MEIS1表达对胃癌根治术后患者生存期的影响及其在预后评估中的价值

目的:探讨不同表达水平骨髓嗜病毒整合位点1 (MEIS1)胃癌患者的术后生存情况,分析MEIS1表达在胃癌患者预后评估中的预测价值。方法:在胃癌生存队列中选取215例行胃癌根治术的患者。免疫组织化学染色法检测胃癌和癌旁正常组织中MEIS1表达水平。采用χ^(2)检验或Fisher确切概率法分析MEIS1表达水平与患者临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,采用Log-rank检验比较MEIS1高表达组和MEIS1低表达组胃癌患者生存差异;采用多因素Cox比例风险回归模型计算风险比(HR)及其95%置信区间(CI),评价MEIS1表达水平与胃癌患者生存的关系。结结果果:免疫组织化学染色,MEIS1在胃癌组织中表达水平降低;单因素分析,MEIS1高表达患者比MEIS1低表达患者总生存期长(P=0.049),预后更好;多因素Cox比例风险回归分析,MEIS1低表达和TNM分期高是胃癌患者预后的独立危险因素(HR=1.577, 95%CI:1.011~2.460, P=0.045;HR=2.709, 95%CI:1.708~4.297, P<0.001)。结结论论:MEIS1低表达胃癌患者术后总生存期短,MEIS1有望成为胃癌根治术后患者预后评估的生物标志物。

Meis1与VEGFR-2在早期肾癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨髓系亲嗜性白血病病毒整合位点1(myeloid ecotropic viral integration site 1,Mesi1)及血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR-2)在人早期肾癌中表达的临床意义及相关性。方法:收集中南大学湘雅医学院附属海口医院2005年4月至2018年9月间手术切除后的肾癌及癌旁组织标本,其中石蜡组织80对,新鲜冻存组织15对。利用real-time PCR及免疫组织化学技术分别检测肾癌组织中Meis1和VEGFR-2的mRNA和蛋白质表达水平,并分析其与患者的临床病理学参数及预后的相关性。结果:肾癌组织中Meis1和VEGFR-2的mRNA和蛋白质表达水平均较癌旁组织低,差异均有统计学意义(均P<0.01),并且Meis1与VEGFR-2在表达量上呈正相关(r=0.681,P<0.01)。患者的临床病理学相关参数分析显示:Meis1表达的阳性率与肾癌的病理类型有关(P<0.01),Meis1和VEGFR-2表达的阳性率与肾癌患者性别、年龄、T分期等均无关,差异均无统计学意义(均P>0.05),但其与患者的预后明显有关(P<0.05)。Cox回归分析显示:Meis1是影响患者预后的独立因素(95%CI:0.08~1.85,P<0.05)。结论:早期肾癌组织中Meis1和VEGFR-2的mRNA和蛋白质表达水平明显降低,在肾癌中可能可作为肿瘤抑制因子来影响肾癌的发生、发展,Meis1可作为预测肾癌患者预后的生物标志物。

MEIS1在子宫内膜样腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨骨髓嗜病毒整合位点1(MEIS1)在子宫内膜样腺癌中的表达及其临床意义。方法选取45例子宫内膜样腺癌患者的病变组织(内膜癌组),以及12例非内膜病变患者的正常子宫内膜组织(对照组),采用免疫组织化学染色检测2组组织中MEIS1蛋白的阳性率,分析内膜癌组MEIS1蛋白与临床病理特征、雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)间的关系。结果子宫内膜样腺癌组织中,MEIS1蛋白主要表达于腺上皮细胞胞核中。内膜癌组的MEIS1蛋白阳性率高于对照组(P<0.05)。子宫内膜样腺癌组织中,MEIS1的表达与腺癌细胞分化级别、分期、肌层浸润深度、淋巴结转移、脏器转移等均无关(P均>0.05),与ER、PR的表达有关(P均<0.05)。结论MEIS1在子宫内膜样腺癌中呈高表达,并与ER、PR的表达相关,可能参与了子宫内膜样腺癌的发生机制。

胃癌中异位病毒整合位点-1的表达及临床意义

目的探讨异位病毒整合位点-1(EVI-1)在胃癌中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学法检测胃癌组织和癌旁组织中EVI-1蛋白的表达情况;采用蛋白质印迹法(Western blot)和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应,分别检测人胃癌细胞株AGS、NCI-N87、MGC-803、HGC27和永生化正常胃黏膜细胞株GES-1中EVI-1的3个剪切变异体蛋白(MDS1/EVI-1、EVI-1、EVI-1△324)和EVI-1 mRNA(除MGC-803)的表达水平。结果胃癌组织中EVI-1蛋白的阳性表达率为76.7%(46/60),明显高于癌旁正常胃组织的41.7%(25/60),差异有统计学意义(P﹤0.01)。胃癌细胞中MDS1/EVI-1和EVI-1蛋白相对表达量均高于正常胃黏膜上皮细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.05);MGC-803、AGS胃癌细胞中EVI-1△324蛋白相对表达量也高于正常胃黏膜上皮细胞,但差异无统计学意义(P﹥0.05)。HGC27、NCI-N87、AGS细胞株中EVI-1 mRNA相对表达量均高于GES-1细胞株,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论胃癌中EVI-1蛋白(除EVI-1△324亚型)和EVI-1 mRNA的表达均较癌旁正常胃黏膜组织高。EVI-1基因可能是潜在的胃癌原癌基因,尚有待进一步深入研究。

EVI1在急性髓系白血病中的研究进展

急性髓系白血病(AML)是血液系统常见的恶性疾病,伴EVI1高表达患者占成人AML的8%~10%。研究表明EVI1高表达在AML的治疗与预后中发挥重要作用。近些年来研究人员不断揭示EVI1的结构与作用,但其介导AML的机制尚未完全明确。系统探讨EVI1在AML中的作用可为EVI1高表达AML患者的精准化治疗提供有益参考。

地西他滨治疗亲嗜性病毒整合位点1高表达的慢性髓细胞性白血病分子机制研究

目的探索亲嗜性病毒整合位点1(ecotropic viral integration site 1,EVI1)高表达对K562细胞的影响,及DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨治疗EVI1高表达的慢性髓细胞性白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)的分子机制。方法使用逆转录病毒载体转染K562细胞,检测空载体组和EVI1组微小RNA(micro RNA,miR)-9表达水平、miR-9启动子序列甲基化程度及细胞克隆数。使用地西他滨和溶媒处理EVI1高表达的K562细胞,检测miR-9表达水平、miR-9启动子序列甲基化程度、细胞克隆数及细胞周期。结果与空载体组相比,EVI1组miR-9相对表达量显著降低[(0.0021±0.0003)比(0.0034±0.0003),P<0.01],miR-9启动子序列甲基化程度显著增加,细胞增殖能力增强[(232.67±6.81)比(124.67±5.03),P<0.01]。地西他滨组较溶媒组miR-9表达水平显著升高[(0.0023±0.0003)比(0.0007±0.0001),P<0.01],miR-9启动子甲基化程度显著降低[(44.67±6.57)%比(90.22±4.29)%,P<0.01],细胞增殖能力减弱[(173.67±12.06)比(219.33±10.26),P<0.01],G_(0)/G_(1)细胞比例增高[(59.25±1.20)%比(50.45±1.06)%,P<0.05]。结论EVI1通过增加miR-9启动子甲基化程度,下调miR-9表达,可能是EVI1参与CML的机制之一。地西他滨可逆转EVI1高表达所致的miR-9甲基化程度,肿瘤细胞克隆增殖能力得以遏制,为其用于EVI1高表达的CML治疗提供理论依据。

EVI1基因阳性的儿童急性髓细胞性白血病生物学及临床特征分析

目的研究EVI1基因在急性髓细胞性白血病(AML)患儿中的表达及EVI1基因阳性AML患儿的临床特征。方法收集分析EVI1阳性患儿的临床资料;采用RT-PCR法和实时荧光定量聚合酶链反应法(RQ-PCR)定性和定量测定EVI1的表达;流式细胞术检测骨髓细胞免疫表型;多参数流式细胞术(MFC)监测微小残留白血病(MRD);同时对染色体进行检查。结果 241例AML患儿中,有33例EVI1基因表达呈阳性(13.7%);与EVI1基因表达阴性的AML患儿相比,EVI1阳性AML患儿的初诊年龄、外周血白细胞计数、血红蛋白含量和血小板计数差异均无统计学意义(均P>0.05),但女性患儿比例增加(P<0.05);EVI1表达改变与临床缓解和MRD改变不同步,部分患儿EVI1转阴滞后于临床缓解和MRD转阴,而部分患儿临床未缓解或MRD仍呈阳性,但EVI1已转阴;EVI1常与其他融合基因共表达;免疫表型分析提示EVI1阳性AML患儿高表达CD33(100%)、CD38(88%)和HLADR(76%);15例患儿发现染色体结构或数目异常;EVI1表达阳性AML患儿第1疗程完全缓解(CR)率明显低于EVI1表达阴性患儿(P<0.05)。结论 EVI1基因表达阳性的AML患儿近期预后差;EVI1基因在AML的病程中活化不是孤立的,而是与其他基因相互作用或染色体异常的结果,其活化机制及功能还需进一步研究。

亲嗜性病毒整合位点1负向调控微小RNA-9与急性髓系白血病发病机制研究

目的探讨亲嗜性病毒整合位点1（EVI1）对微小RNA－9（miR－9）的调控作用和机制及对急性髓系白血病细胞增殖能力的影响及机制，研究EVI1参与髓系白血病的分子机制.方法首先使用MSCV－EVI1及MSCV－vector制备反转录病毒并感染Uocm1细胞系，比较EVI1过表达后miR－9表达水平，miR－9启动子序列甲基化程度及EVI1过表达对细胞周期和克隆形成能力的影响；然后使用去甲基化药物地西他滨以0.1 μmol/L浓度处理EVI1过表达的Uocm1细胞，以逆转miR－9启动子过度甲基化，研究恢复miR－9表达对细胞周期和增殖能力的影响.结果相对于空载体组，过表达EVI1可以显著下调miR－9表达水平：对照组相对表达量为0.006±0.001，而EVI1过表达组相对表达量为0.004±0.000 （t＝4.09，P〈0.05），并且miR－9启动子序列出现过度甲基化现象；EVI1过表达组的Uocm1细胞较空载体组Uocm1细胞克隆形成能力增强（对照组122.3±7.8，空载体组45.7±6.1）（t＝－13.44，P〈0.01），EVI1过表达组细胞中S期、G2期比例增高（均P〈0.05），而G0/G1期细胞比例降低（P〈0.05）。相对于对照组，0.1 μmol/L地西他滨可显著降低EVI1引起的miR－9启动子过度甲基化，恢复miR－9的表达（P〈0.01）；G0/G1期细胞比例在对照组为（48.25±2.19）%，地西他滨组为（65.9±2.90）%（t＝－6.85，P〈0.05）；对照组细胞集落数为123.40±8.12，而地西他滨组仅为51.00±10.01（t＝9.59，P〈0.01），提示地西他滨可通过G0/G1期阻滞遏制细胞增殖.结论EVI1通过诱导miR－9启动子过度甲基化下调miR－9表达可能是EVI1参与髓系白血病的机制之一；地西他滨能降低miR－9启动子甲基化水平，逆转EVI1对miR－9的负向调控，为其用于EVI1高表达急性髓系白血病的治疗提供了理论依据。

三氧化二砷影响EVI1基因调控造血转录因子的体外研究

目的:观察三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)在体外影响反转录病毒整合位点1基因(ecotropic viral integration site-1,EVI1)基因对造血转录因子的调控作用。方法:实验选取EVI1高表达的急性髓系白血病细胞株THP-1,利用健康成人外周血单个核细胞作为对照,通过反转录实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RFQ-PCR),检测EVI1基因及造血转录因子GATA1、GATA2、RUNX1、MPO、LMO2、CMYB、PU.1和SCL的m RNA相对表达量。分别以1μmol/L、3μmol/L、5μmol/L的ATO溶液处理THP-1细胞株后,再通过反转录RFQ-PCR检测EVI1基因及造血转录因子的m RNA相对表达量。结果:通过反转录RFQ-PCR检测证实,存在EVI1基因的THP-1细胞中GATA2和CMYB基因的表达上调,而GATA1、RUNX1、MPO、LMO2、PU.1及SCL基因的表达水平下调。ATO对EVI1基因的下调作用具有浓度与时间依赖性,并对其他造血转录因子进行调控。结论:通过体外研究发现,高表达EVI1基因的THP-1细胞有GATA2基因的表达上调,同时存在其他造血转录因子的表达异常,与促进原始细胞增殖及髓系、红系的分化成熟受抑密切相关。ATO可特异性地下调EVI1基因的表达,并抑制GATA2转录因子的激活。

反转录病毒结合位点-1基因在急性淋巴细胞性白血病中的研究进展

作为原癌基因,反转录病毒结合位点-1（EVI1）基因在急性髓系白血病（AML）中可因染色体易位或其他遗传学异常而高表达,最终导致预后较差.近年来,EVI1基因在急性淋巴细胞性白血病（ALL）中的研究逐渐增多,尤其在儿童ALL中的研究较多.EVI1基因高表达亦提示预后不良,且与年龄密切相关,但是其与混合谱系白血病（MLL）基因重排及BCR-ABL基因重排的关系有待进一步研究.研究ALL中EVI1基因的表达特点以及探索相应的靶向治疗药物是今后的重要研究方向.

PDZ连接激酶诱导自噬对肺癌细胞顺铂化疗敏感性的影响研究

目的探究PDZ连接激酶(PBK)对肺癌细胞顺铂化疗敏感性的作用及其相关的作用机制。方法A549细胞用顺铂处理或者是转染si-NC、si-PBK、si-亲嗜性病毒整合位点-1(EVI1)、oe-NC和oe-EVI1。RT-qPCR检测人肺癌细胞株A549、HCC827、NCI-H1299和人正常肺上皮细胞BEAS-2B中EVI1和PBK mRNA表达;Western blot检测细胞中EVI1、PBK、Beclin1、p62和微管相关蛋白1轻链3(LC3B)蛋白表达;CCK-8检测细胞活力;EdU实验检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;ChIP-PCR实验检测细胞中EVI1和PBK启动子区域的结合。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较(EVI1及PBK表达情况只比较HCC827组与BEAS-2B组、NCI-H1299组与BEAS-2B组、A549组与BEAS-2B组)采用LSD-t检验。si-NC组和si-EVI1、oe-NC组和oe-EVI1组PBK的表达情况采用独立样本t检验进行比较。结果与BEAS-2B细胞相比,HCC827、NCI-H1299和A549细胞中EVI1和PBK mRNA表达以及蛋白表达均升高,差异具有统计学意义(P均<0.05)。与空白对照组相比,顺铂组和顺铂+si-NC组细胞中EVI1和PBK mRNA表达以及蛋白表达均升高,Beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达(0.15±0.01比0.36±0.02、0.34±0.02)(1.32±0.11比4.16±0.21、4.04±0.15)均升高,差异具有统计学意义(P均<0.05);与空白对照组相比,顺铂组、顺铂+si-NC组及顺铂+si-PBK组细胞24、48、72 h细胞活力降低,EdU阳性细胞率[(42.71±2.56)﹪比(30.25±1.91)﹪、(28.90±2.51)﹪]、迁移数[(133.67±6.51)个比(72.00±4.00)个、(70.00±2.65)个]、侵袭数[(81.00±4.00)个比(43.00±3.00)个、(42.00±3.00)个]、p62蛋白表达(0.65±0.03比0.22±0.02、0.23±0.01)均降低,差异具有统计学意义(P均<0.05)。与顺铂组和顺铂+si-NC组相比,顺铂+si-PBK组细胞中PBK mRNA和蛋白表达降低,24、48、72 h细胞活力降低,EdU阳性细胞率[(30.25±1.91)﹪比(28.90±2.51)﹪、(22.25±1.97)﹪]、迁移数[(72.00±4.00)个、(70.00±2.65)个比(34.00±3.00)个]、侵袭数[(43.00±3.00)个、(42.00±3.00)个比(21.33±2.52)个]、Beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达(0.36±0.02、0.34±0.02比0.25±0.02)(4.16±0.21、4.04±0.15比2.45±0.22)均降低,差异具有统计学意义(P均<0.05);p62蛋白表达(0.22±0.02、0.23±0.01比0.46±0.02)升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。EVI1通过直接与PBK启动子区域结合,与si-NC组相比,si-EVI1组细胞中EVI1 mRNA和蛋白表达降低,PBK mRNA和蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P均<0.05);与oe-NC组相比,oe-EVI1组细胞中EVI1和PBK mRNA和蛋白表达升高,差异具有统计学意义(P均<0.05)。结论受EVI1调节的PBK可能通过促进自噬抑制肺癌细胞对顺铂的化疗敏感性。