点问题,涉及多个学科。中国性学会性医学专业委员会生殖道感染学组组织多学科讨论,对临床支原体相关问题形成了共识。泌尿生殖道支原体存在无症状携带,以解脲支原体(U.urealyticum,Uu)为主,解脲支原体可分为微小脲原体和解脲支原体两种亚型,其中微小脲原体特别容易见于无症状携带。Uu和生殖支原体(M.genitalium,Mg)是导致尿道炎的重要致病微生物,Mg还是宫颈炎、盆腔炎的重要致病微生物。采用核酸分析的方法进行支原体检测更有利于支原体的诊治。如果男女双方均无泌尿生殖道感染的相关症状,仅Uu阳性,考虑为携带者,不必治疗。男性为Uu性尿道炎,建议同时治疗性伴。孕期下生殖道检出Uu的患者不需要进行干预和治疗。男性精液质量异常且有生育需求时,男女双方建议同时治疗一疗程。男女双方生殖道Uu培养阳性对IVF无明显影响。

反向线点杂交方法检测和鉴定4种常见致病支原体

目的评价反向线点杂交方法检测生殖支原体、人型支原体、微小脲原体和解脲脲原体的敏感性。方法应用支原体反向线点杂交方法和种特异性PCR方法同时检测198例临床标本,比较两种方法的检测结果。结果支原体反向线点杂交方法和种特异性PCR检测支原体阳性率分别为33.3%和34.3%,两种方法检测结果符合率为98.5%。3例标本支原体种特异性PCR方法检测微小脲原体阳性,而反向线点杂交方法检测为阴性。两种方法检测支原体结果无显著性差异(P>0.05)。结论反向线点杂交方法能同时快速、敏感和特异的检测这4种支原体。

基于重组截短蛋白mp-tGAPDH的微小支原体抗体间接ELISA检测方法建立和应用

猪源嗜血支原体(Hemotropic mycoplasma,HM)寄生于猪红细胞表面及骨髓中,引起猪传染性贫血,给我国养猪产业造成危害。近年来病原流行病学调查发现我国流行三种HM,猪支原体(Mycoplasma suis,M.suis猪附红细胞体),微小支原体(M.parvum)和新种Candidate Mycoplasma hemosuis(CMh)。且M.parvum在是我国浙江和海南猪群中的主要流行嗜血支原体,目前仅M.suis有血清抗体检测方法报道。本研究根据M.parvum ZJ9330株的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因序列设计引物扩增404 bp的部分基因片段、原核表达纯化15 ku截短蛋白mp-tGAPDH,Western-blot表明纯化蛋白mp-tGAPDH与小鼠抗mp-tGAPDH血清有较好的反应性。以mp-tGAPDH为包被抗原,建立了检测M.parvum抗体的间接ELISA方法。特异性实验表明,建立的ELISA方法不与猪圆环病毒病、猪瘟、伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征和弓形虫阳性血清交叉反应。重复性实验表明,该ELISA方法批间和批内重复性低于18.4%,表明该法有较好的重复性。用建立的ELISA方法对浙江省上虞地区5个猪场248份临床送检血清进行了检测,M.parvum血清抗体阳性率为36.69%(91/248)。本研究建立的间接ELISA方法为猪微小支原体的检测和流行病学调查提供了一种快速简便的血清学诊断方法。

正确看待子宫颈支原体阳性的临床意义

支原体是一类与女性泌尿生殖道疾病密切相关的微生物,主要包括解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,UU)、人型支原体(Mycoplasma hominis,Mh)、生殖支原体(Mycoplasma genitalium,Mg)。不同的支原体具有不同的临床意义。文章探讨了子宫颈支原体阳性的临床意义。UU主要导致尿道炎,女性阴道内无症状UU培养阳性非常常见,妊娠期下生殖道UU培养阳性不能增加妊娠不良结局,子宫颈UU阳性和(或)Mh阳性提示存在细菌性阴道病可能,应进一步检查。UU可进一步分型为微小脲原体(Up)和解脲脲原体(Uu),分型检测有助于帮助判断临床意义。Mg是尿道炎、子宫颈炎、盆腔炎的重要病原体,子宫颈Mg阳性提示可能存在上述炎症,需要积极抗生素干预。我国开展Mg检测较少,亟待普及Mg的核酸检测。Mg耐药较为普遍,有条件应该检测耐药基因,帮助选择抗生素治疗方案。

小附红细胞体mpg1基因的克隆及序列分析

根据猪附红细胞体3-磷酸甘油醛脱氢酶样蛋白1基因（msgl）序列设计引物，对上海地区分离的小附红细胞体阳性猪全血DNA进行PCR扩增，获得小附红细胞体3-磷酸甘油醛脱氢酶样蛋白1基因（mpgl）并进行测序和分析，研究其遗传变异特点。结果显示，共获得了11条小附红细胞体mpgl基因序列，序列长度均为1011bp。同源性分析显示，所获得的1l条小附红细胞体mpgl基因序列之间的相似性为96．8％～99．9％，预测氨基酸序列的相似性在97．9％～100％之间；与GenBank中公布的猪附红细胞体msgl基因核苷酸序列相似性在96．6％～98．2％之间，氨基酸序列的相似性为98．2％～99．1％。系统进化分析表明，msgl基因与mpgl基因共同构成每个聚簇。

小附红细胞体的分离鉴定及其对猪的人工感染试验

采用2对附红细胞体种特异性引物,对上海地区2个屠宰场采集的736份猪血液基因组DNA进行PCR检测,将小附红细胞体特异性引物扩增产物克隆到pMD18-T载体,进行序列测定和生物信息学分析。将小附红细胞体阳性血液分离物肌肉注射给5头切除脾的断奶广西巴马小型猪仔猪,感染后定期采血,进行显微镜检,并提取基因组DNA进行PCR检测。另设3头猪作为不感染对照组,进行相同的检测。结果显示,共有101份样品检测出附红细胞体阳性,阳性率为13.72%,其中54份为小附红细胞体单独感染,占7.34%。5头巴马小型猪在接种小附红细胞体后第13~16天起,至第34天试验结束,出现明显的临床症状;血液显微镜检和PCR检测均发现存在小附红细胞体感染;其序列测定显示,16SrRNA基因的部分序列与接种的小附红细胞体的相应序列完全一致。上述结果表明,本研究成功筛选出小附红细胞体阳性血液,并成功实现了小附红细胞体对巴马小型猪的人工感染试验。

脲原体/人型支原体培养及药物敏感检测试剂盒行业标准的建立

目的建立脲原体/人型支原体培养及药物敏感检测试剂盒行业标准。方法选择6个厂家生产的解脲脲原体及人型支原体检测试剂盒,按拟定的行业标准,对外观、培养基pH、生长性能、药物敏感符合率、特异性、重复性和稳定性项目进行验证。结果除2个厂家试剂盒的解脲脲原体对红霉素及加替沙星的药物敏感结果的一致性不满足批间重复性要求外,其他验证结果均能满足拟定行标中的要求,表明行业标准各指标具有一定的合理性,可操作性强。结论根据验证情况,最终建立了脲原体/人型支原体培养及药物敏感检测试剂盒行业标准,这将有助于该类试剂盒质量标准的统一和提高,为其生产、检验、流通等领域的监管提供了依据。

基于环介导恒温扩增和微流控芯片的生殖道支原体检测方法构建

目的建立一种结合环介导恒温扩增和微流控芯片技术检测生殖道支原体的方法。方法针对4种生殖道支原体包括解脲脲原体(UU)、微小脲原体(UP)、生殖支原体(MG)、人型支原体(MH)的DNA序列进行特异性引物设计和合成,制备微流控芯片,配制恒温扩增反应体系后进行芯片加样,于核酸分析仪中进行核酸扩增和结果判读,并对该芯片进行准确性、灵敏度、特异性和重复性验证。结果成功制备的4种生殖道支原体的微流控芯片具有较好的准确性、灵敏度、特异性和重复性,整个检测过程在1 h内即可完成,UU、MG、MH的最低检测限为1000拷贝/μL,而UP的最低检测限为5000拷贝/μL。结论基于环介导恒温扩增技术的4种生殖道支原体微流控芯片具有快速、准确、高通量等优点,在临床上具有广泛的应用前景。

LAMP检测三种常见泌尿生殖道支原体的应用评价

目的对环介导等温扩增(LAMP)技术在三种常见泌尿生殖道支原体(解脲支原体、人型支原体和微小脲原体)检测中的应用进行临床评价。方法同时采用LAMP方法和实时PCR方法检测泌尿生殖道标本中的三种支原体,分析LAMP方法与实时PCR方法检测结果的符合率,初步评价LAMP方法检测解脲支原体、人型支原体和微小脲原体的临床性能。结果48例泌尿生殖道标本中,解脲支原体LAMP检测阳性7例,阳性率为14.6%;人型支原体LAMP检测阳性6例,阳性率为12.5%;微小脲原体LAMP检测阳性9例,阳性率为18.8%。其中,解脲支原体和人型支原体同时感染1例,解脲支原体和微小脲原体同时感染1例,微小脲原体和人型支原体同时感染4例。LAMP方法与实时PCR方法检测解脲支原体、人型支原体和微小脲原体的符合率分别为95.8%、95.8%和100.0%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论LAMP技术用于解脲支原体、人型支原体和微小脲原体的检测具有很好的临床性能,适合在各级医院的临床实验室推广应用。