福建省羊支原体性肺炎分子流行病学研究

为了解福建羊支原体性肺炎和山羊传染性胸膜肺炎的分子流行情况,于2014-2016年从福建省6个市采集到疑似羊支原体性肺炎或山羊传染性胸膜肺炎病料61份,用支原体目引物、绵羊肺炎支原体、丝状支原体山羊亚种、山羊支原体山羊肺炎亚种、山羊支原体山羊亚种、精氨酸支原体、莱氏无胆甾原体和无乳支原体的特异引物,通过PCR方法进行检测。挑取部分PCR阳性病料进行支原体分离和纯化,用16SrRNA基因通用引物进行克隆测序。结果显示61份样品中检出绵羊肺炎支原体45份(73.77%),检出丝状支原体山羊亚种4份(6.56%),检出莱氏无胆甾原体4份(6.56%),检出精氨酸支原体2份(3.28%)。该研究结果表明福建省发生的类传染性胸膜肺炎是以绵羊肺炎支原体为主的羊支原体性肺炎,为福建省羊支原体性肺炎的有效防治提供了科学依据。

国内部分地区羊支原体肺炎血清学调查及分析

为了解国内羊肺炎支原体的流行情况,本研究应用正向间接血凝试验(IHA)对2014年~2015年间采自我国12个省44个市、县的3 402份未免疫血清样品进行了绵羊肺炎支原体(MO)、山羊支原体山羊肺炎亚种(Mccp)抗体的检测。结果显示:MO抗体阳性率为31.92%(1 086/3 402),其中阳性率最高的省份为内蒙古76.8%(636/828),其次是河北50%(60/120)、吉林21.99%(93/423);Mccp的抗体阳性率为10.67%(363/3 402),其中阳性率最高省份为河南35.14%(39/111),其次为河北27.5%(33/120)、山东22.5%(27/120);另有来自河北、辽宁、吉林、海南、黑龙江、内蒙古和安徽7省份的少量血清样品同时检测出MO和Mccp两种抗体,表明该病的流行存在不同菌株混合感染的情况,这在河北地区最为严重(15%)。分析表明,羊支原体肺炎在我国大部分地区流行相当严重,尤其在河北、河南和山东等集约化舍饲养殖发展的地区。绵羊的抗体阳性率明显高于山羊,表明MO在致病性和感染性方面相对Mccp更强。本研究为评估羊支原体肺炎在我国的流行状况以及制定有效防制措施提供了实验依据。

羊支原体肺炎防治研究进展

羊支原体肺炎在山羊和绵羊中是一种流行广泛、危害严重的疾病,药物治疗和疫苗接种是防控该病的重要手段。但是药物治疗的效果不尽人如意,传统疫苗本身具有难以克服的局限,所以人们开始关注羊支原体肺炎新型疫苗的研究。论文就羊支原体肺炎的病原学、药物治疗、疫苗研制,羊肺炎支原体的致病性和致病机制、主要抗原和抗原基因等方面的研究进行了阐述。

马山黑山羊支原体肺炎病原的鉴定

为了了解马山黑山羊支原体肺炎的病原,给马山黑山羊支原体肺炎的防控提供依据,本研究采用形态学观察、生化特性、生长抑制、PCR扩增测序和动物致病性试验对从马山黑山羊支原体肺炎病原中分离到的菌株进行鉴定,并进行药物敏感试验。鉴定结果表明马山黑山羊支原体肺炎的病原为绵羊肺炎支原体。药物敏感试验结果表明其对壮观霉素、卡那霉素、庆大霉素、阿米卡星、林可霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明、氟苯尼考高度敏感。

中国美利奴羊不同MBL型个体感染绵羊肺炎支原体的免疫应答分析

为探讨中国美利奴羊不同甘露(聚)糖结合凝集素(MBL)型个体感染绵羊肺炎支原体的免疫应答变化,对4种不同MBL型个体进行MBL水平测定,选择其中20只作为对照组,50只为试验组,在相同饲养条件下试验组人工感染绵羊肺炎支原体,分别在攻毒前1d(-1d)、攻毒后1d(1d)、1周(7d)、2周(14d)、3周(21d)用ELISA方法定量分析血清中TNF-α、IFN-γ、补体C1、C3水平。结果显示,A型和B型其MBL浓度较低,C型MBL浓度较高,与对照组相比,在攻毒后1周,A型和B型IFN-γ表达显著降低(P<0.05),攻毒后2周,补体C3表达显著降低,TNF-α升高显著(P<0.05);与A型和B型相比,在攻毒后1周,C型IFN-γ表达增加(P<0.05),在攻毒后2周,补体C3表达增加、TNF-α显著降低(P<0.05),补体C1各组均不显著。结论:低血清MBL浓度与绵羊支原体肺炎有一定的相关性,不同基因型之间其TNF-α、IFN-γ、补体C1、C3水平有差异,低浓度MBL绵羊更易发生比较严重的炎症反应。

丝状支原体山羊亚种FJ-GT株的分离和鉴定

为明确福建省某羊场发生的疑似山羊传染性胸膜肺炎病例的病原,对肺组织的病原进行分离培养和纯化,通过生化试验和特异性PCR方法进行鉴定,用16S r RNA通用引物对分离株进行克隆测序。将分离菌株命名为FJ-GT。结果显示菌落呈典型的油煎蛋状,中心有棕褐色突起;分离株能发酵葡萄糖,不能水解精氨酸,不分解尿素,血细胞吸附试验呈阴性,胆固醇需要试验、美兰还原反应和氯化四氮唑还原反应均呈阳性,溶血试验为β溶血;PCR结果扩增出丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri,Mmc)特异大小为394 bp的目的片段;菌株16S r RNA序列与丝状支原体山羊亚种标准株PG3的序列比较,同源性为99.5%。鉴定结果表明本次分离到的支原体为丝状支原体山羊亚种。本研究首次从病原学角度证明了福建省存在由丝状支原体山羊亚种引起的羊支原体性肺炎,对福建省羊支原体性肺炎的诊断和有效防控具有重要的指导意义。

绵羊支原体肺炎中不同甘露(聚)糖结合凝集素基因型对肺组织病变的影响

为建立不同甘露(聚)糖结合凝集素(MBL)基因型绵羊支原体肺炎的动物疾病模型,本研究选择MBL外显子1中4种不同基因型共32只绵羊作为试验组,6只健康羊作为对照组,在人工感染绵羊肺炎支原体3周后全部迫杀,取肺脏组织做病理切片,以组织病理学评分确定肺部的炎症反应程度。不同MBL型绵羊的肺脏呈现不同程度病理改变,组织病理学评分结果为MBL A型和B型平均分为18.3和19.1,表现为重度病变;MBL D型平均分为12.3,为中度病变;MBL C型平均分为8.9,为轻度病变。本研究以组织病理学评分方法客观量化了不同MBL基因型肺部炎症反应的严重程度,根据评分结果推测MBL A型和B型为易感型,C型为抗性型。本研究利用组织病理学评分方法对其肺炎程度进行量化评价,为筛选绵羊支原体肺炎抗性基因型提供依据。

山羊传染性胸膜肺炎支原体和绵羊肺炎支原体对抗菌药物敏感性的研究

测定了环丙沙星、氧氟沙星、单诺沙星、红霉素、罗红霉素、泰乐菌素、泰妙菌素、四环素等8种药物对羊肺炎支原体两个标准株Y 98和Y goat的体外抑菌浓度以及红霉素与氧氟沙星、泰乐菌素对Y goat和四环素与氧氟沙星、泰乐菌素对Y 98的联合药敏作用。结果表明,这8种抗菌药物对Y goat和Y 98的MIC(μg/mL)分别为:环丙沙星0.223、0.00223,氧氟沙星0.281、0.0140,单诺沙星0.136、0.0140,红霉素0.0218、无效,罗红霉素0.0327、无效,泰乐菌素0.0422、0.0390,泰妙菌素0.0217、0.0520,四环素0.195、0.0520。红霉素与氧氟沙星的联合药敏指数为1,是相加作用;红霉素与泰乐菌素对Y goat的联合药敏指数为1.5,是无关作用;四环素与氧氟沙星、泰乐菌素对Y 98的联合药敏试验指数均为0.375,是协同作用。

山羊支原体肺炎的CT影像分析

旨在研究羊感染肺炎支原体后胸部CT影像学特征。将20只山羊分为2组,对照组5只、试验组15只,试验组通过气管注射感染5 mL绵羊肺炎支原体(1×10^(7) CCU·mL^(-1))人工诱发山羊支原体肺炎,对照组注射等体积生理盐水。感染后观察两组羊的临床症状,在感染后第0、7、14、21、28天对两组羊胸部进行CT扫查,分析支原体肺炎的CT影像学特征。感染后第29天剖杀羊,观察肺部病理解剖变化。取病变组织制备石蜡切片,观察组织病理学变化。结果显示:试验组山羊感染肺炎支原体后表现出呼吸道感染症状,体温升高,咳嗽,流浆液性或脓性鼻液。胸部CT影像主要表现为片状磨玻璃密度影,网格状阴影,多见双侧肺叶病变,好发于右前叶,以间质性肺炎伴发支气管肺炎为主,其中,重症羊多见空气支气管征,个别羊见胸膜增厚影。对照组临床症状和胸部CT影像在感染前后未见明显差异和异常。综上表明,CT影像诊断技术有利于羊支原体肺炎的早期诊断,并有助于疾病转归的判断。

绵羊肺炎支原体毒力相关基因预测与分析

为了预测和分析绵羊肺炎支原体中重要的毒力相关基因,试验采用Blast及DNAStar等分析工具,通过对绵羊肺炎支原体SC01株全基因组所有864个CDS进行同源比较,预测和分析绵羊肺炎支原体中重要的毒力相关基因。结果表明:绵羊肺炎支原体具有至少9个黏附相关基因,编码参与甘油代谢及产生H2O2的所有基因,包含多个溶血素、核酸酶及蛋白酶的基因。

羊支原体性肺炎两标准株对抗菌药物敏感性的研究

本实验测定了环丙沙星、氧氟沙星、单诺沙星、红霉素、罗红霉素、泰勒菌素、泰妙菌素、四环素等8种药物对羊肺炎支原体两个标准株Y98和Y-goat的体外抑菌浓度以及红霉素与氧氟沙星、泰勒菌素对Y-goat和四环素与氧氟沙星、泰勒菌素对Y98的联合药敏作用。对羊肺炎支原体两个标准株对抗菌药物的敏感性进行了分析。

都兰县宗加镇西西羊场绵羊肺炎支原体的诊断

都兰县宗加镇西西羊场死亡绵羊采集肝脏和肺脏进行组织学检测、细菌学检测、绵羊肺炎支原体检测。结果:组织学检测和细菌学检测未检出致病菌,肺组织进行绵羊肺炎支原体PCR检测为阳性。

贵南县贵德黑裘皮羊传染性胸膜肺炎的血清学诊断

用间接血凝试验对贵南县贵德黑裘皮羊品种资源保护场的99份黑藏羊血清进行了绵羊肺炎支原体抗体检测。结果:检出阳性血清26份,阳性率26.26%。

绵羊肺炎支原体GZ-WN株感染不同品种羊的组织病变与病原核酸载量差异的研究

为探究绵羊肺炎支原体(Mo)致不同品种羊感染及病原核酸载量的差异,本研究利用Mo贵州威宁(GZ-WN)株分别感染5个品种羊,感染后死亡或迫杀后观察各组织的剖检病变,经荧光定量PCR检测各组织Mo的核酸载量,统计分析相同品种羊不同组织中Mo的核酸载量及不同品种羊相同组织中的核酸载量。结果显示,Mo可引起5个品种羊感染,死亡率呈现白山羊、黑山羊>麻羊>波尔山羊>湖羊;Mo感染可引起5个品种羊的肺脏、气管和胸腔出现不同程度的剖检病变,黑山羊肺脏粘连与白山羊气管黏液病变较其他品种羊严重;白山羊胸腔积液较其它品种羊严重,黑山羊次之;5个品种羊的心脏、肝脏、脾脏及肾脏均无肉眼可见病变。相同品种羊不同组织中Mo核酸载量的统计分析结果显示,相同品种羊的不同组织Mo核酸载量不同,各品种羊气管中的Mo核酸载量相对最高,极显著高于其他组织的核酸载量(p<0.01);其次是肺脏,而脾脏和肾脏中的Mo载量较低。不同品种羊相同组织中的Mo核酸载量统计结果显示,5个品种羊气管中Mo核酸载量最多的是波尔山羊,最少的是白山羊,且极显著低于其他品种羊(p<0.01);黑山羊肺脏中Mo核酸载量显著高于其他品种羊(p<0.05),湖羊Mo载量最少;心脏组织中,黑山羊Mo的核酸载量显著高于除麻羊以外的其他品种羊(p<0.05),载量最少的是白山羊;肝脏组织中,Mo核酸载量最多的是麻羊,显著高于除湖羊以外的其他品种羊(p<0.05),而白山羊最少;脾脏组织中,Mo核酸载量最多的是湖羊,显著高于其他品种羊(p<0.05),最少的是麻羊。肾脏组织中,Mo核酸载量最多的是湖羊,显著高于除波尔山羊外的其他品种羊(p<0.05),最少的是麻羊。上述结果表明,Mo感染相同品种羊存在组织病变和组织核酸载量的差异,且感染羊脏器组织Mo的核酸载量与组织病变程度和临床表现呈正相关;不同品种羊感染Mo后相同组织的Mo核酸载量也不同。Mo人工感染不同品种羊组织病变与核酸载量的差异研究国内外至今无相关报道,本研究为探究Mo对不同品种羊感染差异性机制提供参考依据。

甘肃地区绵羊支原体病原菌的分离培养

在甘肃省5个地区采集了100份绵羊血清样本,并对100份样品进行了血清学及病原菌分离培养试验。血清学检测初步鉴定为14份阳性,其中11份来自于同一地区。然后对两例疑似患病羊做病原分离鉴定以及微生物学诊断和PCR鉴定,并对病原菌进行革兰氏染色。本研究成功地从病羊身体中分离出细小、纤细的呈球形、双球形、线状、螺旋状、半月状和短杆状等形态的绵羊肺炎支原体。

圈养绵羊布鲁氏菌病支原体肺炎衣原体病的血清学检测

羊规模圈养和快速育肥,必然引起疫病发生、传播特点的变化,本文就某绵羊养殖场羊的布鲁氏菌病、支原体肺炎和衣原体病的感染状况进行了血清学检测,以便为因病设防提供依据。检测表明布鲁氏菌病、支原体肺炎和衣原体病的感染率分别为6.04%、26.22%和10.28%。

规模化羊场支原体感染的流行病学调查

试验通过血清学、PCR检测及病理剖检等方法对新疆南疆5个规模化羊场进行绵羊肺炎支原体感染和流行调查。血清学调查结果显示,5个规模化羊场绵羊肺炎支原体的感染率为52.07%。PCR检测结果显示,阳性率为30%。流行病学调查结果表明,5个规模化羊场绵羊均存在不同程度的肺炎支原体感染,其中沙雅县的感染最为严重。

互助藏羊肺炎病原绵羊肺炎支原体的PCR检测与分析

青海省互助某羊场藏系绵羊发生肺炎疾病,为了快速准确诊断藏羊肺炎发病的致病病原微生物,及时防控和治疗,采集病死绵羊肺样品,利用PCR分子生物学方法进行鉴定与生物信息学分析。经过分子鉴定,此羊场引发肺病的病原是绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae, MO);测序结果显示样品中鉴定的为同一株病原,鉴定的菌株的16S rRNA基因与参考序列EU265779的同源性达到99.86%。同时遗传进化树显示,鉴定的菌株与GenBank中的绵羊肺炎支原体聚成一大支,其关系最近,在进化角度证实此次鉴定的确实为绵羊肺炎支原体。结果表明,此羊场引发肺炎疾病的病原是绵羊肺炎支原体,提示要对羊群进行相关的病原学研究和流行病学调查,为针对性地对细菌性病原进行对症治疗提供参考。

羊支原体肺炎胶体金免疫层析检测方法的建立及应用

本试验应用绵羊支原体肺炎RPS 11基因重组蛋白为免疫抗原,制备鼠RPS11单克隆抗体,经间接ELISA特异性抗体效价检测,小鼠腹水单克隆抗体的效价均高于105。将制备的鼠RPS11单抗进行胶体金标记、纯化、质量鉴定及条件优化,建立羊支原体肺炎胶体金免疫层析检测方法。应用制备的免疫金标诊断试纸条对临床180份疑似血液样本进行检测,并与ELISA检测结果进行比较,结果显示,2种方法的阳性符合率为91.11%;特异性试验结果显示,试验诊断检测试纸条不与羊其他常见感染病原发生交叉特异性反应。因此,研制的金标诊断检测试纸条为羊支原体肺炎的早期诊断检测及流行病学调查奠定了良好的技术基础。

张家川回族自治县肉牛、绵羊支原体肺炎流行学调查

近年来,由于肉牛、绵羊支原体肺炎的传入,给张家川回族自治县肉牛、绵羊养殖产业造成巨大的经济损失。支原体肺炎,是由于感染支原体而引起的高度接触性传染病,主要以飞沫经呼吸道传播,也可通过直接接触传播。本研究采用ELISA方法检测肉牛、绵羊支原体肺炎在该地区的感染情况,较全面地反映其流行特点。肉牛、绵羊支原体肺炎在张家川回族自治县东部、中部、西部15个乡镇均有发病;肉牛的总感染率(8.98%)低于绵羊的总感染率(10.46%)。