骨髓增生异常综合征骨髓细胞凋亡与TNF-α和Fas／FasL系统关系的研究

目的:探讨TNF-α和Fas／FasL的表达及骨髓细胞凋亡与骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)发生发展的关系。方法:采用 ELISA法检测MDS患者骨髓单个核细胞培养上清液中TNF-α浓度,采用流式细胞术测定骨髓CD 34+细胞Fas、FasL的表达率和细胞凋亡率。结果:各型MDS患者骨髓单个核细胞培养上清液中TNF-α浓度和CD 34+细胞Fas、FasL的表达率均明显高于正常对照组(P< 0．01)。其中RA／RAS组的TNF-α浓度和CD 34+细胞Fas+表达率均明显高于RAEB和RAEB-t组(P<0．001),而RAEB与RAEB-t组组间无明显差异(P值分剐为0．115和0．239);RAEB和RAEB-t组细胞的CD 34+FasL+表迭率明显高于RA／RAS组(P值分别为0．001和0．010)。 RA／RAS和RAEB组的细胞凋亡率均高于对照组(P值均为0．000),而RAEB-t组的细胞凋亡率与对照组相近(P=0．216)。各型MDS患者 TNF-α浓度与CD34+Fas+表达率呈正相关(r=0．570,P=0．012)。而CD 34+细胞凋亡率与TNF-α浓度或CD 34+Fas+表达率之间均无直线相关关系(P值分别为0．103和0．091)。结论:MDS患者骨髓细胞的凋亡受多因素的调节,TNF-α与Fas／FasL系统介导的凋亡以及机体对其调控的失常参与了MDS骨髓无效造血的病理生理过程。

Fas-FasL和TNF-α介导的细胞凋亡及IL-8在老年慢性阻塞性肺疾病发病机理中的作用

目的探讨Fas/FasL和TNF-α介导的细胞凋亡及IL-8的分泌在老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病机制中的作用。方法对40例老年COPD患者发作期与缓解期及30例健康老人(对照组)外周血可溶性Fas、TNF-α及IL-8水平的观察。结果发现COPD外周血中可溶性Fas、TNF-α及IL-8均高于健康对照组(P<0.05,P<0.05,P<0.01)。结论Fas和TNF-α介导老年COPD患者的免疫细胞凋亡,Fas/FasL刺激IL-8的分泌,在老年COPD发病及其发生发展进程中起重要作用。

黑逍遥散调控Fas/FasL/Caspase-8/Caspase-3信号通路对AD大鼠神经元细胞凋亡的影响

目的:探究黑逍遥散调控肿瘤坏死因子受体超家族成员6(Fas)/Fas配体(FasL)/胱天蛋白酶-8(Caspase-8)/胱天蛋白酶-3(Caspase-3)信号通路干预神经元细胞凋亡防治阿尔茨海默病(AD)的作用及机制。方法:选用4月龄SPF级SD雄性大鼠90只,随机选取10只作为空白组,10只作为假手术组(双侧海马各注射生理盐水1μL),其余70只双侧海马各注射β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)1μL溶液复制AD模型。筛选出造模成功的大鼠50只,随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组(0.45 mg·kg^(-1))及黑逍遥散高、中、低剂量组(15.30、7.65、3.82 g·kg^(-1))。连续灌胃42 d,1次/d。原位末端标记法(TUNEL)染色观察大鼠皮层和海马神经元细胞凋亡情况,免疫组化法(IHC)检测大鼠海马组织B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Fas、FasL、Fas相关死亡结构域蛋白(Fadd)mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Fas、FasL、Fadd、Caspase-3、切割型(cleaved)Caspase-3、Caspase-8、cleaved Caspase-8相关蛋白的表达。结果:与空白组和假手术组比较,模型组大鼠皮层和海马区细胞凋亡率显著升高(P<0.01),Bax水平显著增高(P<0.01),Bcl-2水平显著下调(P<0.01),海马组织Fas、FasL、Fadd mRNA表达显著提高(P<0.01),Fas、FasL、Fadd、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-8蛋白表达显著增高(P<0.01);与模型组比较,盐酸多奈哌齐组及黑逍遥散高、中剂量组大鼠皮层和海马区细胞凋亡率明显下降(P<0.05,P<0.01),Bax水平显著降低(P<0.01),Bcl-2水平显著提高(P<0.01),海马组织Fas、FasL、Fadd mRNA表达明显下调(P<0.05,P<0.01),Fas、FasL、Fadd、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-8蛋白表达显著下调(P<0.01);黑逍遥散低剂量组大鼠皮层和海马区细胞凋亡率明显下降(P<0.05,P<0.01),Bcl-2表达水平显著降低(P<0.01),海马组织FasL、Fadd mRNA表达明显下调(P<0.05),Fas、FasL、Fadd、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-8蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论:黑逍遥散可保护AD大鼠皮层和海马区神经元细胞凋亡,其作用机制可能与抑制Fas/FasL/Caspase-8/Caspase-3信号通路介导的细胞凋亡有关。

骨髓增生异常综合征患者骨髓凋亡细胞类型及TRAIL表达水平研究

目的探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓细胞凋亡累及的细胞类型,以及其与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)表达水平的关系。方法用流式细胞术检测骨髓有核细胞总凋亡率、CD3+、CD3+4细胞凋亡率和TRAIL表达水平,运用CellQuest及ModFit软件对所测得结果进行数据分析。结果MDS患者骨髓有核细胞总凋亡率为(17.39±10.17)%,CD+3、CD3+4细胞凋亡率分别为(20.41±11.61)%、(21.32±12.17)%,TRAIL表达水平为(7.55±3.10)%,均显著高于正常对照组[(5.88±1.38)%、(5.47±1.65)%、(4.92±2.11)%、(1.26±0.46%)],P<0.05。早期MDS有核细胞总凋亡率为(21.95±9.44)%、TRAIL表达水平为(9.00±2.47)%,均高于进展期[(8.26±2.27)%、(4.65±2.04)%],P<0.05。骨髓有核细胞总凋亡率与骨髓原始细胞数呈负相关(r=-0.65,P<0.05),与TRAIL表达水平呈正相关(r=0.85,P<0.05)。结论MDS存在过度凋亡,凋亡累及早期造血细胞和淋巴细胞;TRAIL可能是引起凋亡增加的原因之一。

骨髓增生异常综合征骨髓细胞凋亡与肿瘤坏死因子α的研究

目的 探讨骨髓增生异常综合征 (MDS)患者骨髓细胞凋亡及髓内肿瘤坏死因子α(TNFα)水平 ,初步揭示MDS无效造血机制。方法 采用TUNEL法检测 2 6例MDS及 10例正常健康对照组新鲜骨髓单个核细胞 (BMMNC)凋亡 ,RT PCR探讨BMMNC中TNFαmRNA表达 ,ELISA法测定骨髓上清液TNFα蛋白水平。结果 早期MDS(RA +BM原始细胞 <10 %RAEB)患者的骨髓细胞凋亡率明显增加 ,进展期MDS(BM原始细胞 >10 %RAEB +RAEB t)骨髓细胞凋亡率与对照组无显著差异 ,凋亡累及各阶段幼稚粒细胞及有核红细胞。早期MDS细胞凋亡程度与骨髓增殖程度有关。 5 8% (15 / 2 6 )MDS表达TNFαmRNA ,77% (2 0 / 2 6 )MDS髓内TNFα蛋白升高 ,早期MDS髓内TNFα水平与凋亡呈正相关 ,并于外周血血红蛋白 (Hb)量呈负相关。结论 早期MDS骨髓细胞凋亡增加 ,随病情演变 ,凋亡逐渐下降 ,这可能与异常克隆逃逸凋亡有关 ,髓内TNFα增加是骨髓细胞发生凋亡的机制之一。

骨髓增生异常综合征患者骨髓细胞肿瘤坏死因子α的检测及意义

目的:探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓细胞肿瘤坏死因子α(TNFα)水平,初步揭示MDS无效造血机制。方法:采用RT-PCR法探讨骨髓单个核细胞(BMMNC)中TNFα mRNA表达。应用ELISA法测定骨髓上清液TNFα蛋白水平。结果:58%的MDS表达TNFα mRNA,MDS患者髓内TNFα蛋白升高。早期患者髓内TNFα水平与凋亡呈正相关并与血红蛋白(Hb)呈负相关。结论:MDS患者髓内TNFα增加是骨髓细胞发生凋亡的机制之一。

再生障碍性贫血患儿骨髓细胞凋亡与肿瘤坏死因子-α和凋亡相关因子/凋亡相关因子配体系统的关系

目的探讨TNF-α和Fas/FasL系统的表达及骨髓细胞凋亡与再生障碍性贫血(AA)的关系。方法AA组30例分为重型AA组(SAA)和慢性型AA组(CAA),采用酶联免疫吸附法检测各组患儿骨髓单个核细胞培养上清液中TNF-α水平,采用流式细胞术测定骨髓CD34+细胞Fas、FasL表达率及细胞凋亡率。结果AA患儿骨髓单个核细胞培养上清液中TNF-α水平[SAA(27.9±8.20)ng/L;CAA(23.6±6.78)ng/L]显著高于对照组(t=3.432P<0.01);CD34+细胞Fas、FasL表达率分别为SAA(25.88±5.75)%,(5.87±0.56)%,CAA(23.51±3.13)%,(6.73±0.98)%,AA患儿CD34+细胞Fas表达率显著高于对照组(t=3.446P<0.01),但CD34+细胞FasL的表达率与对照组比较无显著性差异(t=1.083P>0.05);细胞凋亡率SAA为(24.6±9.56)%,CAA(20.9±7.32)%,显著高于对照组(t=3.492,3.458Pa<0.01);但SAA与CAA组间TNF-α水平,CD34+细胞Fas、FasL表达率,细胞凋亡率比较均无显著性差异(Pa>0.05)。AA患儿TNF-α与CD34+Fas+表达率呈正相关(r=0.542P<0.05)。骨髓CD34+细胞的凋亡率与CD34+Fas+表达率间也呈正相关(r=0.602P<0.05),但TNF-α表达水平与骨髓CD34+细胞的凋亡率间无明显相关性(r=0.086P>0.05)。结论TNF-α和Fas/FasL系统介导的凋亡参与了AA患儿骨髓造血干细胞的凋亡过程。

As_2O_3/TRAIL诱导的骨髓增生异常综合征原始细胞系MDS-L的生物学变化

目的 观察骨髓增生异常综合征 (MDS)髓系原始细胞系MDS L经不同剂量和不同时间的三氧化二砷 (As2 O3 )和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)处理后的生物学变化。方法 体外培养的MDS L细胞经 9种不同浓度的药物及药物组合 (As2 O3 :1,2 ,5mmol/L ;TRAIL :10 0 ,30 0 ,5 0 0 μg/L ,As2 O3 1mmol/L +TRAIL 10 0 μg/L ;As2 O3 2mmol/L +TRAIL 30 0 μg/L ;As2 O3 5mmol/L +TRAIL 5 0 0 μg/L)处理 ,在 2 4 ,4 8和 72h后收获细胞。对未经药物处理的细胞和药物处理后收获的细胞均进行流式细胞仪检测细胞凋亡 ;药物处理 2 4h后的细胞再经体外培养 18d后作形态学观察 ,同时以流式细胞仪检测CD34+ 细胞变化 ,检测药物的促分化作用 ;RT PCR检测P15 ink4b mRNA表达 ;甲基化特异性PCR(MethylationspecificPCR ,Msp)检测P15 ink4bDNA甲基化状态 ;DAB免疫酶标检测P15 ink4b蛋白水平表达。结果 不同的药物组合均可诱导细胞发生凋亡 ,药物处理 4 8h凋亡达高峰 (约 2 5 % ) ,72h时仍有约9%的细胞凋亡。药物处理 (尤其是As2 O3 +TRAIL)导致细胞明显的形态学分化 ,而TRAIL能显著降低CD34+ 细胞比率。未经处理的MDS L细胞基本不表达P15 ink4b,并伴有明显的DNA甲基化。药物处理后P15 ink4b表达增强 。