多参数流式细胞术对急性髓系白血病微小残留病变与疾病复发的监测

本研究探讨微小残留病变(MRD)检测对急性髓系白血病(AML)治疗后疾病复发的预测作用。采用多参数流式细胞术(multiparameter flow cytometry,MPFC)分析AML治疗前白血病相关免疫表型(leukemia associated immunphenotypes,LAIP),检测诱导和巩固治疗后MRD(Post-Ind MRD,Post-Cons MRD)的水平。结果表明:122例初发AML患者中(AML-M3除外),有115例(94.3%)存在明确的LAIP,其中存在单一LAIP类型的患者15例(13.0%),存在2个或2个以上LAIP类型的患者100例(87.0%)。抗原跨系列表达者占40.9%,抗原跨阶段表达者、抗原过度表达者和抗原表达减弱或缺失者分别占20.9%、27.0%和34.8%。对41例诱导化疗后达完全缓解并进行2个疗程以上巩固治疗的AML患者MRD监测显示,Post-Ind MRD+的24例中,巩固治疗后18例复发;Post-Ind MRD-者17例中,巩固治疗后5例复发;Post-Ind MRD-患者和Post-Ind MRD+患者的平均无病生存时间(RFS)分别为43.05±6.25个月和12.48±1.69月(p<0.0001)。Post-Cons MRD+者18例均复发;Post-Cons MRD-者23例中仅5例复发。Post-Cons MRD-患者和Post-Cons MRD+患者的平均RFS分别为39.32±5.44月,9.72±1.51个月(p<0.0001)。结论:Post-Ind MRD水平和Post-Cons MRD水平均与AML患者的RFS密切相关,可作为AML治疗依赖的预后因素。

急性髓系白血病微小残留病的多色流式细胞术检测

目的:建立本实验室急性髓系白血病微小残留病检测的十色抗体组合方案,探讨其临床应用价值。方法:根据初发急性髓系白血病患者白血病细胞的抗原表达特征,采用多参数流式细胞术检测骨髓微小残留病,并将检测结果与骨髓细胞形态学和PCR结果进行比较,确定本实验室微小残留病检测的十色抗体组合方案。结果:分析郑州大学第一附属医院392例初诊急性髓系白血病患者的免疫表型特点,其中出现异常免疫表型的有357例(占91.07%)。异常免疫表型主要有跨系表达、跨阶段表达、抗原表达缺失或强度异常、其他异常表达。根据白血病细胞异常免疫表型特征建立的本实验室十色抗体组合方案应用于156例急性髓系白血病患者的微小残留病检测,阳性率(43.6%)高于骨髓细胞形态学(26.8%),与PCR检测结果符合度高(96.49%),且阳性者复发率(86.96%)显著高于阴性者(5.75%),可真实反映体内白血病负荷,提示病情变化。结论:多参数流式细胞术可检测出急性髓系白血病的多种异常免疫表型,根据白血病细胞抗原表达特点建立的本实验室十色抗体组合方案能很好地检测白血病微小残留病,预测复发。

免疫表型及非髓系分化抗原表达分析:对急性髓细胞白血病的诊断和预后判定有应用价值

目的探讨急性髓细胞白血病(AML)免疫表型和非髓系分化抗原表达特征及其临床应用价值。方法采用BD FACSCalibur流式细胞仪对109例AML患者进行免疫表型检测,分析AML免疫表型、非髓系分化抗原表达的特点及与预后疗效完全缓解(CR)率的关系。结果免疫表型显示AML细胞髓系分化抗原阳性率由高到低依次为CD13、CD117、CD33、MPO、CD15,其中CD117、CD13、CD33、MPO阳性率差异无统计学意义(P>0.05),并且均高于CD15阳性率(P<0.05);AML细胞非髓系分化抗原CD9、CD200、CD56、CD7阳性率依次降低,均高于CD25、CD19、CD2、CD10、CD4、CyCD79a、CyCD3阳性率(P<0.05);109例AML中CD7、CD34、CD56、CD25呈阳性的患者CR率均低于阴性患者(P<0.05);MPO、CD19呈阳性的患者CR率均高于阴性患者(P<0.05);伴AML1-ETO阳性表达的15例AML-M2b患者中CD56阳性组1疗程CR率低于CD56阴性组,CD56阳性组1年内复发率高于CD56阴性组(P<0.05)。结论免疫表型和非髓系分化抗原表达分析对AML的诊断及预后判定有重要临床意义,是AML诊疗的主要依据之一。

CD7、CD56、CD19在AML预后及MRD监测中的意义

目的探讨急性髓系白血病伴淋系抗原(Ly+-AML)表达者在预后及白血病微小残留病(MRD)监测中的临床意义。方法利用流式细胞术(FCM)对86例AML进行免疫分型,并以CD7、CD56、CD19为标志进行MRD检测。结果交叉表达现象在M5中出现频率最高,其次为M2;CD7表达在Ly+-AML中最常见;首次化疗形态学完全缓解(CR)率Ly+-AML病例低于Ly--AML病例;2年死亡率Ly+-AML病例高于Ly--AML病例;在MRD阳性检出率方面,CD7+AML组与Ly--AML组之间差异有统计学意义(P1<0.05),CD56+AML组与Ly--AML组之间差异有统计学意义(P2<0.05),CD19+AML组与Ly--AML组之间差异无统计学意义(P3>0.05)。讨论 Ly+-AML与Ly--AML有不同的临床特点,CD7+AML和CD56+AML预后差;CD7、CD56可以作为MRD监测的重要指标。

流式细胞术用于混合型白血病及急性未分化型白血病的诊断

选用美国ＢＤ公司的急性白血病免疫表型分析试剂盒，以流式细胞术方法对白血病患者进行细胞免疫表型分析，观察系属抗原表达情况，计算各系属Ｃａｔｏｖｓｋｙ积分，对混合型白血病和急性未分化型白血病进行鉴别诊断。结果：根据Ｃａｔｏｖｓｋｙ积分标准，淋系和粒系的各自积分≥２分者，诊断为混合型白血病，急性未分化型白血病各系属特异性抗原表达均为阴性。５１例临床白血病患者经流式细胞术分析，７例（１３．７２％）诊断为混合型白血病，１例（１．９６％）为未分化型白血病，同期形态学分析仅１例诊断为混合型白血病。提示，用流式细胞术和细胞免疫分型，可以对混合型白血病和急性未分化型白血病作出有效的鉴别诊断。

急性髓细胞性白血病微分化型(ANLL-M_0)的临床研究

目的 :探讨ANLL -M0 的细胞形态学、细胞化学、细胞免疫学特性和治疗 .方法 :骨髓涂片用Wright-Giemsa染色、POX染色、PAS染色、NES染色及NaF抑制试验 .骨髓液用流式细胞单克隆抗体直接免疫标记技术检测白血病细胞表面相关抗原分化群 ,TPA试验 .短期培养法直接法G显带分析白血病细胞染色体组型 .化疗、异基因外周血干细胞移植 (allo -PBSCT) .结果 :骨髓早期微分化细胞 (NEC)均 >90 % .POX均阴性 .PAS染色 2例弱阳性 ,2例阴性 .NES染色 2例阳性 ,均不受NaF抑制 .4例TPA强阳性 .免疫表型 2例CD+ 13 ,1例CD+ 15,1例CD+ 3 8,1例CD+ 11b,MPO 3例阳性 ,CD+ 19,CD+ 2 均阴性 ,2例CD+ 7.2例化疗达完全缓解 ,其中 1例作allo -PBSCT ,已存活 2 8月CCR和 19月 .结论 :细胞形态学、细胞化学、细胞免疫表型是诊断急性髓细胞性白血病微分化型的重要依据 ,用AML的治疗方案治疗ANLL -M0 有效 .

CD117在白血病细胞中的表达及意义

目的 :探讨细胞分化抗原CD117在各型白血病中的表达情况及意义。方法 :采用三色流式细胞术 ,CD45 /SSC双参数散点图设门方法 ,对 15 9例白血病患者骨髓或外周血白血病细胞免疫分型及CD117表达进行分析。结果 :急性髓系白血病患者表达率为 5 4% ,各型急性白血病M0 /M1 ( 75 % )、M4 /M5( 62 % )、M6 ( 10 0 % )、在M3中CD117表达较低为 14 %。慢性髓细胞白血病慢性期CD117为表现性 ,加速期、急变期患者CD117阳性细胞 >10 % ,急淋、慢淋CD117均为阴性 ,在双表型白血病中CD117亦达 5 0 %。结论 :CD117有助于淋巴系和髓系白血病的鉴别 ,同时在AML中CD117的表达与CD3

微分化型急性髓系白血病5例临床分析

目的:探讨流式细胞免疫分型在微分化型急性髓系白血病(AML-M0)诊断中的作用。方法:分析5例AML-M0患者的临床资料,观察其骨髓细胞形态学和细胞化学染色的特征以及与流式细胞仪骨髓细胞免疫分型的符合程度。结果:5例患者骨髓细胞学均报告原始及幼稚淋巴细胞增多,POX染色阴性,PAS染色部分阳性,流式细胞免疫分型髓系标志CD13、CD33、CD117至少1项阳性,而淋巴系统及巨核细胞系统抗原阴性。结论:骨髓细胞形态学、细胞化学染色结合骨髓细胞免疫表型和细胞遗传学检查是诊断AML-M0的主要依据,其中原始细胞的免疫分型对诊断AML-M0是非常必要的。

急性髓系白血病M_2微小残留病与细胞遗传学关系探讨

目的了解急性髓系白血病(AML)M2微小残留病(MRD)水平与细胞遗传学分组的关系。方法采用多参数流式细胞仪(MFC)进行白血病免疫分型,然后再根据白血病相关免疫表型(LAIP)选择抗体组合,完成对117例M2病人的MRD监测。结果将初次缓解AML-M2病人的微小残留病灶水平以5×10-4为界,在细胞遗传学预后较好组、预后中等组、预后较差组之间进行比较,发现三组MRD水平差异无显著性。动态监测中比较了45例患者1年内不同遗传学分组MRD从10-3水平后上升到10-2水平的发生率:预后较好组33%,预后中等组32%,预后较差组50%。结论MFC检测AML-M2病人MRD水平可用于评估治疗反应及预测复发。

急性髓系白血病微小残留病灶的检测

目的探讨流式细胞术（FCM）检测急性髓系白血病（AML）患者微小残留病灶的特点及临床意义。方法对60例急性髓系白血病（AML）患者采用CD45／SSC双参数散点图设门的方法进行四色流式细胞术微小残留病灶的动态监测。结果60例急性髓系白血病（AML）患者异常免疫表型的出现频率为：交叉系列抗原表达占35％，抗原缺失占55％，抗原过度表达占6．7％，不同期抗原共表达仅占3．3％。结论利用流式细胞术（FCM）能够对AML患者进行MRD动态监测，对治疗评估、预测预后及提示复发有重要意义。

异常免疫表型模式在急性髓系白血病微小残留检测中的应用

目的用多参数流式细胞术区分急性髓性白血病细胞与正常骨髓原始细胞免疫表型,建立急性髓系白血病细胞异常免疫表型模式和流式细胞术检测急性白血病微小残留病的方法。方法选择正常骨髓标本和急性髓性白血病患者骨髓标本,用流式细胞术分析髓系原始细胞免疫表型特征。并将标记抗原用于分析初发白血病细胞免疫表型,以寻找急性髓系白血病细胞异常免疫表型模式和确定用于微小残留病检测的抗体组合,更好地提示患者复发情况。并将流式细胞术结果、骨髓细胞形态学结果和PCR融合基因检测结果进行比较。结果分析20例非恶性血液系统恶性疾病患者的骨髓标本中髓系原始细胞的免疫表型,CD117阳性髓系原始细胞占2.51%±0.84%,CD34阳性髓系原始细胞占1.21%±0.83%,均有特定免疫表型特征。检测346例非早幼粒细胞白血病的急性髓性白血病患者免疫表型特征,异常免疫表型有314例,占90.80%,其中跨系表达抗原主要包括CD7(31.21%)、CD56(23.70%)、CD19(13.87%),跨阶段共表达的抗原包括CD34/CD64(2.89%)、CD14/CD117(1.16%),抗原表达强度变化或抗原缺失主要包括原始粒细胞不表达HLA-DR(4.62%)、CD13(7.51%)或CD33(12.14%),以及单核细胞不表达CD14(5.20%)。早幼粒细胞白血病患者31例,有异常免疫表型的仅占16.7%,低于非早幼粒细胞白血病的急性髓性白血病。根据白血病异常免疫表型模式,与PCR结果符合度高,能很好地提示白血病进展。结论急性髓性白血病细胞具有明显不同于正常来源原始细胞的异常免疫表型特征,适合采用流式细胞术进行微小残留病检测,并能反映体内白血病细胞负荷和病情变化。

膜表面免疫球蛋白M检测对慢性淋巴细胞白血病和套细胞淋巴瘤的鉴别价值

目的探讨在慢性淋巴细胞白血病(CLL)和套细胞淋巴瘤(MCL)中诊断和鉴别诊断中,膜表面免疫球蛋白M(sIgM)的应用及意义。方法回顾性收集2016年5月至2022年8月江苏省人民医院血液科收治的首次确诊的CLL患者420例、MCL患者67例的临床资料;CLL患者中,典型免疫表型CLL(tCLL)298例,不典型免疫表型CLL(aCLL)122例。采用多参数流式细胞术(MFC)检测所有患者肿瘤细胞中sIgM和公认的CLL诊断免疫标记物分化抗原簇(CD)200表达水平,并分析sIgM、CD200以及二者联合在aCLL和MCL中的鉴别诊断价值。结果sIgM高表达率在MCL(88.1%)、aCLL(23.0%)、tCLL(8.7%)中依次降低(χ^(2)=193.218,P<0.01);而CD200高表达率反之,在MCL(10.4%)、aCLL(78.7%)、tCLL(92.9%)中依次升高(χ^(2)=261.194,P<0.01)。sIgM对MCL鉴别于aCLL的灵敏度,特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度与CD200相近。sIgM联合CD200相比于单一的CD200或sIgM指标拥有更高的诊断灵敏度(98.5%)和阴性预测值(98.7%)。结论sIgM表达水平在CLL和MCL的诊断,尤其在aCLL和MCL的鉴别诊断中具有很好的临床应用价值。

多参数流式细胞术筛选急性早幼粒细胞白血病免疫表型特征

目的:多参数流式细胞术(MFC)分析筛选急性早幼粒细胞白血病(APL)免疫表型特征。方法:回顾性描述性研究。纳入2016年1月1日至2023年12月31日于河北燕达陆道培医院就诊的130例急性髓系白血病(AML)患者,其中经典型APL(cAPL)组44例,微颗粒变异型APL(APLv)组24例,非APL[包括NPM1突变AML(NPM1 mut AML)、AML伴KMT2A重排等]组62例。采用MFC免疫分型法分析和比较各组侧向散射光(SSC)中位表达强度(MEI)及其白血病细胞与自身成熟淋巴细胞MEI比值(T/L MEIR),CD34、髓过氧化物酶(MPO)、CD64和CD9的中位荧光强度(MDFI)及其上述参数白血病细胞与自身成熟淋巴细胞MDFI比值(T/L MDFIR)差异;绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价流式多参数模型对cAPL和非APL、APLv和非APL的鉴别诊断效能。结果:cAPL组SSC的MEI、T/L MEIR高于APLv组和非APL组(P均<0.05),且APLv组高于非APL组(P<0.05);cAPL组和APLv组CD34的MDFI均高于非APL组(P均<0.05),APLv组的CD34 T/L MDFIR高于非APL组(P<0.05);cAPL组和APLv组MPO、CD9的MDFI、T/L MDFIR均高于非APL组(P均<0.05);cAPL组CD64的MDFI、T/L MDFIR均高于非APL组(P均<0.05)。ROC曲线结果显示,SSC的MEI、CD64的MDFI、CD9的MDFI、SSC的T/L MEIR和CD9的T/L MDFIR诊断cAPL的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.932、0.816、0.893、0.960和0.894,诊断APLv的AUC分别为0.725、0.737、0.791、0.729和0.736,其对鉴别cAPL和非APL、APLv和非APL均有较好的诊断价值(P均<0.05)。结论:通过MFC方法可分析筛选APL的免疫表型特征,对cAPL、APLv和非APL患者进行鉴别诊断。

急性淋巴细胞白血病患者免疫表型分析

目的:探讨急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)的免疫表型特点。方法:运用流式细胞术及特异性单克隆抗体CD2,CD3,CD4,CD5,CD7,CD8,CD10,CD13,CD19,CD20,CD22,CD33,CD34,CD38,CD45,CD56,CD117,HLA-DR,sIg M,cyIg,cyCD79a,MPO和TdT对58例形态学诊断ALL患者进行免疫表型检测。结果:通过CD3、CD19、CD33和MPO的表达情况分出T-ALL 8例(13.79%),B-ALL 49例(84.48%),混合细胞白血病1例(1.72%)。B-ALL进一步根据CD10,CD20,cyIg,sIg M的表达情况分为早前B型5例(8.62%),普通B型34例(58.62%),前B型9例(15.52%),成熟B型1例(1.72%)。B-ALL异常细胞存在抗原跨系列表达、跨阶段表达、缺失表达。儿童ALL免疫分型及白血病相关免疫表型与成人ALL差异无统计学意义。结论:ALL的异常骨髓细胞有明显本系列特征、原始细胞标记和跨系表达,在此基础上应用多参数流式细胞仪可有效检测微小残留病变。

急性早幼粒细胞白血病微小残留病灶的检测

目的探讨急性早幼粒细胞白血病(APL)患者免疫分型与微小残留病灶的特点及临床意义。方法对30例急性早幼粒细胞白血病患者采用CD45/SSC双参数散点图设门方法进行三色流式细胞术免疫分型分析,多色单克隆技术检测微小残留病灶。结果 30例急性早幼粒细胞白血病(APL)主要阳性表达为CD33、CD117、CD13、CD38、MPO和CD11B(阳性表达率分别为100%、70.00%、76.67%、53.33%、76.67%、10.0%);HLA-DR和CD34阳性表达率分别为6.67%和30.0%。结论免疫分型在细胞形态学和细胞化学染色基础上对急性早幼粒白血病诊断与分型极为重要,同时对急性早幼粒细胞白血病的免疫分型的诊断结果更为客观准确。微小残留病灶的检测对白血病患者的复发能够提前预测,对于疾病的判断和预后至关重要。

髓系白血病转基因小鼠模型骨髓免疫表型分析

目的分析髓系白血病转基因小鼠模型的免疫表型分型特点。方法根据小鼠骨髓各系列分化抗原表达特性，结合多色流式细胞术分析5只髓系白血病转基因小鼠和10只BL6健康对照组小鼠的骨髓免疫表型分型特点，并通过细胞周期分析进一步确认细胞增殖情况。结果白血病转基因小鼠的骨髓细胞中Mac-1^＋Gr-1^＋细胞、C-Kit^＋细胞的表达率分别为（72．6±6．5）％、（20．5±4．8）％，明显高于健康对照组的（52．8±4．8）％、（2．1±0．3）％，差异有统计学意义（t值分别为6．66、12．66，P均〈0．01）；而B220^＋、CO3^＋、CD41^＋和Ter119^＋细胞的表达率分别为（2．7±1．1）％、（1．2±0．3）％、（1．2±0．6）％及（2．8±1．1）％，明显低于健康对照组的（20．2±2．1）％、（6．6±1．3）％、（4．7±1．1）％及（10．6±1．2）％，差异有统计学意义（t值分别为-17．63、-8．69、-6．30、-12．28，P均〈0．01）。细胞周期中的S期和G2／M期的表达率分别为（25．7±4．2）％和（21．1±4．2）％，明显高于健康对照组的（11．8±2．1）％和（8．9±1．8）％，差异有统计学意义（t值分别为8．59、7．98，P均〈0．01）。结论髓系白血病小鼠模型的髓系标志Mac-1、Gr-1及造血干祖细胞标志c-Kit的表达明显增高，而B淋巴细胞系标志（B220）、T淋巴细胞系标志（CD3）、巨核细胞系标志（CD41和红细胞系标志（Ter119）的表达明显受抑。

急性B淋巴细胞白血病儿童化疗后微小残留病灶免疫表型改变的分析

目的:分析儿童急性B淋巴细胞白血病(B-cell acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)化疗过程中首次微小残留病灶(minimal residual disease,MRD)免疫表型的变化规律及特点,为临床诊断及后续微小残留病的监测提供依据。方法:回顾性分析我院2013年1月至2018年4月收治的393例B-ALL患儿的免疫分型结果及诱导化疗第15天首次MRD数据。结果:(1)在393例白血病中,B-ALL相关特征性免疫表型的出现频率为:CD19+/CD10+/34+64.4%;CD19+/CD10+/34部分表达,15.5%;CD19+/CD34+/CD20+,58.5%;CD19+/CD10+/CD13+,13.2%;CD19+/CD10+/CD33+,5.9%;CD19+/CD10+/CD117+,0.7%;CD19+/CD10+/CD123+,50.1%;CD19+/CD10-/34±,5.9%;CD19+/CD10-/CD20-,2.5%;CD34bright,12.2%;(2)共有285例首次MRD检测结果呈阳性,有181例(63.5%)MRD检测结果至少有1个抗原荧光强度发生改变,其中出现一个抗原强度变化的为83例(29.1%),2个抗原荧光强度变化的为57例(20.0%),3个抗原荧光强度变化为31例(10.9%),4个及4个以上抗原荧光强度变化为10例(3.5%)。抗原荧光强度变化频率最高的依次为CD45、CD34、CD20;(3)共有7例患儿复发,复发时行免疫分型检测,其中4例与初发时有抗原荧光强度变化。结论:(1)儿童B-ALL远高于其他白血病类型,且具有独特的相关特征性免疫表型。初发B-ALL免疫分型结果不仅可完善白血病MICM分型,更是化疗后MRD监测的线索及客观依据;(2)在儿童B-ALL化疗过程中,免疫表型极有可能会发生变化,在后续的微小残留病灶检测过程中应注意对变化抗原的判断和追踪。

多参数流式细胞术在急性髓细胞白血病患者微小残留病监测中的临床应用及其研究进展

急性髓细胞白血病(AML)是一种具有高度异质性的血液系统恶性肿瘤,大部分AML成年患者经治疗可达到完全缓解(CR),然而相当一部分患者在3~5年内复发。由于微小残留病(MRD)与AML患者复发风险增加,以及生存期缩短有关,因此需要通过有效手段对AML患者进行治疗后MRD监测。多参数流式细胞术(MFC)是一种基于白血病相关免疫表型(LAIP)的MRD检测方法,具有高灵敏度、高性价比,以及实时、快速等优点,适用于绝大部分AML患者,被广泛应用于临床实践中。笔者拟就目前应用MFC监测AML患者MRD的原理及策略、优势及临床意义、面临的挑战及其临床应用的促进方法等进行综述。